鉤藤化學(xué)成分研究

李 正，徐 濤

［1.中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)附屬第一醫(yī)院(安徽省立醫(yī)院) 藥學(xué)部，安徽 合肥 230001；2.皖西學(xué)院生物與制藥工程學(xué)院，安徽 六安 237012］

鉤藤始載于《名醫(yī)別錄》，列為下品，多以帶鉤莖枝入藥[1]，為茜草科鉤藤屬植物鉤藤Uncaria rhynchophylla（Miq.） Miq. ex Havil.、大 葉 鉤 藤U.macrophyllaWall.、毛鉤藤U.hirsutaHavil.、華鉤藤U.sinensis（Oliv.） Havil.或無柄果鉤藤U.sessilifructusRoxb.的干燥帶鉤莖枝，具有息風(fēng)定驚、清熱平肝的功效, 用于治療肝風(fēng)內(nèi)動、驚癇抽搐、高熱驚厥、感冒夾驚、小兒驚啼、妊娠子癇和頭痛眩暈等癥，其中尤以鉤藤U.rhynchophylla廣泛栽培，為市場上的主流商品[2]。近年來，國內(nèi)外學(xué)者對其化學(xué)成分進(jìn)行了研究，已報道的從鉤藤中分離出的化學(xué)成分包括生物堿類、三萜類、黃酮類、醌類、木脂素類等[3]。為了闡明鉤藤的物質(zhì)基礎(chǔ)，本研究對鉤藤提取物進(jìn)行了分離鑒定，得到9個化合物，其中化合物C-藜蘆酰乙二醇（C-veratroylglycol）（1）；2,3-二羥基-1-（4-羥基-3,5-二甲氧基苯基）-1-丙酮[2,3-dihydroxy-1-（4-hydroxy-3,5- dimethoxyphenyl）-1-propanone]（2）；4-羥基-3,5-二甲氧基-苯酚（4-hydroxy-3,5-dimethoxy-phenol）（3）;rel-5-（3S, 8S-dihydroxy-1R, 5S-dimethyl-7-oxa-6-oxobicyclo[3,2,1]-oct-8-yl）-3- methyl-2Z, 4E-pentadienoic acid（4）；4-O-β-D-glucopyranosyl sinapic acid methyl ester（5）；兒 茶素（catechin）（6）；去氫假虎刺酮（dehydrocarissone）（8）；3-hydroxy-β-damascone（9）為首次從鉤藤中分離得到。

1 儀器與材料

Bruker AV-500型、Bruker AV-600型 和Bruker AV-800型核磁共振波譜儀（德國Bruker公司）；API QSTAR Pulsar1型質(zhì)譜儀（美國 Applied Biosystems/MDS SCIEX）；MITSUB ISHI GOT1000型中壓制備液相（上海利穗科技有限公司）；色譜柱為 RP-18 gel（50 μm；Merck）預(yù)裝柱 ；YMC型色譜柱（S-5 μm 12 nm ；250 mm × 20.0 mm和250 mm×10.0 mm）；凝膠Sephadex LH-20（25 ～ 100 μm，GE公司）；柱色譜硅膠（200 ～300目，100 ～ 200目）和薄層色譜用硅膠G、GF254（青島海洋化工廠）；顯色劑為10%硫酸乙醇（噴后105 ℃加熱顯色）或碘蒸氣顯色。

鉤藤藥材購自康美中藥城，經(jīng)安徽中醫(yī)藥大學(xué)張偉副教授鑒定為茜草科植物鉤藤Uncaria rhynchophylla（Miq.） Miq. ex Havil.的干燥帶鉤莖枝。標(biāo)本（GT-20210710001）存放于皖西學(xué)院。

