胡紅永 張燦梅

作者單位：671000 云南大理白族自治州，大理白族自治州人民醫(yī)院核醫(yī)學(xué)科（胡紅永），檢驗(yàn)科（張燦梅）

羅氏Cobas 6000e系列電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀因性能穩(wěn)定、檢測敏感度高、精密度好等優(yōu)點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用于臨床檢驗(yàn)和科研工作中。在檢測過程中所有項(xiàng)目都需使用ProCell M和CleanCell M液，同時為消除潛在干擾，一些項(xiàng)目在測量前需要使用PreClean M液［1］。配套洗液在測試過程中消耗量巨大，由于其售價昂貴，經(jīng)測算每個測試的耗占比約為15%～20%。而國產(chǎn)配套預(yù)清洗液、緩沖液和清洗液價格相對低廉，可以降低醫(yī)療成本，為醫(yī)療改革提供支持。本研究采用國產(chǎn)配套預(yù)清洗液、緩沖液和清洗液代替羅氏原裝 PreClean M、ProCell M和CleanCell M液，評估和比較檢測效果。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 羅氏Cobas 6000 e601電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀以及PreClean M、ProCell M、CleanCell M液、配套試劑和校準(zhǔn)品均由羅氏診斷產(chǎn)品（上海）有限公司提供。國產(chǎn)預(yù)清洗液、緩沖液和清洗液由深圳瑞萊柏生物科技有限公司提供。

1.2 研究方法

1.2.1 國產(chǎn)配套洗液性能測試 根據(jù)性能測試操作步驟，在羅氏Cobas 6000 e601電化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)試劑盤1、2號位分別放置Blankcell試劑，3、 4號位分別放置Cellcheck試劑，5號位放置血清淀粉樣蛋白P（serum amyloid P，SAP）檢測試劑。再在“香蕉架”上5個位置分別放置相應(yīng)的儀器性能測定驗(yàn)證檢測試劑，在主機(jī)維修管理軟件上執(zhí)行“Assay Performance Check（APC）”程序后，進(jìn)行相應(yīng)的性能驗(yàn)證測試，測試完成后采用相應(yīng)的性能測試管理軟件分析測試數(shù)據(jù)，自動得到測試結(jié)果。

1.2.2 交叉污染及敏感度檢測 性能驗(yàn)證合格后，分別采用原裝PreClean M、ProCell M和CleanCell液 以及替代的國產(chǎn)檢測預(yù)清洗液、緩沖液和清洗液進(jìn)行“APC”交叉污染及敏感度檢測程序，通過主機(jī)維修軟件分析得到變異系數(shù)（coefficient of variation，CV）、交叉污染值和敏感度。要求性能驗(yàn)證參數(shù)AB3、iSAP、CO的CV分別為≤5%、≤2%、≤5%，交叉污染值≤1.5×10-4，敏感度≤6.0×10-15，比較結(jié)果差異是否有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2.3 檢測指標(biāo)與方法 根據(jù)所選檢測及質(zhì)控項(xiàng)目，使用不同的配套預(yù)清洗液、緩沖液和清洗液，采用夾心法檢測高敏促甲狀腺素（hypersensitive thyroid stimulating，h-TSH）、糖類抗原125（carbohydrate antigen 125，CA125）和癌胚抗原（carcinoembryonic antigen, CEA），采用競爭法檢測孕酮（progesterone，P）、游離三碘甲狀腺原氨酸（free triiodothyronine，F(xiàn)T3）和雌二醇（estradiol，E2）。E2檢測需要用到PreClean M液， 其余項(xiàng)目則無需使用PreClean M液。先使用羅氏原裝PreClean M、ProCell M和CleanCell M液及原裝試劑進(jìn)行校準(zhǔn)和測定，再使用國產(chǎn)預(yù)清洗液、緩沖液和清洗液分別替換原裝PreClean M、ProCell M和CleanCell M液，重新校準(zhǔn)后測試相同項(xiàng)目。

1.2.4 室內(nèi)質(zhì)控及室間質(zhì)評評價 采用美國伯樂公司的質(zhì)控品（批號：40390），設(shè)置高、低2個濃度水平，分別以國產(chǎn)預(yù)清洗液、緩沖液和清洗液與羅氏原裝PreClean M、ProCell M和CleanCell M液對7個項(xiàng)目〔FT3、h-TSH、總?cè)饧谞钕僭彼幔╰otal triiodothyronine，TT3）、孕酮（P）、促卵泡生成素（follicle stimulating hormone，F(xiàn)SH）、促黃體生成素（luteinizing hormone，LH）、睪酮（testosterone，T）〕進(jìn)行1個月的室內(nèi)質(zhì)控檢測。以本實(shí)驗(yàn)室原有室內(nèi)L-J質(zhì)控圖進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，監(jiān)測不同項(xiàng)目的每日質(zhì)控結(jié)果，根據(jù)1S，3S質(zhì)控判斷規(guī)則分析室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果。采用國產(chǎn)洗液對2021年第二次國家衛(wèi)生健康委臨床檢驗(yàn)中心提供的腫瘤標(biāo)志物Ⅰ室間質(zhì)評質(zhì)控品進(jìn)行復(fù)測，根據(jù)國家衛(wèi)生健康委臨床檢驗(yàn)中心提供的靶值，計(jì)算檢測偏倚。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 19.0軟件分析數(shù)據(jù)。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 交叉污染率和敏感度檢測 國產(chǎn)預(yù)清洗液、緩沖液和清洗液的交叉污染率和敏感度與原裝預(yù)清 洗液、緩沖液和清洗液比較，均符合標(biāo)準(zhǔn)要求，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。見表1～2。

