王秀芝 史曉斌 崔聰聰 李 杰 張曉梅 張松柏 杜曉華 譚新球 張德詠 劉 勇*

（1 赤峰市農(nóng)牧科學(xué)研究所，內(nèi)蒙古赤峰 024031；2 湖南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所，湖南長(zhǎng)沙 410125）

病毒病是番茄生產(chǎn)中最為常見(jiàn)的病害，發(fā)生和傳播都非常迅速，引起的損失也較為嚴(yán)重，可造成大幅度減產(chǎn)，甚至絕收。目前生產(chǎn)上危害較為嚴(yán)重的有番茄褪綠病毒（Tomato chlorosis virus，ToCV）和番茄黃化曲葉病毒（Tomato yellow leaf curl virus，TYLCV）。這兩種病毒都是由介體昆蟲(chóng)傳播，其中ToCV 由煙粉虱、白粉虱等以半持久方式傳播（Wisler et al.，1998），TYLCV 由煙粉虱以持久方式傳播（Brown &Czosnek，2002）。近年來(lái)隨著氣溫升高和田間煙粉虱的頻繁發(fā)生，番茄病毒病的發(fā)生日趨嚴(yán)重，并且在很多地區(qū)存在病毒病的復(fù)合侵染。

TYLCV 和ToCV 分 別 于2006 年 和2013 年 在我國(guó)大陸首次報(bào)道（Wu et al.，2006；Zhao et al.，2013）。目前ToCV 和TYLCV 在我國(guó)分布廣泛，且復(fù)合侵染情況較為普遍（趙黎明 等，2014；吳淑華等，2016；劉微 等，2018）。2018 年開(kāi)始，筆者在內(nèi)蒙古赤峰市寧城縣大城子鎮(zhèn)和松山區(qū)大廟鎮(zhèn)進(jìn)行番茄病毒病的調(diào)查，發(fā)現(xiàn)有些棚戶的番茄植株表現(xiàn)褪綠和黃化曲葉的癥狀，采集樣品檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，樣品存在ToCV 和TYLCV 的復(fù)合侵染。為規(guī)范番茄病毒病的綠色防控，減少化學(xué)農(nóng)藥的使用，促進(jìn)番茄綠色生產(chǎn)，2019 年和2020 年，筆者在該地區(qū)采用嗜硫小紅卵菌HNI-1 菌劑噴霧與噻蟲(chóng)嗪蘸（灌）根組合的方式對(duì)番茄病毒病進(jìn)行預(yù)防和防控，通過(guò)增強(qiáng)植物免疫和控制介體昆蟲(chóng)的方式控制病毒病，以期達(dá)到較為理想的預(yù)防和防控效果，控制病毒病的擴(kuò)散傳播，為其他地區(qū)番茄病毒病的防控提供借鑒和參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試藥劑：2 億CFU · mL嗜硫小紅卵菌菌劑（HNI-1，懸浮劑）由長(zhǎng)沙艾格里生物科技有限公司提供，25%噻蟲(chóng)嗪水分散粒劑由瑞士先正達(dá)作物保護(hù)有限公司生產(chǎn)，2 種藥劑均在番茄上進(jìn)行了登記。供試番茄品種為漢姆1 號(hào)，購(gòu)自赤峰和潤(rùn)農(nóng)業(yè)高新科技產(chǎn)業(yè)開(kāi)發(fā)有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

小區(qū)設(shè)計(jì)：2019 年試驗(yàn)在內(nèi)蒙古赤峰市寧城縣大城子鎮(zhèn)設(shè)施番茄園區(qū)進(jìn)行，2020 年試驗(yàn)在內(nèi)蒙古赤峰市松山區(qū)大廟鎮(zhèn)設(shè)施番茄園區(qū)進(jìn)行。在兩處園區(qū)各選取了20 個(gè)溫室，其中10 個(gè)用于預(yù)防試驗(yàn)，另外10 個(gè)用于防控試驗(yàn)。預(yù)防試驗(yàn)和防控試驗(yàn)使用的溫室之間的距離大于10 m。每個(gè)溫室面積667 m，選取其中的一半進(jìn)行藥劑處理，另外一半作為對(duì)照。

