李孟 楊穎 鄧曉顏 張靖柯 王勝超 孫孝亞 鄭曉珂 馮衛(wèi)生
中圖分類號(hào) R284;R285 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408(2022)05-0563-07
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2022.05.09
摘 要 目的 比較懷中1號(hào)地黃不同炮制品(鮮地黃、生地黃和熟地黃)中脂溶性成分的差異,并初步評(píng)價(jià)其體外抗氧化活性。方法 采用索氏提取法獲得地黃3種炮制品的脂溶性提取物,采用氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)其進(jìn)行成分分析。采用NIST98系統(tǒng)譜庫(kù)自動(dòng)檢索組分的質(zhì)譜信息,結(jié)合有關(guān)文獻(xiàn)和與八峰索引、EPA/NIH庫(kù)對(duì)照對(duì)化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定,并使用Hewlett Packard軟件按峰面積歸一化法計(jì)算各化合物的相對(duì)含量。采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除法考察3種地黃炮制品中脂溶性成分的抗氧化活性。結(jié)果 從地黃不同炮制品中共鑒定出79個(gè)脂溶性成分,從鮮地黃、生地黃和熟地黃中分別鑒定出48、52和37個(gè)脂溶性成分,其相對(duì)含量分別占總成分的92.69%、86.29%、92.89%;三者中共有脂溶性成分20個(gè),其相對(duì)含量分別占各炮制品中脂溶性成分含量的88.73%、80.89%、85.87%,且均以亞油酸甲酯、棕櫚酸甲酯、油酸甲酯等脂肪酸類成分為主。另外,鮮地黃中獨(dú)有的脂溶性成分有18個(gè),多為萜類化合物;生地黃和熟地黃中獨(dú)有的脂溶性成分分別有17、6個(gè),多為烷烴類化合物??寡趸瘜?shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,三者中脂溶性成分對(duì)DPPH自由基的半數(shù)清除濃度分別為0.756、0.660、0.758 mg/mL。結(jié)論 不同地黃炮制品中的共有脂溶性成分多為脂肪酸類化合物,鮮地黃中獨(dú)有的脂溶性成分多為萜類化合物,生地黃和熟地黃中獨(dú)有的脂溶性成分多為烷烴類化合物;其脂溶性成分均具有一定的體外抗氧化活性。
關(guān)鍵詞 懷中1號(hào)地黃;鮮地黃;生地黃;熟地黃;脂溶性成分;氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法;抗氧化
Comparison of liposoluble constituents and study on in vitro antioxidant activities of different processed products of Huaizhong No.1 Rehmannia glutionsa
LI Meng1,2,YANG Ying1,2,DENG Xiaoyan1,2,ZHANG Jingke1,2,WANG Shengchao1,2,SUN Xiaoya1,2,ZHENG Xiaoke1,2,F(xiàn)ENG Weisheng1,2(1. School of Pharmacy, Henan University of Chinese Medicine, Zhengzhou 450046, China; 2. Engineering and Technology Center for Chinese Medicine Development of Henan Province, Zhengzhou 450046,China)
ABSTRACT? ?OBJECTIVE To compare the difference of liposoluble constituents in different processed products of Huaizhong No.1 Rehmannia glutionsa (fresh R. glutionsa, R. glutionsa and prepared R. glutionsa), and to evaluate its in vitro antioxidant activity preliminarily. METHODS Liposoluble extracts were extracted from 3 processed products of R. glutionsa by Soxhlet extraction. Their constituents were analyzed by gas chromatography-mass spectrometry. The spectral library of NIST98 system was used to automatically retrieve the mass spectrum information of components, and the structures of compounds were identified in combination with relevant literature and by comparing with eight peak index and EPA/NIH library. Relative contents of the components were calculated by using peak area normalization method with Hewlett Packard software. The antioxidant activities of liposoluble constituents in 3 processed products of R. glutionsa were investigated by 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) free radical scavenging. RESULTS A total of 79 liposoluble components were identified from different processed products of R. glutionsa, and 48, 52 and 37 liposoluble compounds were identified from fresh R. glutionsa, R. glutionsa and prepared R. glutionsa, respectively; their relative contents accounted for 92.69%, 86.29%, 92.89% of the total components respectively. Among them, there were 20 liposoluble compounds totally, and their relative contents accounted for 88.73%, 80.89% and 85.87% of liposoluble components in each processed product respectively; they were mainly composed of fatty acids such as methyl linoleate, methyl palmitate and methyl oleate. In addition, there were 18 unique liposoluble components in fresh R. glutionsa, mostly terpenoids; there were 17 and 6 unique liposoluble components in R. glutionsa and prepared R. glutionsa, mostly alkanes. The results of antioxidant experiment showed that median scavenging concentrations of liposoluble components to DPPH free radical were 0.756, 0.660, 0.758 mg/mL, respectively. CONCLUSIONS The common liposoluble components in different processed products of R. glutionsa are mostly fatty acids; the unique liposoluble components in fresh R. glutionsa are mostly terpenoids, and those of R. glutionsa and prepared R. glutionsa are mostly alkanes; the liposoluble constituents possess in vitro antioxidant activities.
