曹平 宋煒 陳佳 謝正麗 王魯民

(1 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院東海水產(chǎn)研究所，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部遠(yuǎn)洋與極地漁業(yè)創(chuàng)新重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海 200090；2 上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院，上海 201306；3 福建福鼎海鷗水產(chǎn)食品有限公司，大黃魚(yú)育種國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建寧德 352103；4 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院漁業(yè)機(jī)械儀器研究所，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部漁業(yè)裝備與工程技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海 200092)

棘頭梅童魚(yú)(Collichthyslucidus)俗稱(chēng)梅童、小金鱗等，隸屬于鱸形目(Perciformes)、石首魚(yú)科(Sciaenidae)、梅童魚(yú)屬(Collichthys)，是廣泛分布于我國(guó)近海和河口的小型經(jīng)濟(jì)魚(yú)類(lèi)，其肉質(zhì)鮮嫩味美，營(yíng)養(yǎng)豐富，是沿海居民重要的鮮食水產(chǎn)品[1-3]。近年來(lái)，由于過(guò)度捕撈等原因，棘頭梅童魚(yú)的天然資源呈現(xiàn)衰退趨勢(shì)，價(jià)格上升，已無(wú)法滿(mǎn)足市場(chǎng)需求[4]。目前國(guó)內(nèi)相關(guān)科研單位利用野生棘頭梅童魚(yú)親魚(yú)已成功實(shí)現(xiàn)了人工育苗，并開(kāi)展了有關(guān)餌料組成、攝食習(xí)性、繁殖特征和早期發(fā)育等方面的研究[5-9]。此外，陳仕煊等[10]報(bào)道了呂泗漁場(chǎng)棘頭梅童魚(yú)秋季脂肪酸組成，高學(xué)慧等[11]報(bào)道了棘頭梅童魚(yú)的肌肉營(yíng)養(yǎng)成分組成。但總體而言，目前有關(guān)棘頭梅童魚(yú)營(yíng)養(yǎng)學(xué)方面的研究仍然較少。

親魚(yú)脂肪及脂肪酸儲(chǔ)備情況是影響其繁殖性能和后代發(fā)育的重要因素[12-14]。目前國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)有關(guān)棘頭梅童魚(yú)親魚(yú)脂肪及脂肪酸水平的研究報(bào)道。本研究對(duì)野生棘頭梅童魚(yú)親魚(yú)不同組織中的脂肪含量和脂肪酸組成進(jìn)行定量檢測(cè)和分析，以期了解棘頭梅童魚(yú)親魚(yú)在性腺發(fā)育后期脂類(lèi)及脂肪酸的蓄積特點(diǎn)，為親魚(yú)培育和人工育苗技術(shù)提供基礎(chǔ)資料和相關(guān)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料采集

雌性棘頭梅童魚(yú)親魚(yú)于2018年6月捕獲于福建省閩東海域。挑選30尾魚(yú)體健壯、無(wú)病害的個(gè)體作為測(cè)試分析樣本。試驗(yàn)魚(yú)的平均體長(zhǎng)為(13.15±2.08)cm，平均體質(zhì)量為(38.32±12.67)g，卵巢發(fā)育均為Ⅳ期。

1.2 樣品處理

將捕撈后的試驗(yàn)魚(yú)冷藏運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室，逐尾解剖樣品，并分別取其卵巢、肝臟和背部肌肉組織，卵巢、肝臟和肌肉組織各為1組。將每組樣品粉碎均勻并分成2份，自封袋封存，1份用于脂肪測(cè)定，另1份用于脂肪酸測(cè)定。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 脂肪含量測(cè)定

依照食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(GB 5009.6—2016)，用索氏抽提法測(cè)定不同組織中的脂肪含量。

1.3.2 脂肪酸測(cè)定

(1)色譜條件

色譜柱：TG-5MS(30 m×0.25 mm×0.25 μm)。升溫程序：80 ℃保持1 min，以10 ℃/min的速率升溫至200 ℃，繼續(xù)以5 ℃/min的速率升溫至250 ℃，最后以2 ℃/min的速率升溫至270 ℃，保持3 min。進(jìn)樣口溫度：290 ℃。載氣流速：1.2 mL/min。不分流進(jìn)樣，開(kāi)閥時(shí)間為1 min。質(zhì)譜條件：離子源溫度為280 ℃，傳輸線(xiàn)溫度為280 ℃，溶劑延遲時(shí)間為5.00 min，掃描范圍為30～400 amu，離子源為EI源70 eV。

