李超 高麗 康利平 劉大會(huì) 王旭 崔占虎 張超云 黃顯章
摘要:為建立不同產(chǎn)地艾葉及土壤中礦物元素的分析方法和評(píng)價(jià)體系,采用電感耦合等離子體質(zhì)譜法(ICP-MS)對(duì)國(guó)內(nèi)5個(gè)主產(chǎn)區(qū)75份艾葉樣品及土壤中鉀、納、鈣、鎂、磷、鐵、錳、鋅、鉬、鎳、銅、鉛、砷、鎘、汞等元素的含量進(jìn)行測(cè)定,并借助方差分析、主成分分析等計(jì)量學(xué)方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和分析。結(jié)果表明,不同產(chǎn)地艾葉中有12種元素的含量存在顯著差異(P<0.05),鎘、鉬、砷、鈉等元素變異系數(shù)較高,銅元素含量超出規(guī)定限度;不同產(chǎn)地土壤中有6種元素的含量存在顯著差異,鉬、汞、鈣、鎂等元素的變異系數(shù)較高,各重金屬元素含量符合土壤污染風(fēng)險(xiǎn)管控標(biāo)準(zhǔn);各產(chǎn)地艾葉均對(duì)磷、鈉、鎘等元素富集能力較強(qiáng),對(duì)鐵、錳、鉛、鎳、砷等元素相對(duì)貧化;在艾葉規(guī)范化種植生產(chǎn)中,應(yīng)注意磷肥的減施,且應(yīng)控制土壤及周圍環(huán)境中鎘的含量,避免艾葉對(duì)鎘過(guò)度富集引起重金屬超標(biāo)。本研究為探索艾葉與土壤中礦物元素的分布態(tài)勢(shì)和作用規(guī)律提供科學(xué)依據(jù),也為艾葉藥材道地性評(píng)價(jià)和種植適宜區(qū)選擇提供有益參考。
關(guān)鍵詞:艾葉;土壤;礦物元素;分布特征;富集特征
中圖分類號(hào): S567.23+9.01;S567.23+9.06? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A
文章編號(hào):1002-1302(2021)22-0186-06
收稿日期:2021-05-26
基金項(xiàng)目:國(guó)家自然科學(xué)基金(編號(hào):81803661);河南省科技攻關(guān)項(xiàng)目(編號(hào):202102310512、182102110361)。
作者簡(jiǎn)介:李 超(1987—),男,河南南陽(yáng)人,博士,講師,主要從事中藥資源學(xué)方向的研究。E-mail:lichaotcm@126.com 。
通信作者:黃顯章,博士,教授,主要從事中藥品質(zhì)評(píng)價(jià)方向的研究。E-mail:nylgzyx@126.com。
藥用植物中礦物元素的種類和含量是中藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)的重要指標(biāo),與中藥材的生長(zhǎng)發(fā)育、藥用物質(zhì)的形成以及臨床療效的發(fā)揮密切相關(guān),礦物元素對(duì)藥效發(fā)揮的協(xié)同作用不容忽視[1-5]。土壤礦物元素是藥用植物生長(zhǎng)最主要的環(huán)境因子之一,能夠直接影響根系營(yíng)養(yǎng)及生理代謝,并對(duì)藥材的品質(zhì)產(chǎn)生較大影響[6-7]。因此,開展中藥材及土壤中礦物元素特征分析對(duì)藥材品質(zhì)評(píng)價(jià)及種植適宜區(qū)的選擇具有重要意義。
