方龍香，陳曦，黃銖玉，單祥保，邢路暢，張聰,宋超1,2,*

(1. 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部水產(chǎn)品質(zhì)量安全環(huán)境因子風險評估實驗室，中國水產(chǎn)科學研究院淡水漁業(yè)研究中心， 江蘇 無錫214081；2. 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部水產(chǎn)品質(zhì)量安全控制重點實驗室，北京100141；3. 南京農(nóng)業(yè)大學無錫漁業(yè)學院，江蘇 無錫214081;4. 江蘇省常州市天寧區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，江蘇 常州213000)

近年來，隨著中華絨螯蟹(Eriocheirsinensis)養(yǎng)殖規(guī)模的擴大，集約化程度也越來越高，由此而引發(fā)的一系列細菌性疾病也日趨嚴重。恩諾沙星由于其抗菌譜廣、殺菌和抑菌作用顯著，而被廣泛應用于中華絨螯蟹的養(yǎng)殖[1-2]。但是，由于養(yǎng)殖從業(yè)者科學用藥理論缺乏，安全用藥意識薄弱，在養(yǎng)殖過程中濫用抗生素，忽視了因抗生素濫用而引起的養(yǎng)殖生態(tài)環(huán)境的惡化和藥物殘留的問題，導致喹諾酮類抗生素在生物體內(nèi)蓄積[3-5]。而且中華絨螯蟹由于其底棲的生活習性、移動緩慢、活動范圍小以及濾食的特性，在污染環(huán)境中缺乏回避能力，所以體內(nèi)易蓄積污染物質(zhì)[6-7]。過量的抗生素不僅會使細菌產(chǎn)生耐藥性，而且也會影響水產(chǎn)品的質(zhì)量安全。

相關(guān)研究表明，在蝦、鯉(Cyprinuscarpio)、鮭以及中華絨螯蟹等多種水產(chǎn)品體內(nèi)的各個組織中檢測到恩諾沙星的殘留[8-10]，含恩諾沙星的水產(chǎn)品被消費者食用后，由于其在人體內(nèi)代謝緩慢，易蓄積在肌肉、肝臟等部位中，恩諾沙星在機體內(nèi)的長期蓄積，可能會引起關(guān)節(jié)或者軟骨損傷，還可能會引起泌尿系統(tǒng)、消化系統(tǒng)的損害，更嚴重可能導致神經(jīng)系統(tǒng)的損傷[11-12]。

目前關(guān)于恩諾沙星在水產(chǎn)動物體內(nèi)代謝情況的研究對象多為魚類，少部分涉及蝦類、中華鱉(TrionyxSinensis)等其他的水產(chǎn)動物[5, 13-15]。由于中華絨螯蟹肝臟組織的脂肪類化合物含量較高且成分復雜，極易干擾目標藥物的檢測，較少有關(guān)于中華絨螯蟹體內(nèi)可食部位(蟹腿肉、蟹身肉、性腺和肝胰腺)恩諾沙星富集效應的研究[16]。本研究以中華絨螯蟹為研究對象，探究其在不同濃度恩諾沙星暴露下，藥物在其體內(nèi)不同可食部位的富集規(guī)律，以及性別差異對恩諾沙星蓄積的影響，并觀察主要代謝產(chǎn)物環(huán)丙沙星的生成情況，為恩諾沙星在中華絨螯蟹體內(nèi)的分布、蓄積和遷移規(guī)律提供理論指導，進而為國內(nèi)中華絨螯蟹的健康養(yǎng)殖以及質(zhì)量安全提供科學依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實驗樣品

實驗所用的中華絨螯蟹于2019年10月中旬采集于中國水產(chǎn)科學研究院淡水漁業(yè)研究中心宜興生態(tài)養(yǎng)殖基地，將采集到的螃蟹暫養(yǎng)于玻璃缸(長39.50 cm×寬28.50 cm×高19.50 cm)中。暫養(yǎng)一周后，選擇規(guī)格整齊、肢體健全以及無明顯體表外傷的雌雄個體(公蟹初始平均體重約為120 g，母蟹約為90 g)各60只開始正式實驗。