2 提取分離

對鉤藤藥材（20 kg）曬干后粉碎成粗粉，用95%乙醇、50%乙醇進(jìn)行滲漉提取，合并滲漉液，減壓回收乙醇，經(jīng)水分散后，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，得到各個萃取部位：石油醚萃取部位100 g（Fr.A），乙酸乙酯萃取部位700 g（Fr.B），萃取后水部位1.6 kg（Fr.C）。Fr.B（700 g）經(jīng)硅膠柱色譜，依次用二氯甲烷-甲醇（100 ∶0 → 0 ∶100）梯度洗脫，得到5個流分（Fr.B-1 ～ Fr.B-5）。Fr.B-3（84.7 g）經(jīng)硅膠柱色譜分離，石油醚-乙酸乙酯（100∶0→0∶100）梯度洗脫，得到 6個流分（Fr.B-3-1 ～Fr.B-3-6）。Fr.B-3-3（24.3 g）經(jīng)MCI柱色譜處理，以甲醇-水系統(tǒng)（20∶80→100∶0）梯度洗脫，經(jīng)薄層色譜檢識，合并得4個洗脫流分（Fr.B-3-3-1 ～ Fr.B-3-3-4）。Fr.B-3-3-3（11.3 g）經(jīng)硅膠柱色譜和Sephadex LH-20葡聚糖凝膠色譜反復(fù)純化得化合物 3 （44 mg）、6 （26 mg）、7 （35 mg）。Fr.B3-4（16.5 g）經(jīng)ODS柱以甲醇（20 ∶ 80→100 ∶ 0）為洗脫劑得4個流分（Fr.B-3-4-1 ～ Fr.B-3-4-4），F(xiàn)r.B-3-4-2（8 g）經(jīng)硅膠柱色譜以二氯甲烷∶甲醇（100 ∶0 →0 ∶100）梯度洗脫得7個流分（Fr.B-3-4-2-1 ～Fr.B-3-4-2-7），F(xiàn)r.B-3-4-2-2（2.2 g）經(jīng)制備HPLC（20%乙腈-水，流速：8 mL/min） 制備得化合物1（11.2 mg）、2（8.9 mg）。Fr.B-4（164.8 g）經(jīng)硅膠柱色譜分離，二氯甲烷-甲醇 （100∶0→0∶100）梯度洗脫，得到5個流分（Fr.B-4-1 ～ Fr.B-4-5）。Fr.B-4-2（64.3 g）經(jīng)MCI處 理，以 甲 醇-水（20∶80→100∶0）為洗脫劑最終得5個洗脫流分（Fr.B-4-2-1 ～ Fr.B-4-2-5），F(xiàn)r.B-4-2-3（20.5 g）經(jīng)硅膠柱色譜分離，二氯甲烷-甲醇（100∶0 →0∶100）梯度洗脫，得到5個流分（Fr.B-4-2-3-1 ～Fr.B-4-2-3-5）。Fr.B-4-2-3-2（3.5 g）經(jīng)制備HPLC（40%甲醇-水，流速：8 mL/min）制備得化合物 4（18 mg）、5（22 mg）。Fr.B-4-2-3-3（4.6 g）經(jīng)制備HPLC（20%乙腈-水，流速：8 mL/min）制備得化合物8（25 mg）、9（40 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：棕色無定形粉末，分子式C10H12O5，ESI-MS m/z：211 [M-H]-。1H-NMR（500 MHz，CD3OD）δ：7.61（1H，s，H-2），7.59 （1H，d，J= 8.5 Hz，H-6），6.91（1H，d，J= 8.5 Hz，H-5），5.14（1H，t，J= 4. 8 Hz，H-8），3.93 （ 3H，s，3-OCH3），3.78（1H，m，H-9α），3.33（1H，m，H-9β）；13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：199.6（C-7），153.8（C-4），149.2（C-3），128.0（C-1），125.1（ C- 6），115.9（C-5），112.4（C-2），75.5（C-8），66.3（C-9），56.4（3-OCH3）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[4]報道基本一致，化合物1的結(jié)構(gòu)鑒定為C-藜蘆酰乙二醇（C-veratroylglycol）。

化合物2：無色晶體（甲醇），分子式C11H14O6，ESI-MS m/z：265 [M+Na]+。1H-NMR（500 MHz，CD3OD）δ：7.24（2H，s，H-2＇，6＇），5.04（1H，dd，J= 5.2，3.9 Hz，H-2），3.80（6H，s，OMe×2），3.67（1H，dd，J= 11.7，3.9 Hz，H-3α），3.64（1H，dd，J= 11.7，5.2 Hz，H-3β）。13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：199.7（C-1），149.1（C-3＇，5＇），143.0（C-4＇），126.7（C-1＇），107.7（C-2＇，6＇），75.6（C-2）, 66.2（C-3），56.9（3＇，5＇-OCH3）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]報道基本一致，化合物2的結(jié)構(gòu)鑒定為2,3-二羥基-1-（4-羥基-3, 5-二甲氧基苯基）-1-丙酮[2, 3-dihydroxy-1-（4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl）-1-propanone]。

化合物3：白色粉末，分子式為 C8H10O4，ESIMS m/z：171 [M + H]+。1H-NMR（500 MHz，CD3OD）δ：7.23（2H，s，H-2，6），3.78（6H，s，3，5-OCH3）；13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：148.7（C-1，3，5），108.2（C-2，6），141.1（C-4），56.7（3，5-OCH3）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報道基本一致，化合物3的結(jié)構(gòu)鑒定為4-羥基-3,5-二甲氧基-苯酚（4-hydroxy-3,5-dimethoxy- phenol）。

