微生物農(nóng)藥常見術(shù)語(yǔ)及釋義

王以燕，袁善奎*，農(nóng)向群，李 梅

（1. 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)藥檢定所，北京 100125；2. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所，北京 100193）

術(shù)語(yǔ)是在特定學(xué)科領(lǐng)域用來表示基本概念的集合，是制定規(guī)范和標(biāo)準(zhǔn)的理論基礎(chǔ)，并準(zhǔn)確、簡(jiǎn)潔表達(dá)相關(guān)詞條的定義。微生物農(nóng)藥的特性不同于化學(xué)農(nóng)藥，因此在術(shù)語(yǔ)表達(dá)方面具有特殊性。本文依據(jù)FAO/WHO《微生物農(nóng)藥指南》以及現(xiàn)有微生物農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)和有關(guān)資料[1-3]，總結(jié)了微生物農(nóng)藥基本定義、分類、含量、雜質(zhì)、檢測(cè)等幾個(gè)方面相關(guān)的術(shù)語(yǔ)和釋義，旨在為微生物農(nóng)藥科研、教學(xué)、生產(chǎn)、推廣及管理等相關(guān)領(lǐng)域提供參考，推動(dòng)行業(yè)規(guī)范發(fā)展。

1 基本術(shù)語(yǔ)

1.1 微生物農(nóng)藥（microbial pesticide/microbial pest control agent, MPCA）

以天然的或基因修飾的細(xì)菌、真菌、病毒等微生物活體為有效成分的農(nóng)藥。

1.2 微生物農(nóng)藥有效成分（microorganism active substance）

對(duì)有害生物控制發(fā)揮作用的微生物及其相關(guān)代謝產(chǎn)物，其可以是活的或者失活的微生物。

1.3 微生物農(nóng)藥母藥（technical grade of MPCA）

用于加工微生物農(nóng)藥制劑的微生物原料，是高純度的微生物農(nóng)藥存在形式，除含有生產(chǎn)過程中用于微生物生長(zhǎng)或繁殖、以及用于典型純化或制備的一些物質(zhì)外，通常不含其他添加物或助劑，特殊情況下為便于貯存和運(yùn)輸會(huì)加入少量的防腐劑、穩(wěn)定劑或稀釋劑。

1.4 微生物農(nóng)藥制劑（microbial pest control product, MPCP）

以微生物農(nóng)藥活體作為有效成分的農(nóng)藥制劑產(chǎn)品，登記或標(biāo)注用于有害生物控制。

1.5 寄主/宿主（host）

為其他生物（寄生物）提供生存環(huán)境或養(yǎng)分的動(dòng)物（包括人類）、植物或微生物。

1.6 增殖/繁殖（multiplication）

微生物在侵染過程中進(jìn)行復(fù)制或數(shù)量增加的能力。

1.7 定殖（colonization）

微生物在環(huán)境中增殖或持續(xù)存在的能力，如在生物體表（表皮）或內(nèi)部器官表面（如腸道、肺）、在機(jī)體外表環(huán)境（如表皮）或內(nèi)部環(huán)境（組織器官如消化道等）繁殖和持續(xù)存在的現(xiàn)象。微生物在所定殖的器官或部位持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)，定殖數(shù)量可能保持穩(wěn)定或增長(zhǎng)，也可能緩慢下降。定殖微生物可能是無害的，也可能是功能性或致病性微生物。

1.8 宿存（survival）

活性微生物使用后一定時(shí)間內(nèi)在動(dòng)植物表面、體內(nèi)，或者土壤中保持活性的狀態(tài)。

1.9 侵染（infection）

病原微生物引入或進(jìn)入易感宿主的過程，無論其是否引起病理效應(yīng)或疾病。微生物必須進(jìn)入宿主的體內(nèi)，通常是細(xì)胞，并能夠繁殖形成新的感染單位。簡(jiǎn)單地?cái)z入病原體并不意味是侵染。

