血清微囊藻毒素-LR水平與原發(fā)性肝癌臨床病理特征的關(guān)系*

唐燕梅，農(nóng)清清△，趙惠柳，王佑新，黃杏蕾，蘇釗輝，何俊權(quán)，趙 娜

（1.廣西醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院環(huán)境衛(wèi)生學(xué)教研室，南寧 530021；2.廣西高校高發(fā)疾病預(yù)防與控制研究重點實驗室，南寧 530021；3.廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院檢驗科，南寧 530021）

原發(fā)性肝癌（primary liver cancer，PLC，以下簡稱肝癌）是我國最常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一，其中85%～90%為肝細(xì)胞肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC），而廣西是我國的肝癌高發(fā)地區(qū)之一，2010—2016 年廣西腫瘤登記點肝癌發(fā)病率和死亡率分別為41.79/10 萬、34.56/10 萬，均居惡性腫瘤發(fā)病順位和死亡順位第2 位[1]。目前我國肝癌的5 年總體生存率僅為15%，預(yù)后差，復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致患者長期生存率較低的主要原因[2-3]。原發(fā)性肝癌的發(fā)生與環(huán)境因素密切相關(guān)，微囊藻毒素（microcystins，MCs）長期暴露被認(rèn)為是除肝炎病毒和黃曲霉毒素以外的環(huán)境中導(dǎo)致肝癌的重要原因[4]。MCs是由富營養(yǎng)化水體中的銅綠微囊藻、水華魚腥藻等產(chǎn)生的一種環(huán)狀七肽肝毒素，有240余種亞型，其中微囊藻毒素-LR（MC-LR）是分布最廣且毒性最強(qiáng)的一種亞型[5]。有研究報道，血清MC-LR水平與肝癌患者TNM 分期及預(yù)后相關(guān)，但至今尚無一致結(jié)論[6-7]。本研究通過檢測原發(fā)性肝癌患者血清MCLR 水平，研究其與肝癌發(fā)病風(fēng)險、臨床病理特征之間的關(guān)系，以期為肝癌的預(yù)防和控制提供科學(xué)依據(jù)。

1 對象與方法

1.1 研究對象 收集2016年12月至2021年7月在廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院經(jīng)病理確診且臨床資料完整的初診未治的原發(fā)性肝癌患者405例作為肝癌組，其中男322 例，女83 例；年齡40～82 歲，平均（52.16±9.10）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）臨床和病理診斷符合2019 年原發(fā)性肝癌診療規(guī)范[8]；（2）初次入院，未經(jīng)過放、化療治療的原發(fā)性肝癌患者。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）放、化療后患者以及復(fù)發(fā)患者；（2）存在任何其他類型的腫瘤患者，包括肝血管瘤、轉(zhuǎn)移性肝癌以及任何其他癌癥病史的患者；（3）臨床資料不完整的患者。以同期體檢健康者411 例作為對照組，其中男325 例，女86 例，年齡40～79 歲，平均（52.36±8.99）歲。兩組性別、年齡構(gòu)成比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。所有研究對象在同一地區(qū)居住10年以上，均簽署知情同意書且經(jīng)廣西醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)倫理委員會審批。

1.2 研究方法

1.2.1 資料收集 收集所有研究對象的一般資料，包括性別、年齡、民族、吸煙、飲酒、食用魚生史、塘邊滲井水或溝塘水飲用史和腫瘤家族史。吸煙：每日吸煙量≥1 支，連續(xù)半年以上。飲酒：每次飲啤酒≥200 g 或飲黃酒、白酒≥50 g，每周兩次以上，連續(xù)半年[9]。塘邊滲井水或溝塘水飲用史：指曾飲用塘邊滲井水（水井設(shè)在塘邊，水由池塘滲透到井里）或溝塘水10年以上。收集肝癌組的基本臨床資料，包括腫瘤數(shù)量、腫瘤大小、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、腫瘤分化程度、腫瘤分期及是否門靜脈侵犯等；其中腫瘤分期采用2018版歐洲肝病協(xié)會制定的巴塞羅那臨床肝癌（Barcelona clinic liver cancer，BCLC）分期系統(tǒng)。采集肝癌組患者入院次日空腹靜脈血，采集對照組體檢當(dāng)日空腹靜脈血，3 000 r/min 離心10 min，離心半徑為18.5 cm，分離血清后保存于-80 ℃冰箱，待檢。

