張 李 聶詩明 - 陳運中 - 顏春潮 -

(湖北中醫(yī)藥大學藥學院，湖北 武漢 430065)

臨床上常用的他汀類、煙酸類等降脂類藥物，雖療效較好，但長期服用會產生頭痛失眠、惡心乏力、橫紋肌溶解、肝功能受損等毒副作用[1-2]。一些具有降血脂功效的天然食品及其活性成分，因安全、毒副作用小，逐漸成為防治高脂血癥領域的研討熱點[3]。

膳食纖維和α-亞麻酸是生物相容性良好、幾乎無毒副作用的天然降血脂活性成分，兩者均能有效降低血清膽固醇水平、調節(jié)血脂血糖代謝、減少動脈粥樣硬化[4-5]。海帶和瓊脂富含褐藻膠、纖維素和半纖維素等成分，是機體補充膳食纖維的優(yōu)質食源[6]；亞麻籽油富含亞麻酸、油酸、亞油酸等不飽和脂肪酸，其中α-亞麻酸含量高達40%～60%，被譽為“血管清道夫”和“液體腦黃金”[7-8]。目前，國內外以海帶、亞麻籽油為復合原料制備降脂保健食品的研究罕見報道。

研究擬從中醫(yī)的“食療”理念出發(fā)，以脫腥海帶粉、瓊脂粉、冷榨亞麻籽油、胖大海粉為主原料，輔以其他天然食物組成復合配方，采用有效成分保留率高且經濟的加工工藝制成超微粉，并對復方海帶代餐粉的降血脂作用進行探討，以期為該產品保健功能的深入研究和綠色功能性食品的開發(fā)提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 主要材料

50只健康成年SD雄性大鼠：SPF級，體重150～200 g，武漢子星生物科技有限公司；

高脂飼料(78.8%基礎飼料、1%膽固醇、10%蛋黃粉、10%豬油、0.2%膽鹽)、基礎飼料：武漢春之花實驗動物飼料有限公司；

干海帶：溫嶺市海匯食品有限公司；

冷榨亞麻籽油：內蒙古興源植物油有限責任公司；

瓊脂粉：福建省石獅市高新瓊脂食品有限公司；

生姜：市售；

胖大海、陳皮、茉莉花茶：杭州藝福堂茶業(yè)有限公司。

1.1.2 主要儀器設備

超微粉碎振動磨：WFM-50型，江蘇宏達粉體設備有限公司；

高速多功能粉碎機：CX-100型，上海緣沃工貿有限公司；

GENESPEED離心機：1580R型，Gene Company Limited基因有限公司；

全自動生化分析儀：AU5800型，美國貝克曼庫爾特有限公司；

數顯恒溫水浴鍋：HH-6型，常州國華電器有限公司；

電熱鼓風干燥箱：GZX-9146MBE型，上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠。

1.2 方法

1.2.1 復方海帶代餐粉的制備

(1) 復方海帶代餐粉配方：脫腥海帶粉12 g、瓊脂粉9 g、冷榨亞麻籽油3 g、胖大海粉1 g、山楂粉0.5 g、紅棗粉3 g、木糖醇11 g。人體推薦量為39.5 g/60(kg·d)。

(2) 復方海帶代餐粉的配制：將干海帶在常溫下用清水浸泡1.5 h后，洗去表面泥沙等雜質并去除根部及發(fā)黃部分，瀝干后切成均勻絲狀；然后將海帶放入提前煎煮并過濾后的質量分數為2%生姜液+3%陳皮液的復合脫腥液中，80 ℃水浴下浸泡脫腥40 min，漂洗瀝水后放入質量分數為1%的茉莉花茶液中煮沸1 h，進行二次脫腥和熟化；脫腥結束后，將海帶用清水沖洗2～3遍，去除殘留脫腥液，瀝干后置于托盤上放入烘箱中于(60±5) ℃下干燥；將干燥后的海帶粉碎過5號篩，制得脫腥海帶粉。將脫腥海帶粉、瓊脂粉和胖大海粉等按配方比例混合均勻，進行超微粉碎，干燥，再加入一定量的冷榨亞麻籽油，即得到復方海帶代餐粉。復方海帶代餐粉的主要成分含量如表1所示。

1.2.2 動物分組與劑量設定 在飼養(yǎng)溫度為(25±1) ℃，相對濕度為(55±5)%下，以基礎飼料適應性喂養(yǎng)大鼠7 d后，用斷尾取血法采集血樣(讓大鼠自然運動使毛細血管充血，用固定器固定住大鼠，以酒精棉球擦拭尾部消毒并使血管充分擴張，剪斷鼠尾末端3～5 mm，采集血液約2 mL于抗凝管中，采血過程中從大鼠尾根到尾尖輕輕按摩以增加血量)，測定血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)含量。

