牛至油博落回口服液的研制及體外抑菌活性測定

李偉浩，孫媛媛，劉聚祥

(河北農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院，保定 071000)

當前，大型規(guī)?；B(yǎng)殖已成為中國畜牧業(yè)發(fā)展的主要方向，而飼用抗生素對防治畜禽細菌性疾病、促進畜禽生長性能和飼料利用率方面均有重要作用，使得畜禽數(shù)量與產(chǎn)量得到很大提高，獲得較為可觀的經(jīng)濟效益。但飼用抗生素的長期添加導致了細菌耐藥性、環(huán)境污染、動物源食品藥物殘留等一系列問題，因此中國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部于2019年7月發(fā)布194號公告：“自2020年1月1日起，退出除中藥外的所有促生長類藥物飼料添加劑品種”，意味著中國飼料行業(yè)進入全面“禁抗”時代，因此，亟需尋求研發(fā)綠色無害的動物生長促進劑。在目前受到廣泛研究和應用的替抗產(chǎn)品中，牛至油和博落回提取物作為植物提取物不僅具有促生長、抑菌殺菌、抗氧化和免疫調(diào)節(jié)等多種生物學功能，而且具有天然、無毒副、無耐藥及無殘留的優(yōu)點[1-2]。

牛至油(oregano oil)是從牛至中提取的具有特殊芳香氣味的揮發(fā)油，主要化學成分是百里香酚(thymol)和香芹酚(carvacrol)、萜烯類及其衍生物等[3-4]。研究表明，牛至油可顯著抑制金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、沙門氏菌類及普通變形菌類[5-6]，有效調(diào)節(jié)腸道微生物區(qū)系平衡，改善腸道形態(tài)，提高食欲，進而可提高增重、飼料利用率及抗感染能力[7-8]。博落回(Macleayacordata)是罌粟科博落回屬多年生草本植物，博落回中主要生物活性物質(zhì)為異喹啉類生物堿，如血根堿、白屈菜紅堿、原阿片堿、別隱品堿等[9-10]，具有抗菌、促進腸道黏膜發(fā)育、改善料重比、提高生長性能及增強機體抗氧化能力的作用[11-12]。

最先出現(xiàn)的牛至油市售產(chǎn)品是荷蘭羅帕法姆公司1995年生產(chǎn)的諾必達(RopadiarTM)牛至油預混劑，諾必達是純天然牛至提取物，其牛至油含量≥5%，價格相對較高，應用成本也較高。博落回提取物(Sangrovit?)最早是由德國的Phytobiotics公司生產(chǎn)。國內(nèi)的主要產(chǎn)品為湖南美可達生物資源股份有限公司研發(fā)的美佑壯博落回散，為二類中獸藥制劑。這些產(chǎn)品均為預混劑，不適于畜禽規(guī)?；B(yǎng)殖的水線系統(tǒng)。鑒于此，本試驗研制牛至油博落回提取物復合溶液劑，并測定其含量及體外抑菌活性，以期為臨床提供一種適用于畜禽規(guī)?；B(yǎng)殖水線系統(tǒng)的替代抗生素促生長劑，并為其臨床合理用藥提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥品與試劑 牛至油(批號：20200812，含量≥90%)購自江西海瑞天然植物有限公司；博落回提取物(批號：F01040 020091801，含量≥60%)購自湖南漢清生物技術有限公司；聚氧乙烯(40)氫化蓖麻油(批號：20200902)購自深圳市歐朋特科技有限公司；2,6-二叔丁基對甲酚(BHT，含量≥98%)、叔丁基對羥基茴香醚(BHA，含量≥98%)均購自上海源葉生物科技有限公司；色譜純乙腈(含量≥99.95%)購自賽默飛世爾科技(中國)有限公司；色譜純磷酸(含量≥85%)購自福晨(天津)化學試劑有限公司；香芹酚標準品(含量≥98%)、血根堿標準品(含量≥98%)均購自北京索萊寶科技有限公司；抗生素藥敏片(青霉素、鏈霉素、替米考星、氟苯尼考、頭孢噻呋)購自賽默飛世爾科技有限公司。