艾葉為菊科植物艾(Artemisia argyi Levl.et Vant.)的干燥葉,性溫,味苦、辛,歸肝、脾、腎經(jīng),具有散寒止痛、溫經(jīng)止血、理氣安胎等功效,是我國(guó)傳統(tǒng)常用中藥材之一[8-11]。艾葉既可內(nèi)服,也可外洗,以所含艾絨為原料制成的灸條是中醫(yī)灸法的主要原材料,臨床應(yīng)用十分廣泛[12]。歷代本草中明確記載“蘄艾”“北艾”“海艾”及“祁艾”為道地藥材,即現(xiàn)在湖北省蘄春縣、河南省湯陰縣、浙江省寧波市及河北省安國(guó)市等地所產(chǎn)艾葉[13]?,F(xiàn)如今,河南省南陽(yáng)市已成為國(guó)內(nèi)最大的艾葉生產(chǎn)和集散地,產(chǎn)業(yè)規(guī)模居全國(guó)之首。因此,開展以上產(chǎn)區(qū)艾葉及土壤中礦物元素的研究能夠涵蓋我國(guó)目前艾葉主產(chǎn)區(qū)的整體情況,具有一定的指導(dǎo)意義。
到目前為止,國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)艾葉的研究主要集中在化學(xué)成分及藥理作用方面[14-18],而對(duì)不同產(chǎn)地艾葉及土壤中礦物元素的分布特征、富集特性、環(huán)境安全性評(píng)價(jià)等方面的研究尚未見報(bào)道。本研究旨在分析不同主產(chǎn)區(qū)艾葉及土壤中礦物元素的吸收特性及變異規(guī)律,進(jìn)而探討艾葉與土壤中礦物元素的作用關(guān)系,研究結(jié)果可為艾葉藥材的道地性評(píng)價(jià)及種植適宜區(qū)的選擇提供有益參考。
1 材料與方法
1.1 樣品采集
艾葉及土壤樣品于2019年5—6月在河南省南陽(yáng)市、湖北省蘄春縣、河南省安陽(yáng)市、浙江省寧波市及河北省安國(guó)市等地采集,經(jīng)南陽(yáng)理工學(xué)院黃顯章教授鑒定為菊科蒿屬植物艾。將艾葉樣品去雜、干燥、剪碎、混勻后備用。土壤樣品取自對(duì)應(yīng)種植區(qū) 0~20 cm耕作層,設(shè)置3個(gè)平行,每個(gè)產(chǎn)區(qū)土壤樣品采集1 kg,除雜、風(fēng)干、研磨后過(guò)100目篩備用。
1.2 儀器與試劑
ICP-MS儀(Thermo X-Ⅱ,購(gòu)自美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司);微波消解系統(tǒng)(Mars-5,購(gòu)自美國(guó)CEM公司);硝酸(優(yōu)級(jí)純,購(gòu)自德國(guó)Merk公司);元素標(biāo)準(zhǔn)溶液(單標(biāo)/混標(biāo),購(gòu)自美國(guó)Spex公司);超純水(自制)。
1.3 工作參數(shù)
射頻收發(fā)核心電路射頻(RF)功率為1 200 W,霧化器壓力為1.0 bar,輔助氣(氬氣)流量為 0.7 L/min,等離子氣(氬氣)流量為13.0 L/min,蠕動(dòng)泵轉(zhuǎn)速分析為30 r/min、沖洗為70 r/min。
1.4 樣品消解
植物樣品:精確稱取艾葉樣品約0.4 g于消解內(nèi)罐,加65%濃HNO3 5 mL浸泡過(guò)夜,160 ℃保持 6 h,冷卻至室溫,趕酸,移入25 mL容量瓶中,洗液合并后定容,混勻備用,同時(shí)做試劑空白試驗(yàn)。土壤樣品:精確稱取土壤樣品約0.1 g于消解內(nèi)罐,加65%濃HNO3 5 mL浸泡過(guò)夜,加H2O2 2 mL及HF 2 mL,于200 ℃消解4 h,冷卻至室溫,趕酸,移入 25 mL 容量瓶中,洗液合并后定容,混勻備用,同時(shí)做試劑空白試驗(yàn)。以上程序完成后上機(jī)測(cè)定各元素含量,以待測(cè)元素質(zhì)譜信號(hào)與內(nèi)標(biāo)元素質(zhì)譜信號(hào)的強(qiáng)度比進(jìn)行定量分析。
1.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線
