王俊超

摘要：豬大腸桿菌病是一類由致病性大腸桿菌引發(fā)的傳染病，常導(dǎo)致幼齡豬群發(fā)生嚴(yán)重腹瀉和敗血癥，發(fā)病過程短，死亡率高。豬場發(fā)生豬大腸桿菌病后，通常會用抗生素治疔，但在長期用藥過程中，如果用藥不規(guī)范，耐藥菌株數(shù)量會顯著增加，導(dǎo)致多種抗生素治疔效果逐漸下降，大腸桿菌多重耐藥性的產(chǎn)生使該病的防治難度越來越大。該文從山東省萊陽市部分規(guī)?；i場篩選出大腸桿菌菌株并進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，希望篩選出更敏感的藥物，提高疾病防控效果。

關(guān)鍵詞：豬源大腸桿菌;藥敏試驗(yàn);結(jié)果分析

中圖分類號：S855.1文獻(xiàn)標(biāo)識碼：Bdoi：10.3969/j.issn.2096-3637.2022.02.007

Results and Analysis of Drug Susceptibility Test of Pig-derived Escherichia Coli

WANG Junchao

（Animal Husbandry and Veterinary Station，of Gaogzhuang，Laiyang City，Yantai Shandong 265200，China）

Abstract：Porcine colibacillosis is a kind of infectious disease caused by pathogenic Escherichia coli，which often leads to severe diarrhea and sepsis in young pigs，with short onset process and high mortality. After the prevalence of porcine colibacillosis in pig farms，antibiotics are usually used for treatment，but in the process of long-term medication，if the medication is not standardized，the number of drug-resistant strains will increase significantly，resulting in the gradual decline of the treatment effect of multiple antibiotics. The emergence of multi drug resistance of Escherichia coli makes the prevention and treatment of the disease more and more difficult，and poses a serious threat to animal food safety. Combined with working experience，E. coli strains were screened from some large-scale farms in Laiyang City，Shandong Province，and drug sensitivity tests were carried out，hoping to screen more sensitive drugs and improve the effect of disease prevention and control.

Keywords：swine-derived Escherichia Coli，drug sensitivity test，result analysis

0引言

豬大腸桿菌病是一類威脅動物健康生長的細(xì)菌性傳染病，該病傳播速度較快，且傳播途徑多樣，如果沒有做好飼養(yǎng)管理，致病性大腸桿菌就會趁機(jī)侵染豬群，引起發(fā)病。另外在細(xì)菌性疾病防控過程中，很多養(yǎng)殖戶存在違規(guī)使用抗生素的行為，導(dǎo)致細(xì)菌的耐藥性顯著增強(qiáng)，多種疾病的防控效果越來越差，這很容易造成豬群大批量死亡，帶來不必要的經(jīng)濟(jì)損失。因此在疾病防控過程中，要做好豬源大腸桿菌病的病原鑒定和藥敏試驗(yàn)，做到對癥用藥，合理用藥，嚴(yán)格控制抗生素的使用，確保在短時(shí)間內(nèi)控制病情。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

樣品：來源于山東省萊陽市某規(guī)?；i場采集發(fā)病豬病料。

設(shè)備：恒溫培養(yǎng)箱、高壓滅菌、蒸汽鍋、普通電爐、普通天平酒精燈、接種棒、鑷子、玻璃平皿、燒杯、玻璃棒、生理鹽水、營養(yǎng)瓊脂、蒸餾水、尺子[1]由當(dāng)?shù)孬F醫(yī)站提供。

試劑：諾氟沙星、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、丹諾沙星、沙拉沙星、氨芐青霉素、慶大霉素、卡那霉素、氯霉素、鏈霉素、四環(huán)素、頭孢唑林。

培養(yǎng)基：麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、瓊脂培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基。

1.2試驗(yàn)方法

將采集的病料充分粉碎后接種到普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，將分離得到的菌株分別轉(zhuǎn)移到麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、SS瓊脂培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基，37 ℃持續(xù)培養(yǎng)24 h，觀察各培養(yǎng)基菌落特征。同時(shí)挑取少量菌落染色涂片鏡檢，觀察細(xì)菌形態(tài)。