1.1.2 試驗菌株及培養(yǎng)基 大腸桿菌標準菌株BNCC336902、金黃色葡萄球菌標準菌株BNCC186335、糞鏈球菌標準菌株BNCC336445均購自北納創(chuàng)聯(lián)生物技術有限公司；沙門氏菌標準菌株CMCC50041由河北農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院病理實驗室提供；營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基及新生牛血清均購自北京索萊寶科技有限公司；脫纖維綿羊血購自上海源葉生物科技有限公司。

1.1.3 主要儀器 電子天平購自賽多利斯科學儀器有限公司；超純水系統(tǒng)購自上海力新儀器有限公司；電熱鼓風干燥箱購自上海博訊實業(yè)有限公司；超凈工作臺(ZHJH-1106B)購自ZHCHENG公司；恒溫振蕩器(THZ-98C)購自上海一恒科學儀器有限公司；生化培養(yǎng)箱(SPX)購自寧波江南儀器廠；立式高壓滅菌器(LDZX-50L)購自上海申安醫(yī)療器械廠；高效液相色譜儀紫外檢測器(SPD-20A)、控制器(CBM-20A)及泵(LC-6AD)均購自日本島津有限公司。

1.2 牛至油博落回口服液處方篩選及優(yōu)化

以牛至油和博落回提取物的溶解性狀、感官性狀為主要考察指標，并結合兩種成分各自的理化性質(zhì)，考慮到溶解能力、揮發(fā)速度、穩(wěn)定性及臨床應用中安全性等因素，選取適宜的溶劑、增溶劑和抗氧化劑。在水、乙醇及丙二醇等常用溶劑中確定以水為溶劑；比較不同增溶劑對牛至油與博落回提取物的增溶效果，在吐溫-80、吐溫-20、聚氧乙烯(40)氫化蓖麻油(RH40)中確定以RH40為增溶劑；針對植物精油易氧化問題，從符合安全標準、高效抗氧化要求的BHT、維生素E及BHA中確定以BHT為抗氧化劑。

以口服液感官評分為評價標準，設計3因素3水平的響應面分析，采用Design-Expert 10.0統(tǒng)計軟件Box-Behnken法對試驗結果進行響應面回歸分析，即以牛至油、博落回提取物及RH40添加量為影響因子，各取3個水平，進行響應面分析，從而更加直觀地篩選出牛至油博落回口服液最優(yōu)配方。感官評分標準見表1，響應面分析因素水平見表2。

表1 牛至油博落回口服液感官評分標準

表2 響應面分析因素水平

1.3 含量測定

1.3.1 色譜條件 采用高效液相色譜法進行含量測定：色譜柱為Waters SunFire C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)；流動相為乙腈∶0.2%磷酸水溶液=7∶3；流速為1 mL/min；檢測波長分別為血根堿270 nm和香芹酚275 nm；進樣量為20 μL。

1.3.2 溶液配制 標準品溶液的配制：精密稱取10 mg香芹酚標準品，置于25 mL容量瓶中，加入乙腈溶解，定容，制成濃度為400 μg/mL的標準品溶液；精密稱取5 mg血根堿標準品，置于50 mL容量瓶中，加入乙腈溶解，定容，制成濃度為100 μg/mL的標準品溶液。陰性對照品溶液的配制：按配方稱取口服液中的輔料，制成不含藥品的口服液陰性對照品，精密量取100 μL陰性對照品，置于50 mL容量瓶中，加入乙腈溶解，定容。供試品溶液的配制：精密量取100 μL口服液，置于50 mL容量瓶中，加入乙腈溶解，定容。

1.3.3 專屬性考察 分別取對照品溶液、供試品溶液和空白輔料制備的陰性對照品溶液，按照上述色譜條件和進樣方法進樣，驗證香芹酚和血根堿的出峰位置是否唯一，考察香芹酚和血根堿兩峰之間以及與其他雜質(zhì)峰分離是否良好。

1.3.4 線性關系試驗 精密量取對照品貯備溶液適量，用乙腈稀釋制成香芹酚濃度分別為400、200、100、50、25和12.5 μg/mL，血根堿濃度分別為100、50、25、12.5、6.25和3.125 μg/mL的系列對照品溶液，按照1.3.1色譜條件和進樣方法進樣，記錄各色譜峰峰面積，以濃度X為橫坐標、吸收峰面積Y為縱坐標進行線性回歸。

