透骨草提取物對小麥葉蜂的毒殺活性初步研究

□文/邢浩春魏娜李同慶白浩偉郭淑霞付靜李志亮謝全森

小麥葉蜂（Dolerus tritici C.）屬于膜翅目葉蜂科昆蟲，是小麥抽穗前最常見的害蟲。在北方3～4月份發(fā)生一代，幼蟲主要危害小麥葉片，每平方米30多頭時發(fā)生較嚴(yán)重，會使小麥減產(chǎn)。目前農(nóng)村要求用低毒的高效氫氯菊酯來防治麥葉蜂，但也有用禁用農(nóng)藥的情況，而且供選用的生物農(nóng)藥種類比較少。因此研發(fā)高效低毒環(huán)保、廣譜、成本低、符合老百姓心意的生物農(nóng)藥很有必要，近幾年植物源農(nóng)藥的研發(fā)更是受到科研工作者的青睞，比如白屈菜、透骨草、川烏等。透骨草（Phryma leptostachya L.）為我國傳統(tǒng)中藥材，有一定毒性。國內(nèi)外學(xué)者陸續(xù)研究了透骨草全株、根、地上部分的提取物對家蠅、黏蟲、淡色庫蚊、菇蠅和小菜蛾幼蟲等的毒殺活性，表明透骨草對上述害蟲均有明顯的活性。對有殺蟲活性的透骨草提取物進(jìn)行了進(jìn)一步分離鑒定和分析，顯示不同提取、萃取方法和萃取劑等條件分離出來的化學(xué)成分也不同，分離得到的主要化學(xué)成分有木質(zhì)素類化合物、黃酮類化合物、三萜類化合物等。其中木質(zhì)素類化合物具有極高的殺蟲活性，對家蠅的觸殺活性和商業(yè)化的擬除蟲菊酯相當(dāng)，雙氧木質(zhì)素A主要對多種鱗翅目害蟲有效。目前透骨草提取物對小麥葉蜂的毒殺作用還未見報道。本實驗采用透骨草甲醇提取物的乙酸乙酯萃取物對小麥葉蜂進(jìn)行毒殺實驗，了解其殺蟲活性，為中草藥的利用及生物農(nóng)藥的開發(fā)提供參考依據(jù)。

一、實驗材料和方法

1.實驗材料

透骨草：全株，購自藥店。

小麥葉蜂幼蟲：采集于未噴灑藥液的小麥田中，在實驗室飼養(yǎng)。

2.實驗方法

（1）透骨草的甲醇提取物制備

將全株透骨草干品打粉過60目篩。準(zhǔn)確稱取透骨草干燥粉末與90%甲醇溶液混合冷漬1天，60℃條件下超聲波輔助提取，再抽濾，完成后收集濾液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮成浸膏，干燥后收集稱重計算得率。放入4℃冰箱中保存。得到浸膏即為透骨草甲醇提取物。

（2）甲醇提取物的乙酸乙酯萃取物制備

將透骨草甲醇提取物浸膏加水溶解，加入等量乙酸乙酯溶液，用超聲波輔助萃取，分離水相和乙酸乙酯相，最后將乙酸乙酯相用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮得到浸膏稱重，計算萃取得率，公式如下：

（3）透骨草甲醇提取物的乙酸乙酯萃取物殺蟲活性測定方法

殺蟲活性測定采用載毒葉片法。用丙酮將透骨草甲醇提取物的乙酸乙酯萃取物配成1毫克∕毫升、2毫克∕毫升、4毫克∕毫升、8毫克∕毫升四個濃度梯度的藥液作為實驗組，用等量的蒸餾水和丙酮溶劑作為對照組，每組三個重復(fù)，每個重復(fù)用10頭小麥葉蜂，共30頭。將新鮮麥葉浸入藥液20秒拿出，等溶劑揮發(fā)后，放置在盛有濾紙的干凈培養(yǎng)皿中，然后放入停食一天、健康活潑、等大的小麥葉蜂。觀察小麥葉蜂在食用葉片2小時、12小時、24小時后的反應(yīng)。如觀察到發(fā)生麻痹現(xiàn)象用解剖針觸其身體不再作出反應(yīng)即為死亡。計算小麥葉蜂死亡率和校正死亡率。（如表1）

表1 透骨草提取物的乙酸乙酯萃取物對小麥葉蜂的處理效果

（4）數(shù)據(jù)統(tǒng)計和分析

用excel軟件統(tǒng)計數(shù)據(jù)及分析。

二、結(jié)果討論

1.透骨草甲醇提取物的乙酸乙酯萃取物對小麥葉蜂的中毒特征

通過載毒葉片法處理小麥葉蜂，發(fā)現(xiàn)正常的小麥葉蜂活潑健康，喜歡啃食葉片，身體微透明淺米色。藥液處理后出現(xiàn)掙扎、蜷曲、聚堆、遠(yuǎn)離葉片的現(xiàn)象，死亡時身體柔軟收縮、不動、顏色發(fā)黑等。

2.不同濃度梯度乙酸乙酯萃取物對小麥葉蜂的毒殺活性

不同濃度梯度透骨草甲醇提取物的乙酸乙酯萃取物處理小麥葉峰24小時后，1毫克∕毫升、2毫克∕毫升、4毫克∕毫升、8毫克∕毫升濃度時死亡數(shù)為10頭、12頭、18頭、20頭，可以發(fā)現(xiàn)藥液對小麥葉蜂有比較明顯的胃毒、觸殺活性。濃度在8毫克∕毫升24小時校正死亡率最高為58.32%。實驗中也發(fā)現(xiàn)，除了透骨草提取物對小麥葉蜂的毒殺作用外，丙酮因為沒有完全揮發(fā)也起了一些作用，丙酮對照組死亡率就達(dá)20%，所以24小時校正死亡率相對死亡率來說小一些。

上圖分析看出，隨著透骨草甲醇提取物的乙酸乙酯萃取物濃度的增加，小麥葉蜂的24小時死亡率和校正死亡率也逐漸上升。但在本實驗條件下4毫克∕毫升和8毫克∕毫升濃度處理組相比，沒有太多增加，可能是因為8毫克∕毫升濃度處理時透骨草提取物的浸膏摻雜了雜質(zhì)所致，也可能濃度過高效果也不太明顯，因此濃度等于或高于8毫克∕毫升其毒殺活性還有待進(jìn)一步研究。

圖1 透骨草甲醇提取物的乙酸乙酯萃取物對小麥葉蜂的毒殺活性折線圖

三、結(jié)論

本實驗利用甲醇提取和乙酸乙酯萃取方法得到透骨草的有效化學(xué)物質(zhì)，即透骨草甲醇提取物的乙酸乙酯萃取物，用載毒葉片法次檢測了其對北方3～4月份危害小麥比較嚴(yán)重的小麥葉峰的毒殺活性。結(jié)果顯示：害蟲表現(xiàn)出一定的中毒特征。藥液濃度為1毫克∕毫升、2毫克∕毫升、4毫克∕毫升和8毫克∕毫升梯度時，隨濃度的增加其死亡率和校正死亡率也增加，8毫克∕毫升時校正死亡率最高達(dá)58.32%。從本實驗條件下初步研究結(jié)果顯示，透骨草甲醇提取物的乙酸乙酯萃取物對小麥葉蜂有一定的殺蟲活性，殺蟲活性與其濃度呈正相關(guān)。而高濃度時或其他不同溶劑提取物的活性及透骨草化學(xué)成分分離和鑒定還有待進(jìn)一步研究。