李曉麗/河北省承德市動物疫病預(yù)防控制中心 067000

近年來，隨著養(yǎng)殖業(yè)的迅速發(fā)展，動物疫病呈現(xiàn)出新的特點(diǎn)，動物疫病種類多發(fā)，多種動物疫病混合感染的情況愈發(fā)嚴(yán)重，隱性感染、非典型癥狀和混合感染無處不在，大大增加了動物的發(fā)病率和死亡率，給動物疫病的防控和凈化工作帶來了巨大的挑戰(zhàn)。僅靠傳統(tǒng)的流行病學(xué)調(diào)查、臨床癥狀和病理剖檢變化往往難以準(zhǔn)確診斷動物疫病，如不能及時確診疫病、準(zhǔn)確制定防控措施，可能會導(dǎo)致動物大量發(fā)病甚至死亡，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。因此，實(shí)驗(yàn)室檢測的重要性也更加突顯，獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果是獸醫(yī)行政和執(zhí)法的重要技術(shù)支撐，是動物疫病防控的重要組成部分，在確診疫病、檢測監(jiān)測、流行病學(xué)調(diào)查、疫苗免疫效果評估和檢測母源抗體水平及動物疫病凈化等方面具有重要意義。

1 獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室開展的主要檢測

根據(jù)《各級獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室建設(shè)標(biāo)準(zhǔn)》及獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室開展的實(shí)驗(yàn)活動范圍規(guī)定，BSL-2 獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室主要進(jìn)行血清學(xué)檢測和病原學(xué)檢測。

1.1 血清學(xué)檢測血清學(xué)檢測的基本原理是利用抗原與相應(yīng)抗體在體外特異性結(jié)合的特性，對樣品中的抗原或抗體進(jìn)行定性或定量的檢測。在機(jī)體免疫應(yīng)答過程中，主要分為細(xì)胞免疫和體液免疫，獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室血清學(xué)檢測中，以體液免疫反應(yīng)中的特異性抗體的檢測應(yīng)用最為廣泛。常用的方法除傳統(tǒng)的沉淀反應(yīng)、凝集試驗(yàn)和補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)外，標(biāo)記免疫測定，如酶聯(lián)免疫測定、熒光免疫測定等方法已成為主要的免疫測定技術(shù)。近年來，一些快速測定法如膠體金方法已被基層廣泛應(yīng)用。目前，BSL-2 獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室血清學(xué)檢測方法最常用的是ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）方法，該方法具有操作簡單、時間短、特異性強(qiáng)、敏感性高和機(jī)器判讀結(jié)果、減少人為誤差等優(yōu)點(diǎn)。主要用于評估疫苗免疫效果和作為對未免疫動物感染的判定依據(jù)。

ELISA 既可以用于測定抗體，也可以用于測定抗原，用于獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測用的ELISA 主要分三種類型：雙抗體夾心ELISA、間接ELISA 和競爭ELISA。

1.2 病原學(xué)檢測病原學(xué)檢測一是采用分離培養(yǎng)、鑒定或直接染色鏡檢等方法直接檢測病原微生物如細(xì)菌、寄生蟲等，這種方法操作復(fù)雜，危險性較高，在BSL-2 獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室做的相對較少。二是采用 PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）方法，檢測樣品中病原微生物的核酸，從而間接反應(yīng)病原微生物是否存在，這種檢測病原微生物核酸的方法更加便利、快捷，能夠在較短的時間得到檢測結(jié)果，應(yīng)用更為廣泛。

PCR 技術(shù)的基本原理類似于DNA 的天然復(fù)制過程，由變性-退火-延伸三個基本反應(yīng)步驟構(gòu)成，具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、對標(biāo)本純度要求低、簡便、快捷等優(yōu)點(diǎn)，越來越多的應(yīng)用于動物疫病的診斷。目前實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用最多的是PCR 和熒光PCR 技術(shù)，PCR 技術(shù)可以檢測病毒、細(xì)菌和寄生蟲等各種病原微生物，對樣品中的核酸進(jìn)行定量和定性分析，可用于突發(fā)動物疫情的處置和確診動物疫病和流行病學(xué)調(diào)查等工作。