表1 原裝洗液交叉污染率及敏感度檢測結(jié)果

2.2 原裝PreClean M、ProCellM、CleanCell M液與國產(chǎn)預(yù)清洗液、緩沖液和清洗液的準(zhǔn)確性驗(yàn)證 按照《用患者樣本進(jìn)行方法比較和偏倚評估：批準(zhǔn)指南第二版》（EP9-A2文件）［2］要求，每日收集10份患者 樣本，共收集5 d。分別使用羅氏原裝PreClean M、ProCell M、CleanCell M液和國產(chǎn)預(yù)清洗液、緩沖液和清洗液對每個樣本進(jìn)行重復(fù)測定，取平均值作為最終測定值。更換國產(chǎn)配套洗液后，重新進(jìn)行儀器的清洗和灌注，并經(jīng)再次較準(zhǔn)，完成相同項(xiàng)目的重復(fù)測試。見表3。結(jié)果表明，采用原裝PreClean M、 ProCell M和CleanCell M液與國產(chǎn)預(yù)清洗液、緩沖液和清洗液測定的h-TSH、FT3、E2、P、CA125、CEA結(jié)果均較為接近，計(jì)量資料采用配對t檢驗(yàn)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05，r＞0.99），呈高度正相關(guān)。

表2 國產(chǎn)洗液交叉污染及敏感度檢測結(jié)果

表3 采用國產(chǎn)洗液與羅氏原裝洗液檢測6種指標(biāo)結(jié)果比較（±s）

表3 采用國產(chǎn)洗液與羅氏原裝洗液檢測6種指標(biāo)結(jié)果比較（±s）

注：h-TSH為高敏促甲狀腺素，F(xiàn)T3為游離三碘甲狀腺原氨酸，E2為雌二醇，P為孕酮，CA125為糖類抗原125，CEA為癌胚抗原

洗液類型 樣本數(shù)（份）h-TSH（mU/L） FT3（pmol/L） E2（ng/L） P（μg/L） CA125（kU/L） CEA（μg/L）原裝洗液 50 3.94±0.60 5.42±0.23 566.2±104.1 14.39±2.02 21.96±5.92 2.84±0.38國產(chǎn)洗液 50 3.98±0.59 5.47±0.23 563.6±102.9 14.19±2.00 22.22±6.06 2.85±0.38 t值 1.704 2.700 2.888 2.193 1.691 0.544 P值 0.095 0.864 0.105 0.103 0.413 0.356 r值 1.000 0.996 1.000 0.999 1.000 0.999

2.3 精密度驗(yàn)證 使用美國伯樂公司提供的質(zhì)控品（批號：54690）配制為2個濃度水平的溶液，復(fù)溶后充分混勻，分裝成20份。

2.3.1 批內(nèi)精密度驗(yàn)證 使用已復(fù)溶好的高、低濃度質(zhì)控品，每個樣本連續(xù)重復(fù)測定20次，記錄測定結(jié)果，分別計(jì)算均值、標(biāo)準(zhǔn)差及CV。結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)：批內(nèi)精密度＜1/4允許總誤差（total allowable error，TEa），參考美國臨床檢驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)量控制文件（CLIA'88），比對結(jié)果為符合。

2.3.2 批間精密度驗(yàn)證 使用已復(fù)溶好的低、高濃度質(zhì)控品，每日測試2批，每批測定1次，兩批間隔時間2 h以上，連續(xù)測定10 d，每個樣本記錄20次測定結(jié)果，分別計(jì)算均值、標(biāo)準(zhǔn)差、CV。批間精密度＜1/3TEa，參考CLIA'88文件，比對結(jié)果為符合。采用國產(chǎn)配套洗液和羅氏原裝洗液檢測各項(xiàng)目，均值和標(biāo)準(zhǔn)差比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。采用國產(chǎn)預(yù)清洗液、緩沖液和清洗液檢測的各項(xiàng)目批內(nèi)CV均＜3.76%，批間CV均＜5.86%，符合儀器所需試劑CV要求。