預(yù)防試驗(yàn)用藥方法：播種前用HNI-1菌劑30mL兌水3kg拌種15min；在幼苗4葉期，用HNI-1 菌劑300 倍液噴霧1 次，每平米苗床噴1 000 g 藥液；移栽前2 d，用25%噻蟲(chóng)嗪水分散粒劑2 000 倍液蘸根，每平米苗床使用2 000 g 藥液；定植后第5 天，用HNI-1 菌劑300 倍液噴霧，每667 m噴30 L 藥液。對(duì)照用清水處理。定植30 d后調(diào)查煙粉虱數(shù)量及番茄病毒病發(fā)病情況。

防控試驗(yàn)用藥方法：田間調(diào)查時(shí)，在番茄開(kāi)花后期植株表現(xiàn)出明顯的褪綠和黃化曲葉癥狀時(shí)，立即進(jìn)行防控試驗(yàn)。用HNI-1 菌劑300 倍液噴霧，每667 m噴30 L 藥液，每隔3 d 用藥1 次，連續(xù)用5 次，同時(shí)用25%噻蟲(chóng)嗪水分散粒劑2 000 倍液灌根1次，每株50～100 mL藥液。對(duì)照用清水處理。待所有處理完成，間隔15 d 后調(diào)查煙粉虱數(shù)量及番茄病毒病發(fā)病情況。

調(diào)查方法：對(duì)每個(gè)處理共選取10 行番茄（第7、8、19、20、31、32、43、44、55、56 行）進(jìn)行調(diào)查，統(tǒng)計(jì)每一行番茄總株數(shù)和每株番茄上的煙粉虱數(shù)量及病毒病發(fā)病情況，預(yù)防和防控試驗(yàn)處理前后，根據(jù)表1 的病毒病病情調(diào)査分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)（劉勇等，2018），調(diào)查統(tǒng)計(jì)總株數(shù)和各級(jí)病株數(shù)，計(jì)算病情指數(shù)。最后分別對(duì)10 個(gè)溫室的預(yù)防和防控結(jié)果取平均值，并進(jìn)行方差分析。

表1 病毒病病情調(diào)査分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)

病情指數(shù)=∑（各級(jí)病株數(shù)×相應(yīng)級(jí)值）/（調(diào)查總株數(shù)×最高級(jí)值）× 100

1.3 番茄病毒病鑒定

2019 年和2020 年，分別將用于預(yù)防和防控試驗(yàn)的20 個(gè)小區(qū)的600 份感病番茄葉片帶回實(shí)驗(yàn)室，分別用CTAB 法和Trizol 法提取DNA 和RNA，提取后放于-20 ℃保存，用于后續(xù)的番茄病毒?。―NA病毒和RNA 病毒）檢測(cè)試驗(yàn)。

分別用番茄上常見(jiàn)病毒（番茄黃化曲葉病毒TYLCV、番茄斑萎病毒TSWV、番茄褪綠病毒ToCV、黃瓜花葉病毒CMV、煙草花葉病毒TMV、番茄花葉病毒ToMV）的引物（Pan et al.，2012；孫潔 等，2014；王雪忠 等，2018；劉勇 等，2019）對(duì)每個(gè)小區(qū)的采集樣品進(jìn)行擴(kuò)增，引物信息見(jiàn)表2。PCR 產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳檢測(cè)，在凝膠成像系統(tǒng)上觀察并記錄結(jié)果。

表2 引物信息

1.4 數(shù)據(jù)分析

采用 SPSS 18.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用獨(dú)立樣本檢驗(yàn)對(duì)預(yù)防和防控試驗(yàn)中煙粉虱數(shù)量、番茄病毒病的病情指數(shù)進(jìn)行差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 預(yù)防試驗(yàn)中番茄病毒病病情指數(shù)和煙粉虱數(shù)量對(duì)比

