摘 要：磺胺類藥物在人體內蓄積濃度超過一定值可對人體產生危害。因此，建立一種快捷、準確、高效和適用性廣的磺胺類藥物殘留檢測方法很有必要。本文建立了基體固相擴散-固相萃取-高效液相色譜-紫外檢測法同時分析蜂蜜中9種磺胺類藥物殘留量。該方法對蜂蜜加標回收率為63.1%～105.1%，相對標準偏差為5.7%～15.2%，最低檢出限為4～6 μg/kg，可用于蜂蜜中磺胺類藥物殘留的分析檢測。

關鍵詞：磺胺類藥物;高效液相色譜法;蜂蜜

Analysis of Residues of Sulfonamides in Honey

LI Lin

（Hbgs Technical Services Co.， Ltd.， Shijiazhuang 050000， China）

Abstract： The accumulation concentration of sulfonamides in human body exceeds a certain value， which can cause harm to human body. Therefore， it is necessary to establish a rapid， accurate， efficient and widely applicable method for the determination of sulfonamides residues. A matrix solid phase diffusion solid phase extraction high performance liquid chromatography ultraviolet detection method was established for the simultaneous analysis of 9 sulfonamides residues in honey. The recovery of honey spiked by this method is 63.1%～105.1%， the relative standard deviation is 5.7%～15.2%， and the minimum detection limit is 4～6 μg/kg， which can be used for the analysis and detection of sulfonamides residues in honey..

Keywords： sulfonamides; high performance liquid chromatography; honey

隨著社會的發(fā)展，食品中重金屬超標、農藥、獸藥和激素殘留及帶有致病菌等問題已引起人們的廣泛關注。其中，獸藥殘留問題較為嚴重[1]。隨著抗生素的應用越來越廣泛，且用量較大，帶來嚴重的獸藥殘留問題。近年來，磺胺類藥物殘留超標現象較嚴重，主要發(fā)生在豬肉、牛肉中。目前，磺胺類殘留的檢測方法較多，但這些方法對檢測儀器要求較高，且價格昂貴，適用范圍受到局限[2]。因此，建立一種方便快捷、適用性廣、靈敏度高及檢出限低的方法很有必要。本文通過基體固相擴散（Matrix Solid-phase Dispersion，MSPD）和固相萃?。⊿olid-Phase Extraction，SPE）的前處理方法對樣品進行凈化，用FMOC-Cl衍生，通過高效液相色譜-紫外法（High Performance Liquid Chromatography-ultraviolet Detection，HPLC-UV）同時檢測多種脂溶性和水溶性的磺胺類獸藥殘留。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 材料與試劑

二氯甲烷;三氯甲烷;乙酸乙酯;正己烷;甲醇;無水乙醇;無水醋酸鈉;冰醋酸;衍生試劑;硅膠;固定相C18（Celite545）;蜂蜜，包括荊花蜜（野生）、油菜花蜜（野生）、紫云英蜜（汪氏）、萬花蜜（汪氏）和荊花蜜（百花牌）。

1.1.2 儀器與設備

液相色譜儀;色譜工作臺;檢測器（UV，Waters 2487 Dual）;色譜柱（Inersil DDS-3）;氮氣吹干裝置;可控水浴裝置;電子精密天平;101A-1型干燥箱。

1.2 實驗方法

1.2.1 溶液配制

（1）標準儲備液的配制。稱取標準品磺胺吡啶（Sulphapyridine，SP）、磺胺嘧啶（Sulphadiazine，SD）、磺胺二甲嘧啶（Sulphamethazine，SM2）、磺胺甲嘧啶（Sulphamerazine，SDM）、磺胺-6-甲氧嘧啶（Sulphamonomethoxine，SMM）、磺胺-5-甲氧嘧啶（Sulphameter，SME）、磺胺氯噠嗪（Sulphachloropyridazine，SCP）和磺胺甲惡唑（Sulphamethoxazole，SMZ）各10.00 mg溶于10 mL甲醇中，得到l mg/mL的標準樣品溶液Ⅰ。量取標準樣品溶液Ⅰ 100 μL，定容至10 mL，得到10 μg/mL的標準樣品溶液Ⅱ。量取標準樣品溶液Ⅱ l mL，定容至5 mL，得到2 μg/mL的標準樣品溶液Ⅲ。