1.2 試劑及藥品

甲醇、甲酸均為色譜純(購于德國默克生物科學公司)；提取液(0.1%甲酸乙腈溶液)；Agilent Bond Elu EMR-Lipid增強型脂質(zhì)去除凈化管，EMR-Lipid Polish MgSO4(購于上海安譜實驗科技股份有限公司)；恩諾沙星標準品(純度>99.9%，購于Dr. Ehrenstrofer GmbH)，鹽酸環(huán)丙沙星標準品(純度>92.3%，購于Dr. Ehrenstrofer GmbH)；0.1%甲酸水、0.1%甲酸甲醇、初始流動相(0.1%甲酸甲醇∶0.1%甲酸水=2∶8)；HLB固相萃取小柱(上海安譜實驗科技股份有限公司，60 mg/3 mL)。

1.3 儀器設(shè)備

超高效液相色譜/質(zhì)譜(Waters，美國)；多管式渦旋振蕩器(Henry Troemner，美國)；GL-22 MS高速冷凍離心機(上海盧湘儀離心機儀器有限公司)；Talboys數(shù)顯型多管式漩渦混合器(上海安譜科學儀器有限公司)；Talboys基本型漩渦混合器(上海安譜實驗科技股份有限公司)；離心機(Sigma，德國)；真空系統(tǒng)(Merck，德國)；AL104分析天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)。

1.4 實驗設(shè)計

根據(jù)預實驗的結(jié)果，暴露實驗分別設(shè)置了空白對照組(0 μg/L)、低濃度組(50 μg/L)、中濃度組(500 μg/L)和高濃度組(5 000 μg/L)4個實驗組，每個濃度組設(shè)置3個重復，公母蟹分開，共24個玻璃缸。每個玻璃缸中加入6 L水(養(yǎng)殖用水為戶外曝氣一周以上的除氯水)，分別隨機放入6只螃蟹。

在每個缸中放入增氧泵連續(xù)增氧，試驗環(huán)境控溫，溫度保持在(23±1)℃，隔3 d換一次水，每次換完水都需要按照初始濃度重新添加藥物，養(yǎng)殖周期共5周。在實驗養(yǎng)殖期間，不投喂任何飼料，每天觀察并記錄各試驗缸中螃蟹的打斗和傷亡情況。

1.5 樣品采集

養(yǎng)殖周期為5周，從實驗開始的第1天采集一次中華絨螯蟹樣品，隨后每間隔一周采集一次，在24個缸中分別隨機挑選一只螃蟹，仔細沖洗螃蟹表面，減少表面藥物殘留。用剪刀去殼、去鰓后，將螃蟹的可食部位按照蟹腿肉、蟹身肉、肝胰腺以及性腺分裝于離心管中，-20 ℃保存，待進一步處理。

1.6 樣品前處理及測定

1.6.1 樣品的提取

準確稱取(2.00±0.01)g的樣品于50 mL離心管中，加入10 mL的提取液(0.1%甲酸乙腈)振蕩混勻，在2 000 r/min的速度下渦旋振蕩10 min，10 000 r/min的轉(zhuǎn)速下離心5 min；取離心后的上清液5 mL到已經(jīng)用5 mL超純水活化后的Agilent Bond Elu EMR-Lipid增強型脂質(zhì)凈化管中，2 000 r/min的速度下渦旋振蕩5 min，在4 000 r/min的轉(zhuǎn)速下離心5 min；將離心后的上清液全部轉(zhuǎn)入裝有1.7 g EMR-Lipid Polish MgSO4離心管中，2 000 r/min的速度下渦旋振蕩5 min，在4 000 r/min的轉(zhuǎn)速下離心5 min。取有機相(上層)過0.22 μm有機相濾膜于10 mL離心管中，若樣品濃度較低時旋蒸濃縮后再上機；樣品濃度較高時稀釋至標準曲線濃度范圍內(nèi)再上機。

