林強(qiáng)
摘要:醋酸阿托西班是子宮內(nèi)及蛻膜、胎膜上受體的催產(chǎn)素競爭性的拮抗劑,能有效幫助早產(chǎn)的孕婦推遲即將來臨的早產(chǎn),達(dá)到保胎的目的。目前通常采用HPLC法測定醋酸阿托西班含量及有關(guān)物質(zhì),其檢測時間較長,化學(xué)試劑用量大,本文參照HPLC測定方法,進(jìn)行UPLC含量及有關(guān)物質(zhì)測定方法學(xué)研究。
關(guān)鍵詞: HPLC、UPLC、醋酸阿托西班、方法學(xué)
【中圖分類號】 R4 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】 A? ? ? 【文章編號】2107-2306(2022)12--01
原料藥生產(chǎn)過程中,需嚴(yán)格控制每一道工序純化產(chǎn)物的有關(guān)物質(zhì),故而每次純化收集的餾分都需經(jīng)過檢測,檢測符合要求后方可轉(zhuǎn)入下一道工序。目前生產(chǎn)過程中的檢測,主要以高效液相色譜儀(HPLC)進(jìn)行檢測。其單次檢測耗時較長,大批量生產(chǎn)時檢測次數(shù)多,需配備較多的高效液相色譜儀(HPLC)及較長的檢測周期以滿足生產(chǎn)的需求,設(shè)備、時間及人工成本較高。
目前,超高效液相色譜儀(UPLC)發(fā)展技術(shù)已十分成熟,其采用的色譜柱填料粒徑更小,更利于有關(guān)物質(zhì)的分離。相比較于高效液相色譜儀(HPLC),它的主要優(yōu)勢有分離度高,檢測時間短,靈敏度更高,溶劑用量小等優(yōu)點。如果能在原料藥生產(chǎn)過程中使用,能夠大大降低單次檢測時長,檢測周期都能較大的縮短,對于原料藥生產(chǎn)過程的成本控制是非常有效的。而且,超高效液相色譜儀(UPLC)具有靈敏度高的優(yōu)點,對于產(chǎn)品質(zhì)量的控制也能起到很大的作用。
本文根據(jù)醋酸阿托西班原料藥HPLC測定方法,進(jìn)行UPLC方法學(xué)研究,旨在探討UPLC條件下中間控制過程檢測的適用性。
1. 儀器及試劑
本次使用的是waters公司生產(chǎn)的超高效液相色譜儀ACQUITY UPLC H-Class系統(tǒng),C18色譜柱,規(guī)格為:2.1×50mm,1.8微米;試劑為:乙腈,純化水,溶劑:50mmol/L磷酸二氫鉀溶液。
2. 試驗
2.1專屬性試驗:
分別稱取經(jīng)過結(jié)構(gòu)確認(rèn)的,生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的相關(guān)雜質(zhì)(雜質(zhì)1、雜質(zhì)3、雜質(zhì)9、雜質(zhì)27),用溶劑進(jìn)行稀釋配制成試液。
將目標(biāo)產(chǎn)品阿托西班用溶劑配制成供試品溶液,與各雜質(zhì)試液按(濃度比約為100:1)比例混合配制成系統(tǒng)適用性溶液,并對該系統(tǒng)適用性溶液進(jìn)行檢測,確定該洗脫條件下各組分分離及柱效情況。要求各組分USP分離度≥1.5,USP理論塔板數(shù)≥5000。檢測結(jié)果如下:
從上表可以看出,系統(tǒng)適用性溶液各組分USP分離度>1.5,理論塔板數(shù)>25000,各組分之間均能達(dá)到有效分離,系統(tǒng)適用性良好。
2.2耐用性試驗:
2.2.1、分別采用0.15ml/min、0.20ml/min、0.25ml/min,三個不同的流速,對系統(tǒng)適用性溶液進(jìn)行檢測,確定不同流速情況下系統(tǒng)適用性溶液分離情況;
2.2.2、分別采用三根相同規(guī)格,不同品牌色譜柱,按0.2ml/min的流速,對系統(tǒng)適用性溶液進(jìn)行檢測,確定不同品牌色譜柱情況下該系統(tǒng)適用性溶液分離情況。
通過檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn),不同流速情況下,系統(tǒng)適用性溶液各組分USP分離度均>1.5,理論塔板數(shù)均>25000,流速的細(xì)微變化對樣品檢測分離無影響;不同品牌色譜柱之間檢測結(jié)果同樣滿足分離度及柱效要求,保留時間基本一致。
2.3定量限及檢測限試驗:
通過檢測,通常信噪比達(dá)到10~15,可作為定量限;信噪比達(dá)到3~5,可作為檢測限。定量限及檢測限均符合要求,滿足日常生產(chǎn)需求。
2.4線性范圍試驗:
取溶劑,定量限試液進(jìn)樣1ul作為最低點,取阿托西班配制樣品溶液,分別進(jìn)樣0.5ul、1.0ul、1.5ul、2.0ul、2.5ul, 檢測結(jié)果峰面積分別為142、2837301、5866774、8837434、11769891、14843102,通過計算得出R2=0.9999,即當(dāng)前樣品濃度下,在當(dāng)前的進(jìn)樣量范圍內(nèi),結(jié)果滿足線性關(guān)系。
2.5準(zhǔn)確度(回收率)試驗:
配制成阿托西班含量分別為80%、100%、120%的三組樣品,每組檢測3次,共計9次,并計算其回收率。回收率(%)=實際測定值/理論值*100%,通過結(jié)果計算回收率為100.13%,符合要求。
穩(wěn)定性試驗:
配制樣品溶液進(jìn)行穩(wěn)定性考察,分別在:0小時、2小時、4小時、8小時、12小時、24小時、30小時進(jìn)樣測定,樣品峰面積RSD≤0.6%。樣品溶液穩(wěn)定性良好。
2.6進(jìn)樣精密性試驗:
2.7.1、配制阿托西班樣品溶液,連續(xù)進(jìn)樣6針進(jìn)行測試進(jìn)樣精密度,確定設(shè)備重復(fù)性,保留時間及峰面積RSD分別為0.8%;0.6%。
2.7.2、使用不同實驗室,同型號設(shè)備,相同參數(shù)條件,不同操作人員連續(xù)進(jìn)樣6針進(jìn)行檢測中間精密度。
檢測結(jié)果顯示,進(jìn)樣精密度保留時間及峰面積RSD值分別為0.0%及0.1%,設(shè)備重復(fù)性精密度良好。
不同實驗室檢測結(jié)果顯示,保留時間及峰面積RSD分別為0.3%和0.3%,重復(fù)性符合要求,中間精密度良好。
3. 結(jié)論
通過上述試驗結(jié)果表明,在當(dāng)前醋酸阿托西班原料藥UPLC檢測色譜條件下,主成分阿托西班與雜質(zhì)之間的分離度、柱效,系統(tǒng)適用性良好;設(shè)備定量、檢測靈敏度高,設(shè)備準(zhǔn)確度及精密度符合生產(chǎn)需求,可以作為醋酸阿托西班中間過程控制的檢測方法。
參考文獻(xiàn):
[1]HPLC法測定醋酸阿托西班有關(guān)物質(zhì)的研究[J]. 姚志勇,支欽,李新宇.? 中國處方藥. 2014(05)