1.2.2 血清MC-LR水平及乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的檢測 采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測研究對象血清MC-LR 水平和HBsAg，MC-LR 檢測試劑盒購自美國Beacon 公司，HBsAg 檢測試劑盒購自上海榮盛生物藥業(yè)有限公司，檢測操作均嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行實驗操作。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 25.0統(tǒng)計軟件分析數(shù)據(jù)，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗；多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用q檢驗。計數(shù)資料采用χ2檢驗。以血清MC-LR水平中位數(shù)（0.14 ng/mL）為節(jié)點，將血清MC-LR水平分為低暴露組和高暴露組后，采用多因素Logistic 回歸模型分析血清MC-LR與原發(fā)性肝癌發(fā)病風(fēng)險之間的關(guān)系。所有統(tǒng)計學(xué)檢驗均為雙側(cè)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般資料 性別、年齡、民族和吸煙在對照組和肝癌組間分布差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05），而飲酒、食魚生史、塘邊滲井水或溝塘水飲用史、HBsAg陽性和腫瘤家族史在兩組間的分布差異有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）。肝癌組有飲酒、食魚生史、塘邊滲井水或溝塘水飲用史、腫瘤家族史和HBsAg陽性的比例高于對照組，見表1。

表1 兩組一般資料比較n（%）

2.2 兩組血清MC-LR水平比較 原發(fā)性肝癌患者血清MC-LR水平為（0.18±0.09）ng/mL，明顯高于對照組的（0.12±0.06）ng/mL，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=12.32，P＜0.01）。

2.3 血清MC-LR水平與原發(fā)性肝癌發(fā)生風(fēng)險的關(guān)系 以血清MC-LR 水平中位數(shù)（0.14 ng/mL）為節(jié)點，將血清MC-LR 水平分為低暴露組和高暴露組后，進(jìn)行二元Logistic回歸分析。結(jié)果顯示，與MCLR低暴露組（＜0.14 ng/mL）相比，MC-LR高暴露組（≥0.14 ng/mL）人群原發(fā)性肝癌的發(fā)病風(fēng)險明顯增加，粗OR值為2.58（95%CI：1.95～3.43，P＜0.001）；調(diào)整性別、年齡、飲酒、食魚生史、塘邊滲井水或溝塘水飲用史、HBsAg 和腫瘤家族史后OR值為2.81（95%CI：1.78～4.43，P＜0.001），見表2。

表2 血清MC-LR水平與原發(fā)性肝癌發(fā)生風(fēng)險的關(guān)系

2.4 不同臨床病理特征肝癌患者血清MC-LR水平比較 不同腫瘤直徑和數(shù)量、BCLC 分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和門靜脈侵犯的肝癌患者血清MC-LR 水平比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）。腫瘤直徑≥5 cm 者血清MC-LR 水平高于腫瘤直徑＜5 cm 者；與腫瘤單發(fā)者相比，腫瘤多發(fā)者血清MC-LR 水平較高；BCLC 分期為0～A 期和B 期的肝癌患者血清MC-LR 水平低于C～D 期患者；腫瘤低分化患者血清MC-LR 水平高于中、高分化患者；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的肝癌患者血清MC-LR水平高于無轉(zhuǎn)移的患者；發(fā)生門靜脈侵犯者血清MC-LR水平高于無侵犯者（均P＜0.05）。而血清MC-LR水平在性別、年齡上差異無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05），見表3。

表3 405 例不同臨床病理特征肝癌患者血清MC-LR 水平比較

3 討論

MC-LR是一種藍(lán)藻產(chǎn)生的有毒代謝產(chǎn)物，廣泛分布在全球富營養(yǎng)化的淡水系統(tǒng)中，其化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定、毒性強(qiáng)，可通過飲水、飲食或直接接觸等多種途徑進(jìn)入人體并累積在機(jī)體內(nèi)，對人體的肝、腎等功能產(chǎn)生影響，并且長期暴露于MC-LR 有致癌的危險。越來越多的證據(jù)表明，MC-LR 長期暴露與肝癌、大腸癌、胃癌等多種癌癥的發(fā)生均有關(guān)聯(lián)[10]。國際癌癥協(xié)會（International Agency for Research on Cancer,IARC）將MC-LR 歸為2B 類致癌物（對人類可能致癌）[11]。

