李 杰，黃曉宇，尚學(xué)峰，楊姣姣，張娟麗，謝開會，張亞麗，閆尊強，王鵬飛，高小莉，楊巧麗，馬艷萍，滾雙寶，3

(1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，甘肅 蘭州 730070；2.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)圖書館，甘肅 蘭州 730070；3.甘肅省現(xiàn)代養(yǎng)豬技術(shù)工程研究中心，甘肅 蘭州 730070)

我國作為世界第一大花椒生產(chǎn)國，花椒種植歷史悠久，品種齊全，種植面積超過113萬hm2，主產(chǎn)區(qū)產(chǎn)量超過37萬t[1-2]。花椒果皮常用作調(diào)味品，花椒籽為花椒的主要副產(chǎn)品，占花椒總質(zhì)量的60%以上[3]，花椒籽油中富含脂質(zhì)和蛋白質(zhì)，多不飽和脂肪酸種類多且含量高[4-5]。李路路[6]研究發(fā)現(xiàn)，花椒籽油中多不飽和脂肪酸高達85%。隨著人們生活水平的不斷提高，對豬肉品質(zhì)有了更高的要求，肌內(nèi)脂肪、脂肪酸含量是評價肉品質(zhì)的指標(biāo)，直接影響著肉的風(fēng)味和口感。然而，豬肉中多不飽和脂肪酸的合成需要中間產(chǎn)物(亞油酸、α-亞麻酸等)，且胴體中的脂肪酸含量與飼料有直接關(guān)系[7]?；ń纷阎懈缓退?、亞油酸、a-亞麻酸、棕櫚酸等脂肪酸[8]，是豬從飼料中獲取脂肪酸較為理想的來源，在飼料工業(yè)中具有較好的利用價值。近年來，對花椒籽的開發(fā)利用方面研究炙熱，已有學(xué)者在雞[9]、魚[6]、豬[10]上進行試驗，研究均表明，在日糧中添加一定比例的花椒籽粉可提高動物生產(chǎn)性能。由此可見，花椒籽可在飼料行業(yè)開發(fā)利用，它的合理利用有望節(jié)約生產(chǎn)成本和提高經(jīng)濟效益，解決花椒生產(chǎn)中副產(chǎn)品浪費的問題。

脂肪酸結(jié)合蛋白2基因(Fatty acid-binding protein 2 gene，F(xiàn)ABP2)，蛋白分子質(zhì)量較小(14～15 ku)，屬于脂肪酸結(jié)合蛋白家族(FABPs)[11]，該家族基因大多含有多態(tài)性位點，通過調(diào)節(jié)脂肪酸代謝途徑來提高肉品質(zhì)，其多態(tài)性位點間接影響肌內(nèi)脂肪含量[12-13]，F(xiàn)ABPs的這種生物學(xué)功能對豬肉肌內(nèi)脂肪沉積有潛在影響。肌內(nèi)脂肪是豬肉品質(zhì)評定的一項重要指標(biāo)[14]，其含量影響肉的風(fēng)味。現(xiàn)階段育種對豬肉肌內(nèi)脂肪含量要求較高，如何增加肌內(nèi)脂肪含量、提高肉品質(zhì)，是當(dāng)今育種工作者的目標(biāo)和難點。而FABP2與體內(nèi)脂肪沉積相關(guān)聯(lián)，可作為影響肌內(nèi)脂肪含量的候選基因，主要參與哺乳動物長鏈脂肪酸的運輸和吸收，影響脂類代謝[15-16]。其次可以通過調(diào)節(jié)參與脂質(zhì)代謝的基因和提高脂肪酸水溶性來促進腸道對多不飽和脂肪酸的吸收[17-18]。除此之外，F(xiàn)ABP2基因還與膽汁酸和維生素具有較高的親和力[19]，這表明FABP2具有極其重要的生理作用。

為了尋找與豬脂肪沉積有關(guān)的基因，本試驗通過研究FABP2在不同比例花椒籽飼喂育肥豬中的組織差異表達，以及對其編碼區(qū)進行克隆及生物信息學(xué)分析，以期為花椒籽的開發(fā)利用和FABP2基因作為肌內(nèi)脂肪沉積候選基因的相關(guān)研究提供參考依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 樣品采集