2019 年預(yù)防試驗(yàn)中共調(diào)查番茄2 978 株，2020年預(yù)防試驗(yàn)中共調(diào)查番茄2 959 株。從表3 可以看出，2019 年清水對(duì)照的病毒病病情指數(shù)為8.254，而播種前使用HNI-1 菌劑拌種、4 葉期使用HNI-1菌劑噴霧和定植前使用噻蟲(chóng)嗪蘸根處理的番茄病毒病病情指數(shù)僅為1.165；2020 年清水對(duì)照的病毒病病情指數(shù)為10.125，而播種前使用HNI-1 菌劑拌種、4 葉期使用HNI-1 菌劑噴霧和定植前使用噻蟲(chóng)嗪蘸根的番茄，病毒病病情指數(shù)僅為1.572；兩年間藥劑處理與對(duì)照的差異均達(dá)到顯著水平，說(shuō)明HNI-1 菌劑拌種、噴霧和噻蟲(chóng)嗪蘸根處理能夠有效預(yù)防番茄病毒病的發(fā)生。從表3 也可以看出，與清水對(duì)照相比，使用HNI-1 菌劑拌種、噴霧和噻蟲(chóng)嗪蘸根處理能顯著降低番茄植株上的煙粉虱數(shù)量，煙粉虱數(shù)量維持在6 頭 · 株以下。

表3 預(yù)防試驗(yàn)中番茄病毒病病情指數(shù)和煙粉虱數(shù)量對(duì)比

2.2 防控試驗(yàn)中番茄病毒病鑒定

防控試驗(yàn)中用藥前對(duì)發(fā)病的10 個(gè)溫室的番茄葉片樣品進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，結(jié)果表明，只有TYLCV和ToCV 的病毒引物擴(kuò)增后出現(xiàn)目的條帶，而用其他病毒引物擴(kuò)增后均沒(méi)有出現(xiàn)目的條帶。其中TYLCV 的條帶大小與預(yù)期目的條帶1 442 bp 大小一致，ToCV 的條帶大小與預(yù)期目的條帶450 bp大小一致（圖1）。說(shuō)明該地區(qū)番茄病毒病主要為T(mén)YLCV 和ToCV。

圖1 用藥前番茄TYLCV 和ToCV 的PCR 驗(yàn)證

2.3 防控試驗(yàn)中番茄病毒病病情指數(shù)和煙粉虱數(shù)量對(duì)比

2019 年防控試驗(yàn)中共調(diào)查番茄2 952 株，2020年防控試驗(yàn)中共調(diào)查番茄2 935株。調(diào)查結(jié)果表明，用藥后顯著降低了番茄病毒病的病情指數(shù)和煙粉虱數(shù)量。從圖2 可以看出，2019、2020 年HNI-1菌劑噴霧和噻蟲(chóng)嗪灌根處理15 d 后，病情指數(shù)顯著降低，分別為5.94、7.48。從圖3 可以看出，2019、2020 年HNI-1 菌劑噴霧和噻蟲(chóng)嗪灌根處理后，與清水對(duì)照相比，番茄植株上的煙粉虱數(shù)量顯著降低，分別達(dá)到64.3、84.3 頭 · 株。

圖2 防控試驗(yàn)中番茄病毒病病情指數(shù)對(duì)比

圖3 防控試驗(yàn)中番茄上煙粉虱數(shù)量對(duì)比

2.4 防控試驗(yàn)中番茄病毒病癥狀對(duì)比

2019 年和2020 年的防控試驗(yàn)中，HNI-1 菌劑噴霧和噻蟲(chóng)嗪灌根處理后番茄植株長(zhǎng)勢(shì)均得到了明顯的改善，番茄褪綠癥狀明顯減輕，用藥前表現(xiàn)出褪綠癥狀的葉片邊緣逐漸恢復(fù)綠色，用藥前表現(xiàn)出黃化曲葉癥狀的植株頂端長(zhǎng)出了新葉，且新葉沒(méi)有表現(xiàn)出發(fā)病癥狀（圖4）。