MC-LR主要的暴露途徑是經(jīng)口攝入，攝入機(jī)體后其被釋放到外周血中，并能夠從血清中檢出[12-13]。本研究發(fā)現(xiàn)，原發(fā)性肝癌患者血清MC-LR平均值為0.18 ng/mL，明顯高于健康人群（0.12 ng/mL）。進(jìn)一步分析血清MC-LR 與肝癌發(fā)生風(fēng)險的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，MC-LR 高暴露組（≥0.14 ng/mL）人群發(fā)生肝癌風(fēng)險是低暴露組（＜0.14 ng/mL）的2.806 倍（校正OR=2.81，95%CI：1.78～4.43，P＜0.001）。在重慶開展的一項流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，隨著血清MCLR 水平的增加，HCC 的發(fā)病風(fēng)險也增加，OR值為2.9（95%CI：1.5～5.5，P＜0.05），提示血清MC-LR為肝癌發(fā)生的獨(dú)立危險因素[6]。MC-LR致肝癌的作用機(jī)制比較復(fù)雜，可能通過抑制細(xì)胞內(nèi)蛋白磷酸酶1和2A（PP1、PP2A）的活性，干擾蛋白分子去磷酸化與磷酸化的平衡，導(dǎo)致細(xì)胞氧化損傷、DNA 損傷等促進(jìn)腫瘤生成[14-15]。

本研究對血清MC-LR 水平與肝癌臨床病理特征的關(guān)系進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)肝臟腫瘤多發(fā)者血清MC-LR 水平高于單發(fā)者。腫瘤直徑≥5 cm 者血清MC-LR水平高于腫瘤直徑＜5 cm者，表明早期肝癌患者血清MC-LR 水平低于中晚期肝癌患者。Ito等[16]報道，亞致死劑量20 μg/kg的MC-LR經(jīng)腹腔注射28 周后可出現(xiàn)多個肝臟腫瘤結(jié)節(jié)。肝癌的準(zhǔn)確分期對于肝癌治療方式的選擇和預(yù)后的判斷有重要價值，BCLC 分期是唯一一個提供了每個階段治療建議和最佳治療決策方案的肝癌分期系統(tǒng)。肝癌患者BCLC Kinki分期、腫瘤分化程度和微血管侵犯是肝癌患者根治術(shù)后總體生存情況及無瘤生存情況的獨(dú)立影響因素[17]。本研究發(fā)現(xiàn)，肝癌患者BCLC 分期較晚、腫瘤分化程度較低者，血清MCLR 水平較高。Chen 等[18]報道，肝癌組織中有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)多肽1B3（OATP1B3）的表達(dá)水平較低，與腫瘤分化程度較低有關(guān)。肝細(xì)胞有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)多肽（OATPs）表達(dá)下調(diào)可減少肝細(xì)胞對MC-LR 的攝取，可導(dǎo)致血清MC-LR水平升高[19]。本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的肝癌患者血清MC-LR水平高于無轉(zhuǎn)移的患者，發(fā)生門靜脈侵犯者血清MC-LR 水平高于無侵犯者。推測可能是由于轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞部分失去了肝臟細(xì)胞功能，處于低分化狀態(tài)，因此血清MCLR水平較高。

綜上所述，血清MC-LR水平與原發(fā)性肝癌發(fā)病風(fēng)險呈正相關(guān)關(guān)系，MC-LR高暴露可能增加原發(fā)性肝癌發(fā)病風(fēng)險，血清MC-LR水平與原發(fā)性肝癌的臨床病理特征相關(guān)，為此，應(yīng)加強(qiáng)對水源水及飲用水中微囊藻毒素污染狀況的監(jiān)測，強(qiáng)化水源保護(hù)和凈化措施，進(jìn)一步加強(qiáng)原發(fā)性肝癌預(yù)防和控制知識的宣傳教育。