將50只大鼠隨機分為5組，每組10只，分別為空白對照組、模型對照組、復方海帶粉低劑量組[1.65 g/(kg·d)，人體推薦量的2.5倍]、復方海帶粉中劑量組[3.29 g/(kg·d)，人體推薦量的5倍]和復方海帶粉高劑量組[6.58 g/(kg·d)，人體推薦量的10倍]。

1.2.3 脂代謝紊亂模型的建立 分組后空白對照組繼續(xù)飼喂基礎飼料，其他組均飼喂高脂飼料，3個劑量組每日灌胃對應劑量的復方海帶代餐粉混懸液(2 mL/100 g·BW)，空白組、模型組灌胃等體積的蒸餾水。連續(xù)灌胃4周，期間所有大鼠自由進食、飲水，每周固定時間測定體重一次，并觀察記錄大鼠的行為活動變化是否異常。末次灌胃后，禁食不禁水12 h，大鼠腹腔注射10%水合氯醛(0.30 mL/100 g·BW)，待其完全麻醉后剖解，于腹主動脈取血(約2 mL)后處死，血樣離心15 min(4 ℃、3 000 r/min)，取上層血清，4 ℃貯存并及時測定大鼠血清TC、TG、LDL-C、HDL-C值。比較造模前后大鼠血清4項指標，若造模后TC、TG和LDL-C值升高，HDL-C值降低，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，則判定建模成功。并按式(1)計算動脈粥樣硬化指數(AI)。

表1 復方海帶代餐粉的主要成分

(1)

式中：

ai——動脈粥樣硬化指數(AI)；

tc——血清總膽固醇(TC)，mmol/L；

hdlc——高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)，mmol/L。

1.3 數據處理

數據用Excel處理后以均值±標準差(n=10)表示。用統(tǒng)計軟件Graphpad Prism 8作統(tǒng)計學分析，服從正態(tài)分布的數據，組間比較采用單因素方差分析；不服從正態(tài)分布的用秩和檢驗，組間比較用LSD法。

2 結果與分析

2.1 高脂血癥動物模型的建立

由表2可知，建模前各組大鼠血清TC、TG、LDL-C、HDL-C含量無顯著性差異(P>0.05)；建模后(見表3)，相較于空白對照組，模型組大鼠血清TC、TG和LDL-C含量極顯著增高(P<0.01)，分別為26.64%，47.83%，41.67%，HDL-C含量極顯著降低(P<0.01)，為43.93%。此種差異可能是模型組大鼠長期攝食脂肪含量較高的飼料，造成機體能量過剩，膽固醇轉運受阻以及甘油三酯異常增高，導致體內脂質異常堆積，從而引起血脂紊亂，這也進一步肯定了試驗高脂飼料配方，同時表明喂食高脂飼料成功建立了高脂血癥大鼠模型。

2.2 復方海帶代餐粉對大鼠生長指標的影響

由表4可知，高脂血癥模型建立前，各組大鼠體重相近，無顯著差異(P>0.05)。模型建立期間，各組大鼠體重均呈增長走勢，無疾病、嘔吐和異常死亡狀況，高脂模型組大鼠體重增長速率高，比較于空白對照組體重增量差異極顯著(P<0.01)，表明高脂飼料喂養(yǎng)能引起大鼠體重顯著增加。復方海帶粉灌胃1～3周后，各劑量組大鼠體重增量相比空白對照組顯著增加(P<0.01，P<0.05)，比較于模型對照組體重增量相近(P>0.05)，說明短期內給予受試品不能改善喂食高脂飼料引起的大鼠體重突增；灌胃4周后，低、中、高劑量組大鼠體重增量相比模型對照組均減小，分別為2.34%，6.77%，14.29%，其中高劑量組體重增量具有顯著性差異(P<0.05)，且比較于空白對照組無顯著性差異(P>0.05)，體重趨于正常增長。推斷產生這一差異的原因是模型組大鼠長期攝食高脂飼料，導致其體重增長速率快，而3個劑量組大鼠雖飼喂高脂飼料，但同時灌胃不同濃度的復方海帶粉混懸液，復方海帶粉中含有豐富的膳食纖維，膳食纖維體積大、比重小，有較強黏性和吸水性，進食后在胃中吸水膨脹，使機體產生裹腹感，有助于攝食量的減少；同時，膳食纖維可吸附多種營養(yǎng)成分，阻礙其消化吸收，對體重有一定的控制作用[9-10]。因此，隨著干預時間的延長，復方海帶粉各劑量組大鼠的體重增量與模型組相比出現了不同程度的減小。董吉林等[11]研究表明，燕麥膳食纖維對生長發(fā)育期小鼠肥胖具有預防作用，主要以通便、減少采食、降低血脂、減少脂肪吸收等途徑減輕小鼠體重。徐田輝等[12]發(fā)現洋薊膳食纖維可緩解動物因喂食高脂飼料而產生體重增長和脂質積累，對高脂飲食引起的肥胖具有一定預防作用。試驗結果與上述學者的研究結果相符，由此可見，該復方海帶代餐粉在一定程度上能減緩高脂飲食引起的機體體重增加，對預防肥胖具有積極作用。

表2 試驗前大鼠血清4項血脂水平

表3 試驗后大鼠血清4項血脂水平?

