壯醫(yī)藥線點(diǎn)灸療法對(duì)原發(fā)性痛經(jīng)大鼠的影響

梁淇棋　林娜　樊俊宏　稂宇嘉　黃禮芳　劉志珊　韋麗樂(lè)　林艷明

【摘 要】 目的：觀察壯醫(yī)藥線點(diǎn)灸療法對(duì)原發(fā)性痛經(jīng)大鼠PGF2α、NO、Ca²⁺的影響，探討壯醫(yī)藥線點(diǎn)灸療法對(duì)原發(fā)性痛經(jīng)大鼠模型的作用機(jī)理。方法：50只雌性SD大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組，壯醫(yī)藥線點(diǎn)灸治療組、阿司匹林組、當(dāng)歸芍藥散組，持續(xù)干預(yù)7d，比較各組大鼠的扭體反應(yīng)以及子宮勻漿中PGF2α、NO、Ca²⁺表達(dá)水平。結(jié)果：正常對(duì)照組無(wú)扭體，與模型組相比，壯醫(yī)藥線點(diǎn)灸治療組、阿司匹林組、當(dāng)歸芍藥散組30 min扭體次數(shù)減少（P<0.01），且3組中壯醫(yī)藥線點(diǎn)灸治療組體抑制率最高;壯醫(yī)藥線點(diǎn)灸治療組、阿司匹林組、當(dāng)歸芍藥散組扭體次數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。與正常組比較，壯醫(yī)藥線點(diǎn)灸治療組、阿司匹林組、當(dāng)歸芍藥散組大鼠PGF2α、NO、Ca²⁺含量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;與模型組比較，壯醫(yī)藥線點(diǎn)灸治療組、阿司匹林組、當(dāng)歸芍藥散組PGF2α、Ca²⁺值顯著降低，NO顯著增加（P<0.01）。結(jié)論：壯醫(yī)藥線點(diǎn)線療法治療原發(fā)性痛經(jīng)的作用機(jī)制可能與降低PGF2α、Ca²⁺水平，升高NO水平有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】 壯醫(yī)藥線點(diǎn)灸療法;PGF2α;一氧化氮;鈣離子;原發(fā)性痛經(jīng)

【中圖分類號(hào)】R246.3【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A? 【文章編號(hào)】1007-8517（2022）07-0042-04

基金項(xiàng)目：作者簡(jiǎn)介：梁淇棋（1997-），女，漢族，碩士研究生在讀，研究方向?yàn)榕R床醫(yī)學(xué)。E-mail：571710688@qq.com

通信作者：林艷明（1974-），女，壯族，碩士，副教授，研究方向?yàn)椴辉凶C中西醫(yī)治療。E-mail：kisspsm@tom.com

Effect of Zhuang Medicine Line Point Moxibustion Therapy on Primary Dysmenorrhea Rats

LIANG Qiqi LIN Na FAN Junhong LAN Yujia HUANG Lifang LIU Zhishan WEI Lile LIN Yanming*

Youjiang Medical University for Nationalties，Baise 533000，China

Abstract：Objective To observe the effect of line point moxibustion with Zhuang medicine on PGF2α、NO and Ca2+ in rats with primary dysmenorrhea， and to explore the mechanism of line point moxibustion with Zhuang medicine on rats with primary dysmenorrhea. Methods 50 female SD rats were randomly divided into normal control group， model control group， zhuang nationality thread moxibustion group， aspirin group， Danggui Shaoyao powder group. After continuous intervention for 7 days， the writhing reaction of each group and the expression levels of PGF2α、Ca²⁺and NO in uterine homogenate were compared. Results There was no body twisting in the normal control group. Compared with the model group， the number of body twisting in 30min in the Zhuang medicine line-point moxibustion treatment group， the Aspirin treatment group and the Danggui Shaoyao powder group decreased P<0.01）， and the torsion inhibition rate in the Zhuang medicine line-point moxibustion treatment group was the highest. There was no significant difference in the number of body writhing between Zhuang medicine line point moxibustion treatment group， aspirin group and Danggui Shaoyao powder group （P>0.05）. Compared with the normal group， the contents of PGF2α、Ca²⁺and NO in Zhuang medicine line point moxibustion treatment group， aspirin group and Danggui Shaoyao powder group were not statistically significant （P>0.05）. Compared with the model group， thePGF2α、 Ca²⁺value of Zhuang Medicine line-point moxibustion treatment group， Aspirin group and Danggui Shaoyao powder group was significantly decreased， and NO was significantly increased （P<0.01）.Conclusion The mechanism of Zhuang medicine line point-line therapy in the treatment of primary dysmenorrhea may be related to the decrease of PGF2α、Ca²⁺and increase of NO.42F13091-10A7-4D00-ACA3-FE6638C6814D

