一株樁菇屬野生真菌的分離鑒定及生物學(xué)特性研究

關(guān)艷麗 郭玲玲 韓 冰 李 瑩

（遼寧省微生物科學(xué)研究院，遼寧朝陽122000）

大白樁菇又稱雷蘑，隸屬于口蘑科、白樁菇屬，子實(shí)體大型，夏秋生于草原、林緣、竹林中，單生或群生，有時(shí)形成蘑菇圈。該菌主要分布在河北、內(nèi)蒙古、吉林、遼寧、山西、黑龍江、青海、浙江、新疆等省區(qū)，味道鮮美、營養(yǎng)豐富[1]。該菌可藥用，治療小兒麻疹、煩躁不安等癥，將鮮姜和雷蘑切片，水煎服，可治傷風(fēng)感冒[2]。另外，該菌所含杯傘素（clito‐cybin），有抗人類致病細(xì)菌的活性，如蠟樣芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌[3]，1945 年已有研究表明它對結(jié)核分枝桿菌Mycobacterium tuberculosis、傷寒沙門氏菌Salmonella typh和流產(chǎn)布氏桿菌Brucea abortus有抑制活性[4]。從該菌中分離的clitoeine 能促進(jìn)體外人宮頸癌細(xì)胞（HeLa細(xì)胞）的凋亡[5]。液體培養(yǎng)大白樁菇菌絲體能產(chǎn)生具有抗氧化活性的酚類化合物、黃酮類化合物[6]。

筆者對采自遼寧省錦州市義縣的一株野生真菌進(jìn)行分離培養(yǎng)，旨在為該菌的進(jìn)一步研究與開發(fā)提供數(shù)據(jù)支撐。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

（1）供試菌株：采自錦州市義縣頭臺(tái)鄉(xiāng)落葉灌木林草地上的大白樁菇，菌種分離，獲得純培養(yǎng)物，編號(hào)YX210702。

（2）培養(yǎng)基：PDA 綜合培養(yǎng)基?；A(chǔ)培養(yǎng)基為葡 萄 糖2%，蛋白胨0.3%，KH2PO40.3%，MgSO4·7H2O 0.15%，VB110 mg，瓊脂2%，水1 L。

1.2 菌株鑒定

采用形態(tài)學(xué)方法鑒定該菌株。具體參照文獻(xiàn)[1，7-10]。

1.3 菌絲培養(yǎng)條件試驗(yàn)

1.3.1 碳源對菌絲生長的影響試驗(yàn)

將基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的葡萄糖用相當(dāng)量的供試碳源代替，供試碳源分別為果糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖、淀粉。采用DPS v9.50 對菌絲日均長速進(jìn)行單因素方差分析。

1.3.2 氮源對菌絲生長的影響試驗(yàn)

將基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的蛋白胨用相當(dāng)量的供試氮源代替，供試氮源分別為酵母膏、麩皮、硫酸銨、尿素、黃豆粉。

1.3.3 pH對菌絲生長的影響試驗(yàn)

試驗(yàn)培養(yǎng)基為PDA 綜合培養(yǎng)基，設(shè)置培養(yǎng)基pH分別為5.0、6.0、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0。

1.3.4 培養(yǎng)溫度對菌絲生長的影響試驗(yàn)

試驗(yàn)設(shè)置培養(yǎng)溫度分別為15 ℃、18 ℃、22 ℃、25 ℃、28 ℃、30 ℃。將供試菌種接種在PDA 綜合培養(yǎng)基上，置于試驗(yàn)溫度下培養(yǎng)。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌株形態(tài)鑒定結(jié)果

