葉夏聲 何玉榆 黃婷 邱永為
摘? 要:本研究基于高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法建立了一種高精密度檢測三聚氰胺的方法,并對所建立的方法進行了方法學的考察與驗證,參考已有的標準,對標準的相關(guān)處理步驟進行優(yōu)化,采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法進行分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn),其標準曲線相關(guān)系數(shù)為0.998 592,方法檢出限為0.001 5 μg/kg,回收率范圍為87.79%~104.54%,相對標準偏差為2.39%~5.07%。由此表明,該方法檢出限低,回收率較好,精準度高,重復(fù)性好,為液態(tài)奶中的三聚氰胺檢測提供了有力的方法支撐。
關(guān)鍵詞:三聚氰胺;高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜;高精密度;高回收率
中圖分類號:S859.84 文獻標志碼:A 文章編號:1001-0769(2022)04-0098-03
三聚氰胺(melamine)(化學式為C3H6N6),相對分子量為126.12,俗稱密胺、蛋白精,國際純化學和應(yīng)用化學聯(lián)合會(international union of pure and applied chemistry chemical nomenclature,IUPAC)命名為“1,3,5-三嗪-2,4,6-三胺”,是一種三嗪類含氮雜環(huán)有機化合物,是有機化工業(yè)的常用材料,廣泛應(yīng)用于木材加工、化學涂料、高分子塑料等多個領(lǐng)域[1]。在傳統(tǒng)的檢測方法中,凱氏定氮法只能測定待測物的含氮量,進而推算出其蛋白質(zhì)的含量,忽略了氮元素的來源及種類,故被非法商家利用此漏洞將三聚氰胺添加至乳制品中,塑造蛋白質(zhì)含量高的假象。此類產(chǎn)品被人食用后會嚴重影響人的身體健康,長期食用可能會導(dǎo)致膀胱結(jié)石、腎結(jié)石、腎衰竭,泌尿系統(tǒng)未成熟的嬰幼兒食用后將會受到更大的影響,曾經(jīng)在社會上造成過惡劣影響[2]。在GB/T22388—2008《原料乳與乳制品中三聚氰胺檢測方法》中原料乳及乳制品中三聚氰胺的限量值分別為:嬰兒配方食品限量要求1.0 mg/kg;其他食品限量要求? ? ?2.5 mg/kg[3]。故研究和開發(fā)出高效的三聚氰胺檢出分析技術(shù)一直是食品安全檢測領(lǐng)域的熱點。
常用的三聚氰胺檢測方法有酶聯(lián)免疫試劑盒檢測法(ELSAE)、膠體金試紙條法、氣相色譜-質(zhì)譜檢測法(gas chromatography-mass spectrometer,GC-MS)、高效液相色譜法(high performance liquid chromatography,HPLC)、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(liquid chromatography-gas chromatography/mass spectrometer,LC-MS/MS)等[4-8]。其中,液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法將色譜的高分離能力與質(zhì)譜的高靈敏度和高選擇性優(yōu)點相結(jié)合,既可以定性又可以定量,應(yīng)用前景廣闊[5-6]。本研究將基于液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS),對液態(tài)奶中三聚氰胺檢測方法進行進一步研究,優(yōu)化前處理步驟,用二乙胺乙腈水溶液作為提取液超聲提取液態(tài)奶中的三聚氰胺,離心后過濾,濾液無需凈化,用氮吹儀吹干,之后用甲醇進行復(fù)溶。該方法不僅免除了傳統(tǒng)方法中固相萃取的繁瑣步驟,消除牛奶基質(zhì)的影響,增強了抗干擾能力,還降低了檢出限,提高了定量檢測的重現(xiàn)性。整個前處理步驟較為簡單,節(jié)約了時間,降低了成本,實現(xiàn)了更快更準地測定液態(tài)奶中三聚氰胺的含量,為液態(tài)奶的安全食用提供技術(shù)保障。