1.6.2 儀器操作條件

色譜條件：色譜柱為ACQUITY UPLC BEH C181.7 μm，2.1 mm×100.0 mm，柱溫設(shè)為40.0 ℃；樣品室溫度設(shè)為10.0 ℃；進樣量為5.0 μL。梯度洗脫程序見表1。

表1 液相梯度洗脫程序

質(zhì)譜條件：電噴霧離子源(ESI+)，多反應監(jiān)測模式(MRM)。毛細管電壓為3.5 kV，錐孔電壓為30 V，離子源溫度為150 ℃，脫溶劑氣溫度為450 ℃，脫溶劑氣流速為800 L/Hr，錐孔氣流速為50 L/Hr，碰撞能量為3 V。恩諾沙星和環(huán)丙沙星的定性及定量離子對質(zhì)譜參數(shù)見表2，恩諾沙星標準物質(zhì)和環(huán)丙沙星標準物質(zhì)的總離子流色譜圖(Total Ions Chromatograph，TIC)和定量離子圖見圖1。

表2 恩諾沙星和環(huán)丙沙星的質(zhì)譜分析條件參數(shù)及保留時間

圖1 恩諾沙星和環(huán)丙沙星標準物質(zhì)的定量離子圖

考慮實驗過程中恩諾沙星的濃度隨時間降解，以上機濃度為1、5、10、20和50 ng/mL的梯度繪制標準曲線，曲線線性良好，回歸系數(shù)均大于0.999 6，實驗前對空白水樣進行恩諾沙星加標處理，樣品回收率在81%～112%，以樣品上機3倍和10倍信噪比(S/N)計算方法的檢出限(LOD)和定量限(LOQ)，檢測限和定量限值均小于0.2 ng/mL。

1.7 生物富集

生物富集系數(shù)(Bioconcentration factors，BCF)是用來描述化學物質(zhì)在生物體累積趨勢的重要指標。實驗結(jié)束時，某種抗生素在生物體內(nèi)以及在水中的含量變化基本保持平衡，此時生物體對抗生素的富集系數(shù)為：

BCF=Cfs/Cws

式(1)

式中，Cfs表示平衡時，生物體內(nèi)的藥物含量(mg/kg)；Cws表示平衡時生物體所在的水環(huán)境中藥物的含量(mg/kg)。

1.8 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)統(tǒng)計及相關(guān)繪圖在Excel 2010軟件中完成，以P<0.05作為差異性顯著水平。結(jié)果用平均值±標準偏差來表示，在進行多重比較時，用*表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 恩諾沙星在中華絨螯蟹可食部位中的富集系數(shù)

從表3可知，當中華絨螯蟹暴露在低濃度的恩諾沙星水環(huán)境時，不同可食部位的富集系數(shù)從大到小依次是蟹腿肉>蟹身肉>性腺>肝胰腺，說明在低濃度時，蟹腿肉和蟹身肉的富集能力最強；當暴露在中濃度的水環(huán)境時，恩諾沙星的富集系數(shù)從大到小依次是蟹身肉>肝胰腺>蟹腿肉>性腺，說明中濃度條件下，中華絨螯蟹蟹身肉的富集能力最強；當暴露在高濃度的水環(huán)境時，恩諾沙星在中華絨螯蟹各部位的富集系數(shù)從大到小依次是蟹身肉>性腺>肝胰腺>蟹腿肉，其中蟹身肉和性腺的富集系數(shù)相近，說明高濃度組中，蟹身肉和性腺的富集能力較強。由3個濃度組的結(jié)果綜合可知，恩諾沙星在蟹身肉中的富集能力最強。

表3 不同濃度的恩諾沙星暴露下中華絨螯蟹可食部位的富集系數(shù)