本試驗所用組織樣為畜牧學(xué)養(yǎng)豬產(chǎn)業(yè)技術(shù)創(chuàng)新團隊前期試驗保存[10]。試驗對象為288頭90日齡杜×長×大三元雜交育肥豬(33 kg)，由臨夏州眾惠豬業(yè)科技有限公司提供，將其隨機分為4組，每組設(shè)4個重復(fù)，每個重復(fù)18頭豬；對照組飼喂基礎(chǔ)日糧，各試驗組分別用花椒籽代替飼糧中2.5%(試驗Ⅰ組)、5.0%(試驗Ⅱ組)、7.5%(試驗Ⅲ組)的玉米，預(yù)試驗7 d，正試期100 d。試驗結(jié)束后，屠宰豬只，采集心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、十二指腸、空腸、回腸、結(jié)腸、直腸、盲腸和背肌組織，液氮迅速冷凍，-80 ℃超低溫冰箱長期保存。

1.2 試驗主要試劑

TRIzol試劑購自北京全式金生物技術(shù)有限公司，Evo M-MLV反轉(zhuǎn)錄預(yù)混型試劑盒購自湖南艾科瑞生物工程有限公司，2×Universal Blue SYBR Green qPCR Master Mix購自武漢賽維爾生物科技有限公司，DNA凝膠回收試劑盒購自擎科生物公司(西安)，2×Taq PCR Master Mix和DH5α感受態(tài)細胞購自北京天根生化科技有限公司，pMDTM19-T Vector購自寶生物工程(大連)有限公司，其他常用國產(chǎn)分析純試劑。

1.3 總RNA提取及反轉(zhuǎn)錄

用TRIzoL提取豬各組織中總RNA，用Evo M-MLV 反轉(zhuǎn)錄預(yù)混型試劑盒合成cDNA，具體步驟如下：①去除基因組DNA，反應(yīng)體系10 μL，其中5× gDNA Clean Reaction Mix 2 μL，Total RNA 2 μL，RNase free water 6 μL，反應(yīng)條件為42 ℃，2 min；4 ℃保存。②反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，步驟①反應(yīng)液10 μL，5× Evo M-MLV RT Reaction Mix 4 μL，RNase free water 6 μL，總體系20 μL。反應(yīng)條件：37 ℃，15 min；85 ℃，5 s；4 ℃保存。反應(yīng)結(jié)束后，測定cDNA濃度，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 FABP2引物設(shè)計與合成

根據(jù)NCBI GenBank數(shù)據(jù)庫中豬的FABP2基因參考序列(NM_001031780.1)、內(nèi)參基因GAPDH參考序列(NM_001206359.1)，利用Primer 5.0在線軟件分別設(shè)計特異性擴增引物，由中科羽瞳生物科技有限公司合成(表1)。

表1 引物信息Tab.1 Primers information

1.5 FABP2的表達檢測

以3個處理組中不同組織的cDNA為模板，采用qRT-PCR檢測FABP2基因在心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、十二指腸、空腸、回腸、結(jié)腸、直腸、盲腸和背肌各組織及各試驗組的相對表達量，qRT-PCR反應(yīng)總體系為20 μL：2×Universal Blue SYBR Green qPCR Master Mix 10 μL，上、下游引物各0.8 μL，cDNA 2 μL，ddH2O 6.4 μL。qRT-PCR反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性30 s；95 ℃變性5 s，60 ℃退火30 s，40個循環(huán)。每組設(shè)3個重復(fù)，以2-ΔΔCt法[20]計算相對表達量。

1.6 三元雜交育肥豬FABP2基因克隆及測序

PCR產(chǎn)物經(jīng) 1%瓊脂糖凝膠電泳檢測，按照DNA凝膠回收試劑盒說明書進行回收純化，將膠回收cDNA與pMDTM19-T Vector載體連接，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化到DH5α感受態(tài)細胞中，加入不含Amp的LB培養(yǎng)基中。搖床振蕩培養(yǎng)1 h后，取適量菌液涂到含Amp、IPTG和X-Gal的LB固體培養(yǎng)基上，進行藍白斑篩選。接著挑取單個白色菌落置于LB(含Amp)液體培養(yǎng)基中，搖床振蕩培養(yǎng)4～5 h。經(jīng)菌液PCR擴增，將陽性克隆菌液送至西安擎科生物公司進行測序。