Key words：Zhuang's Herbal Moxibustion;PGF2α;NO;Ca²⁺;Primary Dysmenorrhea

原發(fā)性痛經(jīng)是婦科常見(jiàn)病癥，臨床上主要表現(xiàn)為經(jīng)前后或行經(jīng)期發(fā)生下腹墜脹、脹痛、伴有腰酸或其他不適，嚴(yán)重影響患者健康及生活質(zhì)量^[1]。原發(fā)性痛經(jīng)的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)^[2-4]認(rèn)為其發(fā)生與內(nèi)分泌、遺傳、代謝及免疫等因素有關(guān)。西醫(yī)治療主要以對(duì)癥處理為主。壯醫(yī)藥線點(diǎn)灸作為廣西特色民族療法，在治療痛經(jīng)上有顯著療效，但其治療機(jī)制尚缺乏現(xiàn)代科學(xué)的證據(jù)^[2]。本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用壯醫(yī)藥線點(diǎn)灸療法治療原發(fā)性痛經(jīng)大鼠模型，通過(guò)觀察大鼠扭體次數(shù)及大鼠血清中PGF2α、NO、Ca²⁺離子水平的變化，探究壯醫(yī)藥線點(diǎn)灸療法治療原發(fā)性痛經(jīng)的可能機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 采用昆明種大鼠50只雌性，鼠齡9～10周，體重（200±20）g，性成熟，未交配，由右江民族醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。大鼠正常飼養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為壯醫(yī)藥線點(diǎn)灸治療組、阿司匹林組、當(dāng)歸芍藥散組、空白對(duì)照組、模型對(duì)照組，每組各10只。

1.2 材料 壯醫(yī)藥線（直徑0.7 cm，廣西中藥醫(yī)大學(xué)壯醫(yī)藥推廣中心）;補(bǔ)佳樂(lè)（拜爾醫(yī)藥保健有限公司廣州分公司）;阿司匹林腸溶片（拜爾醫(yī)藥保健有限公司）;縮宮素注射液（上海全宇生物科技動(dòng)物藥業(yè)有限公司）;蒸餾水、生理鹽水;前列腺素 ELISA 試劑盒（ 上海酶聯(lián)生物）;NO 測(cè)試盒、蛋白測(cè)試盒、鈣測(cè)試盒（南京建成生物工程研究所）;當(dāng)歸芍藥散（右江民族醫(yī)學(xué)院藥劑科提供）。

1.3 動(dòng)物造模及各組干預(yù)方法

1.3.1 樣品制備 稱取當(dāng)歸芍藥散處方：當(dāng)歸20 g，川芎10 g，白術(shù)12 g，茯芩10 g，澤瀉10 g，芍藥20 g，加10倍量水，浸泡20 min，煎煮1 h，取煎出液，再加8倍量水煎煮40 min，合并2次煎煮液，濃縮制成濃度為1 g/mL水煎液;1 mg補(bǔ)佳樂(lè)片研碎溶于20 mL纖稀鈉中制成0.05 mg/mL混懸液;100 mg阿司匹林腸溶片研碎溶于5 mL纖稀鈉中制成20 mg/mL混懸液。