KEYWORDS? ?Huaizhong No.1 Rehmannia glutionsa; fresh Rehmannia glutionsa; Rehmannia glutionsa; prepared Rehmannia glutionsa; liposoluble constituents; gas chromatography-mass spectrometry; antioxidant activities
地黃為四大懷藥之一,是玄參科植物地黃Rehmannia glutinosa Libosch.的新鮮或干燥塊根,始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》,被列為上品。地黃在我國(guó)具有悠久的用藥歷史,是我國(guó)中藥材及中藥飲片出口前十大品種之一[1-2]。自明代以來(lái),公認(rèn)以古懷慶府(今河南焦作、溫縣、沁陽(yáng)、武陟、孟縣等地)一帶為地黃的道地產(chǎn)區(qū)[3]。目前已有大量文獻(xiàn)對(duì)地黃的形態(tài)、采收、產(chǎn)地、加工、配伍、成分、藥效等進(jìn)行了報(bào)道[4-5]?,F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明,地黃具有降血糖、降血脂、調(diào)節(jié)免疫、保肝等作用,且這些藥理作用可能與地黃的抗氧化活性相關(guān)[6-9]。地黃中的化學(xué)成分主要包括環(huán)烯醚萜類、紫羅蘭酮類、苯乙醇苷類、酚酸類、三萜類、糖類、氨基酸等[10-12]。按照炮制方法的不同,地黃分為鮮地黃、生地黃和熟地黃。其中,鮮地黃清熱生津、涼血、止血;生地黃清熱涼血、養(yǎng)陰生津;熟地黃補(bǔ)血滋陰、益精填髓[13]。目前,關(guān)于地黃不同炮制品化學(xué)成分差異的評(píng)價(jià),主要涉及梓醇、毛蕊花糖苷、糠醛等特征性化合物以及無(wú)機(jī)物[14-15],但是針對(duì)極性小的脂溶性成分還缺乏系統(tǒng)研究。
在地黃的栽培、生產(chǎn)中,因長(zhǎng)期無(wú)性繁殖造成地黃品種退化、品質(zhì)下降,以及存在品種利用多年一貫制和病蟲害嚴(yán)重等問(wèn)題,使得地黃的產(chǎn)量和質(zhì)量下降,原有的地黃品種已經(jīng)難以適應(yīng)中藥材企業(yè)和市場(chǎng)的需求[16]。河南中醫(yī)藥大學(xué)研發(fā)的地黃新品種懷中1號(hào)(于2018年12月獲得《河南省中藥材品種鑒定書》)對(duì)輪紋病和斑枯病有較高的抗病性能,具有出苗整齊、塊根集中、生長(zhǎng)健壯的優(yōu)勢(shì),并且相比現(xiàn)有品種其平均畝產(chǎn)提高了10.5%左右。本課題組前期對(duì)懷中1號(hào)鮮地黃的化學(xué)成分進(jìn)行了分離和鑒定,從中分離得2個(gè)新的紫羅蘭酮類、1個(gè)新的酚酸類及1個(gè)新的含氮類化合物[17-19]。本研究以懷中1號(hào)地黃為研究對(duì)象,采用氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(GC-MS)法對(duì)其不同炮制品中脂溶性成分的組成和相對(duì)含量進(jìn)行分析和比較,并初步評(píng)價(jià)這些脂溶性成分的體外抗氧化活性,以期彌補(bǔ)地黃脂溶性成分研究的不足,并為進(jìn)一步明確地黃的炮制機(jī)理、闡釋地黃炮制與藥性/藥效之間的內(nèi)在聯(lián)系提供一定的科學(xué)依據(jù)。