1.7 生物信息學(xué)分析

本試驗通過多種生物信息學(xué)軟件對克隆得到的三元雜交育肥豬FABP2基因的CDS區(qū)進行分析。所用在線軟件及程序見表2。

1.8 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果與分析

2.1 FABP2基因在三元雜交育肥豬各組織差異表達

由圖1可知，F(xiàn)ABP2在三元雜交育肥豬各組織中均有不同程度表達，在空腸中顯著高表達(P<0.05)，背肌中表達量最低。但是總體來說在腸道組織的表達量較高。用不同比例花椒籽替代部分玉米飼喂三元雜交育肥豬后，與對照組相比，各試驗組在心臟、肺臟、腎臟、十二指腸、空腸和盲腸組織中，F(xiàn)ABP2顯著下調(diào)表達(P<0.05)；脾臟和回腸組織中，F(xiàn)ABP2在試驗Ⅱ組和試驗Ⅲ組中顯著上調(diào)表達(P<0.05)；肝臟、結(jié)腸、直腸組織中，F(xiàn)ABP2在試驗Ⅰ組顯著上調(diào)表達(P<0.05)；FABP2在各試驗組不同組織中的表達無明顯規(guī)律(圖2)。

表2 生物信息學(xué)分析軟件Tab.2 Bioinformatics analysis software

不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。圖2同。Different lowercase letters indicate significant difference(P<0.05).The same as Fig.2.

圖2 FABP2基因在不同比例花椒籽飼喂三元雜交育肥豬的組織差異表達Fig.2 FABP2 gene was differentially expressed in tissues of DLY fattening pigs fed with different proportions of Zanthoxylum seed

2.2 三元雜交育肥豬FABP2基因CDS區(qū)PCR擴增及克隆測序

用TRIzol法提取三元雜交育肥豬回腸組織的總RNA，反轉(zhuǎn)錄為cDNA，以cDNA為模板進行PCR擴增，經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測，所得一條427 bp的特異性條帶，與預(yù)期片段大小一致(圖3)。測序結(jié)果表明，F(xiàn)ABP2基因序列全長427 bp，包括5′UTR區(qū)10 bp，3′UTR區(qū)18 bp和CDS區(qū)399 bp，編碼132個氨基酸，其中152位點處的堿基A突變?yōu)镚(圖4)，導(dǎo)致第51位點的賴氨酸突變?yōu)榫彼?；核苷酸序?08位點的堿基T突變?yōu)镃，導(dǎo)致第103位點的亮氨酸突變?yōu)榻z氨酸，均為錯義突變(圖5)。

M.DNA Marker DL2000；1，2.FABP2基因PCR擴增產(chǎn)物。M.DNA Marker DL2000 ；1，2.PCR amplification product of FABP2 gene.

2.3 同源性分析及系統(tǒng)進化樹的構(gòu)建

用NCBI中的Blast在線軟件，分析克隆所得三元雜交育肥豬FABP2CDS區(qū)序列與其他物種CDS區(qū)序列的同源性，結(jié)果顯示，三元雜交育肥豬FABP2CDS區(qū)序列與綿羊(XM_004009588.5)、馬(NM_001081903.2)、牛(NM_001025332.1)、犬(XM_038444525.1)、智人(NM_000134.4)、獼猴(XM_015139143.2)、小鼠(NM_007980.3)、大鼠(NM_013068.1)、雞(NM_001007923.2)的同源性分別為87.72%，83.33%，87.47%，88.97%，85.96%，86.97%，79.39%，81.42%，72.08%。其中，三元雜交育肥豬與綿羊親緣關(guān)系最近，與雞親緣關(guān)系最遠，利用MEGA 7.0軟件計算不同物種間的遺傳距離(表3)并構(gòu)建系統(tǒng)進化樹(圖6)，分析結(jié)果與同源性比對相吻合。

圖4 測序結(jié)果分析Fig.4 Analysis of sequencing results

圖5 氨基酸序列比對Fig.5 Alignment of amino acid sequences

2.4 三元雜交育肥豬FABP2蛋白理化性質(zhì)分析

用ProtParam軟件預(yù)測三元雜交育肥豬FABP2蛋白的理化性質(zhì)，預(yù)測結(jié)果顯示，分子式為C677H1066N186O205S4，分子質(zhì)量為15.219 27 ku，原子總數(shù)為2 138，理論等電點(pI)為6.61，偏酸性；其中天冬酰胺(Asn)、谷氨酸(Glu)和賴氨酸(Lys)所占比例最高(9.80%)，組氨酸(His)最低(0.80%)(圖7)；哺乳動物網(wǎng)織紅細胞體外估計半衰期為30 h，大腸桿菌體內(nèi)半衰期大于10 h，酵母體內(nèi)大于20 h；消光系數(shù)(γ=280 nm)為16 960；脂肪族氨基酸指數(shù)為78.94，不穩(wěn)定指數(shù)(Ⅱ)為25.92，表明該蛋白是穩(wěn)定蛋白。

