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      早期T2DM患者血清miR-142、miR-197表達(dá)與頸動脈內(nèi)-中膜厚度的關(guān)系分析

      2022-05-10 20:24:31柳越
      中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新 2022年10期
      關(guān)鍵詞:頸動脈引物厚度

      柳越

      【摘要】 目的:研究早期T2DM患者血清miR-142、miR-197表達(dá)與頸動脈內(nèi)-中膜厚度(CIMT)的關(guān)系。方法:選取2019年1月-2021年6月朝陽市第二醫(yī)院收治的376例早期T2DM患者,將其按照CIMT的差異分作CIMT增厚組(CIMT≥0.9 mm)172例及CIMT正常組(CIMT<0.9 mm)204例。另取同期健康體檢者100例作為對照組。采集所有受試者的臨床資料,采用全自動生化分析儀檢測糖脂代謝指標(biāo),以實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qRT-PCR)檢測血清miR-142、miR-197表達(dá)水平。借助高頻彩色多普勒超聲技術(shù)完成CIMT的測定。以Spearman相關(guān)性分析明確早期T2DM患者CIMT與相關(guān)指標(biāo)的關(guān)系。結(jié)果:CIMT增厚組及CIMT正常組體質(zhì)量指數(shù)(BMI)、空腹血糖(FPG)、糖化血紅蛋白(HbA1c)及空腹胰島素(FINS)水平均高于對照組,且CIMT增厚組均高于CIMT正常組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。CIMT增厚組血清miR-142、miR-197表達(dá)均低于CIMT正常組及對照組,且CIMT正常組均低于對照組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。經(jīng)Spearman相關(guān)性分析可得,早期T2DM患者CIMT與FPG、HbA1c水平呈正相關(guān),與血清miR-142、miR-197表達(dá)水平均呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論:早期T2DM患者血清miR-142、miR-197均呈異常低表達(dá),且和CIMT密切相關(guān),即隨著上述兩項血清指標(biāo)的表達(dá)下降,CIMT增加。

      【關(guān)鍵詞】 2型糖尿病 miR-142 miR-197 頸動脈內(nèi)-中膜厚度

      Relationship between the Expression of Serum miR-142 and miR-197 and Carotid Intima-media Thickness in Early T2DM Patients/LIU Yue. //Medical Innovation of China, 2022, 19(10): -138

      [Abstract] Objective: To investigate the relationship between the expression of serum miR-142 and miR-197 and carotid intima-media thickness (CIMT) in early T2DM patients. Method: A total of 376 patients with early T2DM admitted to the Second Hospital of Chaoyang City from January 2019 to June 2021 were enrolled in this study. According to CIMT differences, they were divided into the CIMT thickening group (CIMT ≥0.9 mm)

      172 patients and in the CIMT normal group (CIMT <0.9 mm) 204 patients. Another 100 healthy subjects were selected as the control group. Clinical data of all subjects were collected, glucose and lipid metabolism indexes were detected by automatic biochemical analyzer, and serum miR-142 and miR-197 expression levels were detected by real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction (qRT-PCR). The CIMT was measured by high frequency color doppler ultrasonography. Spearman correlation analysis was used to determine the relationship between CIMT and related indicators in early T2DM patients. Result: Body mass index (BMI), fasting blood glucose (FPG), HbA1c and fasting insulin (FINS) levels in the CIMT thickening group and the CIMT normal group were higher than those in the control group, and those in the CIMT thickening group were higher than those in the CIMT normal group, the differences were statistically significant (P<0.05). The expressions of serum miR-142 and miR-197 in the CIMT thickening group were lower than those in the CIMT normal group and the control group, and those in the normal CIMT group were lower than those in the control group, the differences were statistically significant (P<0.05). Spearman correlation analysis showed that CIMT were positively correlated with the levels of FPG and HbA1c in early T2DM patients, and negatively correlated with the levels of miR-142 and miR-197 in serum (P<0.05). Conclusion: Serum miR-142 and miR-197 are abnormally low in early T2DM patients, and are closely related to CIMT, that is, CIMT increases with the decrease of the expression of the above two serum indicators.