1 材料
1.1 主要儀器
本研究所用的主要儀器有7890/7000B型三重串聯(lián)四極桿GC-MS儀(美國(guó)Agilent 公司);BT-25S型十萬(wàn)分之一電子天平(德國(guó)Sartorius公司);AB204-N型萬(wàn)分之一電子天平(德國(guó)Mettler-Toledo公司);N1100VWD型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、EYELA PDU-2110型冷凍干燥機(jī)(上海愛朗儀器有限公司)。
1.2 主要藥品與試劑
懷中1號(hào)地黃藥材于2020年11月采自河南焦作,經(jīng)河南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院董誠(chéng)明教授鑒定為玄參科植物地黃R. glutinosa Libosch.的新鮮塊根。黃酒(酒精的體積分?jǐn)?shù)為14%)購(gòu)自浙江古越龍山紹興酒股份有限公司;維生素C(批號(hào)B21293,純度≥99%)購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司;1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)購(gòu)自美國(guó)Sigma公司;石油醚(沸程60~90 ℃)、無(wú)水乙醇、甲醇、正己烷、無(wú)水硫酸鈉、三氟化硼均為分析純,水為超純水。
2 方法
2.1 地黃飲片及其脂溶性提取物的制備
鮮地黃飲片的制備:取新鮮地黃藥材洗凈,切片,冷凍干燥,即得。生地黃飲片的制備:取鮮地黃藥材1 000 g,置于烘箱中75 ℃干燥48 h,取出,稍悶,放涼,切厚片,即得。熟地黃飲片的制備:取上述生地黃飲片100 g,加35 g黃酒,拌勻,悶潤(rùn)至黃酒被吸盡,以100 ℃蒸32 h,切厚片,即得。
地黃脂溶性提取物的制備:分別稱取各飲片20 g,切小塊,以石油醚為溶劑,80 ℃索氏提取6 h,將提取液減壓濃縮,得黃色油狀提取物,即脂溶性成分(鮮地黃、生地黃、熟地黃得率分別為0.058%、0.056%、0.050%)。在上述提取物中,加入0.5 mol/L氫氧化鉀甲醇溶液4 mL,60 ℃恒溫水浴30 min;冷卻后加入三氟化硼甲醇溶液5 mL,于60 ℃水浴加熱回流5 min;冷卻后加正己烷和飽和氯化鈉水溶液各2 mL,靜置,分層,取上清液加無(wú)水Na2SO4干燥,過(guò)0.22 μm微孔濾膜,即得待測(cè)樣品[20]。
2.2 GC-MS分析條件
2.2.1 GC條件 色譜柱為HP-FFAP型石英毛細(xì)管柱(30 m×0.25 mm,0.25 μm);載氣為高純氦氣(99.999%),流速為1.0 mL/min;進(jìn)樣口溫度為240 ℃;進(jìn)樣量為10? μL,分流進(jìn)樣;升溫程序?yàn)?0 ℃保持2 min,按10 ℃/min升溫至190 ℃并保持2 min,然后再以2 ℃/min升溫至 230 ℃并保持15 min;氣化室溫度為280 ℃;接口溫度為240 ℃。
2.2.2 MS條件 離子源為電子轟擊源,離子源溫度為230 ℃,電子能量為70 eV;掃描范圍為質(zhì)荷比(m/z)30~600;溶劑延遲時(shí)間為4.5 min;GC-MS接口溫度為240 ℃。
2.3 GC-MS分析及數(shù)據(jù)處理
