曾妍

【摘要】 目的：分析陰道鏡活檢、細胞增殖核抗原67（Ki-67）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、牛嗅素4（OLFM4）在子宮頸癌與癌前病變中的診斷價值。方法：回顧性分析2019年1月-2021年1月湖北六七二中西醫(yī)結(jié)合骨科醫(yī)院收治的278例子宮頸病變患者的臨床資料，均經(jīng)陰道鏡活檢，并采用免疫組織化學SP法檢測Ki-67、VEGF、OLFM4在不同子宮頸病變患者中的表達，以術(shù)后組織病理檢查為金標準，分析陰道鏡活檢、Ki-67、VEGF、OLFM4診斷子宮頸病變的價值。結(jié)果：組織病理結(jié)果顯示，278例宮頸病變患者中，慢性子宮頸炎72例，CINⅠ 46例，CINⅡ 60例，CINⅢ 40例，子宮頸癌60例。與組織病理結(jié)果對照，陰道鏡活檢診斷慢性子宮頸炎的符合率為95.83%;診斷CINⅠ的符合率為71.74%;診斷CINⅡ的符合率為75.00%;診斷CINⅢ的符合率為72.50%;診斷子宮頸癌的符合率為86.67%。Ki-67、VEGF、OLFM4的陽性表達率均隨病變級別的升高而升高，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。Ki-67、VEGF、OLFM4在子宮頸癌中的陽性表達率均高于慢性子宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結(jié)論：陰道鏡活檢、Ki-67、VEGF、OLFM4診斷子宮頸癌與癌前病變具有一定價值，可作為篩查子宮頸癌的輔助方法，值得臨床推廣應用。

【關(guān)鍵詞】 子宮頸癌 癌前病變 陰道鏡活檢 細胞增殖核抗原67 血管內(nèi)皮生長因子 牛嗅素4

Diagnostic Value of Colposcopy Biopsy， Ki-67， VEGF and OLFM4 in Cervical Cancer and Precancerous Lesions/ZENG Yan. //Medical Innovation of China， 2022， 19（10）： -127

[Abstract] Objective： To analyze the diagnostic value of colposcopy biopsy， cell proliferation antigen 67

（Ki-67）， vascular endothelial growth factor （VEGF） and bovine OLFM4 （OLFM4） in cervical cancer and precancerous lesions. Method： The clinical data of 278 patients with cervical lesions treated in Hubei 672 Orthopaedic Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine from January 2019 to January 2021 were retrospectively analyzed. All of them were biopsied by colposcopy， and the expressions of Ki-67， VEGF and OLFM4 in patients with different cervical lesions were detected by immunohistochemical SP method. The value of colposcopy biopsy， Ki-67， VEGF and OLFM4 in the diagnosis of cervical lesions was analyzed using postoperative histopathological examination as the gold standard. Result： Histopathological results showed that among the 278 patients with cervical lesions， there were 72 patients with chronic cervicitis， 46 patients with CINⅠ， 60 patients with CINⅡ， 40 patients with CINⅢ， and 60 patients with cervical cancer. Compared with histopathological results， the coincidence rate of chronic cervicitis diagnosed by colposcopy biopsy was 95.83%; the coincidence rate of CINⅠ diagnosis was 71.74%; the coincidence rate of CINⅡ diagnosis was 75.00%; the coincidence rate of CINⅢ diagnosis was 72.50%; the coincidence rate of cervical cancer diognosis was 86.67%. The positive expression rates of Ki-67， VEGF and OLFM4 increased with the increase of lesion grade， the differences were statistically significant （P<0.05）. The positive expression rates of Ki-67， VEGF and OLFM4 in cervical cancer were higher than those in chronic cervicitis， CINⅠ， CINⅡ and CINⅢ， with statistical significance （P<0.05）. Conclusion： Colposcopy biopsy， Ki-67， VEGF and OLFM4 have certain value in the diagnosis of cervical cancer and precancerous lesions， and can be used as an auxiliary method for cervical cancer screening， which is worthy of clinical application.