2.4 分析測量范圍驗(yàn)證 采用EP-6A方案收集臨床患者低濃度血清（L；接近最低檢測限）和高濃度血清（H；接近檢測范圍高限），將低值（L）、高值（H）血清按一定比例配制成系列濃度的混合血清，各取份數(shù)按照5L、4L+1H、3L+2H、2L+3H、1L+4H、5H的比例配制混合，得到6個濃度的標(biāo)本。使用國產(chǎn)預(yù)清洗液、緩沖液、清洗液與原裝PreClean M、ProCell M和CleanCell M液分別對所有濃度標(biāo)本在2 h內(nèi)隨機(jī)重復(fù)檢測3次，計(jì)算每個濃度的均值。見表4。結(jié)果表明，國產(chǎn)預(yù)清洗液、緩沖液、清洗液與原裝PreClean M、ProCell M、CleanCell M液的敏感度及測量范圍比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。

表4 采用國產(chǎn)洗液與羅氏原裝洗液分析測量范圍比較

2.5 室內(nèi)質(zhì)控及室間質(zhì)評 將羅氏配套PreClean M、ProCell M、CleanCell M液更換為國產(chǎn)配套清洗液、清洗液和緩沖溶液并灌注后，檢測7個項(xiàng)目的質(zhì)控品，采用質(zhì)控軟件統(tǒng)計(jì)，繪制均值為現(xiàn)用質(zhì)控圖均值。羅氏原裝配液與國產(chǎn)配液全部質(zhì)控結(jié)果都在±s范圍內(nèi)，比較均值及CV值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表5。采用國產(chǎn)洗液對2021年第二次國家衛(wèi)生健康委腫瘤標(biāo)志物Ⅰ室間質(zhì)評的質(zhì)控品進(jìn)行復(fù)測，所有項(xiàng)目結(jié)果偏倚均在±5%以內(nèi)。

表5 羅氏原裝配套溶液與國產(chǎn)配套溶液室內(nèi)質(zhì)控對比

3 討論

電化學(xué)發(fā)光法具有精密度、敏感度高、檢測線性范圍廣、結(jié)果穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)，且配套試劑穩(wěn)定性較好，保存時間較長［3］。在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)及科研工作中得到廣泛應(yīng)用。電化學(xué)發(fā)光檢測原理以三聯(lián)吡啶釕為標(biāo)記物，與三丙胺（tripropylamine，TPrA）共同構(gòu)成電化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)，三聯(lián)吡啶釕催化TPrA在電極表面發(fā)生特異性電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)［4］，與酶促發(fā)光法、直接發(fā)光法等方法比較，具有較大優(yōu)勢。

電化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)中，PreClean M液用于清除可能干擾信號檢測的物質(zhì)［4］；CleanCell M液用于為電極提供緩沖環(huán)境，在每次測定后清洗試管系統(tǒng)和檢測元件；而ProCell M液中的TPrA參與電極表面的氧化還原反應(yīng)［5］，因此ProCell M液在檢測過程中作為電子供體很重要［6］。國產(chǎn)清洗液若與羅氏原裝ProCell M液存在明顯差異，會導(dǎo)致發(fā)光信號值的差異。羅氏電化學(xué)發(fā)光免疫檢測分析系統(tǒng)中，主要檢驗(yàn)原理是競爭法和夾心法，因使用洗液的變化可導(dǎo)致檢測結(jié)果出現(xiàn)偏低或偏高［7］。

本研究以羅氏Cobas 6000 e 601電化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)為檢測平臺，比較國產(chǎn)配套洗液與羅氏原裝洗液的性能測試結(jié)果，對儀器分別進(jìn)行性能驗(yàn)證，交叉污染率及敏感度對比。采用不同檢測方法檢測 6個項(xiàng)目，結(jié)果比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對7個免疫項(xiàng)目經(jīng)過1個月室內(nèi)質(zhì)控跟蹤，所有測量項(xiàng)目的高低濃度水平質(zhì)控全部在本實(shí)驗(yàn)室繪制質(zhì)控指標(biāo)的x±2s之內(nèi)，且CV值均與羅氏原裝溶液相近。復(fù)測2021年國家衛(wèi)生健康委室間質(zhì)評第二次腫瘤標(biāo)志物Ⅰ樣品，結(jié)果顯示偏倚在±5%以內(nèi)。

綜上所述，國產(chǎn)配套洗液在羅氏Cobas 6000 e系列電化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)中各性能指標(biāo)驗(yàn)證結(jié)果均合格，臨床對比標(biāo)本結(jié)果根據(jù)EP9-A2文件要求均可接受。在實(shí)際檢測分析應(yīng)用中可替代羅氏原裝配套洗液，有研究表明在實(shí)際應(yīng)用中無需重新校準(zhǔn)，可直接替換原裝洗液使用［8-10］。使用國產(chǎn)洗液能為醫(yī)院降低耗材使用成本，減輕患者的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突