      [Key words] Type 2 diabetes mellitus miR-142 miR-197 Carotid intima-media thickness

      First-author’s address: The Second Hospital of Chaoyang City, Liaoning Province, Chaoyang 122000, China

      doi:10.3969/j.issn.1674-4985.2022.10.032

      頸動脈內(nèi)-中膜厚度(CIMT)是臨床上廣泛用以評估早期動脈粥樣硬化的可靠指標(biāo),且和2型糖尿病(T2DM)患者的動脈受損程度、范圍有關(guān)[1-3]。微小RNA(miRNA)是近年來發(fā)現(xiàn)的一類長度約20~25個核苷酸的非編碼RNA,其廣泛存在于真核生物中,可通過和靶基因mRNA序列特異性結(jié)合,繼而調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá),進(jìn)一步在細(xì)胞增殖、分化及凋亡等過程中起著至關(guān)重要的作用[4]。迄今為止,臨床上關(guān)于早期T2DM患者血清miR-142、miR-197表達(dá)的研究較為少見,且上述兩項指標(biāo)表達(dá)和早期T2DM患者CIMT關(guān)系的研究更是未見報道。鑒于此,本文通過研究早期T2DM患者血清miR-142、miR-197表達(dá)與CIMT的關(guān)系,以期為臨床T2DM的防治提供新的靶點及思路,現(xiàn)報道如下。

      1 資料與方法

      1.1 一般資料 回顧性分析2019年1月-2021年6月朝陽市第二醫(yī)院收治的376例早期(確診時間<3個月)T2DM患者的臨床資料,另取同期健康體檢者100例為對照組。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)符合文獻(xiàn)[5]中T2DM診斷標(biāo)準(zhǔn);(2)均為成年人,男女不限;(3)T2DM患者入組前尚未接受相關(guān)降糖治療;(4)T2DM患者空腹血糖水平在6.1~6.9 mmol/L,餐后2 h血糖水平為7.8~11.1 mmol/L;(5)資料不完整。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)心、肝、肺等臟器發(fā)生嚴(yán)重病變;(2)合并嚴(yán)重感染性疾病、免疫性疾病或惡性腫瘤;(3)合并糖尿病并發(fā)癥;(4)合并意識障礙或精神疾病。按照CIMT的差異將T2DM患者分為CIMT增厚組(CIMT≥0.9 mm)172例及CIMT正常組(CIMT<0.9 mm)204例。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會獲悉并核準(zhǔn),入組人員均于知情同意書上簽名。

      1.2 方法 (1)臨床資料采集,主要是通過醫(yī)院病歷系統(tǒng)完成所有受試者的臨床資料統(tǒng)計、記錄。(2)實驗室生化指標(biāo)檢查,包括空腹血糖(FPG)、糖化血紅蛋白(HbA1c)、空腹胰島素、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(DHL-C)等。FPG的檢測通過己糖激酶法實現(xiàn);HbA1c通過高效液相色譜法檢測;空腹胰島素(FINS)通過電化學(xué)發(fā)光法檢測;脂代謝指標(biāo)均通過酶法檢測,使用儀器為美國貝克曼庫爾特BECKMAN COULTER AU5800。(3)血清miR-142、miR-197表達(dá)檢測,分別采集所有受試者晨起空腹靜脈血4 mL,以10 cm為離心半徑,以3 500 r/min為離心速率,低溫條件下離心處理10 min。隨后根據(jù)miRNA提取試劑盒說明書完成miRNA的提取,根據(jù)逆轉(zhuǎn)錄試劑盒對所提取的miRNA實施逆轉(zhuǎn)錄,獲取cDNA。以miScript SYBR Green PCR Kit檢測血清miR-142、miR-197相對表達(dá)水平。其中miRNA提取試劑盒選用天根生化科技有限公司產(chǎn)品;逆轉(zhuǎn)錄試劑盒選用美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司產(chǎn)品;miScript SYBR Green PCR Kit選用北京東璞泰和科技有限責(zé)任公司產(chǎn)品,具體操作以試劑盒說明書為準(zhǔn)。反應(yīng)體系均為20 μL,反應(yīng)條件如下:95 ℃下30 s,60 ℃下30 s,75 ℃下

      10 s,共35個循環(huán)。miR-142引物序列如下:上游引物:5’-GCACTCGAGGAAAGGCCGGGATAAACCTA-3’,下游引物:5’-ATGCGGCCGCACACACAGCAAGAGGGGAG-3’。miR-197引物序列如下:上游引物:5’-CCGACACGGCCATCTCTCC-3’,下游引物:5’-GGCCATGCTGGGTGGAGAAG-3’。

      1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 22.0軟件對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析,計量資料用(x±s)表示,比較采用t檢驗,多組間對比采用單因素方差分析;計數(shù)資料以率(%)表示,比較采用字2檢驗;采用Spearman相關(guān)性分析明確早期T2DM患者CIMT與相關(guān)指標(biāo)的關(guān)系。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

