劉芳月/湖南省郴州市永興縣便江街道農(nóng)業(yè)綜合服務(wù)中心 423300

惡性卡他熱是一種在?？坪吐箍圃S多動(dòng)物物種中具有明顯臨床表現(xiàn)和經(jīng)常致病的疾病，病原為惡性卡他熱病毒。惡性卡他熱在世界許多國(guó)家被認(rèn)為是造成主要家養(yǎng)反芻動(dòng)物重大經(jīng)濟(jì)損失的原因，并且對(duì)多種反芻動(dòng)物混合飼養(yǎng)中的易感動(dòng)物造成嚴(yán)重的威脅。由于發(fā)病機(jī)制及其流行病學(xué)的復(fù)雜性，在臨床上獸醫(yī)在診斷惡性卡他熱病毒單獨(dú)感染或多種病原混合感染疾病方面面臨重大挑戰(zhàn)。然而，最近開發(fā)的分子診斷檢測(cè)改進(jìn)了惡性卡他熱病毒的檢測(cè)和區(qū)分，并提高了實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)在確認(rèn)不同物種的惡性卡他熱感染方面的準(zhǔn)確性。了解新開發(fā)的惡性卡他熱病毒診斷分析以及在每種流行病學(xué)情況下的適當(dāng)應(yīng)用對(duì)于適當(dāng)利用這些分子診斷方法檢測(cè)惡性卡他病毒是必要的。惡性卡他熱的診斷方法是本綜述的重點(diǎn)論述方面。

1 惡性卡他熱的臨床癥狀及流行病學(xué)

當(dāng)從宿主之間傳播足夠病毒量的惡性卡他熱病毒時(shí)，惡性卡他熱會(huì)發(fā)生在多種易感宿主中，例如牛、野牛、鹿和豬。疾病通常具有急性發(fā)作并涉及一系列癥狀，可能包括角膜混濁、大量眼部和鼻腔分泌物、腹瀉、淋巴結(jié)腫大、發(fā)燒和厭食。但基本病理特征的病變可能由于物種存在一些差異，但大體病變幾乎是一致的，包括廣泛的淋巴組織增生,血管和上皮壞死。一旦出現(xiàn)惡性卡他熱的臨床癥狀，傳播的病毒量不會(huì)影響病變嚴(yán)重程度。臨床表現(xiàn)和病理特征在惡性卡他熱的診斷過(guò)程中都具有重要的診斷價(jià)值。通過(guò)PCR 檢測(cè)外周血白細(xì)胞和組織中的惡性卡他熱病毒DNA，尤其是高水平的病毒DNA，可以支持惡性卡他熱病毒引起的疾病的診斷。

在一些研究中發(fā)現(xiàn)，不同病毒類型對(duì)反芻動(dòng)物的易感性差異很大。與牛相比，野牛對(duì)惡性卡他熱病毒的敏感性更敏感，約為牛的1000 倍。盡管一旦出現(xiàn)臨床癥狀，惡性卡他熱在野牛、牛和某些鹿科物種中通常是致命的，但也可能出現(xiàn)亞臨床感染的情況。

惡性卡他熱可能發(fā)生在存在易感宿主且附近有臨床易感動(dòng)物的地方。惡性卡他熱病毒傳播的從儲(chǔ)存宿主到臨床上易感宿主的流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示，病毒通過(guò)其宿主的鼻腔分泌物或眼分泌物釋放到環(huán)境中。臨床上易感的物種通過(guò)吸入獲得病毒，攝入受污染的食品或水中的含有病毒的分泌物也被認(rèn)為是一種傳播途徑。密切接觸和低溫潮濕的環(huán)境可增強(qiáng)通過(guò)帶病毒分泌物的有效傳播，并可長(zhǎng)距離傳播。惡性卡他熱不會(huì)通過(guò)自然方式從一個(gè)臨床易感宿主傳播到另一個(gè)，因?yàn)槭苡绊懙膭?dòng)物通常的結(jié)局為死亡。不同動(dòng)物物種宿主感染的惡性卡他熱病毒毒株可存在不同，并在某些情況下可能會(huì)發(fā)生雙重感染。貯藏宿主中的感染通常是亞臨床的，如在綿羊和山羊中很少報(bào)道出現(xiàn)惡性卡他熱癥狀。