1.3.5 樣品含量測定 取制備的牛至油博落回口服液10批，按供試品溶液制備方法處理，按照1.3.1色譜條件進樣，記錄峰面積，并計算血根堿和香芹酚的含量。

1.4 體外抑菌試驗

1.4.1 試驗藥品的制備 按照優(yōu)化后牛至油博落回口服液的組方制備牛至油博落回口服液，同時分別制備5%牛至油、1%博落回對照品溶液以及空白輔料溶液。

1.4.2 藥敏片的制備 將直徑5 mm的無菌濾紙片置于高壓滅菌的5 mL玻璃藥敏瓶中，分別加入牛至油博落回口服液、5%牛至油溶液、1%博落回溶液和空白輔料溶液，待濾紙片將藥液充分吸收后將其平鋪于無菌培養(yǎng)皿內(nèi)，置于37 ℃烘箱中烘干備用。

1.4.3 菌懸液制備 用無菌接種環(huán)將活化后的大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌分別接種于營養(yǎng)瓊脂平板上，將糞鏈球菌接種于血瓊脂平板上，細菌菌種于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中孵育24 h，然后挑取各培養(yǎng)基上該菌生長比較典型的菌落接種到肉湯中：大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和沙門氏菌接種于普通肉湯中；糞鏈球菌接種于血清肉湯中，經(jīng)過平板計數(shù)法制成細菌總數(shù)為1.5×106CFU/mL的菌懸液備用。

1.4.4 抑菌圈直徑測定 采用濾紙片法(K-B法)測定抑菌圈直徑。先將高壓滅菌的瓊脂培養(yǎng)基的溫度降至45 ℃左右，在干燥滅菌的直徑9 cm培養(yǎng)皿內(nèi)加入15 mL培養(yǎng)基，待冷卻凝固后，再吸取100 μL菌懸液，并用無菌涂布棒均勻涂布于相應瓊脂平皿，備用。用鑷子輕柔夾取自制藥敏片和青霉素、鏈霉素、替米考星、頭孢噻呋、氟苯尼考藥敏片輕輕地貼于涂有菌液的培養(yǎng)基上。37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，觀察并記錄抑菌圈直徑，按照美國臨床和實驗室標準協(xié)會(CLSI)頒布的《抗微生物藥物敏感性試驗執(zhí)行標準》判斷對藥物的敏感性[13]。

1.4.5 最小抑菌濃度和最小殺菌濃度的測定 按照曾振靈[14]介紹的試管二倍稀釋法進行最小抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC)測定。試驗組取90支經(jīng)過高壓滅菌的試管，分為9排，每組10支。1～3排：每管加入2 mL無菌的液體培養(yǎng)基，每排第1個管中加入稀釋2.5倍后的牛至油博落回口服液2 mL，混勻后取2 mL加入第2管，以此類推，至第8管取2 mL廢去，最后向8支試管中分別加入50 μL供試品菌液并振蕩使其均勻；第9管加入液體培養(yǎng)基及菌懸液作無藥陽性對照；第10管只加入液體培養(yǎng)基及試驗藥品作無菌陰性對照。 4～6與7～9排除試驗藥品分別添加5%牛至油對照溶液和1%博落回對照溶液以外，其余操作同1～3排。

陽性對照會出現(xiàn)細菌生長的渾濁現(xiàn)象，陰性對照出現(xiàn)無細菌生長現(xiàn)象，則試驗成立。觀察其他試管狀況，不出現(xiàn)渾濁的濃度是口服液的MIC。將所有清晰無菌生長的試管培養(yǎng)液以劃線法接種于相應的瓊脂平板，37 ℃培養(yǎng)24 h，以菌落不超過5個為口服液的MBC。

1.4.6 聯(lián)合藥敏試驗 按照吳克剛等[15]介紹的微量棋盤稀釋法測定聯(lián)合用藥的MIC，將5%牛至油溶液與1%博落回溶液進行二倍稀釋，牛至油稀釋6個梯度，按高濃度到低濃度從左到右縱向加入96孔板，博落回溶液稀釋6個梯度，按高濃度到低濃度從上到下橫向加入96孔板，接入對數(shù)期菌液，調(diào)整菌液濃度為1×105CFU/mL，37 ℃培養(yǎng)24 h。以聯(lián)合藥敏指數(shù)(FIC)作為聯(lián)合藥敏試驗的判斷依據(jù)，計算公式為：