1.10 侵入（invasion）

微生物進(jìn)入寄主體內(nèi)（如穿透表皮層、腸上皮細(xì)胞等）的過程。病原微生物具有“原發(fā)侵入性”的特性。

1.11 致病性（pathogenicity）

微生物引起寄主疾病和/或造成寄主傷害的能力。很多病原菌通過毒性和侵入性，或者毒性和定殖能力的聯(lián)合作用產(chǎn)生致病性。但有些入侵病原菌引起的疾病是由寄主防御系統(tǒng)造成的異常反應(yīng)。

1.12 感染性（infectivity）

微生物突破或逃避宿主自然屏障、進(jìn)入宿主體內(nèi)并保持存活狀態(tài)或繁殖的能力。感染性可能涉及不同嚴(yán)重程度、部位和數(shù)量，但不涉及是否引起病理效應(yīng)或疾病表征。

1.13 生態(tài)位（ecological niche）

特定物種所占據(jù)的獨(dú)特環(huán)境位置，根據(jù)其在群落或生態(tài)系統(tǒng)中所占據(jù)的實(shí)際物理空間和所發(fā)揮的功能來感知。

1.14 共生現(xiàn)象（symbiosis）

兩種生物之間的一種相互作用，其中一種生物與另一種生物密切相關(guān)，這對(duì)兩種生物都有利。

2 分類術(shù)語(yǔ)

2.1 細(xì)菌農(nóng)藥（bacterial pesticide）

具有殺蟲、抑菌生物活性的單細(xì)胞原核微生物農(nóng)藥。其個(gè)體微小，形態(tài)簡(jiǎn)單，以無性二分裂方式繁殖（裂殖），在自然界中分布最廣、數(shù)量最多。

2.1.1 芽胞1目前文獻(xiàn)中“芽孢”/“芽胞”均有使用，本刊采用“芽胞”。但《農(nóng)藥中文通用名稱》GB 4839-2009、近期的細(xì)菌類標(biāo)準(zhǔn)及我國(guó)農(nóng)藥登記注冊(cè)庫(kù)中的資料都采用“芽孢”。（內(nèi)生胞子）（endospore） 細(xì)菌的休眠體（圓形、橢圓形或柱形）。一個(gè)芽胞萌發(fā)后只形成一個(gè)細(xì)菌，芽胞抗熱性極強(qiáng)，折光性很強(qiáng)，便于在顯微鏡下計(jì)數(shù)。芽胞類細(xì)菌在微生物農(nóng)藥產(chǎn)品中數(shù)量最多，如蘇云金芽胞桿菌、枯草芽胞桿菌等。

2.1.2 胞囊2文獻(xiàn)中“胞囊”/“孢囊”均有使用，較新近的文獻(xiàn)多用“胞囊”，本刊采用“胞囊”。（cyst） 某些細(xì)菌在外界不利條件下，由整個(gè)營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞外壁加厚、細(xì)胞失水而形成一種抵抗干旱但不抗熱的圓形休眠體。

2.1.3 營(yíng)養(yǎng)體（vegetative） 單個(gè)活的生物體，通常能在合適培養(yǎng)基上形成一個(gè)菌落實(shí)體。

2.2 真菌農(nóng)藥（fungal pesticide）

具有殺蟲、防病等生物活性的真核微生物農(nóng)藥。一般能通過無性和有性繁殖方式產(chǎn)生的孢子延續(xù)種群，常見有分生孢子、芽生孢子、厚垣孢子等繁殖體或菌絲營(yíng)養(yǎng)體。

2.2.1 孢子（spore） 真菌的繁殖體，有多種類型。

2.2.1.1 分生孢子（conidium） 由分生孢子梗上產(chǎn)孢細(xì)胞（頂生或側(cè)生、串生或簇生，形狀、大小多種，單胞或多胞）產(chǎn)生無色或有色的無性繁殖細(xì)胞，是真菌農(nóng)藥中最常見的孢子形態(tài)。常見的有球孢白僵菌、金龜子綠僵菌等。

