PD-L1在乳腺癌中表達(dá)及臨床意義

張梅芳 吳東恩 胡蕾蕾 陳芷菲

【摘要】目的：探究乳腺癌患者PD-L1表達(dá)及臨床意義。方法：選擇在我院進(jìn)行乳腺癌篩查的女性患者作為研究對(duì)象（時(shí)間2017年1月—2019年6月），原位癌15例、浸潤(rùn)癌35例、良性病變15例，對(duì)患者進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，比較患者PD-L1陽性表達(dá)情況。結(jié)果：35例浸潤(rùn)癌患者PD-L1陽性表達(dá)率57.14%（20/35），高于15例原位癌患者PD-L1陽性表達(dá)率26.67%（4/15），差異顯著（P<0.05）。15例良性病變者PD-L1陽性表達(dá)率為0.00%，與原位癌、浸潤(rùn)癌患者PD-L1陽性表達(dá)率相比較，差異均顯著（P<0.05）。原位癌患者3內(nèi)生存率86.67%（13/15）高于浸潤(rùn)癌患者57.14%（20/35），差異顯著（P<0.05）。結(jié)論：PD-L1在不同類型乳腺癌中具有差異性的陽性表達(dá)，浸潤(rùn)型乳腺癌中陽性表達(dá)率較高，可以反映出癌細(xì)胞浸潤(rùn)程度，并且對(duì)乳腺癌患者治療、預(yù)后起到輔助作用。

【關(guān)鍵詞】乳腺癌；PD-L1；陽性表達(dá)率

PD-L1 expression in breast cancer and its clinical significance

ZHANG Meifang， WU Dongen， HU Leilei， CHEN Zhifei

Department of Pathology，Maternal and Child Health Hospital of Heyuan City， Heyuan， Guangdong 517000， China

【Abstract】Objective：To explore the expression and clinical significance of PD-L1 in breast cancer patients.Methods：Selected female patients undergoing breast cancer screening in our hospital as the research object （time from January 2017 to June 2019），15 cases of carcinoma in situ，35 cases of invasive carcinoma，and 15 cases of benign lesions.The patients were examined by immunohistochemical staining to compare the positive expression of PD-L1 in patients.Results：The positive expression rate of PD-L1 in 35 patients with invasive carcinoma was 57.14%（20/35），which was higher than 26.67%（4/15）in 15 patients with carcinoma in situ，the difference was significant（P<0.05）.The positive expression rate of PD-L1 in 15 patients with benign lesions was 0.00%，which was significantly different from that in patients with carcinoma in situ and invasive carcinoma，the difference was significant，P<0.05.The survival rate within 3-year in patients with carcinoma in situ was 86.67%（13/15），which was significantly higher than 57.14%（20/35） in patients with invasive carcinoma，the difference was significant（P<0.05）. Conclusion：PD-L1 has differential positive expression in different types of breast cancer.The positive expression rate is higher in invasive breast cancer，which can reflect the degree of cancer cell invasion and play an auxiliary role in the treatment and prognosis of breast cancer patients.

【Key Words】Breast cancer； PD-L1； Positive expression rate

“乳腺癌”多發(fā)于外上象限乳房，是由于乳腺上皮細(xì)胞增殖失控引起的惡變，在女性惡性腫瘤中發(fā)病率最高，病因尚未完全清楚，存在遺傳風(fēng)險(xiǎn)。乳腺癌早期癥狀一般不明顯，通常表現(xiàn)為乳房皮膚異常，如橘皮征、酒窩征等，伴隨乳頭溢液、乳房腫塊等，非常容易被患者忽視，耽誤疾病治療[1]。有研究指出[2]，目前臨床上在對(duì)乳腺癌患者進(jìn)行治療時(shí)，治療方案的選擇以及預(yù)后評(píng)估主要依靠乳腺癌分子分型，例如HER-2表達(dá)等。原位乳腺癌指的是癌細(xì)胞局限在上皮層內(nèi)，沒有對(duì)基底膜形成破壞，也沒有侵入間質(zhì)組織、真皮組織，未發(fā)生浸潤(rùn)或者遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。原位乳腺癌經(jīng)過手術(shù)切除后可獲得良好療效，浸潤(rùn)型乳腺癌多見于40歲以上女性，通常是非特殊型浸潤(rùn)型導(dǎo)管癌，占比70%～80%，其余為浸潤(rùn)型小葉癌[3]。特殊性浸潤(rùn)型乳腺癌包括單純小管癌、浸潤(rùn)型篩狀癌、髓樣癌、黏液癌。乳腺癌病因發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，目前沒有發(fā)現(xiàn)明確的致病因素，普遍認(rèn)為遺傳、生活方式、環(huán)境等因素共同作用是引起乳腺癌的主要原因[4]。浸潤(rùn)型乳腺癌由于癌細(xì)胞擴(kuò)散并向其他部位形成浸潤(rùn)，治療難度大，治療效果往往不理想，預(yù)后較差。 HER-2等對(duì)乳腺癌的分型表達(dá)不夠準(zhǔn)確，在一定程度上會(huì)影響乳腺癌臨床治療效果。為此，為了提高乳腺癌整體治療效果，需要找到一種可以準(zhǔn)確分型與鑒別診斷的預(yù)測(cè)標(biāo)志物，為乳腺癌臨床治療與預(yù)后評(píng)估提供更多幫助。PD-L1是一種腫瘤常見分子標(biāo)志物，與TMB、MMR、MSI-H等有關(guān)系，需要在檢查點(diǎn)進(jìn)行免疫反應(yīng)設(shè)計(jì)，對(duì)殺傷性T細(xì)胞進(jìn)行抑制等，進(jìn)行免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)。乳腺癌患者的癌細(xì)胞表明會(huì)出現(xiàn)PD-L1高表達(dá)，在遇到細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞表面的PD-1接觸時(shí)，由于免疫檢查點(diǎn)抑制劑的使用解除了免疫系統(tǒng)抑制，對(duì)PD-L1進(jìn)行準(zhǔn)確識(shí)別，對(duì)于乳腺癌鑒別診斷有重要意義。本研究對(duì)2017年1月—2019年6月我院進(jìn)行乳腺癌篩查的女性患者65例進(jìn)行研究分析，均通過臨床綜合診斷確診，探究乳腺癌患者PD-L1表達(dá)及臨床意義，報(bào)道如下。