(2)樣品處理

取80～100 mg混合均勻的樣品加入到15 mL離心管中，繼續(xù)加入2 mL 5%鹽酸甲醇溶液、3 mL氯仿甲醇溶液(體積比1∶1)、100 μL十九烷酸甲酯內(nèi)標(biāo)。將上述離心管置于85 ℃水浴鍋中水浴1 h。水浴完成后，待溫度降到室溫時(shí)，在離心管中加入1 mL正己烷，振蕩萃取2 min后，靜置1 h，等待分層。取上層清液100 μL，用正己烷定容到1 mL。最后用0.45 μm濾膜過(guò)膜后上機(jī)(ThermoFisher Trace 1310 ISQ氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀，美國(guó)賽默飛世爾科技公司)測(cè)試。每組樣品取樣5次進(jìn)行平行測(cè)定，以每種脂肪酸的質(zhì)量濃度為基礎(chǔ)計(jì)算其質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

(3)計(jì)算公式

(1)

式(1)中：W為試樣中各脂肪酸的含量，單位為mg/kg；C為試樣測(cè)定液中脂肪酸甲酯的質(zhì)量濃度，單位為mg/L；V為定容體積，單位為mL；k為各脂肪酸甲酯轉(zhuǎn)化為脂肪酸的換算系數(shù)；N為稀釋倍數(shù)；m為試樣的稱(chēng)樣質(zhì)量，單位為g。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)和分析

使用EXCEL 2017和SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析處理試驗(yàn)數(shù)據(jù)。試驗(yàn)數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。利用單因素方差分析(One-Way ANOVA)檢驗(yàn)不同組織中脂肪酸含量的差異性，并進(jìn)行Duncan’s多重比較，設(shè)P<0.05為差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 不同組織中的脂肪含量

雌性棘頭梅童魚(yú)親魚(yú)不同組織中的脂肪含量如圖1所示。卵巢、肝臟和肌肉中脂肪的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為(4.84±0.05)%、(2.66±0.04)%和(0.56±0.05)%。3種組織間脂肪含量差異顯著(P<0.05)，其中卵巢中脂肪含量最高，約為肌肉組織中脂肪含量的8.6倍。

圖1 雌性棘頭梅童魚(yú)親魚(yú)不同組織中的脂肪質(zhì)量分?jǐn)?shù)(鮮質(zhì)量,n=5)Fig.1 Lipid content in different tissues of female Collichthys lucidus broodstocks(fresh weight,n=5)

在雌性棘頭梅童魚(yú)親魚(yú)的卵巢、肌肉和肝臟組織中分別檢測(cè)出29種脂肪酸，包括12種飽和脂肪酸、7種單不飽和脂肪酸和10種多不飽和脂肪酸(見(jiàn)表1)。由表1可知，雌性棘頭梅童魚(yú)親魚(yú)卵巢、肌肉和肝臟中的飽和脂肪酸總含量分別為(3 831.38±37.18)、(1 430.84±14.47)和(4 235.14±37.83)mg/kg，其中含量較高的主要為C16∶0、C18∶0和C14∶0；單不飽和脂肪酸總含量分別為(2 501.69±8.53)、(396.82±1.82)和(867.07±2.99)mg/kg，其中含量較高的主要為C16∶1、C18∶1n9c和C20∶1；多不飽和脂肪酸總含量分別為(4 186.56±14.59)、(629.78±2.11)和(2 932.25±9.83)mg/kg，其中含量較高的主要為C22∶6n3(DHA)、C20∶5n3(EPA)和C20∶4n6(ARA)。肝臟中飽和脂肪酸的絕對(duì)含量高于卵巢和肌肉；卵巢中單不飽和脂肪酸和多不飽和脂肪酸的絕對(duì)含量均高于肌肉和肝臟。

表1 雌性棘頭梅童魚(yú)親魚(yú)不同組織中的脂肪酸組成(n=5)Tab.1 Fatty acid composition in different tissues of female C. lucidus broodstocks(n=5)