2.2.1.2 芽生孢子（blastospore） 由細(xì)胞出芽生成（細(xì)胞膜和原生質(zhì)體隨某部位細(xì)胞壁向外突出，其一個(gè)細(xì)胞核留在母細(xì)胞，另一個(gè)進(jìn)入突起中，形成突起過程即為出芽），形態(tài)多變，無性葉狀真菌孢子，酵母菌、隱球菌及念珠菌可產(chǎn)生此類孢子。

2.2.1.3 厚垣孢子（chlamydospore） 由菌絲體膨大（原生質(zhì)濃縮）分裂產(chǎn)生壁厚、壽命長(zhǎng)，具有抵御不良環(huán)境的無性休眠真菌孢子。

2.2.2 菌絲營(yíng)養(yǎng)體/營(yíng)養(yǎng)菌絲（vegetative hypha） 單條管狀細(xì)絲，是大多數(shù)真菌的結(jié)構(gòu)單位。

2.2.3 微孢子（microsporidium） 在組織細(xì)胞中發(fā)育并分裂，可反復(fù)無性增殖、具傳染性的卵圓形寄生物，屬于低等真菌，簡(jiǎn)稱“微孢子菌”，過去稱為“微孢子蟲”。

2.3 病毒農(nóng)藥（viral pesticide）

由核酸和外殼蛋白組成病毒微粒的非細(xì)胞形態(tài)，以昆蟲為宿主，對(duì)宿主產(chǎn)生致病性，具有直接和間接控制有害昆蟲生物活性的微生物農(nóng)藥。

2.3.1 桿狀病毒科（Baculoviridae）

2.3.1.1 核型多角體病毒（nucleo-polyhedrovirus, NPV） 含1至多個(gè)（單核衣殼/多核衣殼）呈十二面體、四角體、五角體、六角體等桿狀病毒多角體粒子（直徑在0.5～15 μm），在寄主細(xì)胞核內(nèi)，核酸為分段基因組。是應(yīng)用最廣、登記數(shù)量最多的一類病毒微生物農(nóng)藥產(chǎn)品，常見的有棉鈴蟲核型多角體病毒等。

2.3.1.2 顆粒體病毒（granulovirus, GV） 含一個(gè)呈圓或橢圓形顆粒狀體，內(nèi)含核型多角體病毒粒子（粒子小、囊膜中多含單核衣殼），包涵體在細(xì)胞核內(nèi)或細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，核酸為雙鏈 DNA。在農(nóng)藥領(lǐng)域中，其應(yīng)用和登記數(shù)量?jī)H次于核型多角體病毒，常見的有小菜蛾顆粒體病毒等。

2.3.2 呼腸孤病毒科（Rroviridae）

2.3.2.1 質(zhì)型多角體病毒（cytoplasmic polyhedrovirus, CPV） 含多個(gè)一般為六角形、四角形等球狀多角體（直徑在0.5～10 μm）病毒粒子，包涵體在宿主細(xì)胞質(zhì)內(nèi)增殖，核酸為分段雙鏈RNA。常見的有松毛蟲質(zhì)型多角體病毒等。

2.3.3 細(xì)小病毒科（Parvoviridae）

2.3.3.1 濃核病毒（densovirus, DV） 一種小型二十面體（直徑在18～30 nm）無包膜單鏈DNA病毒粒子，在宿主細(xì)胞核內(nèi)復(fù)制，感染早期在核內(nèi)形成致密染色質(zhì)區(qū)。常見的有黑胸大蠊?jié)夂瞬《荆ǜ麜鹤g名：蜚蠊雙義濃核病毒）等。

3 有效成分含量術(shù)語(yǔ)

3.1 毒素蛋白含量（protein toxin content）

蘇云金芽胞桿菌（Bt）產(chǎn)品中伴胞晶體經(jīng)堿解成具有殺蟲活性的毒素蛋白的含量，通常采用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）法測(cè)定，單位為百分含量（%）。

