余衛(wèi)娟，殷月芬，胡文凌，李 莉

(1.浙江省嘉興生態(tài)環(huán)境監(jiān)測(cè)中心，浙江 嘉興 314000；2.自然資源部第一海洋研究所，山東 青島 266061)

1 引言

二甘醇酸是羧甲基殼聚糖的合成過程中氯乙酸脫鹽酸縮合的產(chǎn)物[1～3]，具有一定的腐蝕性，易導(dǎo)致灼傷。由于羧甲基殼聚糖本身是一種安全無毒的殼聚糖類衍生物，具有抗菌抗感染、抗病毒、抗凝血等作用，與甲殼素、殼聚糖相比，能在中性、堿性及微酸性水中溶解，且性質(zhì)較穩(wěn)定，廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、保健品等領(lǐng)域[4～6]，因此建立羧甲基殼聚糖的全面質(zhì)量控制技術(shù)非常關(guān)鍵。作為一種重要的殘留物，我國醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)格限制二甘醇酸的含量，按照標(biāo)準(zhǔn)要求，手術(shù)用品羧甲基殼聚糖膜劑、粉劑中其含量應(yīng)不大于0.1%(m/m)，在凝膠和溶液中不大于0.01%(m/V)。

文獻(xiàn)中用于測(cè)定有機(jī)酸的方法主要有氣相色譜法、高效液相色譜法和離子色譜法[8～11]。氣相色譜法分析有機(jī)酸一般需要將樣品進(jìn)行甲酯化，前處理過程繁瑣；液相色譜法分析有機(jī)酸分析中需用反相模式，洗脫溶劑具有一定毒性；而離子色譜法分析低分子量有機(jī)酸，無須對(duì)樣品進(jìn)行復(fù)雜的預(yù)處理，就能夠很好地分離和同時(shí)檢測(cè)多種有機(jī)酸物質(zhì)，且洗脫溶劑多為碳酸鹽體系，因而在環(huán)境、食品、藥物分析中應(yīng)用較為廣泛。目前，國內(nèi)外有關(guān)二甘醇酸的檢測(cè)的文獻(xiàn)報(bào)道很少。

本文建立了手術(shù)用羧甲基殼聚糖中二甘醇酸殘留量的抑制電導(dǎo)—離子色譜檢測(cè)法，在15 min之內(nèi)完成一次測(cè)試，方法的檢出限、準(zhǔn)確度和重復(fù)性符合分析方法的要求，為羧甲基殼聚糖的質(zhì)量安全控制提供一種簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確的方法。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 儀器與試劑

881 Compact IC pro 離子色譜儀，配Magic net色譜工作站，抑制電導(dǎo)檢測(cè)器(Metrohm公司，瑞士)；Metrosep A Supp5 250陰離子分離柱(4.0 mm×250 mm，5 μm)及Metrosep A Supp 4/5 Guard預(yù)柱(Metrohm公司，瑞士)，NJ-SA-4A陰離子分離柱(4.6 mm×250 mm，10 μm，北京柏奧泰生物技術(shù)有限公司)； Shodex IC SI-52 4E陰離子分離柱(4.0 mm×250 mm，5 μm ，Shodex公司，日本)； Milli-Q50超純水處理系統(tǒng)(Millipore公司，美國)。

碳酸鈉、碳酸氫鈉為分析純?cè)噭?sigma公司，美國)；實(shí)驗(yàn)用水均為電阻率大于18.2 MΩ的超純水。8批手術(shù)用羧甲基殼聚糖樣品及二甘醇酸標(biāo)準(zhǔn)品均由合作實(shí)驗(yàn)室提供。

2.2 方法

2.2.1 樣品前處理

稱取羧甲基殼聚糖膜劑約0.15 g于50 mL容量瓶中，加超純水溶解，定容到刻度線，搖勻，過0.22 μm濾膜。

2.2.2 色譜條件

陰離子交換色譜柱：Shodex IC SI-52 4E；淋洗液為8.0 mmol/L的碳酸鈉溶液；流速為0.8 mL/min；柱溫為45 ℃；進(jìn)樣量為20 μL。

3 結(jié)果與討論

3.1 分離柱的選擇

采用各分離柱推薦的陰離子分析標(biāo)準(zhǔn)條件為分離條件，對(duì)于同一二甘醇酸標(biāo)準(zhǔn)品，比較Metrosep A Supp 5 250、NJ-SA-4A及Shodex IC SI-52 4E三根陰離子分離柱的分離效果，見圖1。