化合物4：無色固體，分子式C15H19O6，ESI-MS m/z：295 [M-H]-。1H-NMR（800 MHz，Acetone-d6）δ：8.08（1H，d，J= 15.9 Hz，H-4），6.57（1H，d，J= 15.9 Hz，H-5），5.82（1H，s，H-2），1.79（1H，dd，J= 13.7，10.9 Hz，H-2＇a）， 2.26（1H，ddd，J=13.7，6.9，1.6 Hz，H-2＇b），3.83（1H，m，H-3＇），1.90（1H，ddd，J=14.3，7.0，1.6 Hz,H-4＇a），1.92（1H，dd，J= 14.3，9.9 Hz, H-4＇b），1.36（3H，s，1＇-CH3），1.09（3H，s，5＇-CH3）；13C-NMR（200 MHz，Acetone-d6） δ：178.5（C-6＇），167.0（C-1），150.5（C-3），132.7（C-4），132.1（C-5），119.5（C-2），88.2（ C-1＇），82.5（C-8＇），64.7（C-3＇），52.8（C-5＇），42.6（C-2＇），41.1（C-4＇），21.0（3-CH3），18.5（1＇-CH3），14.6（5＇-CH3）。 以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]報道基本一致，化合物4的結(jié)構(gòu)鑒定為rel-5-（3S, 8S-dihydroxy-1R, 5S-dimethyl-7-oxa-6-oxobicyclo[3,2,1]-oct-8-yl）-3-methyl-2Z,4E-pentadienoic acid。

化合物5：白色粉末，分子式C18H24O10，ESI-MS m /z：399 [M-H]-。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：3.69（3H，s，-CO2CH3），3.81（6H，s，3，5-OCH3），6.42 （1H，d，J=15.9 Hz，H-8），7.10（2H，s，H-2，6），7.71（1H，d，J=15.9 Hz，H-7）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：169.2（C-9），154.6（C-3，5），146.1（C-7），138.1（C-4），132.1（C-1），118.3（C-8），107.2（C-2，6），104.8（C-1＇），78.4 （C-5＇），77.8（C-3＇），75.7（C-2＇），71.3（C-4＇）， 62.5（C-6＇），57.1（OCH3），52.1（COOCH3）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報道基本一致，化合物5的結(jié)構(gòu)鑒定為4-O-β-D-glucopyranosyl sinapic acid methyl ester。

化合物6：灰白色粉末，分子式C15H14O6，ESIMS m /z：289 [M-H]-。1H-NMR（500 MHz，CD3OD）δ：4.57（1H，d，J= 7.5 Hz，H-2），3.98（1H，m，H-3），2.51 （1H，dd，J= 16.2，8.1 Hz，H-4a），2.84（1H，dd，J= 16.2，5.4 Hz，H-4b），5.93（1H，d，J= 1.7 Hz，H-6），5.86（1H，d，J= 1.7 Hz，H-8），6.84（1H，d，J= 1.6 Hz，H-2'），6.76（1H，d，J= 8.1 Hz，H-5'），6.72（1H，dd，J= 8.1，1.6 Hz，H-6'）；13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：157.7（C-7），157.5（C-5），156.9（C-9），146.2（C-3'），146.2（C-4'），132.2（C-1'），120.0（C-6'），116.1（C-5'），115.2（C-2'），100.8（C-10），96.3（C-6），95.5（C-8），82.8（C-2），68.8（C-3），28.5（C-4）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報道基本一致，化合物6的結(jié)構(gòu)鑒定為兒茶素（catechin）。

化合物7：黃色粉末，分子式C15H10O7，ESI-MS m/z：303 [M+H]+。254 nm 紫外線下顯紫色暗斑，遇碘由藍(lán)綠色迅速變?yōu)樗{(lán)紫色，遇10%硫酸乙醇顯亮黃色。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）δ：6.19 （1H，d，J= 1.9 Hz，H-6），6.41（1H， d，J= 1.9 Hz，H-8），7.67（1H，d，J= 2.1 Hz，H-2'），6.89 （1H，d，J= 8.5 Hz，H-5'），7.54（1H，dd，J= 8.5，2.1 Hz，H-6'）；13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6）δ：175.8（C-4），163.9（C-7），160.7（C-5），156.1（C-9），147.7（C-3'），146.7（C-2），145.0（C-4'），135.7（C-3），121.9（C-1'），119.9（C-6'），115.6（C-5'），115.0（C-2'），103.0（C-10），98.1（C-6），93.3（C-8）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報道基本一致，化合物7的結(jié)構(gòu)鑒定為槲皮素（quercetin）。