3.2 含菌量（microbial content）

微生物農(nóng)藥產(chǎn)品單位質(zhì)量或體積中所含形態(tài)為活菌落體（含菌絲或孢子等）的細(xì)菌或真菌有效成分含量，多用平板菌落計(jì)數(shù)法測(cè)定，單位為CFU/g或mL。

3.2.1 菌落形成單位（colony forming units, CFU） 由單個(gè)或多個(gè)細(xì)胞（如分生孢子、菌絲等）在培養(yǎng)基上經(jīng)培養(yǎng)形成獨(dú)立可見的菌落，用于推算活體的真菌或細(xì)菌農(nóng)藥有效成分含量。

3.3 含孢量（spore content）

微生物農(nóng)藥產(chǎn)品單位質(zhì)量或體積中所含形態(tài)為活孢子的真菌有效成分含量，多用血球計(jì)數(shù)板法測(cè)定。含孢量＝孢子實(shí)測(cè)數(shù)量×活孢率，單位為孢子/g或mL。

3.3.1 活孢率（percentage of alive spores） 在一定培養(yǎng)條件下，可萌發(fā)（孢子芽管長(zhǎng)度大于孢子長(zhǎng)度一半的視為萌發(fā)）生長(zhǎng)的孢子數(shù)占總孢子數(shù)的百分率（%），即孢子萌發(fā)率。

3.4 包涵體（occlusion body, OB/polyhedral inclusion body, PIB）

病毒感染寄主后，在寄主細(xì)胞中大量復(fù)制增殖，形成具有保護(hù)膜包裹的非結(jié)晶、無活性、高折射率蛋白微粒聚集體。即由病毒粒子、固定病毒粒子的蛋白質(zhì)基質(zhì)和保護(hù)性外膜共同組成包涵體結(jié)構(gòu)。包涵體在堿性環(huán)境下被溶解后釋放出病毒粒子，再度侵染寄主。包涵體是病毒水平傳播的主要載體形式，在光學(xué)顯微鏡下可見粒子形態(tài)。

3.4.1 包涵體數(shù)量（OB content/PIB content） 微生物農(nóng)藥產(chǎn)品單位質(zhì)量或體積中所含形態(tài)為包涵體病毒粒子的數(shù)量。其中，多角體病毒常采用血球計(jì)數(shù)板法測(cè)定，顆粒體病毒可采用細(xì)菌計(jì)數(shù)板法或?qū)崟r(shí)熒光定量PCR法測(cè)定，單位為（OB或PIB）/g或mL。

通常病毒為顆粒體的用OB，多角體的用PIB或IB，但目前國(guó)際上主要用OB表示。

3.5 毒力/生物效價(jià)（比）（virulence/biopotency (ratio)）

微生物對(duì)靶標(biāo)有害生物的致死或抑制能力，以接種一定劑量該微生物所引發(fā)寄主或宿主病害程度來衡量，通過生物藥效試驗(yàn)測(cè)定其效價(jià)或生物活性性能。以半致死劑量（LD50）、半致死時(shí)間（LT50）、致死百分率或抑制率（%）等表示，活性單位還有國(guó)際毒力單位（ITU）、國(guó)際單位（IU）等[2,4]。

生物效價(jià)比是以微生物農(nóng)藥比較試樣、標(biāo)樣引起的生物反應(yīng)，測(cè)定微生物農(nóng)藥的生物效價(jià)或生物學(xué)活性的比值。

3.5.1 國(guó)際毒力單位/國(guó)際單位（international toxic unit, ITU/international unit, IU） 在生物測(cè)定中能夠顯示一定毒力的最小單位叫“毒力單位”或“單位”。經(jīng)由國(guó)際農(nóng)藥相關(guān)組織（或國(guó)際協(xié)商）規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)單位就是國(guó)際毒力單位（ITU）或國(guó)際單位（IU）。這兩個(gè)單位的內(nèi)涵基本相同，建議生物效價(jià)采用統(tǒng)一、含義更貼切的ITU表示產(chǎn)品的毒力，避免不必要的混亂。其關(guān)鍵是標(biāo)樣的制備和毒力的確認(rèn)。微生物農(nóng)藥的毒力或生物效價(jià)可通過與具有確定國(guó)際毒力單位或國(guó)際單位的標(biāo)樣進(jìn)行對(duì)比性生物測(cè)定，其結(jié)果用單位重量或體積的國(guó)際毒力單位（或國(guó)際單位）數(shù)值表示。