取“2.1”項(xiàng)下待測(cè)樣品,按“2.2”項(xiàng)下GC-MS條件進(jìn)樣分析。采用NIST98系統(tǒng)譜庫(kù)自動(dòng)檢索組分的質(zhì)譜信息,結(jié)合有關(guān)文獻(xiàn),分別與八峰索引和EPA/NIH庫(kù)對(duì)照,選出匹配度均在80%以上的化合物。用Hewlett Packard軟件按峰面積歸一化法計(jì)算各化合物的相對(duì)含量[21]。
2.4 地黃不同炮制品中脂溶性成分的體外抗氧化能力測(cè)定
采用DPPH自由基清除法測(cè)定地黃不同炮制品中脂溶性成分的抗氧化活性[22]。精密稱取7.88 mg DPPH溶于100 mL無(wú)水乙醇中,制備成終濃度為0.2 mmol/L的DPPH溶液;精密稱取15 mg鮮地黃、生地黃、熟地黃的脂溶性成分(樣品)及維生素C(陽(yáng)性對(duì)照),分別加入無(wú)水乙醇5 mL制備成母液,然后以無(wú)水乙醇將樣品溶液和對(duì)照品溶液均稀釋成1.5、1、0.5、0.1、0.05、0.01 mg/mL的溶液,備用。分別取無(wú)水乙醇100 μL+DPPH溶液100 μL(記為“空白組”)、不同質(zhì)量濃度的維生素C溶液100 μL+DPPH溶液100 μL(記為“陽(yáng)性對(duì)照組”)、不同質(zhì)量濃度的樣品溶液100 μL+DPPH溶液100 μL(記為“樣品組”)于96孔板中,在室溫下反應(yīng)30 min。采用酶標(biāo)儀測(cè)定各孔在517 nm波長(zhǎng)處的吸光度(A)值,并計(jì)算DPPH自由基清除率:DPPH自由基清除率(%)=[(A0-Ai)/A0]×100%。式中,A0表示空白組的A,Ai為藥物組的A。重復(fù)測(cè)定3次,取平均值。利用SPSS 25.0統(tǒng)計(jì)軟件計(jì)算各樣品對(duì)DPPH自由基的半數(shù)清除濃度(IC50)。
3 結(jié)果
3.1 地黃不同炮制品中脂溶性成分的GC-MS分析結(jié)果
依照上述GC-MS條件對(duì)地黃不同炮制品的脂溶性成分進(jìn)行分析,得出的總離子流圖見圖1,GC-MS分析結(jié)果見表1。
結(jié)果顯示,從地黃不同炮制品中共鑒定出79個(gè)脂溶性成分。其中,在鮮地黃脂溶性成分中(圖1A),共鑒定出48個(gè)成分,檢出成分的相對(duì)含量占總成分的92.69%;在生地黃脂溶性成分中(圖1B),共鑒定出52個(gè)成分,檢出成分的相對(duì)含量占總成分的86.29%;在熟地黃脂溶性成分中(圖1C),共鑒定出37個(gè)成分,檢出成分的相對(duì)含量占總成分的92.89%。鑒定出的這些成分主要為脂肪酸類和萜類化合物,另外還有烷烴、烯烴等脂肪族化合物。脂肪酸是地黃中脂溶性成分的主要組成部分,其相對(duì)含量在鮮地黃、生地黃和熟地黃中分別占脂溶性成分的90.44%、82.28%和89.27%,其中飽和脂肪酸占45.05%、37.87%、43.50%,不飽和脂肪酸占45.39%、44.41%、45.77%。以上結(jié)果說(shuō)明,地黃不同炮制品中脂肪酸的構(gòu)成有一定差異。
在地黃的不同炮制品中,共有的脂溶性成分有20個(gè),這20個(gè)共有成分含量分別占各炮制品脂溶性成分含量的88.73%、80.89%、85.87%。其中,亞油酸甲酯、棕櫚酸甲酯、油酸甲酯是3種地黃炮制品中共有且相對(duì)含量較高的成分(含量均在10%以上),合計(jì)相對(duì)含量分別占鮮地黃、生地黃和熟地黃中脂溶性成分的63.25%、60.50%、60.70%。除上述3種炮制品中共有的20種成分外,鮮地黃和生地黃中共有的脂溶性成分有7個(gè),鮮地黃和熟地黃中共有的脂溶性成分有3個(gè),生地黃和熟地黃中共有的脂溶性成分有8個(gè)。以上結(jié)果說(shuō)明,地黃不同炮制品中脂溶性成分具有一定相似性。
