耳針治療對慢性心力衰竭大鼠血清BNP、ET-1和IL-6的影響

吳咚咚，譚曾德，周亞濱，李巖

（黑龍江中醫(yī)藥大學，黑龍江 哈爾濱 150040）

心力衰竭是指由多種原因致心肌收縮力減弱，不能將心室內(nèi)的血液充分排出，從而出現(xiàn)動脈系統(tǒng)供血不足和靜脈系統(tǒng)淤血，由于各臟器因靜脈淤血所引起的臨床癥狀最為明顯，故稱充血性心力衰竭［1］。中醫(yī)學將慢性心力衰竭歸為“驚悸”“怔忡”“喘證”“痰飲”“水腫”范疇。病機為心、肺、腎陽氣虛衰，血行無力，水濕不化，痰濕泛溢，外邪內(nèi)侵。病位在心，涉及肺、脾、腎等臟器［2］。耳針取“心”“定喘”“肺”“腎”“神門”“交感”“內(nèi)分泌”，可用針刺、按壓及埋針等方法治療慢性心力衰竭，臨床療效較好，但其作用機制未明確［3］，故本實驗將研究耳針治療對慢性心力衰竭（CHF）模型大鼠血清BNP、ET-1 和IL-6 的影響，初步闡明耳針治療慢性心力衰竭的作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

清潔級健康雄性SD大鼠40只，體質(zhì)量（200±20）g，8 周齡，由青龍山動物繁殖中心提供，飼養(yǎng)于黑龍江中醫(yī)藥大學附屬第一醫(yī)院動物實驗中心。環(huán)境溫度（23±1.5）℃，相對濕度（50±3.5）%，全部大鼠分籠飼養(yǎng)，自由飲食。本研究符合實驗動物倫理學標準。

1.2 儀器與試劑

水合氯醛（天津市大茂化學試劑廠，規(guī)格：500 g/瓶，批號：20190507）；注射用鹽酸阿霉素（上海阿拉丁生化科技股份有限公司，規(guī)格：100 mg/瓶，批號：D107159）；BNP、ET-1和IL-6試劑盒（上海信裕生物科技有限公司）。

彩色多普勒超聲顯像儀（美國西門子）；中研太和牌一次性使用無菌耳穴撳針（北京中研太和醫(yī)療器械有限公司，規(guī)格：100 支/盒）；彩色超聲診斷系統(tǒng)（Philips Ultrasound 公司，型號：iE33）；多功能酶標儀（美國伯騰儀器有限公司）。

1.3 動物分組與模型建立

選取40只健康雄性SD大鼠，依據(jù)隨機數(shù)字表隨機分為對照組、模型組、假耳針治療組和耳針治療組，各10只。大鼠均適應性喂養(yǎng)1周后，除對照組外，其余3組采用腹腔注射阿霉素的方法制備CHF模型（每次稱取注射用鹽酸阿霉素14 mg 溶于7 mL 生理鹽水中，稀釋成2.0 mg/mL 的溶液，每次給藥劑量為1.25 mg/kg，即0.625 mL/kg，每周2次，連續(xù)6周）。對照組10只，腹腔注射溶劑。

1.4 實驗方法

對照組和模型組不予任何治療；耳針治療組和假耳針治療組分別予以耳針和假耳針治療2個月。

1.4.1 耳針治療組

耳穴選穴：取大鼠耳穴“心”“肺”“腎”“神門”，穴位定位參照文獻［4］。

操作方法：耳穴周圍皮膚用75%乙醇棉球消毒，運用血管鉗夾住一次性無菌撳針［規(guī)格為0.2 mm ×1.5 mm，SEIRIN 株式會社，進口注冊號：國食藥監(jiān)械（進）字2012 第2272550 號（更）］，并固定大鼠耳廓，繃緊施術部位皮膚，將撳針固定留置于所選大鼠耳穴上12 h，每日1 次，兩耳交替治療，30 d 為1 個療程，共治療2個療程，兩個療程之間休息1 d。由具有10年以上針灸治療臨床經(jīng)驗的針灸師進行操作。