2 惡性卡他熱的診斷方法

2.1 惡性卡他熱的血清學(xué)檢測(cè)方法已經(jīng)開發(fā)了幾種血清學(xué)檢測(cè)方法來(lái)檢測(cè)針對(duì) MCFV 的抗體，這些檢測(cè)包括病毒中和(VN)、免疫印跡、酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)(ELISA)/競(jìng)爭(zhēng)抑制 ELISA(cELISA)、免疫熒光檢測(cè)(IFA)/免疫過(guò)氧化物酶檢測(cè)(IPT)和補(bǔ)體結(jié)合檢測(cè)。這些測(cè)試可分為三類：基于中和抗體、多克隆抗體和單克隆抗體的檢測(cè)。病毒中和試驗(yàn)具有高度的特異性，可以很好地檢測(cè)出不同動(dòng)物物種的不同惡性卡他熱病毒型?；诙嗫寺】贵w的檢測(cè),包括 ELISA、IFA 和 IPT 等,可檢測(cè)針對(duì)惡性卡他熱病毒多個(gè)表位的抗體。通常，這些測(cè)試具有良好的敏感性，但由于與其他皰疹病毒(如牛皰疹病毒1 和4)的交叉反應(yīng)，特異性降低。為了提高特異性，使用針對(duì)迄今為止檢測(cè)的所有惡性卡他熱病毒中保守的表位的抗體(15-A)開發(fā)了用于檢測(cè)惡性卡他熱病毒抗體的 cELISA。由于使用了單克隆抗體并與檢測(cè)酶直接結(jié)合，惡性卡他熱病毒的cELISA 具有很高的特異性和靈敏度。此外，cELISA 在多物種樣品檢測(cè)方面具有較高優(yōu)勢(shì)，并且無(wú)需為每個(gè)被測(cè)試物種使用物種特異性酶標(biāo)記物。cELISA 大量樣品檢測(cè)中占具有重要地位。

血清學(xué)測(cè)試還適合在野外調(diào)查無(wú)癥狀動(dòng)物，檢測(cè)陽(yáng)性結(jié)果表明動(dòng)物感染惡性卡他熱病毒。幾乎所有惡性卡他熱病毒的宿主都可在被感染后持續(xù)產(chǎn)生抗體，這種抗體可以通過(guò)任何血清學(xué)測(cè)試檢測(cè)到。4 月齡以下未感染羔羊可能因存在母源抗體而血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果呈抗體陽(yáng)性，因此，不應(yīng)使用血清學(xué)檢測(cè)來(lái)確定低日齡動(dòng)物的感染狀態(tài)。然而,小于12 個(gè)月大的小動(dòng)物，尤其是畜群較小的群體中的低日齡動(dòng)物，可能會(huì)由于接觸感染動(dòng)物傳播的低病毒量的惡性卡他熱病毒而抗體檢測(cè)結(jié)果呈陰性。血清學(xué)對(duì)于確定成年宿主的感染狀態(tài)是可靠的。在牛、野牛和鹿等臨床易感物種中檢測(cè)到惡性卡他熱病毒抗體，也表明動(dòng)物已感染。然而,由于這些物種中有很大一部分可以以亞臨床形式感染該病毒，只有與提示惡性卡他熱的組織病理學(xué)病變和臨床癥狀相互符合的情況下，抗體的存在才確定為動(dòng)物感染惡性卡他熱病毒。

2.2 惡性卡他熱的分子生物學(xué)檢測(cè)方法PCR 已成為惡性卡他熱分子診斷的重要工具。PCR 檢測(cè)已廣泛應(yīng)用于獸醫(yī)診斷實(shí)驗(yàn)室;然而,將其用作檢測(cè)病毒DNA 以在診斷中確認(rèn)臨床惡性卡他熱的常規(guī)方法可能存在問(wèn)題，如因?yàn)閿U(kuò)增污染的可能性很高，從而導(dǎo)致診斷實(shí)驗(yàn)室中的假陽(yáng)性結(jié)果。用于實(shí)時(shí)定量PCR 的特異性引物探針組可顯示出臨床樣品的病毒量。多重PCR 是一種種快速、可靠和鑒別臨床樣本中惡性卡他熱病毒的方法。