2.2 不同濃度的恩諾沙星暴露下中華絨螯蟹各可食部位藥物殘留隨時間的變化

由圖2A的結(jié)果可知，試驗開始1周時，中華絨螯蟹蟹腿肉中恩諾沙星的殘留量在低、中、高三個濃度組含量分別是(12.75±1.96)、(79.88±22.88)和(488.52 ±160.72)ng/g。隨著時間的推移，三個濃度組恩諾沙星蓄積量逐漸增加，在2周時達到最高值，含量分別為(28.38±2.94)、(101.21±28.05)和(746.93±174.39)ng/g，之后殘留濃度逐漸降低。在整個養(yǎng)殖期間，高濃度組蟹腿肉中恩諾沙星的殘留量相較于低、中濃度組均存在顯著性差異(P<0.05)。

從圖2B的結(jié)果可知，在整個養(yǎng)殖期間，低濃度組在1周時中華絨螯蟹身肉中恩諾沙星的蓄積量為(18.76±1.54)ng/g，在2周時達到最大值，濃度為(33.02±2.21)ng/g，之后恩諾沙星的含量隨著時間的推移緩慢下降；中濃度組在1周時蟹身肉中藥物的殘留量為(72.81±12.28) ng/g，在3周時達到最大值，濃度為(185.04±16.58) ng/g，之后蓄積的含量隨時間的變化緩慢降低并維持在一個穩(wěn)定的范圍內(nèi)；高濃度組蟹身肉的蓄積量在1周時為(671.47±79.94) ng/g，在2周時達到最大，為(1 013.90±45.74) ng/g，然后維持在一個穩(wěn)定的范圍內(nèi)。從整個養(yǎng)殖周期來看，低、中濃度組除了在2周時有顯著性差異外(P<0.05)，其他時間段低濃度組和中濃度組無顯著性差異(P>0.05)；高濃度組在整個養(yǎng)殖期間均顯著高于低、中濃度組(P<0.05)。

圖2C的結(jié)果可知，低、中濃度組在1周時，中華絨螯蟹性腺中恩諾沙星的殘留量分別為(10.53±1.92)和(55.07±2.32) ng/g，在4周時含量同時達到最高，分別為(22.22±4.50)和(143.48±21.30) ng/g；高濃度組在1周時，性腺中恩諾沙星的殘留量為(399.15±28.05) ng/g，在2周時達到最大值，為(1 008.00±116.62) ng/g，之后恩諾沙星的殘留量逐漸降低。在整個養(yǎng)殖周期內(nèi)，除4周時低濃度組和中濃度組之間有顯著性的差異(P<0.05)，其他養(yǎng)殖時間低濃度組和中濃度組中恩諾沙星的殘留量均無顯著性差異(P>0.05)；高濃度組與低中濃度組之間均存在顯著性差異(P<0.05)。

由圖2D的結(jié)果可知，低濃度處理組在1周時，中華絨螯蟹肝胰腺中恩諾沙星的殘余量達到最高，為(24.15±10.03) ng/g，之后含量逐漸降低；中濃度處理組在1周時肝胰腺中藥物的殘留量為(65.63±14.24) ng/g，在3周時達到最大值，為(312.12±48.59) ng/g，之后逐漸降低；高濃度處理組在1周時藥物蓄積達到最大值，含量為(1 035.70±106.35) ng/g，之后肝胰腺中恩諾沙星的殘留量降低至穩(wěn)定的水平，藥物含量大約在578.81～667.28 ng/g范圍內(nèi)。高濃度處理組在整個養(yǎng)殖期間均顯著高于低、中濃度處理組(P<0.05)；而低濃度組和中濃度組在2周和3周時有顯著性差異(P<0.05)，其他時間均無顯著性變化(P>0.05)。