2 實(shí)驗(yàn)室檢測數(shù)據(jù)對疫病防控的重要應(yīng)用

實(shí)驗(yàn)室檢測數(shù)據(jù)主要為動物疫病防控提供技術(shù)支撐，主要應(yīng)用于以下方面：

2.1 確診疫病、處置突發(fā)疫情生產(chǎn)實(shí)踐中，由于亞臨床感染、陰性感染、非典型癥狀和混合感染等情況的存在，許多動物疫病已不能僅靠臨床癥狀和病理變化來進(jìn)行準(zhǔn)確診斷，尤其是非洲豬瘟、高致病性禽流感等重大動物疫病的診斷更需要實(shí)驗(yàn)室檢測來確診。以《非洲豬瘟疫情應(yīng)急處置指南（第四版）》為例，疑似疫情和確診疫情均需進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測，因?yàn)橹挥幸咔榇_診后，才能按照程序采取劃定疫點(diǎn)、疫區(qū)和受威脅區(qū)、封鎖、撲殺、無害化處理等一系列后續(xù)措施。

同樣，在處置突發(fā)疫情時也需要進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測，只有根據(jù)實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果，才能準(zhǔn)確判斷疫情等級，采取科學(xué)的防控措施，在撤銷封鎖、終末消毒等任何環(huán)節(jié)都需要實(shí)驗(yàn)室檢測數(shù)據(jù)作為支撐。

2.2 檢測、監(jiān)測和流行病學(xué)調(diào)查通過開展檢測、監(jiān)測和流行病學(xué)調(diào)查，能夠掌握一定區(qū)域的主要動物疫病發(fā)生、流行趨勢，及時把握疫情動態(tài)，準(zhǔn)確評估動物疫情，對疫情進(jìn)行準(zhǔn)確預(yù)警，制訂科學(xué)的防控措施，提升整體防控水平。

2.3 評估疫苗免疫效果和檢測母源抗體動物免疫尤其是使用活疫苗免疫時，免疫效果與其體內(nèi)的母源抗體水平有很大關(guān)系，母源抗體水平高，會干擾疫苗的免疫作用，只有當(dāng)母源抗體下降到一定水平后，使用疫苗才能充分的發(fā)揮其免疫作用，因此要制定科學(xué)合理的免疫程序，就必須進(jìn)行大量的實(shí)驗(yàn)室檢測，以確定母源抗體水平，從而為制定科學(xué)的免疫程序提供參考。

同樣，動物接種疫苗后產(chǎn)生的抗體水平與相關(guān)疫病的防控效果具有相關(guān)性。正常情況下，動物機(jī)體免疫抗體水平越高，動物群體免疫抗體合格率越高，對相應(yīng)疫病的防控效果就越好。實(shí)驗(yàn)室檢測能夠?qū)游锩庖呖贵w水平進(jìn)行監(jiān)測，進(jìn)而評估動物群體的免疫效果，可以此為依據(jù)評判疫苗質(zhì)量、接種劑量、疫苗保存與運(yùn)輸方式、免疫途徑及免疫程序的合理性。

2.4 動物疫病凈化新修訂的《中華人民共和國動物防疫法》中，動物防疫的方針由原來的“預(yù)防為主”調(diào)整為“預(yù)防為主，預(yù)防與控制、凈化、消滅相結(jié)合”，將動物疫病凈化提升到了一個新的高度。動物疫病凈化，是指在特定區(qū)域或場所對某種或某些重點(diǎn)動物疫病實(shí)施有計(jì)劃的消滅過程，達(dá)到該范圍內(nèi)個體不發(fā)病和無感染狀態(tài)。動物疫病凈化主要采用“監(jiān)測、檢疫、撲殺、消毒、無害化處理”等一系列的綜合性防控措施，構(gòu)建“規(guī)范化、制度化、設(shè)施化、和無害化”的防疫和生產(chǎn)體系，最主要的就是通過實(shí)驗(yàn)室檢測定期對感染特定病原微生物的動物個體進(jìn)行準(zhǔn)確識別，采取相應(yīng)措施，以達(dá)到清除特定病原微生物、凈化疫病目的。