FIC指數(shù)=(甲藥聯(lián)合時MIC/甲藥單獨時MIC)+(乙藥聯(lián)合時MIC/乙藥單獨時MIC)

FIC指數(shù)，≤0.5為協(xié)同作用；0.5～1為相加作用；1～2為無關作用；>2為頡頏作用。

1.5 統(tǒng)計分析

每個試驗重復3次，使用Excel 2016和SPSS 19.0進行數(shù)據(jù)處理分析，采用單因素方差分析和Tukey檢驗對結果進行統(tǒng)計分析，結果以平均值±標準差表示，以P<0.05為差異顯著性判斷標準。

2 結 果

2.1 牛至油博落回口服液配方的優(yōu)化

2.1.1 響應面模型的建立 以牛至油、博落回提取物、RH40添加量為影響因子，以牛至油博落回口服液感官評分為響應值進行響應面優(yōu)化，優(yōu)化試驗結果見表3。根據(jù)Design-Expert軟件，以感官評分為響應值，對表3中的數(shù)據(jù)進行二次回歸分析，從而得出最終的二元回歸方程為：感官評分Y=93.40-5.56A-1.30B+2.44C+2.75AB+4.08AC+1.80BC-12.59A2-7.46B2-7.64C2。

表3 響應面優(yōu)化試驗結果

表4 響應面試驗結果方差分析表

續(xù)表

2.1.2 響應面繪制及分析 采用Design-Expert軟件繪制相應的響應面圖和等高線圖，結果見圖1～3。由圖1～3可知，3因素對感官評分的影響大小依次為：牛至油>博落回>RH40。等高線圖形越呈圓形，表示兩因素交互作用越??；等高線圖形越呈橢圓形，表示兩因素交互作用越大。可見，響應面分析與回歸分析結果相互吻合。

圖1 牛至油與RH40添加量對口服液感官評分的二維等高線圖(A)和三維響應面圖(B)

2.1.3 響應面優(yōu)化配方及驗證試驗結果 通過響應面優(yōu)化得到的最佳配方為：5%牛至油、1%博落回提取物、25% RH40，0.02% BHT,余量為水。最佳感官評分為94.5。驗證試驗中，在該條件下進行3次平行試驗，所得感官評分別為94.3、94.6和93.7，平均值94.2，說明模型模擬較好，與實測值基本吻合。

圖2 牛至油與博落回提取物添加量對口服液感官評分的二維等高線圖(A)和三維響應面圖(B)

圖3 博落回提取物與RH40添加量對口服液感官評分的二維等高線圖(A)和三維響應面圖(B)

2.2 牛至油博落回口服液含量測定試驗結果

2.2.1 方法專屬性驗證 方法專屬性結果見圖4。由圖4可知，陰性對照品無明顯峰出現(xiàn)，說明可忽略口服液的輔料對含量測量的影響，香芹酚對照品、血根堿對照品出峰時間與供試品溶液中香芹酚、血根堿出峰時間相同，均在3.8和1.1 min，峰分離度良好，周圍無雜峰干擾，說明該方法專屬性良好，可用來測量制劑藥物的含量。

A，陰性對照品；B，香芹酚對照品；C，血根堿對照品；D，口服液樣品

2.2.2 標準曲線繪制 通過測定不同濃度的香芹酚標準品溶液和血根堿標準品溶液，以濃度X為橫坐標、吸收峰面積Y為縱坐標進行線性回歸，結果顯示，香芹酚的線性回歸方程為：Y=13 578X+20 877，R2=0.9999，在香芹酚濃度12.5～400 μg/mL范圍內(nèi)測定方法線性良好(圖5)；血根堿的線性回歸方程為：Y=97 560X+59 801，R2=0.9998，在血根堿濃度3.125～100 μg/mL范圍內(nèi)測定方法線性良好(圖6)。