2.5 三元雜交育肥豬FABP2蛋白二三級結(jié)構(gòu)預(yù)測

采用在線軟件SOMPA預(yù)測三元雜交育肥豬FABP2蛋白二級結(jié)構(gòu)，結(jié)果顯示(圖8)，F(xiàn)ABP2蛋白的二級結(jié)構(gòu)主要由延伸鏈和無規(guī)則卷曲構(gòu)成，其中延伸鏈占37.12%，由49個氨基酸殘基組成；無規(guī)則卷曲占32.58%，由43個氨基酸殘基組成；α-螺旋占18.94%，由25個氨基酸殘基組成；β-轉(zhuǎn)角占11.36%，由15個氨基酸殘基組成。用Phyre2在線軟件通過同源建模法構(gòu)建三元雜交育肥豬FABP2蛋白三級結(jié)構(gòu)模型，預(yù)測結(jié)果與二級結(jié)構(gòu)預(yù)測一致。同時對其親緣關(guān)系最近的綿羊和最遠的雞構(gòu)建模型，三元雜交育肥豬三級結(jié)構(gòu)與綿羊相比差異較小，雞延伸鏈和無規(guī)則卷曲所占比例均低于三元雜交育肥豬，表明二者蛋白在三級結(jié)構(gòu)上存在差異，在生物體內(nèi)發(fā)揮的作用也有所不同，但三者的三級結(jié)構(gòu)都主要由延伸鏈和無規(guī)則卷曲構(gòu)成，這也是氨基酸序列保守性的原因(圖9)。

表3 不同物種間遺傳距離Tab.3 Genetic distance between different species

圖6 不同物種FABP2基因系統(tǒng)進化樹分析Fig.6 Phylogenetic tree analysis of FABP2 gene in different species

圖7 氨基酸組成及頻率Fig.7 Amino acid composition and frequency

h.α-螺旋；t.β-轉(zhuǎn)角；c.無規(guī)則卷曲；e.延伸鏈。h.α-helix；t.Beta angle；c.Random crimp；e.Extension chain.

A.三元雜交育肥豬；B.綿羊；C.雞。A.DLY fattening pigs ；B.Sheep ；C.Chicken.

2.6 三元雜交育肥豬FABP2蛋白親疏水性和跨膜區(qū)分析

運用ExPASy在線軟件Protscale對三元雜交育肥豬FABP2氨基酸序列進行親疏水性分析(圖10-A)，氨基酸序列中，第14位出現(xiàn)最小疏水值(-2.711)，第65位出現(xiàn)最大疏水值(1.967)，親水性氨基酸占比(65%)高于疏水性氨基酸(35%)。可推測三元雜交育肥豬FABP2蛋白為親水性蛋白。用在線軟件TMHMM預(yù)測跨膜螺旋區(qū)域(圖10-B)，預(yù)測期望值為0，表明該蛋白不存在跨膜區(qū)，為非跨膜蛋白，主要在細胞質(zhì)中發(fā)揮作用。

2.7 三元雜交育肥豬 FABP2 蛋白亞細胞定位和信號肽分析

用PSORT Ⅱ Prediction對蛋白亞細胞定位分析，結(jié)果表明(圖11-A)，該蛋白在細胞質(zhì)(56.50%)、細胞核(30.40%)、線粒體(8.70%)和過氧化物酶體(4.30%)中發(fā)揮作用；SignalP 4.1預(yù)測信號肽，結(jié)果表明，信號肽S預(yù)測均值為0.104，該蛋白不具有信號肽，可推測為非分泌蛋白(圖11-B)。

圖10 FAPB2親疏水性分析(A)和跨膜螺旋結(jié)構(gòu)域預(yù)測(B)Fig.10 FAPB2 hydrophobicity analysis(A)and transmembrane helical structure domain prediction(B)