2.2 不同組織中的脂肪酸組成

從相對(duì)含量來(lái)看，卵巢、肌肉和肝臟組織中的飽和脂肪酸均以C16∶0含量最高，質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為(25.89±0.29)%、(43.32±0.36)%和(36.13±0.36)%(P<0.05)。卵巢、肌肉和肝臟組織中單不飽和脂肪酸均以C16∶1含量最高，質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為(13.81±0.05)%、(11.23±0.03)%和(5.97±0.02)%(P<0.05)。卵巢、肌肉和肝臟組織中的多不飽和脂肪酸均以C22∶6n3(DHA)含量最高，質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為(18.35±0.11)%、(12.64±0.11)%和(18.49±0.13)%，其次為C20:5n3(EPA)，質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為(9.43±0.09)%、(6.70±0.07)%和(8.10±0.08)%。卵巢中DHA+EPA的總量顯著高于肌肉和肝臟(P<0.05)。

比較各組織中的脂肪酸總量，其飽和脂肪酸總量高低順序?yàn)椋杭∪?肝臟>卵巢，依次為(58.22±0.24)%、(52.71±0.24)%和(36.42±0.24)%(P<0.05)。單不飽和脂肪酸總量的高低順序?yàn)椋郝殉?肌肉>肝臟，依次為(23.78±0.09)%、(16.15±0.07)%和(10.79±0.05)%(P<0.05)。多不飽和脂肪酸總量高低順序?yàn)椋郝殉?肝臟>肌肉，依次為(39.79±0.19)%、(36.49±0.21)%和(25.63±0.19)%(P<0.05)。n-3系和n-6系多不飽和脂肪酸總量高低順序均為：卵巢>肝臟>肌肉。DHA/EPA的值在肝臟中為最高(2.28)，其次為卵巢(1.95)，肌肉中最低(1.89)，且具有明顯差異(P<0.05)。不同組織中n-3系與n-6系多不飽和脂肪酸的比值具有明顯差異(P<0.05)，其中肌肉中最高，其次為肝臟，卵巢中最低。

3 討論

3.1 繁殖期雌性棘頭梅童魚(yú)親魚(yú)不同組織間脂肪的分布

脂肪在親魚(yú)不同組織中的分布規(guī)律體現(xiàn)了其脂肪營(yíng)養(yǎng)特點(diǎn)，對(duì)親魚(yú)生產(chǎn)性能和后代的體質(zhì)有重要影響[15]。繁殖期雌性親魚(yú)脂肪的儲(chǔ)存和積累一般會(huì)集中在卵巢組織[16]。本研究結(jié)果表明，雌性棘頭梅童魚(yú)親魚(yú)3種組織中的脂肪含量具有顯著性差異，卵巢中脂肪質(zhì)量分?jǐn)?shù)最高，為(4.84±0.05)%，其次是肝臟，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為(2.66±0.05)%，肌肉中脂肪質(zhì)量分?jǐn)?shù)最低，為(0.56±0.05)%，其脂肪含量呈現(xiàn)卵巢>肝臟>肌肉的規(guī)律。這與施兆鴻等[12]對(duì)灰鯧(Pampuscinereus)、宋超等[16]對(duì)紋縞蝦虎魚(yú)(Tridentigertrigonocephalus)的研究結(jié)果相一致，表明處于繁殖期的雌性棘頭梅童魚(yú)親魚(yú)，其脂肪營(yíng)養(yǎng)會(huì)優(yōu)先供給卵巢，保障卵巢發(fā)育的需求。Ⅳ期卵巢組織中的卵母細(xì)胞已經(jīng)生長(zhǎng)成熟，蓄積了大量脂肪等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，使卵黃顆粒飽滿(mǎn)，能夠?yàn)橐院笫芫押团咛サ陌l(fā)育提供物質(zhì)基礎(chǔ)和能量。在親魚(yú)卵巢發(fā)育的同時(shí)，大量脂肪也積累在肝臟中，肝臟作為脂肪合成和轉(zhuǎn)化的主要場(chǎng)所，可將脂肪酸轉(zhuǎn)化合成后轉(zhuǎn)運(yùn)到卵巢中進(jìn)行蓄積和儲(chǔ)存[17-18]。

3.2 繁殖期雌性棘頭梅童魚(yú)親魚(yú)不同組織間脂肪酸的組成

雌性棘頭梅童魚(yú)親魚(yú)不同組織間的脂肪酸組成存在明顯差異，主要原因是各組織行使的生理功能不同。雌性棘頭梅童魚(yú)親魚(yú)卵巢中多不飽和脂肪酸含量最高，但其飽和脂肪酸含量低于肌肉和肝臟中的，表明雌性棘頭梅童魚(yú)親魚(yú)選擇性地將多不飽和脂肪酸運(yùn)往卵巢中進(jìn)行積累。有研究證實(shí)，多種魚(yú)類(lèi)、貝類(lèi)中也存在同樣的規(guī)律[13,16-17]。卵巢中多不飽和脂肪酸的富集對(duì)細(xì)胞膜的形成及其離子通道的調(diào)節(jié)和激素調(diào)節(jié)等功能具有重要作用[14]。卵巢中大量積累的多不飽和脂肪酸可以作為卵子發(fā)育的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，為后期卵子形成和胚胎發(fā)育等生理活動(dòng)提供保障。