圖5 牛至油博落回口服液中香芹酚含量測定標準曲線圖

圖6 牛至油博落回口服液中血根堿含量測定標準曲線圖

2.2.3 樣品含量測定結果 檢測10批牛至油博落回口服液香芹酚的平均含量為42.59 mg/mL，血根堿的平均含量為6.51 mg/mL。

2.3 牛至油博落回口服液體外抑菌試驗結果

2.3.1 抑菌圈直徑 不同藥物對4種細菌的體外抑菌效果見表5。由表5可知，對大腸桿菌，氟苯尼考、頭孢噻呋、鏈霉素表現(xiàn)為高度敏感，替米考星及口服液為中度敏感，而青霉素、5%牛至油溶液及1%博落回溶液為低度敏感；對沙門氏菌，氟苯尼考、頭孢噻呋及鏈霉素為高度敏感，青霉素、替米考星及口服液為中度敏感，5%牛至油和1%博落回為低度敏感；對金黃色葡萄球菌，除5%牛至油溶液表現(xiàn)為中度敏感外，其余均表現(xiàn)為高度敏感；對糞鏈球菌，氟苯尼考、青霉素及頭孢噻呋為高度敏感，1%博落回、口服液及鏈霉素表現(xiàn)為中度敏感，5%牛至油和替米考星表現(xiàn)為低度敏感。表明頭孢噻呋和氟苯尼考具有強大的廣譜抗菌性，而研制的牛至油博落回口服液對4種菌株均表現(xiàn)為高度或中度敏感，抗菌譜較廣，牛至油與博落回之間無頡頏作用。

表5 濾紙片法(K-B法)測得的抑菌圈直徑

2.3.2 MIC和MBC 37 ℃培養(yǎng)18～24 h后，空白對照孔均無細菌生長，對照孔細菌生長良好，可見培養(yǎng)基明顯渾濁。由表6可知，牛至油博落回口服液對4種細菌菌有較好的抑制作用，對金黃色葡萄球菌和糞鏈球菌有良好的殺菌作用；1%博落回對沙門氏菌的抑制作用弱于其他3種菌，對金黃色葡萄球菌具有良好的殺菌作用；5%牛至油溶液對金黃色葡萄球菌的殺菌作用較大腸桿菌、沙門氏菌及糞鏈球稍強，其中對糞鏈球菌抑殺效果不明顯。

表6 3種供試藥對4種細菌的最小抑菌濃度和最小殺菌濃度

2.3.3 聯(lián)合藥敏試驗 5%牛至油溶液和1%博落回溶液對大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、糞鏈球菌單獨用藥及聯(lián)合用藥時的MIC見表7～10，二者的聯(lián)合藥敏指數(shù)見表11，結果顯示，5%牛至油溶液和1%博落回溶液的聯(lián)合用藥對大腸桿菌、沙門氏菌表現(xiàn)為相加作用，對金黃色葡萄球菌表現(xiàn)為無關作用，對糞鏈球菌表現(xiàn)為協(xié)同作用。

表7 牛至油和博落回提取物對大腸桿菌的聯(lián)合藥敏試驗

表8 牛至油和博落回提取物對沙門氏菌的聯(lián)合藥敏試驗

表9 牛至油和博落回提取物對金黃色葡萄球菌的聯(lián)合藥敏試驗

表10 牛至油和博落回提取物對糞鏈球菌的聯(lián)合藥敏試驗

表11 牛至油和博落回提取物的聯(lián)合藥敏試驗FIC指數(shù)

3 討 論

牛至油和博落回提取物在臨床上常用制劑分別為牛至油預混劑和博落回散，二者均采用混飼給藥，混飼給藥不僅存在拌料不均問題，而且大多數(shù)畜禽在患病后會出現(xiàn)食欲下降甚至食欲廢絕，經(jīng)常需要高劑量給藥或頻繁給藥，往往難以保證療效，也提高了畜禽藥物中毒的可能性[16]?？诜夯祜嫿o藥可以將藥物均勻溶解于水中，在保證給藥量的同時降低了畜禽藥物中毒的可能性，也適應了規(guī)模化養(yǎng)殖場的水線供水系統(tǒng)。

3.1 牛至油博落回口服液處方優(yōu)化

通過處方篩選并采用響應面法進行優(yōu)化，成功制備出了牛至油博落回口服液。該制劑處方中2種成分都不溶于水，由于是口服液劑，且主要針對規(guī)模化養(yǎng)殖場乳頭飲水給藥，所以選擇水作為溶劑；通過篩選不同增溶劑對牛至油和博落回提取物的增溶效果，其中RH40增溶效果最好用量最少，且無毒無刺激性，故確定RH40為增溶劑；而牛至油易氧化，應選擇脂溶性抗氧化劑，其中BHT屬于油脂抗氧化劑且符合安全標準，故根據(jù)BHT標準用量添加。