3 影響實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果的因素

實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理的方針是科學(xué)、及時、準(zhǔn)確，準(zhǔn)確即要求“檢測報告以準(zhǔn)確無誤為標(biāo)準(zhǔn)，確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性”，影響實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果準(zhǔn)確性的因素主要有以下幾個方面：

3.1 人員現(xiàn)階段，我國大部分實(shí)驗(yàn)室特別是基層獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室還未達(dá)到試驗(yàn)全過程機(jī)器化，主要還是采用人工檢測的方式，人員的素質(zhì)和水平很大程度上決定了實(shí)驗(yàn)室水平的高低優(yōu)劣。專業(yè)技術(shù)人員的文化水平、專業(yè)技術(shù)能力、工作熟練程度、對待工作的態(tài)度以及解決問題的能力等，都是影響檢測結(jié)果準(zhǔn)確性的重要因素。

3.2 儀器設(shè)備儀器設(shè)備的靈敏度和穩(wěn)定性直接影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，特別是精密儀器，需要定期檢定校準(zhǔn)和維護(hù)，否則會降低儀器設(shè)備的準(zhǔn)確度和精密度，縮短其使用年限。

3.3 樣品待檢樣品采集的是否規(guī)范及其質(zhì)量對檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性影響也是非常大的，不同種類的待檢樣品和不同檢測項(xiàng)目的樣品的采集和制備是不同的，應(yīng)按具體要求制樣。如進(jìn)行血清學(xué)抗體檢測，如果待檢血清發(fā)生腐敗、溶血，那么很可能導(dǎo)致樣品抗體檢測不合格，如果用于檢測病原的棉拭子樣品不放保存液，就不能真正反映疫病的實(shí)際感染狀況。

3.4 檢測方法和檢測試劑根據(jù)檢測目的，選擇合適的檢測方法和敏感性、精確性相適應(yīng)的檢測試劑，能夠保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。檢測方法應(yīng)優(yōu)先選擇國家標(biāo)準(zhǔn)方法作為檢測依據(jù)，檢測試劑應(yīng)優(yōu)先選擇有獸醫(yī)批準(zhǔn)文號的試劑，同時，根據(jù)平時工作經(jīng)驗(yàn)，選擇穩(wěn)定性、敏感性和精確度均較高的試劑。

3.5 檢測環(huán)境在做血清學(xué)檢測中，抗原抗體反應(yīng)是一個復(fù)雜的生物學(xué)反應(yīng)過程，受很多因素的影響，溫度、濕度是重要的影響因素，特別是溫度的高低會影響抗原抗體反應(yīng)的結(jié)合和解離，直接影響結(jié)果的正確性，因此獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)按規(guī)定安裝空調(diào)裝置，保障檢測環(huán)境符合檢測方法的要求。

檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性是評價和提高獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室管理水平的重要手段，應(yīng)加強(qiáng)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室管理，制定標(biāo)準(zhǔn)化的管理體系文件，確保有效運(yùn)行，確保檢測結(jié)果更加科學(xué)、準(zhǔn)確，使實(shí)驗(yàn)室檢測數(shù)據(jù)在動物疫病防控工作中發(fā)揮更加重要的作用。

4 結(jié)語

加強(qiáng)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室管理，保證檢測結(jié)果的科學(xué)準(zhǔn)確，才能夠更好的將檢測結(jié)果服務(wù)于動物疫病防控工作。