1% HNO3介質(zhì)配制不同濃度梯度的混標(biāo)溶液及空白試劑,建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。以元素質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(x),以待測(cè)元素峰值與內(nèi)標(biāo)元素峰值的比值為縱坐標(biāo)(y)進(jìn)行回歸,并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果顯示,各待測(cè)元素線性關(guān)系良好,線性相關(guān)系數(shù)均不低于0.997 6,線性范圍及定量限均符合分析要求,詳見表1。
1.6 方法學(xué)考察
在精密度試驗(yàn)中,取各標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進(jìn)樣6次并測(cè)定,RSD值均小于2.28%,表明精密度良好。在穩(wěn)定性試驗(yàn)中,取同一供試品溶液,每隔1 h測(cè)定,重復(fù)6次,RSD值均小于2.72%,表明6 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。在重復(fù)性試驗(yàn)中,取同一供試品溶液6份,測(cè)定后計(jì)算RSD,結(jié)果顯示均小于3.06%,表明重復(fù)性較好。在加樣回收率試驗(yàn)中,取已測(cè)定的樣品5份,測(cè)定后計(jì)算平均加樣回收率,RSD值在98.66%~102.17%之間。
2 結(jié)果與分析
2.1 不同產(chǎn)地艾葉中礦物元素含量分析
不同產(chǎn)地艾葉中礦物元素含量的分析結(jié)果見表2。由表2可知,各元素含量整體呈現(xiàn)出K>Ca>P>Mg>Fe>Mn>Na>Zn>Cu>Pb>Ni>As>Cd>Mo>Hg的規(guī)律,元素?cái)?shù)量級(jí)在10-5~102 g/kg之間。K、Ca、P、Mg、Fe、Mn、Na、Zn、Cu、Ni、Mo是植物生長(zhǎng)所必需的元素,具有調(diào)節(jié)細(xì)胞生理功能、酶活性及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等功能。其中,K含量最高的是祁艾,平均含量為39.297 g/kg,顯著高于海艾(P<0.05);Ca含量最高的是蘄艾,平均含量為 12.261 g/kg,顯著高于海艾;Mg含量最高的是祁艾,平均含量為3.710 g/kg,顯著高于蘄艾和海艾;Fe、Zn及Na含量最高的分別是祁艾、海艾和祁艾,平均含量分別為1.818 g/kg、130.161、199.485 mg/kg,均顯著高于其他4個(gè)產(chǎn)區(qū);Ni含量最高的是南陽(yáng)艾,平均含量為2.983 mg/kg,顯著高于蘄艾、海艾和北艾;Mo含量最高的是祁艾,平均含量為 0.536 mg/kg,顯著高于海艾和南陽(yáng)艾;P和Mn含量最高的是蘄艾,平均含量分別為3.682、0.253 g/kg,在產(chǎn)地間未達(dá)到顯著水平。以上述結(jié)果可見,不同產(chǎn)地艾葉中礦物元素含量各具特征且差異較大,這可能與產(chǎn)地間氣候、土壤、水文等生態(tài)因子不同有直接關(guān)系。
