邵芳芳

（江口縣閔孝鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)服務(wù)中心，貴州 江口 554400）

0 引言

在一個養(yǎng)牛場當(dāng)中，引進(jìn)一批肉牛。當(dāng)肉牛運回3d 之后就發(fā)現(xiàn)肉牛存在體溫升高以及咳嗽和喘息等癥狀，而且還伴隨著漿液性流鼻涕，呼吸嚴(yán)重困難等。在運進(jìn)來的牛當(dāng)中還有一部分牛的血液是比較稀的。短時間內(nèi)已經(jīng)有18 頭牛死于這種疾病的折磨下，這對于畜養(yǎng)場來說損失是非常慘重的。牛存在的這些癥狀與感冒是非常相似的，我們?yōu)榱四軌蝾A(yù)防其他的牛感染這種疾病就需要對其進(jìn)行檢驗。在檢驗的過程當(dāng)中利用了野間調(diào)查、病理觀察以及對這種病原進(jìn)行分析等。在這個基礎(chǔ)上我們提出了相應(yīng)的綜合防治的措施。

1 材料與方法

1.1 材料

利用無菌方式采取病死牛的肝部以及肺部的相關(guān)組織，并進(jìn)行細(xì)菌分離，同時將采取出來的肺臟組織研磨，需要注意的是在研磨的過程中要加入一定量的PPLO 支原體培養(yǎng)液。然后對這些樣品進(jìn)行冷凍，再分別對其解凍，先后3 次，將其保存在-20℃的冰箱當(dāng)中。某獸醫(yī)研究所細(xì)菌實驗室已經(jīng)分離出支原體陽性對照GL-1，并對其鑒定和保存。在實驗動物中心中購買昆明種小鼠18～20g。

1.2 方法

（1）進(jìn)行野外的調(diào)查，對牛的臨床癥狀以及它的病理變化進(jìn)行細(xì)致的觀察，對其發(fā)病的情況進(jìn)行詢問，再對死后的牛進(jìn)行解剖，可以用肉眼觀察他們的器官的形狀。

（2）對細(xì)菌進(jìn)行分離以及鑒定：對生病死亡后的肉牛的肝的組織以及肺的組織進(jìn)行改變，使其成為能夠進(jìn)行接觸的組織，然后把已經(jīng)制定好的接觸組織進(jìn)行相應(yīng)的加固，然后對他們進(jìn)行革蘭氏的染色，把染色以后的接觸組織放在顯微鏡下對其進(jìn)行觀察，之后再將肝的組織以及肺的組織分別放置在指定的兔血瓊脂平板上以及TSB 的平板上，然后根據(jù)之前實驗成功的方法對他們進(jìn)行培養(yǎng)。但是培養(yǎng)的環(huán)境是有一定的要求的，需要在37℃下，5%的二氧化碳培養(yǎng)箱當(dāng)中。培養(yǎng)24～48h 的時候需要對細(xì)菌的生長情況進(jìn)行觀察，對優(yōu)勢的菌落進(jìn)行取優(yōu)以及評價。

（3）對細(xì)菌分離進(jìn)行生物測定我們利用的是生物降解特性實驗的方法。一個菌株的當(dāng)個真菌落下，對其進(jìn)行生物測定。將0.2mL 的單滴接種在微生物的化學(xué)試管當(dāng)中，就像葡萄糖、甘蔗、芥末糖以及乳糖等。在存有尿素等具有生物測定的試管當(dāng)中，必須使用無菌的液蠟，放置37～48h 左右。對其冷卻后的反應(yīng)結(jié)果進(jìn)行觀察。