[Key words] Cervical cancer Precancerous lesion Colposcopy biopsy Proliferating cell nuclear antigen 67 Vascular endothelial growth factor Olfactomedin 4

First-author’s address： Hubei 672 Orthopaedics Hospital of Integrated Chinese and Western Medicine， Wuhan 430000， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2022.10.029

子宮頸病變是婦科常見病，包括子宮頸炎、子宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）及子宮頸癌等，其中子宮頸癌是婦科常見惡性腫瘤，近年來其發(fā)病率上升，且年輕化，在女性惡性腫瘤中排第2位，僅次于乳腺癌[1]。據(jù)統(tǒng)計，全球每年子宮頸癌發(fā)病率為45萬，我國每年新增病例約10萬[2]。而CIN是癌前病變階段，因此及時干預可降低子宮頸癌風險[3]。臨床常采用陰道鏡檢查，對子宮頸癌及癌前病變的早診斷及治療與預后有一定價值。但其對操作者要求較高，且無法取得子宮頸管內(nèi)病變組織，從而限制了其準確性，導致誤診[4]。近年來生物標記物逐漸用于子宮頸癌與癌前病變篩查中，抗原67（Ki-67）是核抗原蛋白，常用于輔助子宮頸癌及其癌變前的早期診斷[5]。血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）能促進淋巴管新生，對CIN臨床治療、預后有一定價值[6]。牛嗅素4（OLFM4）是抗細胞凋亡的糖蛋白，參與癌細胞黏附和轉(zhuǎn)移[7]。鑒于臨床采用陰道鏡活檢聯(lián)合Ki-67、VEGF、OLFM4診斷子宮頸癌與癌前病變的診斷價值相關(guān)報道較少，因此本研究進一步分析。旨在提高子宮頸病變檢出率?，F(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2019年1月-2021年1月湖北六七二中西醫(yī)結(jié)合骨科醫(yī)院收治的278例子宮頸病變患者的臨床資料，年齡30～65歲，平均（38.46±6.22）歲。（1）納入標準：①經(jīng)術(shù)后組織病理檢查確診;②有性生活史;③臨床資料完整。（2）排除標準：①合并其他惡性腫瘤者;②合并器質(zhì)性疾病者;③盆腔放療等相關(guān)病史。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理學委員會批準

1.2 方法

1.2.1 組織病理學檢測 行常規(guī)病理組織制片，即于移行帶3、6、9、12點依次取材，同時應用甲醛溶液10%固定選取的子宮頸組織，通過常規(guī)的包埋法將其制備成蠟塊同時送至病理科檢測。診斷標準，子宮頸癌：具有鱗狀上皮分化（即角化），細胞間橋，而無腺體分化或者黏液分泌;癌前病變：慢性子宮頸炎，表現(xiàn)為白細胞、淋巴細胞浸潤;CINⅠ，輕度非典型增生，細胞異型性輕，排列不整齊，異常增生的子宮頸細胞僅限于上皮層的下1/3;CINⅡ，中度上皮內(nèi)瘤變，中度非典型增生，細胞異型性明顯，排列較紊亂，異常增生的子宮頸細胞占據(jù)上皮層的下2/3;CINⅢ，高度上皮內(nèi)瘤變，重度非典型增生，細胞異型性顯著，失去極性，異常增生的子宮頸細胞擴展至上皮層的下2/3以上。

