Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌中L1-CAM的表達(dá)與臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系*

張 媛，張 競(jìng)，劉 靜，劉夢(mèng)君

(蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院腫瘤婦科，安徽 蚌埠 233004)

子宮內(nèi)膜癌(endometrial carcinoma，EC)是女性生殖系統(tǒng)常見(jiàn)的惡性腫瘤[1]，在我國(guó)發(fā)病率僅次于宮頸癌。2019年國(guó)家癌癥中心統(tǒng)計(jì)，我國(guó)子宮內(nèi)膜癌發(fā)病率為10.28/10萬(wàn)，死亡率為1.9/10萬(wàn)。根據(jù)EC的病因及臨床特征，將其分為兩種類型，Ⅰ型EC為雌激素依賴型，占3/4，預(yù)后較好；Ⅱ型EC為非雌激素依賴型，占1/4，預(yù)后較差。盡管近年來(lái)在EC治療方面取得了新進(jìn)展，但EC的發(fā)病率和死亡率仍在增加[2]，即使早期EC患者也面臨著治療后腫瘤轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)，一旦出現(xiàn)轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)，患者的總生存期將少于16周[3]，這也是EC患者死亡的主要原因[4]。因此，尋找有效的反映預(yù)后的檢測(cè)指標(biāo)成為臨床上亟待解決的重要問(wèn)題之一。

L1-細(xì)胞黏附分子(L1-cell adhesion molecule，L1-CAM)是細(xì)胞黏附分子免疫球蛋白超家族中一員，最初在神經(jīng)系統(tǒng)中發(fā)現(xiàn)，在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育、神經(jīng)元遷移、雪旺細(xì)胞突起生長(zhǎng)，以及軸突束和髓鞘形成中起關(guān)鍵作用。研究表明，L1-CAM與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān)，并參與促進(jìn)腫瘤的增殖、遷移、侵襲和轉(zhuǎn)移[5]。本研究通過(guò)檢測(cè)EC中L1-CAM的表達(dá)情況，探討L1-CAM表達(dá)與Ⅰ 型EC臨床病理特征之間的關(guān)系及L1-CAM作為評(píng)價(jià)預(yù)后生物標(biāo)志物的價(jià)值。

1 對(duì)象與方法

1.1對(duì)象 選擇2011年1月-2013年4月蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院腫瘤婦科手術(shù)治療的90例子宮內(nèi)膜癌患者，年齡36～71歲，平均年齡(56.23±11.05)歲。所有病例經(jīng)病理學(xué)證實(shí)為原發(fā)性子宮內(nèi)膜癌，且病理類型為子宮內(nèi)膜樣腺癌，即Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌。患者術(shù)前未接受過(guò)放化療及激素類藥物治療，無(wú)其他惡性腫瘤及嚴(yán)重合并疾病，能耐受手術(shù)。另選擇90例因子宮肌瘤行全子宮切除術(shù)患者，術(shù)后病理證實(shí)為正常子宮內(nèi)膜組織作為對(duì)照組，年齡40～72歲，平均年齡(55.71±11.8)歲。本研究獲本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2方法

1.2.1主要試劑 鼠抗人L1-CAM抗體購(gòu)自Abcam公司，DAB顯色試劑盒及免疫組化試劑盒購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.2.2免疫組織化學(xué)染色方法 采用4 %的福爾馬林將標(biāo)本固定，常規(guī)石蠟包埋處理，連續(xù)切片厚度為4 μm，置于烤箱中烤干。參照S-P試劑盒檢測(cè)各石蠟切片中L1-CAM的表達(dá)情況，具體步驟嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。一抗均按照1∶100比例稀釋，磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.2.3結(jié)果判定 所有切片免疫組化結(jié)果由兩名病理科專業(yè)醫(yī)師診斷判定，盲法讀片觀察結(jié)果。L1-CAM在細(xì)胞質(zhì)和(或)細(xì)胞膜中出現(xiàn)棕黃色顆粒判定為陽(yáng)性，染色定位于腫瘤細(xì)胞邊緣，中心以及彌漫分布，根據(jù)細(xì)胞陽(yáng)性比率和染色強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)定和分析，陽(yáng)性比率評(píng)分0分(0 %)、1分(0～10 %)、2分(10 %～50 %)、3分(>50 %)，染色強(qiáng)度記分：0分(不著色)、1分(著色淡)、2分(著色中)、3分(著色深)。每張切片的陽(yáng)性比率評(píng)分×染色程度評(píng)分結(jié)果為最后得分。0～1分為陰性，≥2分為陽(yáng)性。

1.3隨訪 通過(guò)門(mén)診、電話方式對(duì)90例EC患者進(jìn)行術(shù)后為期5年的隨訪，隨訪截止時(shí)間為2019年4月30日，記錄5年總生存期?？偵嫫?overall survival，OS)指自手術(shù)日到患者死亡日期或隨訪截止日期。

2 結(jié)果

2.1L1-CAM表達(dá)水平的比較 EC組織中L1-CAM的陽(yáng)性表達(dá)率為48.9 %(44/90)，明顯高于正常子宮內(nèi)膜組織中的13.3 %(12/90)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=26.54，P<0.05)。見(jiàn)表1、圖1。

表1 L1-CAM在子宮內(nèi)膜癌和正常子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)水平

圖1 子宮內(nèi)膜癌組織及正常子宮內(nèi)膜組織中L1-CAM的表達(dá)情況(SP法，×400)