（4）支原體的分離、培養(yǎng)以及形態(tài)學(xué)的鑒定：把生前有病的牛的肺組織切割成研磨碗的形狀，在其中加入3mL 的PPLO 支原體培養(yǎng)基，對其充分的研磨，4000r/min 離心十分鐘，將其存在的沉淀物進(jìn)行丟棄，再進(jìn)行過濾。利用一次性的針頭過濾器，濾液以1:10 的稀釋液接種在PPLO 支原體培養(yǎng)基當(dāng)中，在特定環(huán)境的培養(yǎng)箱當(dāng)中培養(yǎng)72～96h 左右，對其進(jìn)行細(xì)致的觀察，如果觀察到液體的介質(zhì)已經(jīng)發(fā)生變色的現(xiàn)象，就需要把線轉(zhuǎn)移到PPLO固體介質(zhì)之下。接種完畢以后，菌落需要在特定環(huán)境的培養(yǎng)箱當(dāng)中放置72～96h。

2 結(jié)果與分析

2.1 現(xiàn)場調(diào)查、臨床癥狀、病理變化

本次實驗一共引進(jìn)58 頭小牛，在引入的這些小牛當(dāng)中有38頭是生病的，18 頭是已經(jīng)死亡的。牛在生病的過程當(dāng)中，對其進(jìn)行預(yù)防治療以及己糖苷的治療都是沒有產(chǎn)生效果的，發(fā)病率以及死亡率分別是65.5%和22.4%。在這些病牛當(dāng)中，他們的癥狀是體溫偏高，咳嗦以及呼吸困難，也存在流鼻涕的癥狀。在解剖學(xué)當(dāng)中，存在這樣癥狀的疾病的位置一般是肺部以及胸部。解剖可以發(fā)展心臟尖端的葉子、心臟以及葉子都存在紅肉退化的現(xiàn)象，而且肺間質(zhì)腫塊有明顯的增加，大小一般像是黃奶酪和白奶酪那樣大，在它們的氣管以及支氣管當(dāng)中也存在像牛奶一樣的白色泡沫。箱子里面有比較少的液體，一袋液體袋和液體呈現(xiàn)為黃色。

2.2 支原體分分離、培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)鑒定

培養(yǎng)72h 之后會發(fā)生變色的現(xiàn)象，這時變色的培養(yǎng)基就需要利用特定的過濾針進(jìn)行過濾。把過濾出來的濾液接種到PPLO 支原體液體以及固體培養(yǎng)基當(dāng)中對其進(jìn)行繼代的培養(yǎng)。根據(jù)實驗我們能夠知道，隨著實驗時間的增加液體變色的速度就會越來越快。經(jīng)過我們的觀察能夠看出來，這些液體會在1～2d 的時間之內(nèi)顏色會徹底改變，會從紅色變成褐色，但是變色之后的培養(yǎng)基它的顏色看起來是非常平均的，里面也沒有其他的雜質(zhì)。在PPLO 的固體培養(yǎng)基上，還可以觀察到有一些和我們平常用的針頭一樣大小的菌落在生長。把它們放在顯微鏡下，都會很明顯地展現(xiàn)出一些菌落，而且這些菌落的形狀都比較像“煎蛋”。經(jīng)過觀察我們還能夠發(fā)現(xiàn)它們的核心都是非常的厚的，而且普遍向下生長到中間。如果觀察比較仔細(xì)的話還能夠發(fā)現(xiàn)它們的四周環(huán)繞著一層比較薄的薄層。我們把他們和各個菌落的形態(tài)相比較，能夠初步將其鑒定為牛的支原體。

2.3 病原菌的分離結(jié)果

在實驗當(dāng)中我們能夠發(fā)現(xiàn)存在有比較少量的革蘭陰性菌，對肺組織進(jìn)行染色，但還是不可以在肝組織當(dāng)中見到它。如果在實驗的過程當(dāng)中對一定量的兔血瓊脂平板進(jìn)行一定程度的提高，這樣一來其中的細(xì)菌就不可以對肝的組織進(jìn)行分離，如果大小是一般的，它的形狀是比較圓的，表面上的肺組織就可以在一定程度上提高，這樣的就是一些性質(zhì)比較濕的，顏色是灰白色的細(xì)菌。我們對這些細(xì)菌進(jìn)行處理凈化，然后把這些凈化以后的細(xì)菌進(jìn)行和一些比較新鮮的血液當(dāng)中的瓊脂板進(jìn)行接種。在指定的條件之下對這些菌落進(jìn)行孵育，一般情況下是24h 左右。在24h以后我們并沒有發(fā)現(xiàn)瓊脂平板當(dāng)中存在黃色的物質(zhì)，而且也沒有其他的細(xì)菌在生長。通過研究我們能夠看出來，這些真菌都是沒有顏色的，表面也是非常光滑的，里面也不像其他的菌落一樣有溶血。把A 組放在一般的條件下對其進(jìn)行觀察，一段時間后能夠明顯的觀察到里面有比較顯明的紅色素。而且TSB 組當(dāng)中在經(jīng)過24h 以后就會出現(xiàn)比較顯明的沉淀物。我們把這些菌落進(jìn)行更進(jìn)一步的檢驗，發(fā)展經(jīng)過凈化后的菌落是革蘭陰性菌。