1.2.2 陰道鏡活檢 陰道鏡采用XD-6000Y型。避開月經(jīng)期，窺器放入陰道后呈半開狀，暴露陰道穹窿，用棉球擦去分泌物，調(diào)整焦距，用5%醋酸的棉球浸濕子宮頸，反應3 min后用5%復方碘液棉球浸濕子宮頸，對病變面積較大者采用Leep術(shù)活檢;對可疑部位行3、6、9、12點作活檢。進行組織學檢查。陰道鏡圖像診斷：（1）正常轉(zhuǎn)化區(qū)，柱狀上皮小島，腺開口和納氏腺囊腫;（2）子宮頸濕疣;（3）醋白上皮;（4）白嵌二聯(lián)征;（5）白嵌三聯(lián)征;（6）子宮頸癌：移行區(qū)有醋白上皮、粗鑲嵌、粗點狀血管及其他異型血管同時出現(xiàn)或單獨出現(xiàn)并可伴有豬油狀、微小腦回狀上皮改變;（7）陰道鏡檢查不滿意：移行帶上移至子宮頸管內(nèi)或因接觸性出血嚴重無法檢查。（1）為陰道鏡陰性診斷，（2）～（7）為陽性診斷。其中陰道鏡陰性診斷為慢性子宮頸炎;子宮頸濕疣、醋白，上皮組織學預測為CINⅠ;二聯(lián)征組織學預測為CINⅡ;三聯(lián)征組織學預測為CINⅢ;子宮頸癌組織學預測為子宮頸癌。

1.2.3 Ki-67、VEGF、OLFM4檢測 鼠抗人Ki-67單克隆抗體及鼠抗人VEGF單克隆抗體均為福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司產(chǎn)品。OLFM4兔抗人多克隆抗體為英國Abcam公司。均采用免疫組化SP法染色。免疫組織化染色：切片脫蠟，梯度酒精水化;行微波修復。將切片放入含檸檬酸鹽緩沖液的容器內(nèi)，微波爐加熱13 min，溫度98 ℃取出容器，自然冷卻，PBS沖洗3 min×3次;阻斷內(nèi)源性過氧化物酶：滴加3%過氧化氫，室溫下孵育10 min，PBS沖洗3 min×3次;滴加非免疫動物血清，室溫下孵育10 min。除去血清，滴加即用型Ki-67的一抗，4 ℃孵育過夜，PBS沖洗3 min×3次;滴加生物素標記的二抗，室溫下孵育10 min，PBS沖洗

3 min×3次;滴加過氧化物酶溶液，室溫下孵育10 min，PBS沖洗3 min×3次;滴加DAB溶液顯色;蘇木素復染、脫水，二甲苯透明，中性樹脂封片。結(jié)果判讀：Ki-67、VEGF、OLFM4陽性產(chǎn)物為棕黃色顆粒，表達強度按陽性細胞比例及分布情況判讀：陰性（-）：陽性細胞數(shù)<5%;弱陽性（+）：陽性細胞數(shù)為5%～24%;中度陽性（++）：陽性細胞數(shù)為25%～50%;強陽性（+++）：陽性細胞數(shù)>50%。

1.3 觀察指標 以術(shù)后組織病理檢查為金標準，分析陰道鏡活檢對慢性子宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及子宮頸癌診斷情況;并統(tǒng)計Ki-67、VEGF、OLFM4在慢性子宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及子宮頸癌中的陽性表達率。

1.4 統(tǒng)計學處理 選用統(tǒng)計學軟件SPSS 20.0對分析和處理，計數(shù)資料以率（%）表示，行字2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 陰道鏡活檢與組織病理診斷對照 術(shù)后組織病理結(jié)果顯示，278例子宮頸病變患者中，慢性子宮頸炎72例，CINⅠ 46例，CINⅡ 60例，CINⅢ 40例，子宮頸癌60例。其中陰道鏡活檢診斷慢性子宮頸炎的符合率為95.83%;診斷CINⅠ的符合率為71.74%;診斷CINⅡ的符合率為75.00%;診斷CINⅢ的符合率為72.50%;診斷子宮頸癌的符合率為86.67%，見表1。

2.2 Ki-67在子宮頸病變中的表達 Ki-67的陽性表達率隨病變級別的升高均有所升高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;Ki-67在子宮頸癌中的陽性表達率高于慢性子宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表2。

2.3 VEGF在子宮頸病變中的表達 VEGF的陽性表達率隨病變級別的升高均有所升高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;VEGF在子宮頸癌中的陽性表達率高于慢性子宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表3。

2.4 OLFM4在子宮頸病變中的表達 OLFM4的陽性表達率隨病變級別的升高均有所升高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;OLFM4在子宮頸癌中的陽性表達率高于慢性子宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表4。