顏色、狀態(tài)、氣味等感官評價為溶液劑的主要質(zhì)量要求，因此以感官評分為考察指標，應用響應面法進行優(yōu)化，3個影響因素對感官評分構成三維空間的響應面圖和二維平面的等高線圖，能夠直觀地反映出3因素的相互作用和對感官評分的影響。響應面越陡峭，表示該因素對感官評分的影響越大，響應面越平緩，表示該因素對感官評分的影響越小[17]。隨著牛至油、博落回提取物和RH40的增加，感官評分呈先上升后下降的趨勢，說明3個因素對感官評分均有較明顯的影響，且兩兩因素之間的交互作用均顯著。結果表明，牛至油添加量對口服液感官影響最顯著，RH40添加量影響次之，博落回提取物添加量對口服液感官影響最小。

3.2 牛至油博落回口服液體外抑菌試驗

王新偉等[18]就牛至油對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌效果研究表明，牛至油對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌均有明顯抑制作用，且對金黃色葡萄球菌的抑制能力明顯強于對大腸桿菌，其中低濃度牛至油對2種細菌的抑菌活性與本研究結果完全一致。許璐等[19]研究發(fā)現(xiàn)，牛至油與香芹酚對金黃色葡萄球菌和糞鏈球菌的殺菌效果相當，百里香酚對金黃色葡萄球菌的殺菌效果與牛至油和香芹酚相當，對糞鏈球菌的作用較弱，推測本研究中1%牛至油溶液對糞鏈球菌抑殺作用弱的原因可能是在水溶液的制備過程中有酚類損失。王朝元等[20]研究發(fā)現(xiàn)，博落回生物堿對金黃色葡萄球菌的抑菌效果較好；李美荃等[21]研究顯示，隨著濃度的增加，博落回生物堿對金黃色葡萄球菌、沙門氏菌及大腸桿菌的抑制效果增強，其中對金黃色葡萄球菌抑制效果最強。蘇紅等[22]研究博落回提取物中血根堿對沙門氏菌、金黃色葡萄球菌和大腸桿菌等的抑菌效果發(fā)現(xiàn)，其對金黃色葡萄球菌、糞鏈球菌的抑制作用最強，這與本試驗結果相一致。

研究發(fā)現(xiàn)，牛至油和博落回提取物對革蘭氏陰性和陽性菌均有較強的抑菌效果[23]。牛至油抗菌機制主要是使細胞質(zhì)膜通透和去極化[24]，抑制細菌生物膜的形成，影響細菌蛋白質(zhì)的合成[25]等。博落回提取物抗菌機制主要是通過干擾Fts Z蛋白的裝配進而抑制細菌分裂，誘導膜結合細胞壁自溶酶的釋放，導致細菌溶解[26]，抑制DNA合成，影響細胞膜的通透性[27]等，從抗菌機制預計2種藥物聯(lián)用時可以從不同途徑抑制并殺死細菌，因此本研究首次將牛至油與博落回提取物聯(lián)合應用，聯(lián)合藥敏試驗結果表明，牛至油與博落回提取物之間存在著良好的正向作用，無頡頏作用，對大腸桿菌及沙門氏菌起相加作用，對金黃色葡萄球菌起無關作用，對糞鏈球菌為協(xié)同作用，因此可以通過聯(lián)合使用提高臨床抗菌效果。

4 結 論

本研究成功研制出可以與水任意比例混溶的牛至油博落回口服液，其中香芹酚含量為42.59 mg/mL，血根堿量為6.51 mg/mL，其對大腸桿菌、沙門氏菌、糞鏈球菌與金黃色葡萄球菌均有良好的抑制作用，對金黃色葡萄球菌和糞鏈球菌的抑菌效果最強。聯(lián)合藥敏試驗結果顯示，牛至油博落回聯(lián)合用藥對大腸桿菌和沙門氏菌起相加作用，對金黃色葡萄球菌起無關作用，對糞鏈球菌為協(xié)同作用，二者聯(lián)合應用可以提高抗菌效果。