圖11 蛋白亞細胞定位(A)和信號肽預(yù)測(B)Fig.11 Protein subcellular localization(A)and signal peptide prediction(B)

2.8 三元雜交育肥豬 FABP2 蛋白激酶磷酸化和N端糖基化位點分析

利用NetPhos 3.1 Server 在線軟件預(yù)測三元雜交育肥豬FABP2蛋白的激酶磷酸化修飾位點(圖12-A)，預(yù)測到絲氨酸在53(2個)，54，72，103位點出現(xiàn)磷酸化位點，得分分別為0.692，0.503，0.993，0.502，0.520；蘇氨酸在42，49(2個)，55，80，105(2個)位點出現(xiàn)磷酸化位點，得分分別為0.573，0.817，0.779，0.662，0.508，0.855，0.507；酪氨酸在15位出現(xiàn)活躍位點，得分為0.788，該蛋白的激酶位點有DNAPK、PKC、PKA、CKI、CKII，共5種(表4)。

NetNGlyc預(yù)測三元雜交育肥豬N端糖基化位點(圖12-B)，預(yù)測值(0.554 6)大于0.5，預(yù)測結(jié)果可靠，氨基酸序列中，在70位點存在1個潛在的N端糖基化位點。

圖12 激酶磷酸化位點(A)和N-端糖基化位點預(yù)測(B)Fig.12 Kinase phosphorylation site(A)and N-terminal glycosylation site prediction(B)

表4 三元雜交育肥豬FABP2蛋白可能的磷酸化位點Tab.4 Possible phosphorylation sites of FABP2 protein in DLY fattening pigs

2.9 三元雜交育肥豬FABP2蛋白的保守結(jié)構(gòu)域和折疊無序化分析

NCBI中預(yù)測到2～131位點含有一個Lipocalin-FABP2超家族保守結(jié)構(gòu)域，是脂質(zhì)運載蛋白(圖13)。運用FoldIndex進行固有無序化分析，存在3個無序化區(qū)域，分別在1～35，90～102，105～132區(qū)段，所含氨基酸數(shù)分別為35，13，28個，未折疊氨基酸總數(shù)76個(圖14-A)。與親緣關(guān)系最遠的雞比較，雞在1～35區(qū)域存在含35個氨基酸的1個無序化區(qū)域，存在很大差異(圖14-B)。與親緣關(guān)系最近的綿羊比較，綿羊存在1個無序化區(qū)域，無序化區(qū)域與雞相同，表明不同物種的蛋白質(zhì)發(fā)揮的功能有所不同(圖14-C)。

3 結(jié)論與討論

FABPs家族成員現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)至少9種，該家族成員的基因結(jié)構(gòu)基本相同[21]，均屬于低分子量的細胞內(nèi)脂質(zhì)伴侶，在各組織中廣泛表達，主要參與脂肪酸轉(zhuǎn)運和調(diào)控細胞增殖[22]。FABP2蛋白是哺乳動物細胞內(nèi)的一種可溶性蛋白質(zhì)[22]，可特異性結(jié)合長鏈脂肪酸，吸收膳食脂肪酸[23-24]，參與長鏈脂肪酸的細胞內(nèi)運輸[25]。此生物學(xué)特性對改善肉品質(zhì)具有潛在價值，可作為體內(nèi)脂肪沉積的候選基因，在分子育種中前景廣闊。已有學(xué)者克隆了斑馬魚[26]和標(biāo)槍蝦虎魚[22]的FABP2基因，發(fā)現(xiàn)該基因編碼132個氨基酸。Larkina等[27]認為，F(xiàn)ABP2基因可作為雞腹部脂肪沉積的候選基因，但是有關(guān)FABP2基因在三元雜交育肥豬上的研究甚少。

圖13 三元雜交育肥豬FABP2蛋白的保守結(jié)構(gòu)域Fig.13 Conserved domain of FABP2 protein in DLY fattening pigs

A.三元雜交育肥豬；B.雞；C.綿羊。A.DLY fattening pigs；B.Chicken；C.Sheep.