圖2 不同濃度的恩諾沙星暴露下中華絨螯蟹蟹腿肉(A)、蟹身肉(B)、性腺(C)和肝胰腺(D)恩諾沙星含量隨時間的變化

整個養(yǎng)殖期間，在不同濃度恩諾沙星的水環(huán)境中，中華絨螯蟹4個可食部位均檢測到恩諾沙星的主要代謝產(chǎn)物環(huán)丙沙星的生成。其中中華絨螯蟹性腺和肝胰腺這兩個部位生成的環(huán)丙沙星量較高，蟹腿肉和蟹身肉在不同濃度組下生成環(huán)丙沙星的量相當。由于肝胰腺中環(huán)丙沙星的生成量略高于性腺，因此圖3選擇肝胰腺來分析環(huán)丙沙星的生成情況。分析可知，低濃度組在整個養(yǎng)殖期間，中華絨螯蟹肝胰腺中環(huán)丙沙星的生成量都很低，含量在0～0.51 ng/g之間；而中、高濃度組隨著時間的推移，肝胰腺中環(huán)丙沙星的生成量逐漸增加，在5周時達到最大值，分別為(209.6±78.62)和(3 207.11±952.84)ng/g。而高濃度組顯著高于低、中濃度組(P<0.05)，低濃度組與中濃度組之間在整個養(yǎng)殖期間都無顯著性差異(P>0.05)。

圖3 中華絨螯蟹肝胰腺中環(huán)丙沙星的生成情況

從整體來說，中華絨螯蟹暴露在含有不同濃度的恩諾沙星水環(huán)境中，其可食部位中恩諾沙星的蓄積量隨著時間的推移先升高后降低，與恩諾沙星的暴露濃度呈正相關(guān)關(guān)系。另外，在不同濃度的恩諾沙星暴露下，蟹腿肉和蟹身肉的富集系數(shù)從大到小依次是低濃度處理組>中濃度處理組>高濃度處理組，性腺的富集系數(shù)從小到大為低濃度處理組>高濃度處理組>中濃度處理組，肝胰腺的富集系數(shù)從大到小為中濃度處理組>高濃度處理組>低濃度處理組?？偟膩碚f，當中華絨螯蟹暴露在不同濃度的恩諾沙星的水環(huán)境時，抗生素濃度越低，其在中華絨螯蟹體內(nèi)的富集能力越強。

2.3 中華絨螯蟹體內(nèi)恩諾沙星含量的性別差異

根據(jù)圖4的結(jié)果可知，處理組中母蟹和公蟹體內(nèi)恩諾沙星的蓄積量隨著暴露時間的增加，呈現(xiàn)出先升高后逐漸降低的趨勢；母蟹和公蟹在相同濃度恩諾沙星的暴露下，體內(nèi)可食部位(蟹腿肉、蟹身肉、性腺和肝胰腺)總的蓄積量隨時間的變化都呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢，其中低濃度組和中濃度組中公蟹的殘留量在整個養(yǎng)殖期間基本都大于母蟹，而高濃度組中，1周和2周時，公蟹的殘留量大于母蟹，后3周母蟹大于公蟹。因此整體上來看，公蟹和母蟹的恩諾沙星殘留存在一定的性別差異，但是差異不顯著(P>0.05)，說明恩諾沙星的暴露濃度和暴露時間可能會影響公母蟹體內(nèi)恩諾沙星的蓄積量，但是具體的差異以及差異機制需要進一步研究。

圖4 中華絨螯蟹體內(nèi)恩諾沙星含量的性別差異

由圖5的結(jié)果可知，低濃度組中，公蟹和母蟹體內(nèi)環(huán)丙沙星的生成量隨著養(yǎng)殖時間的增加無明顯變化，且公蟹和母蟹體內(nèi)可食部位環(huán)丙沙星總的生成量在整個養(yǎng)殖期間相差不多；中濃度組和高濃度組中，公蟹和母蟹體內(nèi)可食部位環(huán)丙沙星總生成量隨著養(yǎng)殖時間的延長而增加，其中公蟹體內(nèi)環(huán)丙沙星的生成量大于母蟹，這種差異在第1周表現(xiàn)最為明顯。因此，公蟹和母蟹體內(nèi)環(huán)丙沙星的生成量在低濃度恩諾沙星暴露下無明顯差別，但在中、高濃度暴露下存在一定的性別差異。