3 討論

目前認為，CINⅡ、CINⅢ患者與高危型HPV密切相關(guān)，CINⅠ病理形態(tài)和陰道鏡下改變與HPV感染無明顯區(qū)別[8]。有學者認為，CINⅡ、Ⅲ是癌前病變，CINⅠ僅是自我限制的性傳播感染的形態(tài)[9]。因此子宮頸癌可早期預防。但由于早期子宮頸癌很難用肉眼識別，常規(guī)子宮頸活檢陽性率不高。而電子陰道鏡分辨率較高，能夠觀察子宮頸柱狀鱗狀上皮邊緣區(qū)域，觀察子宮頸上皮及血管較小病變[10]。同時在檢查中使用醋酸溶液可定位疑病變部位，從而提高診斷準確性和可靠性，且道鏡可檢測到肉眼無法檢測到的亞臨床病變，從而大大降低了漏診率[11]。本研究顯示，陰道鏡活檢診斷慢性子宮頸炎的符合率為95.83%;診斷CINⅠ的符合率為71.74%;診斷CINⅡ的符合率為75.00%;診斷CINⅢ的符合率為72.50%;診斷子宮頸癌的符合率為86.67%，與羅古坡等[12]研究相似，提示陰道鏡活檢診斷子宮頸癌與癌前病變中具有一定價值，但均具有一定誤診率，這是由于活檢不能替代子宮頸錐術(shù)后的組織病理診斷，且陰道鏡子宮頸管內(nèi)的病灶難以暴露，因此存在一定誤診率。

研究表明，Ki-67與惡性腫瘤發(fā)展、轉(zhuǎn)移、預后具相關(guān)性[13-14]。Ki-67是細胞分裂和增殖的蛋白，可反映細胞的增殖活性及異常增殖、惡性病變、新生血管等病理過程的程度，其高表達表明腫瘤細胞增殖活躍，是腫瘤增殖活性分級的指標[15]。而惡性腫瘤生長和轉(zhuǎn)移依賴于血管生成，VEGF是腫瘤血管生成過程中最特異的促血管生成因子，能刺激內(nèi)皮細胞的生長和血管的形成[16-18]。同時新生血管結(jié)構(gòu)不完善和血管通透性的增加可導致細胞空間的擴大，致使癌細胞進入[19]。OLFM4是糖基化細胞外基質(zhì)蛋白，分通過與凝集素和鈣粘蛋白相互作用調(diào)節(jié)細胞黏附，調(diào)控細胞周期，促進細胞增殖，與腫瘤組織的分化相關(guān)[20]。本研究顯示，Ki-67、VEGF、OLFM4的陽性表達率均隨病變級別的升高而升高，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），提示Ki-67、VEGF、OLFM4陽性情況隨子宮頸病變進展逐漸增高，能夠反映正常子宮頸、CIN組織及子宮頸細胞增殖和分化，可成為高危人群篩查的指標。但由于本研究納入例數(shù)較少，可影響結(jié)論，下一步可擴大樣本量進一步論證，并分析陰道鏡活檢聯(lián)合Ki-67、VEGF、OLFM4對子宮頸病變的診斷價值，為臨床提供參考。

綜上所述，陰道鏡活檢、Ki-67、VEGF、OLFM4診斷子宮頸癌與癌前病變具有一定價值，可成為高危人群篩查的指標，值得臨床推廣應用。

參考文獻

[1]孫曉瑩，孟斐.TCT聯(lián)合HPV早期發(fā)現(xiàn)宮頸癌及癌前病變的應用價值[J].中國急救醫(yī)學，2018，38（z2）：293.

[2]羅古坡，曾璽，曹寒雨，等.HPV L1/PD-L1檢測聯(lián)合陰道鏡檢查在宮頸癌前病變及宮頸癌中的臨床意義[J].四川大學學報（醫(yī)學版），2021，52（3）：516.

[3] MANDI A，STEVANOVI N，GUTIC B，et al.Histopathological correlation of cervical biopsy and tissue after excision in patients with precancerous lesions of the cervix[J].Arch Gynecol Obstet，2021，20（3）：1-8.