另外,鮮地黃中獨(dú)有的脂溶性成分有18個(gè),相對(duì)含量較高(在0.10%以上)的有:(+)-2-樟腦(0.49%)、2-氧代十八烷酸甲酯(0.36%)、乙酸松油酯(0.35%)、(-)-β-蓽澄茄烯(0.17%)、L-石竹烯(0.15%)、反式-2-十一烯醇(0.12%)、(E)-β-金合歡烯(0.10%)等,多為萜類成分,占鮮地黃脂溶性成分含量的2.19%。生地黃中獨(dú)有的脂溶性成分有17個(gè),相對(duì)含量較高(在0.10%以上)的有:順式-9-二十三烯(1.03%)、1-十五醇(0.46%)、葉綠醇(0.33%)、1,2-環(huán)氧十六烷(0.28%)、二十四烷(0.13%)、二十二烷(0.12%)、亞麻酰氯(0.10%)等,多為烷烴類化合物,占生地黃脂溶性成分含量的2.84%。熟地黃中獨(dú)有的脂溶性成分有6個(gè),相對(duì)含量較高(在0.10%以上)的有:二十八烷酸甲酯(2.88%)、山崳醇(1.20%)、十八醇(1.12%)、二十八烷(0.17%)等,多為烷烴類化合物,占熟地黃脂溶性成分含量的5.49%。以上結(jié)果說(shuō)明,地黃不同炮制品中脂溶性成分存在一定的差異。
3.2 地黃不同炮制品中脂溶性成分的體外抗氧化活性考察結(jié)果
鮮地黃、生地黃、熟地黃中脂溶性成分均具有一定的體外抗氧化活性,在測(cè)定的質(zhì)量濃度范圍內(nèi),其對(duì)DPPH自由基的清除能力均隨著試樣質(zhì)量濃度的增加而逐漸增強(qiáng),但均弱于維生素C。鮮地黃、生地黃、熟地黃中脂溶性成分對(duì)DPPH自由基的清除率分別為69.70%、61.47%、69.26%,對(duì)DPPH自由基的IC50分別為0.756、0.660、0.758 mg/mL。地黃不同炮制品中脂溶性成分、維生素C對(duì)DPPH自由基的清除率測(cè)定結(jié)果見圖2。
4 討論
本研究運(yùn)用GC-MS法對(duì)鮮地黃、生地黃和熟地黃中的脂溶性成分進(jìn)行分析,共鑒定出79個(gè)脂溶性成分,其中以脂肪酸類化合物為主。三者中主要脂溶性成分均為亞油酸甲酯、棕櫚酸甲酯、油酸甲酯等。有報(bào)道指出,亞油酸具有抗癌、降低膽固醇、抗氧化等多種藥理活性,棕櫚酸甲酯、油酸甲酯具有降血脂、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗血小板聚集及血栓形成等作用[23-26]。而地黃同樣具有降血脂作用,那么,這些脂肪酸類成分是否是地黃發(fā)揮降血脂等作用的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)有待進(jìn)一步驗(yàn)證。