1.4.2 假耳針治療組

耳穴選穴：取大鼠耳穴“心”“肺”“腎”“神門”，穴位定位參照文獻［4］。

操作方法：將一次性無菌撳針剪去針頭使用，耳針的規(guī)格和具體操作同耳針組。

1.5 超聲心動圖檢測心功能

采用彩色多普勒超聲顯像儀進行超聲心動圖檢測，探頭頻率為12 MHz，取心律穩(wěn)定時的連續(xù)10 個心動周期測量獲得實驗大鼠的LVIDd、LVIDs、LVFS 和LVEF等指標。

1.6 組織病理學檢查

實驗結(jié)束后處死大鼠，取大鼠心尖放入4%多聚甲醛溶液中固定24 h，按說明書步驟將組織進行脫水、透明、浸蠟包埋、切片，并進行HE染色。

1.7 血液標本的采集及BNP、ET-1和IL-6檢測

實驗結(jié)束后處死大鼠，打開腹腔后進行腹腔靜脈采血，分別采集2、1.5 mL，4 500 rpm 離心10 min，取上清液，ELISA 試劑盒檢測血漿中BNP、ET-1 和IL-6含量，嚴格按照說明書進行操作。

1.8 統(tǒng)計學方法

采用SPSS26.0 軟件進行數(shù)據(jù)處理及分析。計量資料采用均數(shù)±標準差表示，若數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布且方差齊性，組間比較采用單因素方差分析，并采用LDS進行兩兩比較，組內(nèi)比較采用配對t檢驗；若數(shù)據(jù)不符合正態(tài)分布采用秩和檢驗。計數(shù)資料采用頻數(shù)描述，采用卡方/Fisher's 精確檢驗，等級資料采用秩和檢驗。統(tǒng)計檢驗均采用雙側(cè)檢驗，檢驗水準α = 0.05，P＜0.05代表具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠心肌組織HE染色結(jié)果

對照組大鼠心肌組織紋理清晰，心肌走形規(guī)整，排列平行，心肌細胞明顯，細胞核清晰，胞體無水腫。模型組心肌細胞可有水腫、空泡現(xiàn)象，炎細胞浸潤明顯，心肌纖維斷裂明顯。而假耳針和耳針治療組心肌斷裂細胞水腫均較模型組減輕。見圖1。

2.2 各組大鼠治療后超聲心動圖指標比較

與對照組比較，耳針治療組、假耳針治療組和模型組大鼠LVIDd 和LVIDs 顯著提高（P＜0.05），LVFS 和LVEF 顯著降低（P＜0.05）；與模型組相比，耳針治療組和假耳針治療組的LVIDd、LVIDs、LVFS 和LVEF 水平相似，無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見表1。

表1 各組大鼠超聲心動圖指標比較（±s）

表1 各組大鼠超聲心動圖指標比較（±s）

注：與對照組比較，*P ＜0.05。

組別對照組模型組假耳針治療組耳針治療組n 10 10 10 10 LVIDd（mm）5.94±0.48 6.63±0.45*6.62±0.47*6.61±0.45*LVIDs（mm）3.41±0.52 4.18±0.62*4.15±0.56*4.09±0.58*LVFS（%）46.07±5.32 35.18±8.46*37.35±7.08*38.62±6.52*LVEF（%）82.56±4.69 57.28±4.76*60.21±3.47*62.86±4.25*

2.3 各組大鼠BNP、ET-1和IL-6含量比較

與對照組比較，模型組、假耳針治療組和耳針治療組血清BNP、ET-1 和IL-6 含量升高（P＜0.05）；與模型組比較，假耳針治療組和耳針治療組血清BNP、ET-1 和IL-6 含量降低（P＜0.05）；與假耳針治療組比較，耳針治療組血清BNP、ET-1 和IL-6 含量降低更明顯（P＜0.05）。見表2。

表2 各組大鼠BNP、ET-1和IL-6含量比較（±s，n=10）

表2 各組大鼠BNP、ET-1和IL-6含量比較（±s，n=10）

注：與對照組比較，*P ＜0.05，**P ＜0.01；與模型組比較，△P ＜0.05；與假耳針治療組比較，#P ＜0.05。

組別對照組模型組假耳針治療組耳針治療組BNP（ng/mL）33.81±7.85 74.25±6.94**60.19±6.36*△43.92±8.13*△#ET-1（pg/mL）35.92±8.78 94.26±10.97**57.83±11.32*△46.28±9.75*△#IL-6（pg/mL）21.96±5.63 56.72±6.38**47.15±6.24*△34.08±5.95**△#