4 雜質(zhì)相關(guān)術(shù)語(yǔ)

4.1 微生物污染物（microbial contaminants）

微生物農(nóng)藥產(chǎn)品中除有效成分微生物（或其產(chǎn)生的物質(zhì)）外的其他微生物或物質(zhì)。微生物突變體或取代物均被認(rèn)為是污染物或雜質(zhì)。

4.1.1 雜菌量（number of microbial contaminants） 在微生物農(nóng)藥產(chǎn)品中，除有效成分外其他微生物的數(shù)量之和（或稱雜菌菌落總數(shù)）。

4.1.2 雜菌率（percentage of microbial contaminants） 在微生物農(nóng)藥產(chǎn)品中，除有效成分外其他微生物（如細(xì)菌和真菌等）量占總菌量的百分率。

4.2 相關(guān)次生化合物/代謝物（relevant secondary compound/metabolite）

從毒理學(xué)角度對(duì)人或動(dòng)物健康、或/和對(duì)環(huán)境造成危害的任何次生化合物/代謝物。有些毒素也可看作是相關(guān)次生化合物/代謝物。

4.2.1 次生化合物（secondary compound） 微生物產(chǎn)生的，對(duì)其生長(zhǎng)、擴(kuò)展或繁殖非必需的化合物。

4.3 化學(xué)雜質(zhì)（chemical impurities）

微生物農(nóng)藥產(chǎn)品中，除有效成分及來自制造過程必需物質(zhì)外的任何其他化學(xué)物質(zhì)。

4.4 水分/干燥減量（water/loss in weight）

用于表示微生物農(nóng)藥水分含量的方法，通常包括兩種：

（1）水分：水占試樣中質(zhì)量的比率。

（2）干燥減量：在規(guī)定條件下，經(jīng)加熱干燥后減少的質(zhì)量占試樣的比率。一般包括水分及少量低揮發(fā)性物質(zhì)的質(zhì)量。僅適用固體農(nóng)藥。

雖然兩種表示方式的測(cè)定方法不同，但內(nèi)涵相近，在微生物農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)中多采用后者，相對(duì)簡(jiǎn)便。

5 檢測(cè)方法術(shù)語(yǔ)

5.1 平板菌落計(jì)數(shù)法/菌落形成單位法（plate colony counting method/colony forming unit (CFU) method）

將微生物真菌、細(xì)菌試樣稀釋至適當(dāng)倍數(shù)，均勻涂布或傾注于培養(yǎng)基平板上，在合適溫度培養(yǎng)下，通過肉眼觀察或電子計(jì)數(shù)器對(duì)可見菌落數(shù)量進(jìn)行間接統(tǒng)計(jì)，得到微生物農(nóng)藥產(chǎn)品單位質(zhì)量或體積中活體菌落形成單位數(shù)量的方法，單位為CFU/g或mL。

5.1.1 雜菌量/雜菌率測(cè)定方法（number or percentage of microbial contaminants determination） 在微生物農(nóng)藥產(chǎn)品中雜菌量或雜菌率的測(cè)定方法多采用平板菌落計(jì)數(shù)法，雜菌量單位為CFU/g或mL，雜菌率單位為百分含量（%）。

5.2 血球計(jì)數(shù)板法/直接計(jì)數(shù)法（blood counting chamber method/direct counting method）

在光學(xué)顯微鏡下通過血球計(jì)數(shù)板，直接觀察計(jì)數(shù)形態(tài)較大的真菌或多角體病毒等微生物農(nóng)藥的個(gè)體數(shù)量。一般需要配制成至適當(dāng)稀釋倍數(shù)的懸液，計(jì)數(shù)后計(jì)算產(chǎn)品單位質(zhì)量或體積中的含孢量或包涵體數(shù)量的方法，單位為孢子/g或mL、OB(PIB)/g或mL。