化合物8：無色油狀物，分子式C15H22O2，ESI- MS m/z：235 [M+H]+。1H-NMR（500 MHz，Acetone-d6） δ：6.85（1H，d，J= 9.8 Hz，H-1），6.09（2H，d，J= 9.8 Hz, H-2），1.22（3H，s，H-12），1.23（3H，s，H-13），1.21（3H，s，H-14），1.84（3H，s，H-15）；13C-NMR（125 MHz，Acetone-d6）δ：186.0（C-3），161.6（C-5），157.4（C-1），129.2（C-4），126.5（C-2），71.7（C-11），51.7（C-7），41.0（C-10），39.0（C-9），28.1（C-6），26.9（C-13），26.6（C-12），23.6（C-14），22.8（C-8），10.4（C-15）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報道基本一致，化合物8的結(jié)構(gòu)鑒定為去氫假虎刺酮（dehydrocarissone）。

化合物9：無色油狀物，分子式C13H20O2，ESI-MS m /z：209 [M +H]+。1H-NMR（500 MHz，Acetone-d6）δ：6.74（ 1H，dq，J= 15.7，6.8 Hz，H-9），6.08（1H，dq，J= 15.7，1.6 Hz，H-8），3.96（1H，m，H-3），2.27（1H，ddd，J= 16.9，5.8，1.6 Hz，H-4b），2.04（1H，m，H-4a），1.97（1H，ddd，J= 17.0，9.5，1.3 Hz，H-10），1.67（1H，ddd，J= 12.2，3.7，1.7 Hz，H-2b），1.49（3H，s，H-13），1.43（1H，t，J= 12.2 Hz，H-2a），1. 09 （ 3H，s，H-12 ），0.92（3H，s，H-11）；13C-NMR（125 MHz，Acetone-d6）δ：201.1（C-7），146.5（C-9），140.3（C-5），135.2（C-8），129.0（C-6），64.3（C-3），48.7（C-2），41.7（C-4），36.6（C-1），30.0（C-11），29.3（C-12），21.2（C-13），18.3（C-10）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報道基本一致，化合物9的結(jié)構(gòu)鑒定為3-hydroxy-β-damascone。

4 討論

現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，鉤藤具有明顯的降血壓、鎮(zhèn)靜、抗驚厥、抗癲癇等多種藥理活性。因此，對鉤藤化學(xué)成分研究很有必要。近年來，國內(nèi)外學(xué)者對其化學(xué)成分進(jìn)行了研究，主要集中在生物堿類成分方面，如五種新穎的吲哚類生物堿rhynchines A-E以及四種新穎的單萜吲哚類生物堿uncarialins J-M從鉤藤中分離得到[13-14]。為進(jìn)一步明確鉤藤中化學(xué)成分的種類，本研究對鉤藤化學(xué)成分進(jìn)行了分離鑒定，共得到9個化合物，包括3個苯丙素類、3 個萜類、2個黃酮類和1個酚類化合物。從結(jié)構(gòu)上分析，化合物1和化合物2在8位碳上存在一個甲氧基的差異，化合物5為單糖苷。除了化合物7，其余化合物均為首次從鉤藤中分離得到。目前，對鉤藤的藥理活性研究多集中于生物堿類，鉤藤中生物堿具有明顯的降血壓、鎮(zhèn)靜和抗癲癇的作用，通過抑制單胺氧化酶和靶向褪黑素受體而具有抗抑郁作用[14]。有關(guān)文獻(xiàn)報道其它方面的活性，如化合物6具有抗菌消炎、防治病毒性疾病、抗腫瘤、抑制肥胖、抗氧化等作用[15]；化合物7對脂多糖誘導(dǎo) RAW264.7 細(xì)胞釋放的NO、TNF-α、IL-6 和 IL-1β有顯著的抑制作用，且槲皮素可以增強(qiáng)免疫低下小鼠的免疫力等[16]。因此，有必要挖掘和探索鉤藤的非主要成分，對鉤藤的廣泛利用和臨床用藥具有重要意義。

5 結(jié)論

本研究運(yùn)用多種色譜手段對鉤藤提取物進(jìn)行分離和純化，得到的單體化合物通過核磁共振譜和質(zhì)譜分析并結(jié)合參考文獻(xiàn)中的數(shù)據(jù)進(jìn)行比對，最終共分離鑒定了9個化合物?；衔? ～ 6以及化合物8 ～ 9為首次在鉤藤中分離得到，豐富了對鉤藤的化學(xué)成分認(rèn)識，為進(jìn)一步開發(fā)鉤藤資源提供參考。