1.3.2 動(dòng)物造模 除空白對(duì)照組外，所有大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，采用補(bǔ)佳樂(lè)和縮宮素注射液聯(lián)合制造大鼠原發(fā)性痛經(jīng)模型。具體方法如下：壯醫(yī)藥線點(diǎn)灸組、阿司匹林組、當(dāng)歸芍藥組和模型對(duì)照組，于中午12：00灌胃補(bǔ)佳樂(lè)混懸液10 mL/kg，正常對(duì)照組給予10 mL/kg生理鹽水灌胃，連續(xù)給藥12 d。于末次給藥后1 h腹腔注射縮宮素100 U/kg，正常組注射生理鹽水10 mL/kg。

1.3.3 干預(yù)方法 從造模第5天起，每天下午17：00進(jìn)行1次干預(yù)，連續(xù) 7 d。壯醫(yī)藥線點(diǎn)灸組參照方宗疇等編著的《實(shí)驗(yàn)大鼠針灸俞穴圖譜及針刺手法》取穴人中、歸來(lái)、足三里、中極、肚臍（周圍）、關(guān)元，一人將實(shí)驗(yàn)操作部位充分暴露，另一人點(diǎn)燃藥線線端后熄滅明火，將帶火星的線端對(duì)準(zhǔn)穴位，標(biāo)準(zhǔn)為一按一滅即起為一壯，每穴予灸2壯。阿司匹林組劑量按50 kg成人體表面積折算，每只大鼠予阿司匹林腸溶片混懸液200 mg/kg即10 mL/kg灌胃，當(dāng)歸芍藥散組同按50 kg成人體表面積折算，每只大鼠予當(dāng)歸芍藥散水煎液10 g/kg即10 mL/kg灌胃，空白對(duì)照組和模型對(duì)照組不進(jìn)行干預(yù)，只予生理鹽水10 ml/kg灌胃做等容積液體進(jìn)入胃內(nèi)容對(duì)照。上述操作均在大鼠安靜狀態(tài)下，溫暖的環(huán)境中進(jìn)行。

1.4 觀察指標(biāo)

1.4.1 扭體反應(yīng) 第12天灌胃給藥1 h后，腹腔注射縮宮素100 U/kg（正常組注射生理鹽水 10 mL/kg），觀察記錄大鼠30 min內(nèi)扭體次數(shù)，計(jì)算扭體抑制率。扭體反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)：大鼠腹部收縮內(nèi)凹，軀干與后肢伸展，臀部與一側(cè)肢體內(nèi)旋。抑制率=（模型組大鼠扭體次數(shù)-給藥組大鼠扭體次數(shù)）/模型組大鼠扭體次數(shù)×100%。

1.4.2 子宮勻漿組織PGF2α、NO、Ca²⁺測(cè)定 于末次給藥后1h，大鼠頸椎斷頭處死，迅速剖腹，取出子宮，以冰凍的生理鹽水洗凈拭干稱重，制成5%的子宮組織勻漿，以2500 r/min低溫離心10 min，取上清液冷藏保存待測(cè)。子宮組織前列腺素 F2α （PGF2α）的含量采用ELISA法檢測(cè);NO、Ca²⁺含量測(cè)定采用微板法。均按試劑盒說(shuō)明書(shū)的實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格操作。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，計(jì)量資料以均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較的q檢驗(yàn)（Newman-Keuls法），P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠30 min內(nèi)扭體反應(yīng)比較 空白對(duì)照組未出現(xiàn)扭體反應(yīng)，模型對(duì)照組大鼠扭體次數(shù)明顯增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P<0.01），提示造模成功;各治療組與模型對(duì)照組比較，30 min內(nèi)扭體次數(shù)減少，扭體抑制率上升（P<0.01）;壯醫(yī)藥線點(diǎn)灸組、當(dāng)歸芍物組、阿司匹林組扭體反應(yīng)次數(shù)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 （P>0.05）;且阿司匹林組和壯醫(yī)藥線點(diǎn)灸組扭體抑制率均>80%，說(shuō)明阿司匹林組和壯醫(yī)藥線點(diǎn)灸組鎮(zhèn)痛效果佳。詳見(jiàn)表 1。