2.4 株細(xì)菌生化特性的鑒定

在實驗的過程當(dāng)中我們可以利用生化特性的實驗方法，對在其中分離出來的物質(zhì)進(jìn)行層層的鑒定，我們能夠發(fā)現(xiàn)這些分離物可以對一些糖類進(jìn)行分解，像蔗糖以及葡萄糖等等。分離出來的這些菌的性質(zhì)和粘質(zhì)沙雷氏菌的性質(zhì)大體是一致的。

2.5 藥敏實驗和治療結(jié)果

結(jié)合藥敏進(jìn)行實驗的結(jié)果，在肉牛的機(jī)體當(dāng)中有比較遠(yuǎn)見的犬毒以及新卡尼林敏感和阿替西林，而且對真菌以及青霉素是比較敏感的。但是對于多合子細(xì)菌的B-以及向下的尼西林VI 不是非常的敏感的。對于聚石灰B 以及青霉素額利福庫是非常敏感的。對于先鋒六號以及其他的都是沒有任何的反應(yīng)的物質(zhì)的。在家中，有一些牛會有流眼淚的癥狀，與感冒的癥狀是差不多的，伴隨有咳嗽以及稀釋的情況，像這樣的牛我們就需要對其進(jìn)行過消毒，時刻對這些牛進(jìn)行觀察，如果在這個過程當(dāng)中，牛產(chǎn)生糞便，我們可以對其進(jìn)行收集并對其進(jìn)行化驗分析。在這個過程當(dāng)中我們需要用到鸚鵡速以及比較零碎的半松樹，這些可以與牛的疾病癥狀進(jìn)行對抗。但是牛需要有流淚以及咳嗽的癥狀。運進(jìn)來的這些牛當(dāng)中還有一部分除了有以上等方面的癥狀之外還伴隨著擴(kuò)張，對于這樣的牛我們就需要對其進(jìn)行加上治療，并且需要和其他的牛分離開來。在牛的肌肉上面需要進(jìn)行注射，持續(xù)3～5d 的時間，這樣一來可以在很大程度上避免其他的肉牛傳染。也需要對其加強(qiáng)管理，需要增加適量的多維微量元素，這樣一來就能夠在一定程度上提高抗逆轉(zhuǎn)。當(dāng)8d 之后全部的牛都接受了治療之后，這個時候疾病就能夠得到一定程度的控制，而且沒有發(fā)現(xiàn)其他的疾病例子。

3 結(jié)語

進(jìn)行實驗的這些樣品并沒有進(jìn)行病毒的檢測。這個實驗室分離的牛支原體以及粘質(zhì)沙雷菌會對大觀霉素以及阿米卡星和慶大霉素、新霉素等有高度的敏感性。利用大觀霉素以及地塞米松進(jìn)行聯(lián)合來對這樣的疾病進(jìn)行治療，經(jīng)過實驗?zāi)軌蛑肋@樣的方式起到的效果是比較有效的。最后，將疾病的發(fā)生率控制在一定程度之后，就沒有發(fā)現(xiàn)存在有其他的病例。從這里可以看出來，能夠引起B(yǎng)RDC 的病原體是支原體以及粘質(zhì)沙雷氏菌的混合感染。