      2 結(jié)果

      2.1 三組一般資料及實驗室檢查指標(biāo)比較 CIMT增厚組及CIMT正常組BMI、FPG、HbA1c及FINS水平均高于對照組,且CIMT增厚組均高于CIMT正常組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表1。

      2.2 三組血清miR-142、miR-197水平比較 CIMT增厚組血清miR-142、miR-197表達(dá)均低于CIMT正常組及對照組,且CIMT正常組均低于對照組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表2。

      2.3 早期T2DM患者CIMT與相關(guān)指標(biāo)的相關(guān)性分析 經(jīng)Spearman相關(guān)性分析可得,早期T2DM患者CIMT與FPG、HbA1c水平呈正相關(guān),與血清miR-142、miR-197表達(dá)水平均呈負(fù)相關(guān)(P<0.05),見表3。

      3 討論

      CIMT是公認(rèn)的動脈粥樣硬化早期可靠標(biāo)志物之一,和心血管事件的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān),因此及時有效評估T2DM患者的CIMT,對診斷及控制T2DM患者大血管病變具有重要的意義。有研究發(fā)現(xiàn)miRNA表達(dá)異??稍谝欢ǔ潭壬戏从硻C體的糖脂代謝狀態(tài),而miR-142與miR-197均是miRNAs家族重要成員之一,研究兩者和T2DM患者CIMT關(guān)系具有一定的價值[6-8]。

      本文結(jié)果發(fā)現(xiàn),CIMT增厚組及CIMT正常組BMI、FPG、HbA1c及FINS水平均高于對照組,且CIMT增厚組均高于CIMT正常組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。且早期T2DM患者CIMT與FPG、HbA1c均呈正相關(guān)。這在既往相關(guān)研究中均得以佐證,反映了上述指標(biāo)的異常表達(dá)可能參與了T2DM患者動脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展過程[9-11]。究其原因,隨著FPG、HbA1c水平的升高,機體處于高血糖狀態(tài),可能進(jìn)一步加劇患者的胰島素抵抗水平,繼而通過抑制蛋白激酶B途徑實現(xiàn)對血管舒張功能的抑制,同時可對ROS信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑起到抑制作用,繼而抑制糖的利用及轉(zhuǎn)化,引起糖原的大量積累,最終導(dǎo)致血管系統(tǒng)出現(xiàn)損傷。CIMT增厚組血清miR-142、miR-197表達(dá)均低于CIMT正常組及對照組,且CIMT正常組均低于對照組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。早期T2DM患者CIMT與FPG、HbA1c水平呈正相關(guān),與血清miR-142、miR-197表達(dá)水平均呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。這提示了血清miR-142、miR-197表達(dá)和早期T2DM患者CIMT密切相關(guān),即血清miR-142、miR-197表達(dá)異常可能在動脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展過程中起著至關(guān)重要的作用??紤]原因,miR-142主要定位在人17號染色體上,其可能通過調(diào)控超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)及血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附因子等表達(dá),繼而影響平滑肌細(xì)胞增殖,間接調(diào)控斑塊的形成[12-14]。換言之,當(dāng)miR-142表達(dá)下降時,其對炎癥反應(yīng)的調(diào)控效果降低,并使調(diào)控平滑肌細(xì)胞的增殖效果減弱,最終加速了動脈粥樣硬化的形成及進(jìn)展。miR-197可能對T2DM患者機體內(nèi)的炎癥反應(yīng)調(diào)控密切相關(guān),其中T2DM患者的持續(xù)高糖狀態(tài)極易引起炎癥及內(nèi)皮細(xì)胞功能的障礙,而miR-197的過表達(dá)可通過抑制TLR4基因,實現(xiàn)對NF-kB/NLRP3通路的調(diào)控,進(jìn)一步減輕T2DM患者機體內(nèi)的炎癥反應(yīng)[15-17]。當(dāng)miR-197表達(dá)下降時,其上述抑制炎癥反應(yīng)的作用隨之減弱,繼而促進(jìn)了動脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展[18-20]。

      綜上所述,早期T2DM患者血清miR-142、miR-197均呈異常低表達(dá),且和CIMT密切相關(guān),即隨著上述兩項血清指標(biāo)的表達(dá)下降,CIMT增加。

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      (收稿日期:2021-10-11) (本文編輯:張明瀾)

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