對(duì)比圖1a、圖1b、圖1c可以看出，在各分離柱推薦的標(biāo)準(zhǔn)條件下，對(duì)于Metrosep A Supp 5 250色譜柱，二甘醇酸峰型存在拖尾，二甘醇酸與雜質(zhì)峰分離度為1.34；對(duì)于NJ-SA-4A色譜柱，二甘醇酸峰與雜質(zhì)峰未能分離；對(duì)于Shodex IC SI-52 4E色譜柱，二甘醇酸與雜質(zhì)達(dá)到基線分離，分離度為2.5。由此可見，前兩支色譜柱均不能滿足定量分析要求，因此選定Shodex IC SI-52 4E作為分析二甘醇酸的分離柱。

圖1 不同分離柱分離二甘醇酸效果比較

3.2 淋洗液濃度的優(yōu)化

由3.1節(jié)可知，Shodex IC SI-52 4E分離柱分析二甘醇酸具有較好的效果，但是，在標(biāo)準(zhǔn)分析條件下，其分析時(shí)間較長。為提高分析效率，有必要優(yōu)化淋洗液濃度條件。本文比較了3種淋洗液濃度條件下Shodex IC SI-52 4E的分離效果及所需時(shí)間，見圖2。圖2a、圖2b、圖2c分別為Na2CO3淋洗液濃度為3.6 mmol/L、8.0 mmol/L、12.0 mmol/L時(shí)的離子色譜圖。從圖2中可以看出，當(dāng)淋洗液濃度為3.6 mmol/L及8.0 mmol/L時(shí)二甘醇酸與雜質(zhì)峰都能夠達(dá)到基線分離，隨著淋洗液濃度的增大分析時(shí)間縮短，然而，增大淋洗液濃度到12.0 mmol/L時(shí)，二甘醇酸與雜質(zhì)峰不能基線分離，另外，實(shí)驗(yàn)過程中，淋洗液濃度為12.0 mmol/L時(shí)，容易造成色譜柱壓力過大，因此最終選定淋洗液濃度為8.0mmol/L。

圖2 不同濃度Na2CO3淋洗液分離二甘醇酸的效果

3.3 方法學(xué)考察

標(biāo)準(zhǔn)曲線：以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，線性方程為A=0.0287C+0.0111，R2=0.9999。

檢出限：由D.L.=(3HN/H)×C，(式中HN為噪音峰高，H為標(biāo)樣中離子的峰高，C為標(biāo)樣中離子的濃度)計(jì)算測(cè)得二甘醇酸檢出限為1.98 μg/L。

精密度：取二甘醇酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，連續(xù)7次進(jìn)樣，峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=2.30%，保留時(shí)間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=0.01%。

加標(biāo)回收率：采用標(biāo)準(zhǔn)加入法平行測(cè)定3個(gè)樣品中的二甘醇酸，測(cè)得平均回收率為95.33%，見表1。

表1 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.4 實(shí)際樣品分析

將8批羧甲基殼聚糖樣品分別按照2.2.1所示方法前處理后，在2.2.2所示色譜條件下進(jìn)行離子色譜分析，測(cè)得各羧甲基殼聚糖樣品中二甘醇酸含量(mg/g)，見表2。

表2 羧甲基殼聚糖中殘留二甘醇酸的含量

結(jié)果表明，只有第6批產(chǎn)品的含量應(yīng)小于0.1%(m/m)，達(dá)到手術(shù)用羧甲基殼聚糖粉劑、膜劑的醫(yī)藥衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。因此，有必要對(duì)每一批次羧甲基殼聚糖的二甘醇酸殘留進(jìn)行檢測(cè)，采取相應(yīng)的措施，降低羧甲基殼聚糖的二甘醇酸殘留，以達(dá)到行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求。

4 結(jié)論

本文建立了抑制電導(dǎo)——離子色譜法測(cè)定手術(shù)用羧甲基殼聚糖中殘留二甘醇酸的方法，能夠在15min內(nèi)完成對(duì)羧甲基殼聚糖中殘留二甘醇酸的測(cè)定。實(shí)驗(yàn)表明，該方法操作簡(jiǎn)單、快速，提高了分析效率，能夠滿足醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范的要求。