用世界動物衛(wèi)生組織推薦的生化鑒定法為大腸桿菌菌株進(jìn)行藥敏檢測，檢測過程中要嚴(yán)格控制檢測質(zhì)量。將純化的菌株接種到2 mL肉湯培養(yǎng)基中持續(xù)培養(yǎng)6 h，用滅菌生理鹽水稀釋至108 CFU/mL。用無菌棉簽拭子蘸取稀釋后的培養(yǎng)液，涂布于普通瓊脂培養(yǎng)平板上，室溫下放置20 min，隨后用無菌鑷子將藥敏片緊貼在瓊脂平板上，于恒溫培養(yǎng)箱持續(xù)培養(yǎng)18 h，觀察各種抗生素的抑菌圈直徑。

2結(jié)果

2.1菌株鑒定結(jié)果

該菌為兼性厭氧菌，在普通營養(yǎng)培養(yǎng)基上能健康生長，最適宜的生長溫度為37 ℃，適宜pH值為7.2～7.4。普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上持續(xù)培養(yǎng)24 h后生長出圓形，中間凸起，濕潤光滑，半透明灰白色菌落，直徑為2～3 mm。在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上生長出紅色菌落，在SS瓊脂培養(yǎng)基上不生長，在伊紅美蘭培養(yǎng)基上生長出黑色帶有金屬光澤菌落。革蘭氏染色后鏡檢發(fā)現(xiàn)，該菌為革蘭氏陰性染色，兩端鈍圓，中等大小，有的單個(gè)存在，有的成對排列，大多數(shù)細(xì)菌有鞭毛、可運(yùn)動，也有無鞭毛、不能運(yùn)動的菌株。

生化鑒定試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)該菌吲哚試驗(yàn)、甲基紅試驗(yàn)呈陽性，硫化氫試驗(yàn)、VP試驗(yàn)呈陰性。分離的菌株大多能發(fā)酵乳糖，極少數(shù)半發(fā)酵或者不發(fā)酵。有70%的菌株能分解蔗糖，不產(chǎn)生硫化氫氣體。90%以上的菌株能發(fā)酵葡萄糖，并且產(chǎn)酸產(chǎn)氣。幾乎所有的菌株都能發(fā)酵麥芽糖和甘露醇，明膠穿刺顯示大多數(shù)菌株有運(yùn)動能力，不能液化明膠。

上述諸多結(jié)果顯示該致病菌為大腸桿菌。

2.2藥敏試驗(yàn)

大多數(shù)菌株對四環(huán)素類抗生素、卡那霉素、氨芐青霉素和氟喹諾酮類抗生素表現(xiàn)出較為嚴(yán)重的耐藥性，其中29株大腸桿菌菌株存在9成以上的耐藥性。多數(shù)菌株對氟喹諾酮類抗生素表現(xiàn)出不同程度的抗性，其中對丹諾沙星、諾氟沙星的抗性率達(dá)到60%和56%，對環(huán)丙沙星、沙拉沙星的抗性率相對較低，耐藥菌株比例達(dá)到了25% 和21%。

在本次試驗(yàn)中，敏感性較好的抗生素包括氯霉素、慶大霉素、鏈霉素、恩諾沙星。其中氯霉素的敏感性最強(qiáng)，但是氯霉素會產(chǎn)生嚴(yán)重的毒性，不適合應(yīng)用在大腸桿菌病防治中。

3討論

豬大腸桿菌病通常是由某些血清型的致病性大腸桿菌感染引發(fā)的一種消化道傳染病。根據(jù)大腸桿菌的致病性可以將其劃分成產(chǎn)腸毒素大腸桿菌、產(chǎn)類志賀毒素大腸桿菌、敗血性大腸桿菌、腸致病性大腸桿菌、尿道致病性大腸桿菌等。當(dāng)機(jī)體抵抗力下降，體內(nèi)菌群失衡后，致病性大腸桿菌就會通過多種渠道進(jìn)入身體，引發(fā)嚴(yán)重的腹瀉和敗血癥。致病性大腸桿菌會誘發(fā)年齡較小的豬群發(fā)病，出現(xiàn)豬黃痢、豬白痢和仔豬水腫病等，發(fā)病率較高，死亡率很高帶來不可估量的經(jīng)濟(jì)損失[2]。另外隨著疾病的發(fā)生，豬抵抗力顯著下降，很容易繼發(fā)感染其他細(xì)菌性疾病或病毒性疾病，因此在生豬飼養(yǎng)管理過程中，要加強(qiáng)大腸桿菌病診斷和防控。