Pb、Cd、Hg、Cu、As為重金屬元素,其蓄積量是中藥材及飲片安全性評(píng)價(jià)的重要指標(biāo)。其中,Pb含量最高的是蘄艾,平均含量為3.912 mg/kg,顯著高于南陽(yáng)艾和北艾;Cd含量最高的是海艾,平均含量為0.787 mg/kg,顯著高于祁艾;As含量最高的是祁艾,平均含量為1.594 mg/kg,顯著高于其他4個(gè)產(chǎn)區(qū);Hg含量最高的是蘄艾,平均含量為54.598 μg/kg,顯著高于其他4個(gè)產(chǎn)區(qū);Cu含量最高的是南陽(yáng)艾,平均含量為44.104 mg/kg,產(chǎn)地間差異不顯著。在2019年國(guó)家藥典委發(fā)布的《藥材和飲片檢定通則公示稿》中,明確以上5種重金屬元素的限度檢查:Pb含量≤5 mg/kg,Cd含量≤1 mg/kg,As含量≤2 mg/kg,Hg含量≤0.2 mg/kg,Cu含量≤20 mg/kg。對(duì)照上述標(biāo)準(zhǔn)分析發(fā)現(xiàn),各產(chǎn)地艾葉中Cu含量均超出限度,這可能與艾葉有選擇地吸收和積累Cu元素有關(guān),也可能與該元素在土壤中的賦存狀態(tài)有關(guān),須要重視和進(jìn)一步的探索。
從各元素的變異系數(shù)(表2)可以看出,艾葉中K、Ca、Mg、Cu、Ni等元素的變異系數(shù)在23.12%~32.64%之間,表明這些元素在4個(gè)產(chǎn)區(qū)艾葉中的含量比較接近,在其生長(zhǎng)過(guò)程中需要一定量的蓄積,且易于成為影響艾葉生長(zhǎng)的最小限制因子。Cd、Mo、As、Na等元素的變異系數(shù)較高(75%以上),說(shuō)明以上元素在艾葉中離散程度較高,原因可能是產(chǎn)地間的立地條件差異較大,也可能是部分產(chǎn)地受到污染,從而導(dǎo)致艾葉中Cd、As等元素的含量較高。
2.2 艾葉主產(chǎn)區(qū)土壤質(zhì)量評(píng)價(jià)
由表3可知,與中國(guó)土壤(A層)化學(xué)元素背景值相比,艾葉主產(chǎn)區(qū)土壤中Cd元素的平均值明顯高于背景值(2倍以上);K、Fe、Mn、Zn、Pb、Cu的平均含量略高于背景值;Mg、Na、Ni、As、Hg的平均含量略低于背景值;Ca的平均含量明顯低于背景值。在所測(cè)元素中,Mo、Hg、Ca、Mg的變異系數(shù)相對(duì)較高(87%以上),屬于中至強(qiáng)變異性;而其他元素變異系數(shù)相對(duì)較低(6.77%~50.25%),屬于弱至中變異性。根據(jù)GB 15618—2018《土壤環(huán)境質(zhì)量 農(nóng)用地土壤污染風(fēng)險(xiǎn)管控標(biāo)準(zhǔn)(試行)》對(duì)土壤污染風(fēng)險(xiǎn)最低篩選值規(guī)定:Pb含量≤70 mg/kg,Cd含量≤0.3 mg/kg,As含量≤20 mg/kg,Hg含量≤0.5 mg/kg,Cu含量≤50 mg/kg,艾葉主產(chǎn)區(qū)土壤樣本均符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn),土壤整體質(zhì)量較高,在規(guī)范化、規(guī)?;N植方面具有較為廣闊的發(fā)展前景。
2.3 艾葉土壤礦質(zhì)元素含量的差異分析
對(duì)不同產(chǎn)地艾葉土壤中礦質(zhì)元素的含量進(jìn)行方差分析和多重比較,結(jié)果詳見表4??梢钥闯觯~土壤中礦物元素的含量在產(chǎn)地間差異較大,各元素含量整體呈現(xiàn)出Fe>K>Na>Ca>Mg>P>Mn>Zn>Cu>Pb>Ni>As>Cd>Mo>Hg的規(guī)律,元素?cái)?shù)量級(jí)在10-5~102 g/kg之間。