3 討論

心力衰竭是心臟肌肉受損或負荷過度，以至于無法輸送足夠的血液供給身體的需要，是大多數(shù)心臟疾病的最終階段［5-6］。慢性心力衰竭也稱慢性充血性心力衰竭，多由心瓣膜病以及高血壓、冠心病等引起。左心衰竭最常見，臨床表現(xiàn)有不同程度的呼吸困難、咳嗽、咳痰、咯血、肺部濕性啰音，乏力、疲倦、頭昏、心慌，尿少和腎功能損害等。右心衰竭臨床表現(xiàn)有消化道癥狀如腹脹、食欲不振、惡心、嘔吐，呼吸困難，水腫，頸靜脈充盈、怒張，肝腫大等。且心力衰竭患者多有心臟擴大［7］。中醫(yī)學認為［8-10］，由心陽虧虛引起者，表現(xiàn)為胸悶氣短、心悸、口唇紫紺、面色蒼白、汗出肢冷、倦怠乏力、舌淡胖、脈沉細或結(jié)代，治宜溫補心陽；由心陰虧虛引起者，表現(xiàn)為胸悶、心悸不寧、五心煩熱、少寐多夢、頭暈目眩、口干、面頰烘熱、舌紅少津、脈細數(shù)或結(jié)代，治宜滋陰養(yǎng)心；由心血瘀阻引起者，表現(xiàn)為心悸怔忡、胸悶心痛、面唇紫暗、舌紫暗或有瘀斑、脈細澀或結(jié)代，治宜活血化瘀；因水氣凌心引起者，表現(xiàn)為心悸怔忡、胸悶脘痞、咳吐痰涎、惡心嘔吐、面浮足腫、不能平臥、尿少、苔白膩或白滑、脈弦滑、治宜溫陽利水。

《靈樞·口問》曰：“耳者，宗脈之所聚也”“五臟六腑，十二經(jīng)脈有絡于耳者”，故耳與五臟六腑均有關系。本研究選取治療慢性心力衰竭的常用耳穴“心”“肺”“腎”“神門”，以達到平衡心之陰陽，調(diào)和心之氣血之功。

臨床通常通過血常規(guī)檢查、尿素氮、肌酸酐、電解質(zhì)、血清蛋白、血糖、肝功能、尿液檢查及腦鈉肽（BNP）來協(xié)助診斷心力衰竭［11］。使用超聲心動圖檢測心功能，可實時地觀察心臟的構造及收縮功能，清楚地辨別是否有心室擴大、心肌肥厚、心肌收縮異?；蛐陌ぜ膊?，也可計算出左心室射出分率（LVEF）來評估心臟的收縮功能［12-13］。當各種導致心室內(nèi)壓力升高時，該壓力便牽張心肌細胞使其分泌BNP。理論上，BNP 的測定可判斷患者有無心室內(nèi)壓力的升高［14］。內(nèi)皮素-1（ET-1）可促進心肌細胞和成纖維細胞的病理性增殖，使膠原纖維分泌增加，并在心肌間質(zhì)和血管周圍沉積，使血管壁增厚、管腔狹窄，心肌細胞可被伸入的膠原分隔，細胞間連接的網(wǎng)絡增粗變密，引起室壁順應性下降，舒張、收縮功能均受損［15］。慢性心力衰竭患者心肌細胞存在嚴重的炎癥反應，而在心衰的眾多炎癥遞質(zhì)中，IL-6 是最重要的物質(zhì)之一，參與CHF 的病理、生理進程。

本研究對實驗大鼠進行不同方法處理與治療，與模型組比較，假耳針治療組和耳針治療組血清BNP、ET-1 和IL-6 含量降低（P＜0.05）；與假耳針治療組比較，耳針治療組血清BNP、ET-1 和IL-6 含量降低更明顯（P＜0.05）。結(jié)果表明，耳針治療能夠抑制BNP、ET-1 受體表達和炎癥因子IL-6 等多途徑抑制心肌纖維化，保護心功能。但本研究也存在一定的局限性，由于納入本實驗的相關數(shù)據(jù)偏少，未能很好地控制影響因素，希望今后多進行相關的研究予以彌補。