該菌株子實(shí)體菌蓋直徑為7~30 cm，扁半球形至近平展，污白色，光滑，邊緣內(nèi)卷，菌肉為白色較厚，菌褶延生、不等長，初期為白色，后期為褐色。該菌菌柄較粗，為2~5 cm，長4~8 cm，肉質(zhì)、實(shí)心、基部膨大（圖1）。該野生菌夏秋季于落葉闊葉林草地上群生形成蘑菇圈，當(dāng)?shù)厝朔Q為白蘑，根據(jù)該菌的宏觀形態(tài)特征、生境和分布可以確定所采標(biāo)本屬于口蘑科Tricholomataceae、白樁菇屬Leucopaxillus、大白樁菇Leucopaxillus giganteus（Sow.Ex Fr.）Sing。

圖1 大白樁菇子實(shí)體

2.2 菌絲培養(yǎng)條件試驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 培養(yǎng)基的碳源對菌絲生長的影響

由表1 可知，大白樁菇（YX210702）菌絲均可利用供試碳源，其中葡萄糖、可溶性淀粉、蔗糖菌絲生長速度快，但在以葡萄糖為碳源培養(yǎng)基上菌絲生長最快，菌絲日均長速為5.6 mm/d，且菌絲長勢最好，其次是蔗糖、可溶性淀粉，三者間菌絲日均長速差異不顯著；菌絲生長較差的是果糖、乳糖，菌絲生長速度慢，且菌絲稀疏發(fā)黃。

表1 供試碳源培養(yǎng)基上大白樁菇（YX210702）菌絲生長情況

2.2.2 培養(yǎng)基氮源對菌絲生長的影響

由表2可知，大白樁菇菌絲在以酵母膏、麩皮為氮源培養(yǎng)基上生長快，日均長速分別為5.9 mm/d、5.6 mm/d，氮源為酵母膏培養(yǎng)的菌絲長勢好于氮源為麩皮，菌絲濃密潔白；氮源為黃豆粉、蛋白胨培養(yǎng)的菌絲長速稍慢，菌絲長勢較好；氮源為尿素培養(yǎng)的菌絲生長較差，幾乎不生長。

表2 供試氮源培養(yǎng)基上大白樁菇（YX210702）菌絲生長情況

2.2.3 培養(yǎng)基pH對菌絲生長的影響

由表3 可知，菌絲生長的pH 范圍較廣，大白樁菇（YX210702）菌絲均能在pH5.0~9.0的培養(yǎng)基上生長，當(dāng)培養(yǎng)基pH 為6.5、7.0 時(shí)，菌絲長勢強(qiáng)，日均長速快，分別為6.1 mm/d、5.9 mm/d；pH低于6.0或高于8.0，菌絲日均長速顯著下降，且稀疏。

表3 培養(yǎng)基pH對大白樁菇（YX210702）菌絲生長的影響

2.2.4 培養(yǎng)溫度對菌絲生長的影響

由表4 可知，大白樁菇（YX210702）菌絲的生長適溫范圍較寬，培養(yǎng)溫度為15~30 ℃菌絲均可生長，培養(yǎng)溫度為18~28 ℃菌絲生長快，其中最適溫度為25 ℃，菌絲日均長速快，且顏色濃白；培養(yǎng)溫度低于18 ℃或高于28 ℃，菌絲生長均緩慢，且顏色發(fā)黃。

表4 培養(yǎng)溫度對大白樁菇（YX210702）菌絲生長的影響

3 小結(jié)與討論

經(jīng)形態(tài)學(xué)鑒定，初步確定在錦州市義縣頭臺(tái)鄉(xiāng)地區(qū)采集的一株野生真菌隸屬傘菌目、口蘑科、白樁菇屬、大白樁菇Leucopaxillus giganteus。菌絲培養(yǎng)結(jié)果：該菌株菌絲生長的最適碳源為葡萄糖，最適氮源為酵母膏，培養(yǎng)基適宜的pH 為6.5~7.0；菌絲生長適宜溫度為25 ℃。

大白樁菇具有較高的營養(yǎng)價(jià)值和藥用價(jià)值，目前雖未實(shí)現(xiàn)人工栽培，但可以采取深層發(fā)酵培養(yǎng)方法加以開發(fā)。