其中,K含量最高的產(chǎn)區(qū)是浙江寧波, 平均含量為28.013 g/kg,顯著高于湖北蘄春和河南南陽(yáng);Ca含量最高的產(chǎn)區(qū)是河北安國(guó),平均含量為17.993 g/kg,顯著高于湖北蘄春、浙江寧波和河南南陽(yáng);Ni含量最高的是湖北蘄春,平均含量為30.930 mg/kg,顯著高于浙江寧波;Mo含量最高的是河北安國(guó),平均含量為 0.592 mg/kg,顯著高于湖北蘄春、河南南陽(yáng)和河南安陽(yáng);Pb含量最高的產(chǎn)區(qū)是浙江寧波,平均含量為46.754 mg/kg,顯著高于河北安國(guó)、河南南陽(yáng)和河南安陽(yáng);As含量最高的產(chǎn)區(qū)是湖北蘄春,平均含量為9.556 mg/kg,顯著高于河南南陽(yáng);Fe、Na、Mg、P、Mn、Zn、Cu、Cd、Hg等9種元素的含量在各產(chǎn)區(qū)間的差異均未達(dá)到顯著水平。
2.4 艾葉及其土壤中礦物元素特征分析
主成分分析是利用降維的方式從原始變量中尋求少數(shù)的幾個(gè)主成分,但盡可能多地保留原始變量的信息,該方法具有信息損失少、相關(guān)最優(yōu)和回歸最優(yōu)等特點(diǎn)。為探索艾葉及其土壤中的特征性礦物元素,以15種礦物元素的含量為變量進(jìn)行主成分分析和特征元素識(shí)別,結(jié)果詳見表5和表6。表5闡釋了艾葉及土壤中礦物元素的主成分對(duì)原有變量的總體描述情況,即兩者分別提取了4個(gè)和5個(gè)主成分,分別解釋了原始變量的71.135%和86.490%。表6是主成分旋轉(zhuǎn)后的因子載荷矩陣,由表6可知,第1主成分中,艾葉樣品的K、Ca、Mg、Fe、Mo、Na、As等元素載荷系數(shù)較大,而土壤樣品的P、Mg、Zn、Pb、Cd、Hg、 Cu等元素載荷系數(shù)較大。因此,可以認(rèn)為K、Ca、Mg、Fe、Mo、Na、As是艾葉的特征性元素,而P、Mg、Zn、Pb、Cd、Hg、Cu是產(chǎn)區(qū)土壤的特征性元素。
2.5 富集特征分析
富集系數(shù)可直接體現(xiàn)植物從土壤中攝取元素的能力,即反映土壤-植物系統(tǒng)中元素遷移的難易程度。富集系數(shù)越大,表明植物對(duì)某元素的富集能力越強(qiáng),當(dāng)C≤0.1時(shí)表示元素在植物中強(qiáng)烈貧化,0.1
3 討論與結(jié)論
本研究采用電感耦合等離子(ICP-MS)法測(cè)定和分析了不同主產(chǎn)區(qū)艾葉及土壤中15種元素的含量,研究?jī)?nèi)容能夠涵蓋我國(guó)目前艾葉主產(chǎn)區(qū)的整體情況,為探索艾葉與土壤中礦物元素的相互關(guān)系提供研究基礎(chǔ),具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。
通過(guò)對(duì)艾葉及土壤礦物元素分析發(fā)現(xiàn),不同主產(chǎn)區(qū)艾葉中礦物元素的分布存在較大差異,各元素含量呈現(xiàn)出K>Ca>P>Mg>Fe>Mn>Na>Zn>Cu>Pb>Ni>As>Cd>Mo>Hg的規(guī)律,其中K、Ca、Mg、Fe、Na、Zn、Pb、Ni、As、Cd、Mo、Hg等12種元素在產(chǎn)區(qū)間差異顯著;K、Ca、Mg、Cu、Ni等元素的變異系數(shù)較低,Cd、Mo、As、Na等元素變異系數(shù)較高,以上結(jié)果可能與艾葉對(duì)無(wú)機(jī)離子的選擇性吸收和積累的差異較大有關(guān),使得同一藥材中元素含量明顯不同。土壤礦物元素的含量呈現(xiàn)出Fe>K>Na>Ca>Mg>P>Mn>Zn>Cu>Pb>Ni>As>Cd>Mo>Hg的規(guī)律,其中K、Ca、Pb、Ni、As、Mo等6種元素在產(chǎn)區(qū)土壤中間差異顯著;與中國(guó)土壤(A層)化學(xué)元素背景值相比,Cd明顯高于背景值,Ca明顯低于背景值,其他元素背景值在同一水平。艾葉主產(chǎn)區(qū)土壤樣本均符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn),土壤整體質(zhì)量較高,在規(guī)范化、規(guī)?;N植方面具有較為廣闊的發(fā)展前景。