2.2 各組大鼠子宮勻漿組織PGF2α、NO、Ca²⁺值比較 與空白對(duì)照組比較，模型組大鼠子宮內(nèi)膜 PGF2α含量明顯升高，同時(shí)模型組NO值升高，Ca²⁺值降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）;壯醫(yī)藥線點(diǎn)灸組、當(dāng)歸芍物組、阿司匹林組與模型組比較，PGF2α值、Ca²⁺值降低，NO值升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）;各治療組間NO值、Ca²⁺值均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 （P>0.05），提示壯醫(yī)藥線點(diǎn)灸組、當(dāng)歸芍物組、阿司匹林組對(duì)原發(fā)性痛經(jīng)有效，且壯醫(yī)藥線點(diǎn)灸組與當(dāng)歸芍物組、阿司匹林組之間相比療效相當(dāng)。見(jiàn)表2。42F13091-10A7-4D00-ACA3-FE6638C6814D

3 討論

原發(fā)性痛經(jīng)屬壯醫(yī)“火路病”范疇，是較為普遍的婦科疾患。近年來(lái)，原發(fā)性痛經(jīng)的發(fā)病率逐漸升高，尋找最有效的治療方法極其重要，而中醫(yī)藥在治療原發(fā)性痛經(jīng)取得效好的效果，是值得深入挖掘研究的有效資源^[5-7]。壯醫(yī)藥線點(diǎn)灸療法是壯醫(yī)最具特色的一種治療方法，具有通絡(luò)止痛、活血化瘀、散結(jié)消腫、溫經(jīng)行痹等作用^[8-9]。本實(shí)驗(yàn)采用補(bǔ)佳樂(lè)和縮宮素注射液聯(lián)合制造大鼠原發(fā)性痛經(jīng)模型，根據(jù)中醫(yī)經(jīng)絡(luò)選穴原則，選取人中、歸來(lái)、足三里、中極、臍周四穴、關(guān)元等穴位，用壯醫(yī)藥線灼灸刺激穴位，調(diào)節(jié)氣血，達(dá)到活血化瘀，溫經(jīng)散寒，氣血調(diào)和的作用。研究表明，痛經(jīng)的發(fā)生主要是由于前列腺素（PGs）分泌過(guò)多導(dǎo)致子宮異常收縮引起的^[10]，同時(shí)與NO、Ca²⁺的變化密切相關(guān)，其中PGF2α屬于前列腺素中的一種，可刺激子宮收縮和缺血，導(dǎo)致痛經(jīng)^[11]。Ca²⁺作為在細(xì)胞收縮中起重要作用的第二信使，刺激后可通過(guò)細(xì)胞內(nèi)鈣離子的釋放和胞外的內(nèi)流，子宮平滑肌細(xì)胞內(nèi)Ca²⁺超載引起能量耗竭、細(xì)胞膜受損，此外還可以導(dǎo)致子宮肌攣縮^[12-13]。NO是一種血管內(nèi)皮舒張因子，可通過(guò)NO-環(huán)磷鳥(niǎo)苷（cGMP）途徑調(diào)節(jié)，或直接作用于細(xì)胞膜上的鈣通道，引起鈣離子外流或加速細(xì)胞內(nèi)游離鈣的結(jié)合，從而引起平滑肌細(xì)胞舒張和血管擴(kuò)張。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，壯醫(yī)藥線點(diǎn)灸療法能夠降低PGF2α、Ca²⁺值，并使NO水平升高，抑制扭體反應(yīng)。其作用機(jī)制可能是通過(guò)調(diào)節(jié)PGF2α、Ca²⁺、NO水平，緩解子宮平滑肌痙攣引起的缺血再灌注損傷，抑制子宮痙攣從而達(dá)到解除或緩解疼痛的目的。同時(shí)壯醫(yī)藥線點(diǎn)灸組、當(dāng)歸芍物組、阿司匹林組之間子宮勻漿PGF2α、NO、Ca²⁺對(duì)比無(wú)明顯差異，提示壯醫(yī)藥線點(diǎn)灸療法與臨床常用藥物療效相當(dāng)。因此，壯醫(yī)藥線點(diǎn)灸療法治療原發(fā)性痛經(jīng)具有明顯的療效，值得在臨床上進(jìn)一步推廣。

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（收稿日期：2021-07-07 編輯：陶希睿）42F13091-10A7-4D00-ACA3-FE6638C6814D