未來在豬養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展過程中，為了更好地防范大腸桿菌的傳播流行，需要指導(dǎo)養(yǎng)殖戶堅(jiān)持自繁自養(yǎng)的原則，每個(gè)批次的豬群要全部出來并加強(qiáng)養(yǎng)殖，圈舍的徹底清洗和衛(wèi)生消毒，不能從發(fā)病的養(yǎng)殖場引進(jìn)種豬，做好環(huán)境衛(wèi)生調(diào)控，定期環(huán)境消毒，保持圈舍干燥通風(fēng)，冬春季節(jié)防寒保暖，夏秋季節(jié)防暑降溫，減少環(huán)境中的應(yīng)激刺激。仔豬階段應(yīng)該確保其及時(shí)吃上初乳，吃足初乳避免仔豬和糞便頻繁接觸，避免通過飲食渠道接觸致病性大腸桿菌。仔豬在首次吃奶前，應(yīng)該將母豬乳頭中的少許乳汁去除，并用無刺激性的消毒液對乳房和乳頭進(jìn)行全面的擦拭處理，仔豬出生后應(yīng)及時(shí)吃上初乳，吃足初乳，增強(qiáng)身體抵抗能力。在豬群生長發(fā)育階段應(yīng)該做到科學(xué)搭配飼料，合理使用全價(jià)的飼料母豬，在妊娠中后期可以補(bǔ)充0.1%的亞細(xì)酸鈉維生素E。這樣仔豬出生后能通過乳汁獲得免疫球蛋白，同時(shí)增強(qiáng)豬的抵抗能力，在仔豬哺乳早期階段要及時(shí)做好補(bǔ)鐵補(bǔ)硒工作，誘導(dǎo)仔豬盡早采食哺乳階段的飼料，提高胃腸道的消化功能，增強(qiáng)身體抵抗力。另外加強(qiáng)大腸桿菌病流行病學(xué)調(diào)查，結(jié)合養(yǎng)殖場大腸桿菌菌株可以將其制作成滅活菌苗，對豬群進(jìn)行疫苗免疫接種，能起到很好的預(yù)防效果，在實(shí)際生產(chǎn)過程中，也可以使用養(yǎng)殖場康復(fù)豬、淘汰老齡母豬，或者經(jīng)過自家滅活疫苗滅活處理的高免血清，注射給仔豬或者直接口服，也能取到一定的治療成效，緩解患病豬的臨床癥狀，縮短治療周期。

4結(jié)論

從山東省萊陽市某規(guī)模化豬場分離到的29株大腸桿菌菌株存在很大比例的多重耐藥現(xiàn)象。出現(xiàn)上述情況，主要是因?yàn)楹芏嘭i場存在濫用抗生素的行為，沒有注意藥物的交替使用，隨意在飼料中添加抗生素類藥物，導(dǎo)致細(xì)菌耐藥性日益增強(qiáng)。在今后諸如大腸桿菌病等細(xì)菌性疾病的防控過程中，養(yǎng)殖戶要做到科學(xué)用藥，合理用藥，結(jié)合病原鑒定和藥敏試驗(yàn)，篩選出敏感抗生素。同時(shí)還要不斷加強(qiáng)流行病學(xué)調(diào)查和飼養(yǎng)管理人員的專業(yè)技能培訓(xùn)，加強(qiáng)養(yǎng)殖環(huán)節(jié)的技術(shù)指導(dǎo)，確保防控效果。此外在疾病防控期間，還可以推廣應(yīng)用中成藥制劑，微生態(tài)制劑，抗血清和其他小肽類產(chǎn)品逐漸替代抗生素，同樣能起到很好的防治效果[3]。

參考文獻(xiàn)

[1]張鐵，王春光，王謙，等.豬源大腸桿菌的分離、鑒定及耐藥性監(jiān)測[J].中國農(nóng)學(xué)通報(bào)，2005，21（12）：23-25.

[2]趙靜，楊漢春，查振林.規(guī)模化豬場大腸桿菌耐藥性監(jiān)測[J].中國獸醫(yī)雜志，1998，24（11）：12-13.

[3]雷連成，江文正，韓文瑜，等.致病性大腸桿菌的耐藥性監(jiān)測[J].中國獸醫(yī)雜志，2001，37（1）：12-13.