本研究通過(guò)對(duì)地黃不同炮制品中脂溶性成分的分析,發(fā)現(xiàn)其共有成分20個(gè),但是在不同地黃炮制品中,其相對(duì)含量各不相同:如從鮮地黃炮制成生地黃、再到熟地黃的過(guò)程中,棕櫚酸甲酯、硬脂酸甲酯、11-硬脂酸甲酯、肉豆蔻酸甲酯、癸酸甲酯、月桂酸甲酯的含量逐漸減少,而蠟酸甲酯、木蠟酸甲酯、二十二烷酸甲酯的含量逐漸增加;另外,油酸甲酯和(Z,Z,Z)-9,12,15-十八烷三烯酸甲酯在三者中的含量也有明顯差異。孫瑞霞等[27]采用GC-MS法測(cè)定地黃乙醇提取物和二氯甲烷提取物中的有機(jī)成分,發(fā)現(xiàn)主要為棕櫚酸甲酯和亞油酸甲酯等,與本研究中所列出的主要成分類似,但在文獻(xiàn)[27]中僅注明了“懷地黃樣品”,并未標(biāo)明所用地黃的飲片種類,無(wú)法確定是鮮地黃還是生地黃。邊寶林等[28]采用GC-MS法對(duì)生地黃和熟地黃中的11個(gè)脂肪酸類化合物進(jìn)行對(duì)比,發(fā)現(xiàn)其相對(duì)含量變化不明顯。本研究對(duì)鮮地黃、生地黃和熟地黃中脂溶性成分的種類和含量進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)地黃不同炮制品中上述11個(gè)脂肪酸類化合物的含量有所變化,且發(fā)現(xiàn)生地黃和熟地黃中上述11個(gè)成分的含量較為接近,但其含量與鮮地黃差異較大。
另外,除了以上共有成分外,鮮地黃中獨(dú)有的脂溶性成分有18個(gè),多為萜類成分,占鮮地黃脂溶性成分含量的2.19%;生地黃中獨(dú)有的脂溶性成分有17個(gè),多為烷烴類化合物,占生地黃脂溶性成分含量的2.84%;熟地黃中獨(dú)有的脂溶性成分有6個(gè),占熟地黃脂溶性成分含量的5.49%。該結(jié)果說(shuō)明,地黃不同炮制品中脂溶性成分存在一定差異。而這種差異的產(chǎn)生,可能是地黃加工炮制過(guò)程中,脂溶性成分發(fā)生了裂解、氧化、聚合等反應(yīng)。這些成分的變化,是否可以用來(lái)指導(dǎo)地黃的炮制過(guò)程,有待于進(jìn)一步深入研究。
地黃具有抗衰老、降血糖、抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫功能等多種藥理作用,上述藥理作用均與其抗氧化活性密切相關(guān)[29]。沈華旦等[30]采用在線高效液相色譜-紫外-二苯基三硝基苯肼分析技術(shù)對(duì)生地黃和熟地黃中抗氧化活性成分進(jìn)行篩查,發(fā)現(xiàn)地黃不同炮制品中抗氧化活性成分明顯不同,對(duì)抗氧化活性貢獻(xiàn)率較高的成分分別為玉葉金花苷酸、海膽苷、焦地黃苯乙醇苷A1/A2、毛蕊花糖苷、異毛蕊花糖苷。耿曉桐等[31]采用HPLC指紋圖譜技術(shù)對(duì)鮮地黃塊根不同組織的抗氧化活性譜效關(guān)系進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)地黃塊根菊花心(木質(zhì)部)、非菊花心(韌皮部)和整體塊根的不同極性(氯仿、正丁醇和乙酸乙酯)部位均有較強(qiáng)的抗氧化活性,且以乙酸乙酯部位的抗氧化活性最強(qiáng)。本研究采用石油醚提取地黃不同炮制品中的脂溶性成分,并采用DPPH自由基清除法對(duì)其體外抗氧化活性進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果顯示,不同地黃炮制品中脂溶性成分均顯示出了一定的抗氧化活性,但三者間無(wú)明顯差異。