1.1 一般資料

選擇2017年1月—2019年6月期間在我院進(jìn)行乳腺癌篩查檢查的女性患者作為研究對(duì)象，病例數(shù)65例，患者年齡26～64歲，平均年齡（46.35±2.12）歲。通過綜合診斷后確診：原位癌15例、浸潤(rùn)癌35例、良性病變15例。受檢者臨床資料完整，精神狀況良好，未接受過靶向藥物治療?；颊邔?duì)本次研究知情并自愿參加，積極配合檢查，病情穩(wěn)定。排除妊娠期、哺乳期女性，精神疾病或認(rèn)知障礙患者。

1.2 方法

對(duì)65例乳腺癌篩查檢查患者進(jìn)行PD-L1檢測(cè)，使用Ventana Bench Mark XT型全自動(dòng)免疫組化機(jī)（瑞士，羅氏）。所用試劑PD-L1（clone sp263）所用試劑PD-L1（clone sp263）。免疫組化染色試劑盒Ultra View Universal DAB Detection Kit（Ventana）購(gòu)自羅氏診斷產(chǎn)品（上海）有限公司。檢測(cè)方法為：嚴(yán)格參照全自動(dòng)免疫組化機(jī)操作流程：（1）制作石蠟切片，厚度4～5μm，置于65℃烤片機(jī)中60min，粘貼標(biāo)簽后置于機(jī)器切片盤上；（2）DAB試劑盒、蘇木精、返藍(lán)液、一抗等試劑瓶依次放上檢測(cè)試劑架前準(zhǔn)備運(yùn)行；（3）進(jìn)行消化、抗體孵育、復(fù)染等染色處理，約4h完成；（4）使用含溫和清潔劑的清水對(duì)切片進(jìn)行沖洗，梯度乙醇脫水、二甲苯透明、中性樹脂膠封固。

PD-L1陽性表達(dá)標(biāo)準(zhǔn)：在顯微鏡下對(duì)切片樣本進(jìn)行多個(gè)視野觀察，觀察顯色細(xì)胞的比例以及染色深淺。其中顯色細(xì)胞比例：5%占比以下記為0分，5%～25%占比記為1分，26%～50%占比記為2分，51%～75%占比記為3分，75%以上占比記為4分。染色深淺：未顯色記為0分，淺黃色記為1分，棕色記為2分，深褐色記為3分。顯色細(xì)胞占比得分×染色深淺得分>1，為陽性，反之，為陰性。

1.3 觀察指標(biāo)

比較原位乳腺癌、浸潤(rùn)型乳腺癌、良性病變PD-L1陽性表達(dá)率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)數(shù)資料采用（%）表示，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用（χ±s）表示，進(jìn)行t檢驗(yàn)，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

浸潤(rùn)型乳腺癌患者PD-L1陽性表達(dá)率57.14%，高于原位乳腺癌PD-L1陽性表達(dá)率26.67%和良性病變PD-L1陽性表達(dá)率0.00%，差異顯著（P<0.05）；浸潤(rùn)型乳腺癌與原位乳腺癌PD-L1陽性表達(dá)率差異顯著（P<0.05），見表1。