圖5 中華絨螯蟹體內(nèi)環(huán)丙沙星生成的性別差異影響

3 討論

3.1 恩諾沙星在中華絨螯蟹體內(nèi)的富集效應

中華絨螯蟹暴露在不同濃度恩諾沙星的水環(huán)境時，其體內(nèi)不同可食部位(蟹腿肉、蟹身肉、性腺和肝胰腺)中恩諾沙星的蓄積量隨著養(yǎng)殖時間的推移，先升高后逐漸降低，并且各組恩諾沙星的殘留量與暴露濃度正相關(guān)，呈現(xiàn)一定的劑量-效應關(guān)系。在整個養(yǎng)殖周期中，低濃度組中華絨螯蟹各可食部位中恩諾沙星的殘留量為蟹身肉>蟹腿肉>性腺>肝胰腺；而中濃度組和高濃度組各可食部位中藥物的殘留量大致為蟹身肉>肝胰腺>性腺>蟹腿肉。此外，對照組中恩諾沙星的殘留順序大致為蟹身肉>蟹腿肉>性腺>肝胰腺，結(jié)果與低濃度組相同。吳光紅等[17]研究了恩諾沙星在中華絨螯蟹體內(nèi)的藥物代謝動力學，結(jié)果顯示中華絨螯蟹在肌肉注射恩諾沙星后，0～2 h之內(nèi)，4個組織中的藥物濃度關(guān)系是鰓>血液>肌肉>肝胰腺[17]。由此可見，在養(yǎng)殖生產(chǎn)過程中，中華絨螯蟹體內(nèi)恩諾沙星主要富集的可食部位是蟹身肉，肝胰腺僅次于蟹身肉。

本次實驗在低、中、高三個濃度暴露下，恩諾沙星在中華絨螯蟹體內(nèi)不同可食部位的蓄積量與暴露濃度正相關(guān)。根據(jù)結(jié)果可知，高濃度處理組與低、中濃度處理組之間差異較大，但不呈倍數(shù)關(guān)系。說明暴露濃度越大，恩諾沙星在中華絨螯蟹體內(nèi)的蓄積量就越大。當中華絨螯蟹對恩諾沙星的蓄積達到平衡時，隨著養(yǎng)殖時間的增加，其體內(nèi)的恩諾沙星的殘留值不再增加，會穩(wěn)定在一個濃度范圍內(nèi)。低濃度組中的中華絨螯蟹由于暴露濃度較小，母蟹和公蟹的存活率相對較高；中、高濃度組由于暴露濃度較大，養(yǎng)殖期間存在螃蟹死亡的現(xiàn)象，公蟹之間打斗蠶食的現(xiàn)象也比較嚴重，很多公蟹的蟹腿不完整。并且中、高濃度組在養(yǎng)殖后期，體內(nèi)的部分器官發(fā)生病變，性腺和肝胰腺都發(fā)生不同程度的萎縮，其代謝能力下降。低濃度組各個可食部位恩諾沙星的殘留量在整個養(yǎng)殖期間都小于恩諾沙星殘留的限定標準。因此，在中華絨螯蟹養(yǎng)殖過程中使用恩諾沙星時，應綜合考慮養(yǎng)殖環(huán)境和養(yǎng)殖密度，盡量減小養(yǎng)殖水體中藥物的濃度，控制在50 ng/mL左右，這樣可以盡量減少恩諾沙星在中華絨螯蟹體內(nèi)的殘留，從而保障水產(chǎn)品的質(zhì)量安全。