本研究用NIST98系統(tǒng)譜庫(kù)自動(dòng)檢索組分的質(zhì)譜信息,選取匹配度均在80%以上的化合物。在鮮地黃和生地黃中,在保留時(shí)間為40.915 min處,匹配質(zhì)譜庫(kù)后給出的化合物為2-氧代十八烷酸甲酯或硬脂基碘,但相似度僅為77%,無(wú)法準(zhǔn)確判斷其結(jié)構(gòu)。這一成分在鮮地黃和生地黃中含量較高(分別為3.10%、6.57%),而在熟地黃中并未檢測(cè)到,故筆者推測(cè)其可能為地黃不同炮制品的指標(biāo)性成分,后期可結(jié)合中藥化學(xué)相關(guān)手段對(duì)其進(jìn)行分離、鑒定。另外,本研究對(duì)地黃不同炮制品中脂溶性成分的分析存在一定的局限性,后期筆者將以亞油酸甲酯、棕櫚酸甲酯、油酸甲酯等含量較高的化合物作為指標(biāo)性成分,并采集更多的地黃樣本進(jìn)行相關(guān)研究,彌補(bǔ)本研究的不足。
綜上所述,本研究從地黃不同炮制品中共鑒定出79個(gè)脂溶性成分,共有脂溶性成分20個(gè),其中脂肪酸是地黃脂溶性成分的主要組成部分,鮮地黃中獨(dú)有的脂溶性成分多為萜類化合物,生地黃和熟地中獨(dú)有的脂溶性成分多為烷烴類化合物。本研究為進(jìn)一步豐富和完善地黃的化學(xué)成分、揭示地黃不同炮制品藥效變化的物質(zhì)基礎(chǔ)提供了一定參考。
參考文獻(xiàn)
[ 1 ] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典:一部[S]. 2020年版.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2020:129.
[ 2 ] 盛秋雙,杜潤(rùn)寶,盧娜,等.地黃HPLC指紋圖譜及梓醇含量測(cè)定的研究[J].中草藥,2019,50(20):5060-5063.
[ 3 ] 司南,楊柳,王宏潔,等.近紅外光譜法鑒別懷地黃藥材道地性的研究[J].現(xiàn)代藥物與臨床,2013,28(4):542-546.
[ 4 ] 王豐青,謝彩俠,孫瑞斌,等.地黃種質(zhì)創(chuàng)新與品種選育研究進(jìn)展[J].中國(guó)中藥雜志,2018,43(21):4203-4209.
[ 5 ] 周麗,徐金娣,毛茜,等.地黃加工炮制研究新進(jìn)展及展望[J].中藥材,2016,39(5):1184-1190.
[ 6 ] 鄭曉珂,劉朝妍,蔣贇,等.懷地黃雌激素樣活性篩選的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)藥學(xué)雜志,2013,48(21):1831-1836.
[ 7 ] CHEN Y,LIU Q P,SHAN Z F,et al. Catalpol ameliorates podocyte injury by stabilizing cytoskeleton and enhancing autophagy in diabetic nephropathy[J]. Front Pharmacol,2019,10:1477.
[ 8 ] 趙瑩瑩,陳燕,韓杜菀,等.地黃苦苷元的雌激素樣活性篩選研究[J].藥學(xué)學(xué)報(bào),2019,54(2):308-312.
[ 9 ] LIU Y F,LIANG D,LUO H,et al.Hepatoprotective iridoid glycosides from the roots of Rehmannia glutinosa[J]. J Nat Prod,2012,75(9):1625-1631.
[10] 李紅偉,孟祥樂(lè).地黃化學(xué)成分及其藥理作用研究進(jìn)展[J].藥物評(píng)價(jià)研究,2015,38(2):218-228.
[11] 朱俏峭,鐘亮,戚進(jìn).地黃中環(huán)烯醚萜類化學(xué)成分的研究進(jìn)展[J].海峽藥學(xué),2015,27(9):1-5.