通過(guò)對(duì)特征性元素篩選發(fā)現(xiàn),K、Ca、Mg、Fe、Mo、Na、As是艾葉的特征性元素,P、Mg、Zn、Pb、Cd、Hg及Cu是艾葉產(chǎn)地土壤的特征性元素,這為艾葉的產(chǎn)地溯源和基于礦物元素的品質(zhì)評(píng)價(jià)提供了關(guān)鍵因子。通過(guò)對(duì)各元素的富集特征分析可知,不同產(chǎn)地艾葉中各元素的富集水平各具特點(diǎn),其中,P、Na、Cd、Fe、Mn、Pb、Ni、As等元素在產(chǎn)地間的富集水平較為相似,P、Na、Cd等元素均表現(xiàn)為相對(duì)富集或強(qiáng)烈富集,F(xiàn)e、Mn、Pb、Ni、As等元素均表現(xiàn)為相對(duì)貧化或強(qiáng)烈貧化,鑒于以上結(jié)果,在艾葉規(guī)范化種植生產(chǎn)中,應(yīng)注意P肥的減施,且應(yīng)控制土壤及周圍環(huán)境中Cd的含量,避免艾葉對(duì)Cd的過(guò)度富集導(dǎo)致藥材中重金屬含量超標(biāo),影響藥材安全。K、Ca、Mg、Zn、Cu、Mo、Hg等元素在產(chǎn)地間的富集水平差異較大,如海艾中Ca和Mg的富集系數(shù)高達(dá)13.33和7.63,分別約是祁艾的20倍和25倍;蘄艾中Mo的富集系數(shù)高達(dá)7.07,約是海艾的15倍;K、Zn、Cu、Hg等元素的富集系數(shù)在產(chǎn)地間也存在不同程度的差異。推測(cè)以上結(jié)果的原因可能是由于艾葉對(duì)礦質(zhì)元素的吸收除了與土壤中的礦質(zhì)元素總量相關(guān)外,還與土壤理化性質(zhì)、灌溉施肥、降水量、元素的存在形態(tài)以及艾葉對(duì)礦質(zhì)元素的選擇性吸收有關(guān)。由于立地條件的差異性,即使遺傳背景相同的藥用植物,也會(huì)使體內(nèi)代謝機(jī)制有選擇地吸收和積累無(wú)機(jī)元素,致使其元素含量和富集水平明顯不同,這也是道地藥材形成的原因之一。另外,本研究還發(fā)現(xiàn),各產(chǎn)地艾葉對(duì)P、Na、Cd等元素有較強(qiáng)的富集作用,而Fe、Mn、Pb、Ni、As等元素的富集水平貧化,但土壤中P、Na的含量遠(yuǎn)低于Fe,Cd的含量遠(yuǎn)低于Mn、Pb、Ni、As,這表明植物從土壤中富集無(wú)機(jī)元素的能力不完全取決于某一元素在土壤中的含量,還可能與植物生理特征和元素在土壤中的賦存形態(tài)有關(guān)。因此,富集系數(shù)只能在一定程度上反映植物對(duì)土壤元素的吸收富集能力,為更深入地闡釋植物對(duì)元素的富集特性及累積規(guī)律,后期本課題組將對(duì)不同產(chǎn)區(qū)艾葉及土壤中礦物元素的動(dòng)態(tài)存在形式及有效性進(jìn)行持續(xù)探索。
總體來(lái)看,艾葉對(duì)各元素吸收能力的大小不僅與艾葉對(duì)該元素的需求量和吸收特點(diǎn)有關(guān),也與艾葉產(chǎn)區(qū)的土壤背景關(guān)系密切。本研究為探索艾葉及土壤中礦物元素的分布態(tài)勢(shì)和作用規(guī)律提供數(shù)據(jù)支撐,也為艾葉的品質(zhì)評(píng)價(jià)及道地性研究提供有益參考。
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