表4 復方海帶代餐粉對大鼠體重的影響?

2.3 復方海帶代餐粉對大鼠血脂的影響

由表3可知，預防性連續(xù)灌胃受試樣品4周后，與模型組相比，復方海帶粉低、中、高3個劑量組大鼠血清TC、TG、LDL-C值均顯著降低(P<0.05，P<0.01)，其中，中、高劑量組HDL-C值極顯著升高(P<0.01)。復方海帶粉對TG、LDL-C值的降低作用呈明顯的劑量依賴關系，以高劑量組TC、LDL-C值降低效果最明顯，較模型組分別降低了24.59%和28.33%，中劑量組次之。同時，相比于空白對照組，高劑量組TC、TG、LDL-C和HDL-C值均無顯著性差異(P>0.05)，血脂趨于正常水平。綜合TC、TG、LDL-C和HDL-C 4項指標，復方海帶代餐粉能降低高脂血癥大鼠的血脂水平，且隨著劑量的增加，降低效果更明顯。這一結果可能與復方中的活性成分膳食纖維和α-亞麻酸等發(fā)揮了降脂協(xié)同作用有關。膳食纖維含有許多親水性基團，可吸附膽酸、膽固醇、多種營養(yǎng)成分及有毒物質，阻抑膽固醇的消化和吸收[13-14]；膳食纖維被微生物發(fā)酵后的凝膠樣產物可抑制肝臟膽固醇合成，氣體類產物能刺激腸黏膜，增強腸蠕動，加快脂質的排泄[15-16]；α-亞麻酸在人體內可轉化為二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid，DHA)和二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid，EPA)，DHA可抑制膽固醇合成的主要限速酶羥甲基戊二酰輔酶的活性，減少內源性膽固醇的合成[17]；EPA可抑制脂肪酸合成酶的表達和加強脂肪酸β-氧化，刺激脂質代謝，起到降脂、排脂的作用[18]。綜上表明，該復方海帶代餐粉具有良好的輔助降血脂作用，但其具體降脂機理還有待進一步探究。

2.4 復方海帶代餐粉對高脂大鼠動脈粥樣硬化指數(AI)的影響

由表3、表5可知，空白對照組大鼠喂飼普通飼料，血脂4項指標正常，其AI值相對于其他組較低；而模型對照組大鼠因喂飼高脂飼料，血脂濃度異常，其AI值比較于空白對照組極顯著升高(P<0.01)；預防性給予復方海帶代餐粉4周后，各劑量組AI值相比模型對照組均極顯著降低(P<0.01)，以高劑量組降低效果最為明顯。表明復方海帶代餐粉能有效抑制高脂飲食導致的動脈粥樣硬化指數的升高，降低引發(fā)動脈粥樣硬化的風險，具有一定的預防動脈粥樣硬化的作用，且隨著劑量的加大，作用效果越顯著。

表5 復方海帶代餐粉對高脂大鼠動脈硬化指數的影響?

3 結論

通過預防性給予受試樣品，考察不同劑量的復方海帶代餐粉對高脂血癥模型大鼠血脂的影響。結果顯示，復方海帶代餐粉各劑量組[6.58，3.29，1.65 g/(kg·d)]大鼠血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)含量較模型對照組均顯著降低(P<0.05、P<0.01)，中、高劑量組高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)含量極顯著升高(P<0.01)；各劑量組動脈粥樣硬化指數(AI值)較模型組均極顯著降低(P<0.01)。表明該代餐粉具有較好的輔助降血脂、預防動脈粥樣硬化的作用，且存在一定的劑量依賴關系。

復方海帶代餐粉的降血脂作用與其配方中富含的膳食纖維和α-亞麻酸等有重要的關聯。兩者結合，從抑制脂質生成和加快其代謝、排泄兩方面共同作用，起到降脂、排脂的作用。該試驗結果還顯示復方海帶代餐粉對高脂飲食引發(fā)的體重增加呈一定的抑制作用，也佐證了膳食纖維和亞麻籽油等協(xié)同作用下加快排泄，減少機體對營養(yǎng)成分的吸收。后期將對該產品生物活性及作用機理進行深入研究，以期為相關功能性食品的研發(fā)提供依據。