1? 材料與方法
1.1 設(shè)備與試劑
1.1.1 儀器設(shè)備
試驗所用的安捷倫1290液相色譜儀、AB Science質(zhì)譜儀、氮吹儀、混合儀、梅特勒天平、旋渦混合器、冷凍離心機、超純水儀、超聲波清洗機購自相關(guān)生產(chǎn)廠家。
1.1.2 藥品與試劑
標準物質(zhì):三聚氰胺(德國DR公司生產(chǎn),純度99.5%)
試劑:甲醇、二乙胺和乙腈均為德國默克產(chǎn)品(HPLC級,純度≥98%)
復(fù)溶液:甲醇/水(v/v=20∶80)
1.2 樣品準備
取適量新鮮液態(tài)奶,于-20 ℃下避光? 保存。
1.3 標準儲備液和混合標準工作液的配制
準備三聚氰胺的標準品,精確稱取適量,用甲醇配成10 ?g/mL的標準儲備液,? -18 ℃冰箱中保存,有效期6個月;再分別移取適量地三聚氰胺標準儲備液,用甲醇逐級稀釋成適當濃度的三聚氰胺標準工作液。
1.4 樣品前處理
準確稱取2.00 g(±0.01 g)試樣,置于 15 mL刻度試管中,加入7 mL乙腈,使用渦旋儀振蕩1 min,后加入1 mL二乙胺,用水定容至10 mL,渦旋振蕩1 min,超聲提取15 min,8 000 r/min低溫離心8 min(4 ℃),過濾后備用。移取2 mL在80 ℃下氮氣吹干,用1 mL的20%甲醇溶液復(fù)溶,裝瓶后供高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜上機測定。
2? 結(jié)果與討論
2.1 標準曲線
按GB/T22388—2008 《原料乳與乳制品中三聚氰胺檢測方法》中的條件設(shè)置儀器參數(shù),配制一系列濃度的標準樣品溶液? ? ? ? (0.01 ?g/mL、0.05 ?g/mL、0.10 ?g/mL、? 0.20 ?g/mL、0.50 ?g/mL),待儀器平穩(wěn)后,對相應(yīng)標準品溶液進行測定,繪制曲線,其相關(guān)系數(shù)R2=0.998 592,該曲線的R2值符合實驗要求。
2.2 檢出限測定
以空白牛奶樣品為基質(zhì),一個陽性添加濃度C(10.0 ?g/g),按照上述優(yōu)化過的方法來前處理和上機,所得信噪比S/N=19.49,可計算檢出限為0.001 5 ?g/g。計算公式如下:
檢出限(method detection limit,MDL)(μg/g) =3C/(S/N)
2.3 回收率和精密度的確定
以空白牛奶作為基質(zhì),進行相應(yīng)的加標回收試驗,加標濃度為10 ?g/kg、50 ?g/kg、200 ?g/kg。每個加標濃度分別做6個相同濃度的平行試樣,根據(jù)上述檢測方法進行前處理和儀器測定,方法精密度和回收率結(jié)果分別見表1、表2所示。
3? 結(jié)論
本研究探索優(yōu)化了一種基于高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法的內(nèi)標法測定液態(tài)奶中三聚氰胺的分析方法。該方法通過用含10%二乙胺的乙腈水溶液充分提取,取上清液進行氮吹濃縮后,定容上機測定,最后,該方法的檢出限達到了0.001 5 μg/g,能靈敏的檢測低含量基質(zhì),同時,液態(tài)奶試樣在按10 μg/kg、? ? ?50 μg/kg、200 μg/kg 3個濃度添加情況下,根據(jù)該試驗方法進行前處理和儀器檢測,結(jié)果回收率為87.79%~104.54%,相對標準偏差為2.39%~5.07%。該方法具有前處理簡單便捷、檢出結(jié)果精密度高、定量結(jié)果準確且重復(fù)測試較為穩(wěn)定等特點,大大提高了液態(tài)奶中三聚氰胺的檢測效率,方便對此類藥物的監(jiān)督管控,對有效的倒逼生產(chǎn)養(yǎng)殖端按規(guī)定使用該類藥物起到積極推動作用。
參考文獻
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