3.1 乳腺癌分型及臨床治療

乳腺癌作為女性癌癥中發(fā)病率第一位的癌癥類型，對(duì)女性身心健康均造成嚴(yán)重影響，且病死率高，危害大，早期診斷并接受規(guī)范治療，對(duì)于病情發(fā)展控制以及預(yù)后改善有至關(guān)重要作用。原位癌與浸潤(rùn)癌均為乳腺癌的常見類型，但是兩者的惡性程度不同，治療方式也存在較大差異，對(duì)于原位癌而言，手術(shù)切除是目前比較理想的治療方案，可以根治病灶，延長(zhǎng)患者生存時(shí)間。而浸潤(rùn)癌由于對(duì)其他組織形成浸潤(rùn)，或者發(fā)生遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移，手術(shù)切除乳腺的治療效果有限，容易復(fù)發(fā)，整體療效不理想，需要配合放化療，或者靶向治療，提高臨床治療效果。所以，對(duì)乳腺癌的具體分型與惡性程度進(jìn)行準(zhǔn)確鑒別診斷，對(duì)于疾病治療與評(píng)估預(yù)后起到很大作用，需要找到一種有效、準(zhǔn)確的方法，實(shí)現(xiàn)腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)。

3.2 乳腺癌分型依據(jù)及PD-L1陽性表達(dá)意義

以往臨床上廣泛應(yīng)用HER-2過表達(dá)型、LuminalA、LuminalB等進(jìn)行乳腺癌分子分型，為乳腺癌治療方案的選擇提供依據(jù)，并有效評(píng)估預(yù)后效果。臨床實(shí)踐表明，原位癌患者經(jīng)過手術(shù)切除或者其他聯(lián)合治療方案后，普遍可獲得理想的治療效果，但是對(duì)于浸潤(rùn)型乳腺癌的臨床治療，整體效果不夠理想，且分型較為困難，容易出錯(cuò)。有研究指出，PD-L1作為免疫檢查點(diǎn)抑制劑生物標(biāo)志物，腫瘤細(xì)胞表明通常會(huì)出現(xiàn)高表達(dá)，對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行“偽裝”，使得免疫系統(tǒng)無法準(zhǔn)確識(shí)別并殺死腫瘤細(xì)胞，從而影響了腫瘤診療效果。而浸潤(rùn)型乳腺癌由于發(fā)生浸潤(rùn)情況，PD-L1陽性表達(dá)率高，為了提高治療效果，需要使用PD-L1抑制劑，在乳腺癌免疫治療中具有重要應(yīng)用，可以將腫瘤細(xì)胞對(duì)免疫系統(tǒng)的抑制解除，使得免疫系統(tǒng)可以再識(shí)別腫瘤細(xì)胞，并將其殺死。

3.3 PD-L1在乳腺癌中表達(dá)及臨床意義既往研究

趙戈昱[5]研究中指出，PD-1、PD-L1和CD47在非特殊型浸潤(rùn)性乳腺癌中具有明顯的陽性表達(dá)，且有一定相關(guān)性。PD-1、PD-L1和CD47在非特殊型浸潤(rùn)性乳腺癌患者的癌組織及癌旁正常組織中出現(xiàn)陽性表達(dá)，與患者年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級(jí)以及乳腺癌癌癥TNM分期具有相關(guān)性，不同類型乳腺癌與病程分期患者，患者PD-1、PD-L1和CD47陽性表達(dá)會(huì)有所差異。張寧寧[6]研究中表明，乳腺癌的PD-L1陽性表達(dá)率高，高于非三陰性乳腺癌，表明PD-L1在不同乳腺癌分型以及病理特征中陽性表達(dá)率有差異性，與本研究結(jié)果相近。