[12] LI M,WANG X L,ZHENG X K,et al. A new ionone glycoside and three new rhemaneolignans from the roots of Rehmannia glutinosa[J]. Molecules,2015,20(8):15192- 15201.
[13] 徐軍,傅喆暾.地黃炮制品名歷史沿革及功效考辨探討[J].中成藥,2017,39(9):1913-1916.
[14] 沈麗琴,楊晗,李勝華,等.地黃不同工藝炮制過(guò)程中主要活性成分的變化規(guī)律研究[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥,2019,15(10):75-79.
[15] 張穎,張振凌,楊佳寧,等.地黃不同炮制品中無(wú)機(jī)元素的ICP-OES法測(cè)定[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2019,30(6):1358- 1361.
[16] 吳廷娟,田夢(mèng)平,羅曉錚,等.不同地黃種質(zhì)資源的抗逆性研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2021,49(5):175-177,224.
[17] LIU Y L,CAO Y G,KAN Y X,et al. Two new eremophilane-type sesquiterpenes from the fresh roots of Rehmannia glutinosa[J]. Phytochem Lett,2021,42:125- 128.
[18] LIU Y L,CAO Y G,KAN Y X,et al. Renoprotective acti- vity of a new amide and a new hydroxycinnamic acid derivative from the fresh roots of Rehmannia glutinosa[J]. J Asian Nat Prod Res,2022,24(2):163-169.
[19] 范錫玲,劉晏靈,曹彥剛,等.懷中1號(hào)鮮地黃化學(xué)成分研究[J].藥學(xué)學(xué)報(bào),2021,56(11):3097-3103.
[20] 李紅偉,李孟,石延榜,等.清炒炮制對(duì)北葶藶子中脂肪油的影響[J].中國(guó)新藥雜志,2016,25(24):2821-2825.
[21] 陳克克,強(qiáng)毅.費(fèi)菜不同部位脂溶性成分的GC-MS比較[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2017,23(20):77-81.
[22] 包黎明,包曉華,白迎春,等.基于DPPH法的16種蒙藥材抗氧化活性比較研究[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥,2017,13(6):9-11.
[23] 張?jiān)饺A,曾和平.脂肪酸在生命過(guò)程中的作用研究進(jìn)展[J].中國(guó)油脂,2006,31(12):11-16.
[24] 陳銀基,鞠興榮,周光宏.飽和脂肪酸分類與生理功能[J].中國(guó)油脂,2008,33(3):35-39.
[25] 郜新蓮,劉艷芳,張振凌.中藥菟絲子炮制前后脂肪油含量的比較[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2012,23(3):694.
[26] 彭偉,黎江華,劉玉杰,等.浙貝母花脂肪油成分和生物活性研究[J].中藥與臨床,2017,8(3):19-21,68.
[27] 孫瑞霞,馮精蘭,李怡帆,等.氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定懷地黃中的有機(jī)成分[J].藥物分析雜志,2009,29(12):2154- 2161.
[28] 邊寶林,倪慕云,王宏杰.地黃及其炮制品石油醚提取物中酸性成分的分離、鑒定和比較[J].中國(guó)中藥雜志,1991,16(6):339-341.
[29] 嚴(yán)斐霞,朱徐東,王松,等.基于蛋白質(zhì)組學(xué)探討九蒸九曬地黃延緩去卵巢小鼠腦衰老的藥效與機(jī)制[J].中國(guó)中藥雜志,2022,47(1):141-150.
[30] 沈華旦,方江濟(jì),郭鵬程,等.基于HPLC-UV-DPPH法的地黃和熟地黃藥材抗氧化活性成分比較研究[J].中草藥,2018,49(3):582-588.
[31] 耿曉桐,王豐青,謝彩俠,等.基于HPLC指紋圖譜技術(shù)的地黃塊根抗氧化活性譜效關(guān)系研究[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2019,31(11):1864-1872.
(收稿日期:2021-11-09 修回日期:2022-01-15)
(編輯:林 靜)
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