本試驗成功克隆了三元雜交育肥豬FABP2基因編碼區(qū)，全長399 bp，編碼132個氨基酸。通過組織表達譜分析發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)ABP2基因在各組織中廣泛表達，在空腸中相對表達量最高，但背肌中相對表達量最低。飼糧中添加不同比例花椒籽飼喂三元雜交育肥豬后，試驗Ⅰ組和試驗Ⅲ組背肌組織中FABP2顯著上調(diào)表達。與對照組相比，空腸中FABP2在各試驗組均顯著下調(diào)表達。當(dāng)添加量為7.5%，三元雜交育肥豬背肌中FABP2表達量顯著高于對照組。該研究結(jié)果說明，飼糧中添加花椒籽顯著影響三元雜交育肥豬不同組織中FABP2基因表達水平。Gajda等[28]研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)ABP2在哺乳動物空腸中表達量最高，這與本研究結(jié)果相似。通過三元雜交育肥豬FABP2氨基酸序列與豬氨基酸參考序列的比對發(fā)現(xiàn)，三元雜交育肥豬FABP2氨基酸序列存在2處錯義突變，即152位點處的堿基A突變?yōu)镚，導(dǎo)致第51位點的賴氨酸突變?yōu)榫彼?；核苷酸序?08位點的堿基T突變?yōu)镃，導(dǎo)致第103位點的亮氨酸突變?yōu)榻z氨酸，初步推測這可能是影響豬脂肪沉積的潛在原因之一，但FABP2基因參與脂質(zhì)代謝的機制尚不明確，有待進一步研究。

同源性分析表明，三元雜交育肥豬與綿羊親緣關(guān)系最近，核苷酸序列同源性為87.72%，種間相似性高，說明FABP2蛋白在物種間具有高度保守性。蛋白質(zhì)磷酸化對蛋白質(zhì)發(fā)揮功能具有極其重要的作用，可通過共價修飾的方式修飾1/3以上的細胞蛋白，蛋白激酶僅對絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸3種氨基酸殘基的磷酸化表現(xiàn)出嚴格的特異性[29]。本試驗預(yù)測到三元雜交育肥豬FABP2蛋白存在5個絲氨酸位點、7個蘇氨酸位點和1個酪氨酸位點，預(yù)測結(jié)果合理。此外，還預(yù)測到一個N端糖基化位點，蛋白質(zhì)糖基化大多在膜結(jié)合蛋白中分布，這也是影響該蛋白穩(wěn)定性和功能發(fā)揮的原因[30]。FABP2蛋白二級結(jié)構(gòu)主要由延伸鏈和無規(guī)卷曲構(gòu)成，不存在跨膜螺旋結(jié)構(gòu)，是一種親水性非跨膜蛋白，主要在細胞質(zhì)、細胞核、線粒體和過氧化物酶體中發(fā)揮作用。當(dāng)信號肽位點S均值大于0.5時，才具有潛在的信號肽[31]，三元雜交育肥豬FABP2蛋白信號肽S預(yù)測均值為0.104，表明該蛋白不具有信號肽，是非分泌蛋白，主要在胞質(zhì)中。蛋白質(zhì)固有無序化在生物體中具有極其重要的意義，是評價蛋白質(zhì)功能的重要指標(biāo)之一，與蛋白質(zhì)生物學(xué)特性密切相關(guān)[32]。本試驗預(yù)測到三元雜交育肥豬存在3個無序化區(qū)域，無序化程度高。陳旖婷[33]研究發(fā)現(xiàn)，由脂肪細胞分泌的Lipocalin與脂肪沉積有關(guān)，三元雜交育肥豬FABP2蛋白在2～131位點含有一個Lipocalin-FABP2超家族保守結(jié)構(gòu)域(脂質(zhì)運載蛋白)，具有配體結(jié)合腔，該研究與本研究結(jié)果相似。

本試驗結(jié)果表明，不同比例花椒籽替代部分玉米能顯著影響三元雜交育肥豬各組織中FABP2的表達水平，尤其對背肌和空腸組織中的表達影響最為顯著。三元雜交育肥豬FABP2基因CDS序列全長399 bp，共編碼132個氨基酸，其CDS序列存在2處錯義突變，三元雜交育肥豬FABP2基因與綿羊和牛物種同源性較高。三元雜交育肥豬FABP2蛋白為酸性穩(wěn)定的非分泌蛋白，該蛋白主要以延伸鏈和無規(guī)則卷曲構(gòu)成，該蛋白無序化程度高，主要在細胞質(zhì)中發(fā)揮作用。本試驗結(jié)果可為進一步研究FABP2蛋白的生物學(xué)特性提供科學(xué)依據(jù)。