3.4 PD-L1意義及乳腺癌表達(dá)作用

PD-L1陽性表達(dá)率高與患者腫瘤細(xì)胞分子分型、陽性淋巴結(jié)個(gè)數(shù)與癌癥分期具有相關(guān)性，可以為浸潤(rùn)性乳腺癌的治療方案制定與調(diào)整，評(píng)估預(yù)后提供可靠預(yù)測(cè)標(biāo)志物。PD-L1生物學(xué)意義為：PD-L1與PD-1之間具有相互作用，并利用對(duì)抗原呈遞的陽性信號(hào)傳導(dǎo)進(jìn)行阻斷，制定人體免疫監(jiān)測(cè)。在對(duì)乳腺癌患者進(jìn)行PD-L1檢測(cè)時(shí)，需要將制動(dòng)解除后獲得正確表達(dá)。PD-L1的病理學(xué)意義為：在不同腫瘤類型中PD-L1的表達(dá)作用不確定，一般情況下可以對(duì)免疫檢查點(diǎn)的抑制劑有效提示陽性表達(dá)，但是PD-L1陰性表達(dá)結(jié)果也不會(huì)完全將免疫檢查點(diǎn)的抑制劑可能進(jìn)行排除。而乳腺癌患者的臨床治療中，免疫治療的作用很大，且臨床應(yīng)用廣泛，特別是PD-L1單抗，取得理想的成效。一般情況下，對(duì)乳腺癌患者進(jìn)行PD-L1檢測(cè)，陽性患者可以在阿替利珠單抗與白蛋白紫杉醇聯(lián)合治療中獲取好的臨床療效。而PD-L1檢測(cè)結(jié)果陰性患者則無法獲益。為此，對(duì)乳腺癌患者進(jìn)行PD-L1檢測(cè)時(shí)，不僅可以對(duì)患者的疾病患病情況以及病情進(jìn)展情況進(jìn)行評(píng)估與預(yù)測(cè)，作為診斷乳腺癌的一項(xiàng)依據(jù)與參考標(biāo)準(zhǔn)。而且可以為乳腺癌患者的治療提供新的方向，陽性表達(dá)者進(jìn)行免疫治療的效果好于陰性表達(dá)者。所以，PD-L1檢測(cè)在乳腺癌患者的疾病診斷與治療方案設(shè)計(jì)中均有一定作用，需要引起重視與注意，應(yīng)用價(jià)值高。

3.5 研究結(jié)果

本研究中浸潤(rùn)型乳腺癌PD-L1陽性表達(dá)率明顯高于原位乳腺癌與良性病變者，原位乳腺癌PD-L1陽性表達(dá)率明顯高于良性病變者，差異均顯著。分析原因?yàn)椋篜D-L1在乳腺癌患者的腫瘤細(xì)胞膜中出現(xiàn)陽性表達(dá)，也會(huì)在淋巴細(xì)胞中出現(xiàn)陽性表達(dá)、在單核細(xì)胞胞質(zhì)與胞膜中出現(xiàn)陽性表達(dá)，可以看到明顯的棕黃色顆粒。浸潤(rùn)型乳腺癌的PD-L1的陽性表達(dá)率高于原位乳腺癌與良性病變，說明PD-L1的陽性表達(dá)率會(huì)隨著乳腺癌病灶的轉(zhuǎn)移、病情進(jìn)展而提高。PD-L1的表達(dá)可以在腫瘤細(xì)胞中和腫瘤浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞中，使得乳腺癌患者淋巴細(xì)胞免疫功能下降，并影響分泌功能，是乳腺癌疾病進(jìn)展的重要促進(jìn)因素之一，參與乳腺癌的發(fā)展過程。PD-L1的陽性表達(dá)受到乳腺癌的臨床分期與組織學(xué)分級(jí)影響，會(huì)出現(xiàn)不同的陽性表達(dá)概率。PD-L1可以在淋巴細(xì)胞表面與淋巴PD-1進(jìn)行互相影響，發(fā)生作用后對(duì)人體腫瘤細(xì)胞免疫應(yīng)答進(jìn)行削弱，使得腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)免疫逃逸，從而發(fā)生乳腺癌疾病進(jìn)展，不容易被診斷出來。乳腺癌患者在腫瘤出現(xiàn)后，以及腫瘤進(jìn)展過程中，均會(huì)出現(xiàn)免疫失調(diào)問題，普遍存在。而PD-L1作為一種免疫卡控的重要點(diǎn)位，通過與T淋巴細(xì)胞表面受體進(jìn)行結(jié)合，對(duì)腫瘤患者的免疫抑制應(yīng)答翻譯起到直接誘導(dǎo)，介導(dǎo)了腫瘤細(xì)胞的逃逸，引起腫瘤侵襲與轉(zhuǎn)移，并提示乳腺癌患者復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)級(jí)別高，需要引起足夠重視。

本研究結(jié)果顯示：浸潤(rùn)型乳腺癌患者PD-L1陽性表達(dá)率57.14%，高于原位乳腺癌PD-L1陽性表達(dá)率26.67%和良性病變PD-L1陽性表達(dá)率0.00%，差異顯著（P<0.05）；浸潤(rùn)型乳腺癌與原位乳腺癌PD-L1陽性表達(dá)率差異顯著（P<0.05）。說明PD-L1在乳腺癌患者中具有良好表達(dá)，較高表達(dá)，癌癥進(jìn)展與分級(jí)會(huì)影響PD-L1陽性表達(dá)率，可以作為乳腺癌臨床診斷與評(píng)估病情進(jìn)展的重要標(biāo)準(zhǔn)。

綜上所述，PD-L1在乳腺癌不同類型與病理特征中表達(dá)差異性顯著，對(duì)于乳腺癌治療與預(yù)后評(píng)估有很好的輔助與預(yù)測(cè)作用。

參考文獻(xiàn)

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