2.2子宮內(nèi)膜癌組織中L1-CAM陽(yáng)性表達(dá)與患者臨床特征關(guān)系 EC組織中L1-CAM陽(yáng)性表達(dá)與患者年齡、絕經(jīng)情況、腫瘤病灶大小、FIGO分期、術(shù)后輔助治療無(wú)關(guān)(P>0.05)，而與細(xì)胞分化、肌層浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 L1-CAM陽(yáng)性表達(dá)率與子宮內(nèi)膜癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.3影響子宮內(nèi)膜癌患者存活率的單因素分析 對(duì)90例EC患者進(jìn)行為期5年的隨訪，其中存活67例，死亡23例，5年患者總存活率為74.44 %。EC患者存活率與患者年齡、絕經(jīng)情況、FIGO分期、腫瘤病灶大小、術(shù)后輔助治療之間無(wú)明顯相關(guān)性(P>0.05)。低分化、肌層浸潤(rùn)深度≥1/2、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及L1-CAM陽(yáng)性表達(dá)者存活率顯著低于高中分化、肌層浸潤(rùn)深度<1/2、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及L1-CAM陰性表達(dá)者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 影響子宮內(nèi)膜癌患者存活率的單因素分析

2.4子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后影響因素的多因素分析 多因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸分析結(jié)果顯示，細(xì)胞分化、肌層浸潤(rùn)深度、L1-CAM表達(dá)均是影響EC患者預(yù)后的危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見(jiàn)表4。

表4 影響子宮內(nèi)膜癌患者存活率的Cox多因素分析(n=90)

3 討論

EC是原發(fā)于子宮內(nèi)膜上皮的惡性腫瘤，近年來(lái)發(fā)病率逐年上升并呈年輕化趨勢(shì)[6]。雖然早期EC尤其是Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌預(yù)后良好，但中晚期、分化差的EC患者預(yù)后仍較差。因此有必要尋找一種新的臨床判斷預(yù)后指標(biāo)，為EC患者制定更適宜的個(gè)體化術(shù)后治療方案，從而降低EC患者的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)，有效提高患者的存活率。

L1-CAM是一種促進(jìn)細(xì)胞增殖、遷移、侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)的神經(jīng)細(xì)胞黏附分子，其表達(dá)與結(jié)直腸、胃、腎和乳腺等多種惡性腫瘤進(jìn)展相關(guān)[7]。研究表明L1-CAM表達(dá)與Ⅰ 期EC的無(wú)進(jìn)展生存期和總存活率有關(guān)。L1-CAM在復(fù)發(fā)性EC中表達(dá)水平較高，L1-CAM表達(dá)與低PFS相關(guān)，且在無(wú)病存活率較低的腫瘤組織中表達(dá)較強(qiáng)。研究證實(shí)，L1-CAM在腫瘤中的表達(dá)與低分化有關(guān)，L1-CAM陽(yáng)性患者更有可能屬于較高的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)組[8-10]。

一些研究表明在EC中L1-CAM陽(yáng)性表達(dá)與腫瘤侵襲、更高的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)、總存活率下降密切相關(guān)[11-15]。Zeimet等[15]通過(guò)多中心隊(duì)列研究表明，對(duì)于Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌FIGO分期為Ⅰ期患者，L1-CAM是最強(qiáng)的預(yù)測(cè)因子。本研究結(jié)果表明，90例EC患者中L1-CAM表達(dá)水平顯著高于正常子宮內(nèi)膜組織，提示L1-CAM表達(dá)水平升高，可能與EC的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。進(jìn)一步探討L1-CAM表達(dá)與EC惡性程度的相關(guān)性，結(jié)果證實(shí)L1-CAM表達(dá)水平與EC患者細(xì)胞分化、肌層浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，而與EC患者年齡、絕經(jīng)情況、腫瘤大小、FIGO分期及術(shù)后輔助治療無(wú)關(guān)(P>0.05)。低分化、浸潤(rùn)深度≥1/2肌層、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的EC患者中L1-CAM陽(yáng)性表達(dá)率均高于高中分化、淺肌層浸潤(rùn)、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的EC患者(P<0.05)，表明L1-CAM陽(yáng)性表達(dá)與EC惡性程度呈正相關(guān)。本研究通過(guò)對(duì)EC患者術(shù)后5年存活率統(tǒng)計(jì)，結(jié)果顯示L1-CAM陽(yáng)性表達(dá)者總存活率低于L1-CAM陰性表達(dá)者，與該領(lǐng)域相關(guān)研究報(bào)道結(jié)論一致，表明L1-CAM表達(dá)水平與EC患者預(yù)后密切相關(guān)，其高表達(dá)可能提示預(yù)后不良。單因素分析結(jié)果顯示，低分化、深肌層浸潤(rùn)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及L1-CAM陽(yáng)性表達(dá)者存活率低于高中分化、淺肌層浸潤(rùn)、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及L1-CAM陰性表達(dá)者。多因素Cox回歸分析表明，L1-CAM陽(yáng)性表達(dá)、低分化、深肌層浸潤(rùn)是EC患者影響預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，表明L1-CAM能為判斷EC患者預(yù)后提供一定依據(jù)。

綜上所述，L1-CAM陽(yáng)性表達(dá)與EC惡性程度密切相關(guān)，通過(guò)檢測(cè)EC中L1-CAM表達(dá)水平，為患者病情進(jìn)展情況、治療選擇和預(yù)后判斷提供一定理論依據(jù)。