關(guān)于不同性別中華絨螯蟹對恩諾沙星蓄積的影響，根據(jù)結(jié)果可知，恩諾沙星在中華絨螯蟹體內(nèi)的蓄積情況與其性別關(guān)系不密切，公蟹和母蟹之間的差異不顯著(P>0.05)。在研究恩諾沙星在中華絨螯蟹體內(nèi)的代謝情況時發(fā)現(xiàn)，當公蟹和母蟹大劑量肌肉注射藥物時，公蟹和母蟹體內(nèi)的恩諾沙星半衰期存在明顯的差異，母蟹吸收和消除顯著快于公蟹[18]。說明，環(huán)境中恩諾沙星的超過一定的暴露劑量，其藥物在中華絨螯蟹體內(nèi)的蓄積情況存在性別差異。

3.2 恩諾沙星的主要代謝產(chǎn)物環(huán)丙沙星的生成情況

有研究表明，恩諾沙星在魚[19]、蝦[20]等的體內(nèi)均可以脫去一個乙基而生成環(huán)丙沙星，且存在種間差異。潘明軒等[20]研究中國對蝦(Fenneropenaeuschinensis)通過肌肉注射恩諾沙星，觀察其在體內(nèi)的代謝情況，在檢測過程中發(fā)現(xiàn)環(huán)丙沙星的存在[21]。Intorre等[22]研究鱸(Lateolabraxjaponicas)體內(nèi)恩諾沙星的代謝情況時，在鱸的血液和肝臟中也檢測到了環(huán)丙沙星的存在。

在本次暴露實驗的研究過程中，發(fā)現(xiàn)在中華絨螯蟹體內(nèi)也檢測到環(huán)丙沙星的生成。低濃度組中，環(huán)丙沙星的生成量較少，與空白組相當，說明在低濃度狀態(tài)下，恩諾沙星僅有很少的一部分脫去乙基代謝成環(huán)丙沙星，相較于其他高等生物、代謝率較低。中華絨螯蟹屬低等生物，因此新陳代謝可能比較緩慢，也可能與體內(nèi)缺乏某種乙基肝微粒體酶有關(guān)[17]。在中、高濃度組，由于使用的恩諾沙星的濃度要大于正常使用量，所以恩諾沙星在中華絨螯蟹體內(nèi)可能呈現(xiàn)被動吸收的狀態(tài)。過量的恩諾沙星對于中華絨螯蟹來說是一種外來刺激物，因此機體為了保護自身，會通過鰓、觸角腺等排泄器官將多余的恩諾沙星排出體內(nèi)或者轉(zhuǎn)移到肝胰腺等器官將其降解，來降低藥物對機體的刺激[12]。這也解釋了肝胰腺部位檢測出的環(huán)丙沙星含量較高的原因，說明肝胰腺是恩諾沙星代謝的主要部位[23]。

關(guān)于螃蟹的性別差異對環(huán)丙沙星生成的影響，由結(jié)果可知，低濃度暴露條件下，公蟹和母蟹生成環(huán)丙沙星的量差異不大；中、高濃度條件下，公蟹體內(nèi)環(huán)丙沙星的生成量高于母蟹，但差異不顯著(P>0.05)。說明在恩諾沙星暴露濃度較高的情況下，存在一定的性別差異，但具體的差異以及差異機制需要進一步的探究[21]。

4 結(jié)論

恩諾沙星在中華絨螯蟹體內(nèi)不同可食部位殘留的情況與暴露濃度的劑量存在一定的劑量-效應關(guān)系，且恩諾沙星主要蓄積在蟹身肉部位，肝胰腺僅次于蟹身肉。根據(jù)富集系數(shù)的結(jié)果可知，富集能力較強的是蟹身肉。此外，性別差異對恩諾沙星在中華絨螯蟹體內(nèi)的蓄積存在一定的影響，但差異不顯著。同時，實驗組中華絨螯蟹可食部位均檢測到環(huán)丙沙星的存在，且環(huán)丙沙星的生成量同樣與恩諾沙星的暴露濃度正相關(guān)，其中肝胰腺是環(huán)丙沙星的主要生成部位。中華絨螯蟹的性別差異對環(huán)丙沙星的生成存在一定的影響，具體的情況有待進一步探究。