這些新開發(fā)的檢測(cè)方法在分子水平上顯著改進(jìn)了惡性卡他熱的診斷方法，臨床上獸醫(yī)的關(guān)鍵問(wèn)題是:應(yīng)該使用哪種檢測(cè)方法?在惡性卡他熱的診斷中，首先考慮當(dāng)?shù)氐牧餍胁W(xué)信息很重要。在大多數(shù)情況下，應(yīng)清楚該疾病是否與宿主有關(guān)，并且可以使用針對(duì)預(yù)期病毒的特定檢測(cè)。然而，當(dāng)樣本來(lái)自動(dòng)物園或混合飼養(yǎng)農(nóng)場(chǎng)時(shí)，在這些地方，各種宿主可能與臨床易感物種接觸過(guò)，應(yīng)考慮多重PCR 或針對(duì)不同個(gè)體病毒的多種PCR。一般來(lái)說(shuō)，所有樣本可以分為兩大類:臨床病例和亞臨床病例。易感宿主中，例如牛、野牛和鹿，均存在臨床和亞臨床型病例感染惡性卡他熱病毒的報(bào)道。在來(lái)自混合物種的臨床樣本中，建議使用多重PCR 來(lái)確認(rèn)哪種病毒是致病病毒。在無(wú)病的臨床易感宿主中確認(rèn)感染通常是一個(gè)無(wú)關(guān)緊要的問(wèn)題，因?yàn)閷?dǎo)致牛和野牛惡性卡他熱亞臨床感染形式并不常見，而且病毒從受感染動(dòng)物傳播到其群體的可能性很小。幾乎所有的宿主,如綿羊、山羊和角馬，都感染了惡性卡他熱病毒，感染狀態(tài)通?？梢酝ㄟ^(guò)血清學(xué)確認(rèn)。在某些情況下，需要使用 PCR 來(lái)證明動(dòng)物不攜帶有惡性卡他熱病毒。例如，為了飼養(yǎng)無(wú)惡性卡他熱病毒的綿羊應(yīng)盡早將未感染的羔羊與陽(yáng)性羊分離開，對(duì)羔羊的初步篩選需要進(jìn)行病毒PCR檢測(cè)。無(wú)論動(dòng)物攜帶哪種類型的惡性卡他熱病毒，所有受感染的宿主都被視為病毒傳播的來(lái)源。即使所有現(xiàn)有的PCR 均呈陰性,但在具有強(qiáng)烈的惡性卡他熱臨床和病理學(xué)特征的病例中仍可能存在未鑒定過(guò)的惡性卡他熱病毒。雖然擴(kuò)增產(chǎn)物需要通過(guò)測(cè)序驗(yàn)證，但泛特異性靶向皰疹病毒DNA 聚合酶基因的PCR 檢測(cè)是鑒定新型惡性卡他熱病毒的重要工具，并將繼續(xù)用于惡性卡他熱的診斷領(lǐng)域。

3 結(jié)語(yǔ)

現(xiàn)在有幾種新開發(fā)的分子診斷檢測(cè)方法可用于惡性卡他熱的診斷，但由于發(fā)病機(jī)制及其在不同物種(包括臨床易感宿主和宿主宿主)中的流行病學(xué)的復(fù)雜性，臨床上獸醫(yī)面臨的挑戰(zhàn)是選擇正確的檢測(cè)方法來(lái)確認(rèn)該病或動(dòng)物感染。惡性卡他熱病毒的天然宿主范圍廣泛，一般可分為兩類:一般宿主(如綿羊、山羊和角馬)和臨床易感宿主(如牛、野牛和鹿)。幾乎所有的宿主宿主都被感染，血清學(xué)檢測(cè)對(duì)于確定感染狀態(tài)是有用和有效的，但這不包括帶有母體抗體的低日齡動(dòng)物的檢測(cè)。使用PCR 檢測(cè)和區(qū)分宿主宿主中的惡性卡他熱病毒通常僅用于非常特定的目的，例如,需要巢式PCR 來(lái)確定羔羊是否不攜帶惡性卡特?zé)岵《疽员憬⒉缓瑦盒钥ㄋ麩岵《镜难蛉?。血清學(xué)和PCR 對(duì)在疑似患有惡性卡他熱的宿主中確認(rèn)疾病幾乎沒(méi)有價(jià)值。臨床疾病和亞臨床感染均發(fā)生在臨床易感宿主中。巢式PCR 和實(shí)時(shí)定量PCR 均適用于檢測(cè)具有臨床惡性卡他熱的動(dòng)物的白細(xì)胞和組織中的病毒DNA。建議將實(shí)時(shí)qPCR 用于常規(guī)檢測(cè)，因?yàn)樵摲椒ň哂休^高的靈敏度、高特異性和降低交叉污染的脆弱性。推薦血清學(xué)檢測(cè),特別是 cELISA，用于篩查臨床易感宿主的感染狀態(tài)，因?yàn)樵趤喤R床感染期間白細(xì)胞中病毒DNA 水平低，這可能導(dǎo)致PCR 檢測(cè)出現(xiàn)大量假陰性。隨著分子技術(shù)的進(jìn)步和對(duì)疾病的進(jìn)一步了解，在不久的將來(lái)可能會(huì)開發(fā)出具有更好敏感性、特異性和便利性的新一代惡性卡他熱檢測(cè)方法。