馬超, 李琪, 陶梁春, 呂惠子
(延邊大學(xué) 藥學(xué)院, 吉林 延吉 133002)
合苞橐吾(Ligulariaschmidtii(Maxim.) Makino)為菊科橐吾屬多年生草本植物[1].研究顯示,橐吾屬植物的根、莖、葉、花具有散寒、潤(rùn)肺、解毒清熱、活血化瘀、降血糖等功效[2-6],常用于治療支氣管炎、咳喘、肺結(jié)核、咯血等癥[7-9].查閱文獻(xiàn)顯示,目前針對(duì)合苞橐吾的研究大多是針對(duì)其化學(xué)成分及活性成分進(jìn)行研究的[10-16],而對(duì)其生藥學(xué)方面的研究尚不完善.為此本文對(duì)合苞橐吾的性狀、組織結(jié)構(gòu)等進(jìn)行了研究,以為合苞橐吾質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制訂提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù).
BDS400倒置生物顯微鏡,重慶奧特光學(xué)儀器有限公司; KQ5200型超聲波清洗器,昆山市超聲儀器有限公司; JYD-325B生物組織石蠟切片機(jī),金華市宇典醫(yī)療器械廠; FA2004電子天平,上海良平儀器儀表有限公司; RRH-100萬(wàn)能高速粉碎機(jī),上海緣沃工貿(mào)有限公司.
硅膠GF254薄層板,煙臺(tái)江友硅膠開(kāi)發(fā)有限公司;水合氯醛、無(wú)水乙醇、95%乙醇、二甲苯、石油醚(沸程為60~90 ℃)、乙酸乙酯、濃硫酸(均為分析純),遼寧泉瑞試劑有限公司;石蠟(批號(hào)為20130415),上海華靈康復(fù)器械廠;番紅染料(CAS號(hào)為477-73-6,干燥失重≤5.0%)、固綠染料(CAS號(hào)為2353-45-9,干燥失重≤8.0%),上?;瘜W(xué)試劑采購(gòu)供應(yīng)站;中性樹(shù)膠,上海標(biāo)本模型廠;中藥篩(380 μm),杭州同祺儀器有限公司.
實(shí)驗(yàn)用藥材均采自延邊朝鮮族自治州的不同地區(qū),并由延邊大學(xué)藥學(xué)院樸光春教授鑒定,標(biāo)本號(hào)為ybyx2019053001-10Ly.合苞橐吾的采集信息見(jiàn)表1.
表1 采集的合苞橐吾的信息
由于中國(guó)食品藥品檢定研究院目前尚無(wú)合苞橐吾對(duì)照藥材,故選取經(jīng)專家鑒定的樣品作為對(duì)照藥材進(jìn)行薄層色譜研究.對(duì)照藥材由通化師范學(xué)院于俊林教授提供.
對(duì)采集的10批合苞橐吾的性狀(見(jiàn)圖1)進(jìn)行觀察顯示:葉呈黃綠色,葉片大多卷縮,質(zhì)脆易破碎;葉表面粗糙,葉脈羽狀;葉長(zhǎng)15~30 cm,寬3~15 cm,基部邊緣光滑略呈波浪狀;葉柄呈類三角形,斷面白色或淡黃棕色.合苞橐吾的上述性狀與文獻(xiàn)[3]的表述一致.
2.2.1葉片上、下表皮的顯微特征
顯微鏡下的葉片上、下表皮片(表面制片法[17]制作)如圖2所示.由圖可以看出:上、下表皮細(xì)胞形狀均為不規(guī)則形,多波狀彎曲;上下表皮均有氣孔分布(下表皮相對(duì)較多),氣孔類型為不定式;副衛(wèi)細(xì)胞為3~5個(gè);下表皮側(cè)脈細(xì)胞呈類長(zhǎng)方形,排列緊密.
圖1 合苞橐吾的性狀
圖2 葉片上、下表皮顯微特征(放大倍數(shù)為×10)
2.2.2葉片和葉柄橫切面的顯微特征
取新鮮幼嫩葉片和葉柄,用石蠟制片法[17]切片,用番紅-固綠染色法染色,然后在顯微鏡下觀察葉片和葉柄橫切面的顯微特征.
1)葉片橫切面的顯微特征.圖3為合苞橐吾葉片橫切面的顯微特征圖.由圖可以看出:葉片的上、下各有1層表皮細(xì)胞,且排列整齊;韌皮部細(xì)胞排列整齊;木質(zhì)部導(dǎo)管呈圓形;葉肉組織分化為柵欄組織和海綿組織,其中柵欄組織為1~2列,海綿組織為3~5列,且均排列疏松.
圖3 葉片橫切面特征(放大倍數(shù)為×40)
2)葉柄橫切面的顯微特征.圖4為合苞橐吾葉柄橫切面的顯微特征圖.由圖可以看出:表皮細(xì)胞為1~2層;皮層細(xì)胞為3~6層;有多個(gè)維管束,大小不一,呈類三角形排列;髓部較發(fā)達(dá);韌皮部細(xì)胞排列緊密;木質(zhì)部呈半圓形.
圖4 葉柄橫切面特征(放大倍數(shù)為×40)
2.2.3合苞橐吾葉粉末的鑒別
取干燥葉片研磨成粉末,過(guò)中藥篩(380 μm),水合氯醛裝片,然后在顯微鏡下觀察粉末的特征[17].
圖5為合苞橐吾葉粉末的特征圖.由圖可以看出:木栓細(xì)胞(1)較多,且細(xì)胞壁增厚;纖維束(2)眾多;氣孔(5)類型為不定式;導(dǎo)管主要為螺紋和網(wǎng)紋導(dǎo)管(8);有少量腺鱗(7)、非腺毛(3)、淀粉粒(6)及黃色油狀物(4).
圖5 葉片粉末的特征圖(放大倍數(shù)為×40)
依據(jù)2020版《中華人民共和國(guó)藥典:四部》中的通則0502項(xiàng)[18]對(duì)合苞橐吾的薄層色譜進(jìn)行研究.
2.3.1供試品溶液的制備
取10批合苞橐吾藥材粉末各0.2 g,然后分別加入石油醚20 mL;超聲提取20 min,過(guò)濾;濾液濃縮后備用.
2.3.2對(duì)照藥材溶液的制備
取合苞橐吾對(duì)照藥材粉末0.2 g, 按2.3.1方法制備對(duì)照藥材溶液,備用.
2.3.3點(diǎn)樣、展開(kāi)及顯色
用毛細(xì)管分別吸取供試品溶液與對(duì)照品溶液,點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上.以體積比為10∶3的石油醚-乙酸乙酯作為展開(kāi)劑展開(kāi),再用體積分?jǐn)?shù)為10%的硫酸-乙醇溶液作為顯色劑進(jìn)行顯色.
圖6為合苞橐吾薄層色譜圖.由圖可以看出: 在供試品色譜中,與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯示的是相同顏色的斑點(diǎn),且重復(fù)性良好,未出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象.圖中4個(gè)點(diǎn)的Rf值分別為: 0.34(①)、 0.56(②)、 0.62(③)、 0.96(④).
圖6 合苞橐吾的薄層色譜圖
合苞橐吾的生藥學(xué)特性研究顯示,其主要鑒別特征有:葉呈黃綠色,易破碎;葉柄呈類三角形,斷面白色或淡黃棕色;氣孔為不定式,纖維較多;在10批供試品的薄層色譜中,與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯示的是相同顏色的斑點(diǎn).本文研究結(jié)果可為合苞橐吾的鑒定和質(zhì)量評(píng)價(jià)提供科學(xué)依據(jù).