（2）FMOC-C1衍生試劑配制。稱取157.9 mg FMOC-Cl用3 mL乙腈稀釋，得到0.20 mol/L衍生試劑Ⅰ。量取250 μL衍生試劑Ⅰ，定容至1 mL，得到0.05 mol/L衍生試劑Ⅱ。

（3）流動相緩沖液的配制。稱取0.820 3 g無水醋酸鈉溶于1 000 mL水中，用醋酸溶液調節(jié)pH值至4.20。

（4）硼酸緩沖液的配制。稱取1.236 3 g硼酸溶于10 mL水中配成0.2 mol/L硼酸溶液，用飽和NaOH溶液調節(jié)pH至8.0。

1.2.2 樣品預處理

用基體固相擴散法凈化樣品。稱取1.0 g蜂蜜與3.0 g C18混合后加入100 μL標準樣品溶液Ⅲ，在研缽中磨勻，晾干，裝柱。C18柱用15 mL正己烷淋洗，棄去淋洗液，用10 mL乙酸乙酯洗脫，收集并吹干洗脫液。

1.2.3 衍生化反應

洗脫液吹干后，加入100 μL甲醇和100 μL（pH=8.0）衍生試劑FMOC-Cl（0.05 mol/L），充分振蕩，25 ℃條件下反應 420 min。

1.2.4 SPE凈化

衍生完畢，用氮氣吹干多余的試劑，用1 mL二氯甲烷溶解后充分振蕩。取1.0 g硅膠表柱后，依次用10 mL甲醇，10 mL一氯甲烷活化[3]。將振蕩后的樣品加入活化后的硅膠柱后依次用10 mL 二氯甲烷、10 mL氯仿淋洗;用8 mL含25%甲醇（體積百分含量）的二氯甲烷溶液洗脫，收集并吹干洗脫液，用400 μL流動相溶解，過濾，待上機分析。

1.2.5 儀器條件

紫外檢測器的檢測波長為263 nm;色譜條件：色譜柱為Inersil ODS 3，選擇流動相A為NaOAc-HOAc緩沖體系，pH=4.20;流動相B為乙腈;流速為1.0 mL/min;進樣量20 μL;二元梯度洗脫。

2 結果與分析

2.1 多組分分離的色譜條件

根據待測樣品的衍生產物結構信息和紫外光譜特征，同時考慮到多種化合物同時檢測，選擇紫外檢測器的檢測波長為263 nm[4]。高效液相色譜的二元流動相A為pH=4.20的NaOAc-HOAc緩沖體系，B為乙腈，流動相流速為1.0 mL/min，進樣量20 μL。在試驗多種流動相比例后，初步確定流動相A（醋酸緩沖液）∶B（乙腈）為45∶55（V/V），在此比例下，分離效果較好。但因實驗時間較長，為縮短實驗時間采用二元流動相梯度洗脫，對9種磺胺類藥物的FMOC-衍生物進行分離，見表1。

圖1是標準樣品混合溶液經衍生后的液相色譜分離譜圖，9種藥物在26 min內全部出峰，且分離度良好。但衍生試劑的水解峰（FMOC-OH）較明顯，待測樣品濃度較低時可能會造成干擾，需要考慮去除。

2.2 基體固相擴散對蜂蜜樣品進行凈化條件的優(yōu)化

將樣品磨碎后與固定相在物理上混合均勻，使樣品中的待分析組分不經過任何提取操作就可以完全地、均勻地結合在固定相的表面，可大大簡化分析步驟、縮短分析時間[5]。根據不同組分與固定相的結合力的種類及大小的不同，選用不同的溶劑對固定相進行淋洗，即可將不同的組分逐一洗脫出來。

