當歸揮發(fā)油及其主要成分的抗菌活性研究

楊海雁，于喆源，班小軍

（張掖市質量檢驗檢測研究院，甘肅張掖 734000）

當歸又名干歸、山蘄、白蘄和文無，為傘形科多年生草本植物。根圓柱狀，黃棕色，有濃郁香氣，綠白色或帶紫色[1]。當歸以根入藥，藥性甘、辛、溫，具有補血活血、調經(jīng)止痛、潤燥滑腸等功效[2]。在我國現(xiàn)存最早的藥學著作《神農(nóng)本草經(jīng)》中就有關于當歸的記載，至今仍在臨床廣泛應用，尤其在婦科用藥中有“十方九歸”之說，被稱為“婦科之圣藥”[3]。當歸中含有內酯類、生物堿類、有機酸類或酚類、氨基酸、微量元素、維生素以及中性揮發(fā)油等多種成分。當歸揮發(fā)油是當歸的主要有效成分之一，其中的化學成分按化學結構分類主要為苯酞類，其中藁本內酯占此類化合物總量的60%以上[4-5]。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

當歸，采于甘肅岷縣；當歸揮發(fā)油，自制；藁本內酯，98.5%，濟寧天之藍生物科技有限公司；胰蛋白胨大豆肉湯、伊紅美藍瓊脂、BP瓊脂基礎、營養(yǎng)瓊脂、孟加拉紅培養(yǎng)基，青島高科技工業(yè)園海博生物技術有限公司；阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基，北京陸橋技術股份有限公司。

大腸桿菌（ATCC25922）、阪崎腸桿菌（ATCC51329）、金黃色葡萄球菌（CMCC26003）、枯草芽孢桿菌（CMCC63501）、黑曲霉（CMCC98003）、釀酒酵母（ATCC9080），廣東省微生物菌種保藏中心，

KMD-1000揮發(fā)油裝置，北京科偉永興儀器有限公司；LDZX-50KBS高壓滅菌鍋，上海申安醫(yī)療器械廠；ZSP-SB78生化培養(yǎng)箱，上海齊欣科學儀器有限公司；ZSP-SB057電子天平（百分之一），上海舜宇恒平科學儀器有限公司；BSL-1500ⅡA2-X生物安全柜，濟南鑫貝西生物科技有限公司；10 μL接種環(huán)，上海晶安生物科技有限公司；DW-86L158冰箱，浙江捷盛低溫設備有限公司。

1.2 試驗方法

1.2.1 水蒸氣蒸餾法提取當歸揮發(fā)油

按照《中華人民共和國藥典》規(guī)定的揮發(fā)油提取方法：精密稱取當歸100 g，粉碎后過2號篩，加入蒸餾水約500 mL，靜置浸泡1 h；連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸5 h，至測定器中油量不再增加。得到淡黃色的揮發(fā)油，揮發(fā)油的含量為0.51%[4]。

1.2.2 抑菌性能試驗

溶液配制：當歸精油、藁本內酯分別用純化水配制成濃度為0 mg/mL、0.2 mg/mL、0.5 mg/mL、0.8 mg/mL、1.0 mg/mL、2.0 mg/mL、3.0 mg/mL和5.0 mg/mL的溶液。菌種復活：將實驗室-80 ℃冷凍保存的2代磁珠菌株劃胰蛋白胨瓊脂斜面，37 ℃培養(yǎng)24 h。菌懸液制備：用一次性接種環(huán)從斜面刮取適量菌落，放入生理鹽水中制成1×102～1×103CFU/mL菌懸液。

將0.45 μm的無菌濾膜浸泡在上述體積分數(shù)的當歸精油、藁本內酯溶液中6 h；將伊紅美藍瓊脂培養(yǎng)基、阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基、BP瓊脂基礎培養(yǎng)基、孟加拉紅培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂按產(chǎn)品要求配制好，與當歸精油、藁本內酯溶液一起置于高壓滅菌鍋，121 ℃滅菌15 min；滅菌結束后，將上述培養(yǎng)基的溫度降至45 ℃左右，傾倒無菌平皿。

分別吸取6種菌懸液0.5 mL于選擇性培養(yǎng)基中，每種菌做兩個平行，用涂布棒涂開。將浸泡好的無菌濾膜取出，用無菌鑷子覆蓋在涂好菌液的培養(yǎng)基表面。將細菌放置在37 ℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，將真菌放置在28 ℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5 d，用游標卡尺測量抑菌圈的大小[6-7]。

2 結果與分析

2.1 當歸精油的抑菌能力

如表1所示，當歸精油對金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的最低抑菌濃度（MIC）為0.5 mg/mL，抑菌圈直徑分別為5.0 mm和4.1 mm；當濃度為2.0 mg/mL時，抑菌圈達到最大，直徑分別為13.5 mm和13.0 mm。對大腸桿菌、阪崎腸桿菌、黑曲霉、釀酒酵母的MIC為0.8 mg/mL，抑菌圈直徑分別為6.4 mm、6.1 mm、5.5 mm和6.0 mm；當濃度為4.0 mg/mL時抑菌圈達到最大，直徑分別為12.3 mm、11.8 mm、10.9 mm和11.5 mm。

表1 當歸精油抑菌圈大?。▎挝唬簃m）

2.2 藁本內酯的抑菌能力

如表2所示，藁本內酯對金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的MIC為0.8 mg/mL，抑菌圈直徑分別為4.7 mm和3.9 mm；當濃度為2.0 mg/mL時抑菌圈達到最大，直徑分別為12.4 mm和11.8 mm。對大腸桿菌、阪崎腸桿菌、黑曲霉、釀酒酵母的MIC為0.8 mg/mL，抑菌圈直徑分別為6.0 mm、5.8 mm、4.8 mm和5.7 mm；當濃度為4.0 mg/mL時抑菌圈達到最大，直徑分別為11.2 mm、10.8 mm、10.1 mm和10.5 mm。

表2 藁本內酯抑菌圈大小（單位：mm）

3 結論

當歸精油和藁本內酯對細菌（金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、大腸桿菌和阪崎腸桿菌）的抑制作用優(yōu)于對真菌（黑曲霉和釀酒酵母）的抑制作用，這可能是因為細菌細胞壁的主要成分是肽聚糖（由氨基酸和糖類聚合而成），而真菌細胞壁的主要成分是幾丁質（一種多糖聚合物），肽聚糖的分子量小于幾丁質，當歸精油和藁本內酯更容易滲透，通過破壞細胞壁的結構引起菌種死亡[8-11]。

當歸精油和藁本內酯對革蘭氏陽性菌（金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌）的抑制效果要優(yōu)于革蘭氏陰性菌（大腸桿菌、阪崎腸桿菌），可能是因為革蘭氏陰性菌的細胞壁外有一層膜，限制了疏水性物質在細胞壁脂多糖中的擴散，使得當歸精油和藁本內酯對細胞壁的破壞程度小于革蘭氏陽性菌[12-14]。

當歸精油和藁本內酯的對細菌和真菌的抑菌效果基本一致，由此可以推斷出藁本內酯在當歸精油抑菌性能中起重要作用。