[4] YAN L，LI S，GUO Y，et al.Multi-state colposcopy image fusion for cervical precancerous lesion diagnosis using BF-CNN[J].Biomedical Signal Processing and Control，2021，68（11）：102700.

[5]宋明澤，程一鳴，李剛，等.P16/Ki-67雙染檢測技術(shù)在宮頸癌及癌前病變篩查中的價值[J].國際腫瘤學雜志，2020，47（11）：675-681.

[6]周慶紅，洛若愚，周曉紅，等.Survivin、bFGF、VEGF在宮頸癌組織中的表達及其與臨床病理特征的關(guān)系研究[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學進展，2018，18（18）：77-80，172.

[7]王小麗，蒲麗梅，楊軍，等.嗅覺介導素4與醌氧化還原酶在宮頸癌組織中的表達及意義[J].中國婦幼衛(wèi)生雜志，2018，9（2）：10-13，18.

[8]劉小艷，安瑩花，王娜，等.腫瘤標志物、抑癌基因P16和HPV-L1蛋白檢查在宮頸癌和癌前病變診斷中的意義[J].中國腫瘤臨床與康復，2020，27（4）：70-73.

[9] EFTHIMIOS D，VASILEIOS S，ANTONIOS G，et al.Genetic variations in the SULF1 gene alter the risk of cervical cancer and precancerous lesions[J].Oncol Lett，2018，16（3）：3833-3841.

[10]李麗娟，張秋菊，樊素珍，等.TCT聯(lián)合HR-HPV檢測在宮頸癌及癌前病變早期篩查中的應用價值[J].癌癥進展，2019，17（21）：95-97，127.

[11]陳靜，陳煜岊，弋文娟，等.陰道鏡子宮頸活組織檢查對宮頸癌前病變診斷的準確性及子子宮頸癌漏診影響因素分析[J].腫瘤研究與臨床，2020，32（8）：579-583.

[12]羅古坡，曾璽，曹寒雨，等.HPV L1/PD-L1檢測聯(lián)合陰道鏡檢查在宮頸癌前病變及宮頸癌中的臨床意義[J].四川大學學報（醫(yī)學版），2021，52（3）：516.

[13]許淑霞，林建松，詹燕美，等.p16/Ki-67免疫細胞化學雙染法對宮頸病變的篩查價值[J].中華病理學雜志，2018，47（3）：207-208.

[14]武麗蕊，王蘭朋，李紅霞，等.HPV DNA分型聯(lián)合KRAS、Ki-67檢測對宮頸癌的診斷價值[J].癌癥進展，2020，18（3）：265-267，313.

[15]劉峰，張春霞，張莉，等.宮頸癌及癌前病變中Ki-67、P16蛋白的表達差異及診斷價值[J].中國臨床醫(yī)學，2018，25（2）：278-281.

[16]蘇文芳.GOLPH3和VEGF在宮頸癌組織中的表達及臨床意義[J].蚌埠醫(yī)學院學報，2021，46（2）：169-172.

[17]劉潤麗.吉西他濱聯(lián)合依立替康對宮頸癌患者血管生成與侵襲能力的影響[J].中國醫(yī)學創(chuàng)新，2020，17（15）：50-53.

[18]朱悅，任玲，郝麗惠.VEGF、Rsf-1在宮頸癌組織中的表達及其臨床價值[J].中國婦幼保健，2020，35（6）：1138-1141.

[19]于峰，韓超，韓麗娜，等.HIF-1α、VEGF及Bcl-2在宮頸癌組織中的表達及其意義[J].醫(yī)學臨床研究，2018，35（9）：1696-1698.

[20]王靜，杜欣，馮同富，等.陰道鏡活檢聯(lián)合P16、OLFM4診斷宮頸上皮內(nèi)瘤變的價值觀察[J].中國計劃生育學雜志，2019，27（9）：1225-1228.

（收稿日期：2021-07-20） （本文編輯：張爽）