5.2.1 細(xì)菌計(jì)數(shù)板法（bateria counting chamber method） 在光學(xué)顯微鏡下通過細(xì)菌計(jì)數(shù)板，直接觀察計(jì)數(shù)形態(tài)較小的顆粒體病毒等微生物農(nóng)藥的個(gè)體數(shù)量。一般需要配制成至適當(dāng)稀釋倍數(shù)的懸液，計(jì)數(shù)后計(jì)算產(chǎn)品單位質(zhì)量或體積中的包涵體數(shù)量的方法，單位一般為OB/g或mL。

5.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR法（real-time fluorescence quantitative PCR method）

根據(jù)已知濃度標(biāo)樣（含有目的基因的質(zhì)?；蚧蚪M）的特定保守區(qū)域設(shè)計(jì)引物，進(jìn)行熒光定量PCR，繪制核酸保守片段拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算未知試樣熒光定量PCR獲得的保守片段拷貝數(shù)，推算病毒等微生物農(nóng)藥產(chǎn)品的單位質(zhì)量或體積試樣中包涵體（單位為OB/g或mL）或病毒粒子（單位為病毒粒子/g或mL）數(shù)量的方法，主要用于顆粒體病毒和濃核病毒類農(nóng)藥的檢測(cè)。

5.4 毒素蛋白含量測(cè)定法（protein toxin content determination）

蘇云金芽胞桿菌（Bt）中伴胞晶體經(jīng)堿解成具有殺蟲活性的毒素蛋白。依據(jù)蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量差異，通過凝膠電泳SDS-PAGE使其（130 kDa）與試樣中雜蛋白分離，經(jīng)電泳圖像掃描，定量測(cè)定微生物農(nóng)藥Bt產(chǎn)品中毒素蛋白含量的方法，單位為百分比含量（%）。

我國(guó)未以此數(shù)據(jù)表示Bt產(chǎn)品的含量。美國(guó)在Bt產(chǎn)品標(biāo)簽上以毒素蛋白含量作產(chǎn)品組分含量的數(shù)據(jù)之一，并標(biāo)注生物效價(jià)數(shù)據(jù)。

5.5 毒力或生物效價(jià)（比）測(cè)定方法（virulence/biopotency (ratio) determination）

通過生物藥效測(cè)定方法比較試樣和標(biāo)樣的生物反應(yīng)來體現(xiàn)微生物農(nóng)藥生物效價(jià)或生物活性能力的方法。單位為單位質(zhì)量的國(guó)際毒力單位ITU/mg或國(guó)際單位IU/mg。此方法主要用于蘇云金芽胞桿菌類（包括以色列亞種）和球形芽胞桿菌等產(chǎn)品有效成分含量測(cè)定及部分病毒有效成分“活性”的補(bǔ)充試驗(yàn)和部分鑒別試驗(yàn)。

綜上所述，血球計(jì)數(shù)板法（及細(xì)菌計(jì)數(shù)板法）和平板菌落計(jì)數(shù)法是目前微生物農(nóng)藥有效成分含量測(cè)定的主要方法，實(shí)時(shí)熒光定量PCR法由于技術(shù)要求較高，所需設(shè)備和檢測(cè)成本較貴，企業(yè)還未能普遍采用，僅適用顆粒體病毒和濃核病毒，但這是具有發(fā)展前景的方法之一。毒素蛋白測(cè)定法僅適用蘇云金芽胞桿菌類產(chǎn)品的測(cè)定。毒力/生物效價(jià)法主要用于蘇云金芽胞桿菌類（包括以色列亞種）及球形芽胞桿菌等產(chǎn)品的測(cè)定，雖然品種有一定局限性，但其產(chǎn)量卻是最多的；而病毒產(chǎn)品中生物效價(jià)比的測(cè)定僅作“活體”的輔助補(bǔ)充（或鑒定試驗(yàn)）。