圖4 HNI-1 菌劑噴霧和噻蟲(chóng)嗪灌根處理前后番茄病毒病癥狀對(duì)比

3 結(jié)論與討論

ToCV 首次發(fā)現(xiàn)于美國(guó)佛羅里達(dá)州，隨后在世界各國(guó)迅速傳播，給番茄等作物的生產(chǎn)造成嚴(yán)重?fù)p失（Wisler et al.，1998；Tzanetakis et al.，2013）。2013年ToCV在我國(guó)大陸發(fā)現(xiàn)（Zhao et al.，2013），隨后迅速傳播到北京、江蘇、山西、陜西、浙江等地（Karwitha et al.，2014；Zhao et al.，2014；鄭慧新 等，2016），對(duì)我國(guó)番茄生產(chǎn)造成了非常嚴(yán)重的危害。TYLCV 最早發(fā)現(xiàn)于以色列（Cohen &Harpaz，1964），隨后在全世界范圍內(nèi)擴(kuò)散傳播，于2006 年傳入我國(guó)內(nèi)陸（Wu et al.，2006），目前已經(jīng)在我國(guó)廣泛分布。隨著近年來(lái)ToCV在我國(guó)的發(fā)生，其與TYLCV在田間復(fù)合侵染，給番茄生產(chǎn)進(jìn)一步造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。筆者在調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，番茄植株主要表現(xiàn)為黃化曲葉和褪綠，室內(nèi)檢測(cè)證實(shí)了存在TYLCV 和ToCV 的復(fù)合侵染。

目前對(duì)植物病毒病沒(méi)有特效藥劑，生產(chǎn)上常用的一些病毒抑制劑，如20%鹽酸嗎啉胍可濕性粉劑、0.5%葡聚烯糖可溶粉劑、30%毒氟磷可濕性粉劑等，可在一定程度上減輕ToCV 的危害（李嬌嬌 等，2016），但是并沒(méi)有一套能夠防控番茄病毒病的通用技術(shù)。在番茄種植的早期，如果能采用合理的技術(shù)進(jìn)行預(yù)防，將大大降低番茄病毒病的發(fā)生，此外，在番茄發(fā)病后，如果能及時(shí)采用有效的防控技術(shù)，也可控制病毒病，有助于降低損失，保證產(chǎn)量（史曉斌 等，2020）。

本試驗(yàn)采用防控介體昆蟲(chóng)和提高植物防御反應(yīng)的綜合措施來(lái)防治病毒病。煙粉虱分布于番茄的葉片背面，且容易遷飛，通過(guò)噴霧的方式達(dá)不到理想的防控效果，本試驗(yàn)中采用噻蟲(chóng)嗪蘸（灌）根的方式，在番茄生長(zhǎng)的早期，使植物通過(guò)內(nèi)吸作用吸收藥劑，達(dá)到對(duì)煙粉虱及其蟲(chóng)卵的控制效果，降低了煙粉虱的種群數(shù)量，從而降低了病毒的傳播風(fēng)險(xiǎn)；另外，本試驗(yàn)采用生物制劑嗜硫小紅卵菌菌劑，該藥劑可以通過(guò)提高植物的防御反應(yīng)來(lái)提高植物抗病能力（Su et al.，2015）。使用嗜硫小紅卵菌菌劑后，番茄植株長(zhǎng)勢(shì)明顯提高，抗病能力也得到增強(qiáng)，連續(xù)使用5 次后，病毒病病情指數(shù)顯著降低，病情得到了較好的控制。

綜上所述，通過(guò)連續(xù)兩年的預(yù)防和防控試驗(yàn)，采用嗜硫小紅卵菌菌劑噴霧結(jié)合噻蟲(chóng)嗪蘸（灌）根可有效控制介體昆蟲(chóng)煙粉虱的發(fā)生及病毒的擴(kuò)散，且操作簡(jiǎn)單，成本低廉，降低了化學(xué)農(nóng)藥的使用，可為番茄病毒病的科學(xué)有效防控提供重要借鑒。