分別用正己烷、二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯和甲醇對樣品進行洗脫，發(fā)現正己烷能將雜質洗脫但不會將分析物洗脫;二氯甲烷和氯仿能將雜質洗脫并能將部分分析物洗脫;乙酸乙酯可將大部分分析物洗脫且洗脫的雜質較少，甲醇能將分析物和雜質都洗脫下來。淋洗的主要目的是將雜質洗掉，但要保證分析物保留在柱子里，盡量減少分析物的損失。因此，最終選擇正己烷作為淋洗液。選擇洗脫液的基本條件是將分析物盡可能的洗脫下來，使雜質仍保留在柱中。因此，選擇乙酸乙酯作為洗脫液。

2.3 檢出限

將磺胺類藥品各組分含量為100 μg/L的標準樣品稀釋為4 μg/L、5 μg/L、6 μg/L、8 μg/L、10 μg/L、25 μg/L和50 μg/L，經衍生反應、SPE凈化后進行測定。加標量為4～6 μg/L時，由于雜質峰的干擾，對峰面積的準確積分造成了影響。因此，該方法測定蜂蜜中9種磺胺類藥物殘留的檢出限為4～6 μg/kg。

2.4 加標回收率及精密度試驗

選取荊花蜜（野生）作為樣本，設置10 μg/kg、25 μg/kg、50 μg/kg、100 μg/kg和250 μg/kg 5個加標量。按照優(yōu)化后的實驗條件，稱取1.0 g荊花蜜（野生），分別加入不同量標準樣品后經基體固相擴散，衍生化反應，SPE凈化后用高效液相色譜-紫外法進行測定。表2、表3結果表明，加標量在50～250 μg/kg時9種磺胺類藥物回收率為77.4%～105.1%，相對標準偏差為5.7%～11.5%，試驗的回收率和穩(wěn)定性均較好。加標濃度為10～25 μg/kg時，回收率有不同程度的下降，為63.1%～81.4%，相對標準偏差為7.5%～15.2%。痕量分析回收率大于60%、相對標準偏差小于30%時符合藥物殘留分析的國際通用標準。

3 結論

本文采用基體固相擴散和固相萃取相結合的技術對蜂蜜中磺胺類殘留進行了提取和凈化，建立了高效液相色譜-紫外法檢測蜂蜜中磺胺類藥物殘留量的方法。該方法對蜂蜜的加標回收率為63.1%～105.1%，相對標準偏差為5.7%～15.2%，最低檢出限為4～6 μg/kg。因此，該方法具有檢出限低、回收率高、重復性好、靈敏度高和適用性廣等優(yōu)點，可用于蜂蜜中磺胺類藥物殘留的分析檢測。

參考文獻

[1]宋梓豪，石會娟，王鵬，等.蜂蜜中26種磺胺及其增效劑類藥物殘留檢測方法研究[J].農產品質量與安全，2021（1）：60-66.

[2]梁兆斌，李丹，蒲嬋娟，等.蜂蜜中13種磺胺類藥物殘留的同步測定方法的建立[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2018（7）：219-222.

[3]容裕棠，張憲臣，張朋杰，等.QuEChERS-超高效液相色譜-串聯質譜法同時測定蜂蜜中21種磺胺類藥物殘留[J].食品與發(fā)酵工業(yè)，2018，44（4）：226-233.

[4]高景報，劉二花，田梅，等.飼料中磺胺類藥物檢測方法研究[J].今日畜牧獸醫(yī)，2021，37（11）：2.

[5]薩仁高娃.磺胺類藥物在飼料和畜產品中的殘留危害[J].草食家畜，2021（4）：63-66.

作者簡介：李琳（1992—），女，河北欒城人，大專。研究方向：食品藥品檢測、實驗室質量管理。