EPA和DHA在海水魚(yú)類(lèi)體內(nèi)不能合成，必須由食物供給[19-20]。EPA和DHA直接影響冷水性魚(yú)類(lèi)的繁殖性能及其幼體的發(fā)育狀況[21]。親魚(yú)食用經(jīng)EPA和DHA營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化的飼料后，其卵子和幼體質(zhì)量大大提高[13]。如果DHA和EPA攝取不足，會(huì)阻礙魚(yú)體色素沉積和視覺(jué)系統(tǒng)的發(fā)育，降低魚(yú)苗的索餌能力，從而降低其成活率[22-25]。在雌性棘頭梅童魚(yú)親魚(yú)的肌肉、肝臟和卵巢等3種組織中均含有EPA和DHA。EPA含量在卵巢中是最高的，其次為肝臟；DHA含量在肝臟中最高，其次為卵巢。卵巢中較高含量的DHA和EPA可以為卵子及胚胎的發(fā)育提供營(yíng)養(yǎng)保障。與其他肉食性海水魚(yú)類(lèi)基于歸一化法測(cè)得的數(shù)據(jù)相比，雌性棘頭梅童魚(yú)親魚(yú)卵巢中的DHA質(zhì)量分?jǐn)?shù)為(18.35±0.11)%，與野生灰鯧(18.89%)[12]相近，高于渤海銀鯧(Pampusargenteus)(14.35%)[24]；EPA質(zhì)量分?jǐn)?shù)為(9.43±0.09)%，高于野生灰鯧(2.13%)[12]、渤海銀鯧(3.94%)[24]，而低于紋縞蝦虎魚(yú)(13.28%)[16]。這說(shuō)明魚(yú)體內(nèi)的DHA和EPA含量與魚(yú)的種類(lèi)及其生活環(huán)境密切相關(guān)。

ARA對(duì)于海水魚(yú)類(lèi)正常發(fā)育也有著重要作用[16]。研究表明，飼料中添加ARA能增強(qiáng)黃鱔的肝功能，提高其脂肪代謝能力[25]。ARA能夠改善魚(yú)體繁殖和卵發(fā)育的性能，還能增強(qiáng)魚(yú)苗抗脅迫的能力[13-14]。本研究結(jié)果顯示，雌性棘頭梅童魚(yú)親魚(yú)的ARA在肝臟中含量最高，卵巢次之，肌肉中最低。此時(shí)期棘頭梅童魚(yú)親魚(yú)肝臟中較高的ARA含量可能有利于保持肝臟較高的脂肪代謝能力，有利于脂肪酸營(yíng)養(yǎng)向卵巢中轉(zhuǎn)移和積累。親魚(yú)的繁殖性能和所產(chǎn)卵子及其仔魚(yú)的質(zhì)量在很大程度上受親魚(yú)脂肪酸營(yíng)養(yǎng)水平的影響，而親魚(yú)的脂肪酸組成與其攝食餌料的脂肪酸組成有關(guān)[15-26]。研究親魚(yú)不同組織中的脂肪酸組成，了解不同組織中脂肪酸營(yíng)養(yǎng)的蓄積特點(diǎn)，能夠幫助確定親魚(yú)強(qiáng)化餌料及仔魚(yú)開(kāi)口餌料中脂肪酸的營(yíng)養(yǎng)水平。餌料中DHA∶EPA∶ARA的值是親魚(yú)或仔稚魚(yú)餌料極為重要的營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)[27]。不同品種的魚(yú)類(lèi)，其卵巢組織中DHA∶EPA∶ARA的值也存在差異。本研究中，雌性棘頭梅童魚(yú)親魚(yú)卵巢中DHA∶EPA∶ARA為1.51∶1∶0.52，與野生灰鯧(5.90∶1∶0.44)[12]相比，DHA含量相對(duì)較低，與紋縞蝦虎魚(yú)(1.59∶1∶0.20)[16]相比，ARA含量相對(duì)較高。