何金釗，馮鵬霏，覃定彪，周大顏，李華，陳子桂*，馬華威

（1.廣西壯族自治區(qū)水產(chǎn)引育種中心，廣西壯族自治區(qū) 南寧 530031；2．廣西壯族自治區(qū)水產(chǎn)科學(xué)研究院，水產(chǎn)遺傳育種與健康養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西壯族自治區(qū) 南寧 530021）

糖類是生物有機(jī)體的主要能量和營(yíng)養(yǎng)來(lái)源，是動(dòng)物飼料開發(fā)和研究的主要基礎(chǔ)配料。適宜的糖類添加量不僅能有效促進(jìn)生物生長(zhǎng)發(fā)育和增強(qiáng)免疫，還可減少蛋白浪費(fèi)和飼養(yǎng)成本，提高養(yǎng)殖效益。水生動(dòng)物與陸生動(dòng)物在生存環(huán)境和構(gòu)造機(jī)制方面存在較大差異，其對(duì)糖類的利用力較低，如肉食性水生動(dòng)物的糖類利用能力比草食性和雜食性要低。此外，多糖的來(lái)源、分子質(zhì)量和結(jié)構(gòu)差異也影響了水生動(dòng)物對(duì)糖的利用程度。因此，探究水產(chǎn)養(yǎng)殖品種對(duì)多糖類的營(yíng)養(yǎng)需求，是開發(fā)專用飼料的基礎(chǔ)工作。

黃沙鱉（）是中華鱉的地方種，分布于廣西、廣東的西江流域地區(qū)，是西江水系特有的鱉種，具有食譜廣、環(huán)境適應(yīng)能力強(qiáng)、肉質(zhì)營(yíng)養(yǎng)豐富、口感鮮嫩等特點(diǎn)，是我國(guó)重要的淡水鱉類經(jīng)濟(jì)養(yǎng)殖品種之一。目前，有關(guān)養(yǎng)殖龜鱉對(duì)脂肪類、蛋白類、微量元素、維生素的營(yíng)養(yǎng)需求方面的研究較多，關(guān)于龜鱉對(duì)糖類營(yíng)養(yǎng)需求方面也有報(bào)道。例如投喂含0.4%低聚糖的飼料能提高黃沙鱉的生長(zhǎng)性能，改善其腸道微生物菌群和代謝狀況，并提高其免疫性能；飼料中添加1 g/kg的β-葡聚糖，能大大提高中華鱉的存活率，改善其肉質(zhì)和口感。目前，關(guān)于其他多糖源對(duì)中華鱉生長(zhǎng)和代謝影響方面的研究報(bào)道較少。

研究黃沙鱉對(duì)不同糖類的需求量和利用能力，有利于提升稻田養(yǎng)殖黃沙鱉的生長(zhǎng)性能，提高養(yǎng)殖的綜合效益。2020年5月1日—8月7日，針對(duì)黃沙鱉的營(yíng)養(yǎng)需求，在其飼料中添加小麥淀粉、玉米淀粉、α-淀粉，分析黃沙鱉的生長(zhǎng)性能、生理生化指標(biāo)的變化，篩選出適合于黃沙鱉稻田養(yǎng)殖的糖源，為研究專配飼料提供基礎(chǔ)資料。

1 材料與方法

1.1 樣品

黃沙鱉由廣西維軍生態(tài)農(nóng)業(yè)有限公司提供。放養(yǎng)前將幼體放至養(yǎng)殖箱（2.05 m×1.5 m×1.2 m）中喂養(yǎng)14 d，以適應(yīng)試驗(yàn)環(huán)境。前7 d投喂魚肉，后7 d投喂鱉專配飼料。14 d適應(yīng)期結(jié)束后，將健康個(gè)體[平均濕體質(zhì)量（91.87±8.67）g/只]投放到廣西柳州市三江縣廣西維軍生態(tài)農(nóng)業(yè)有限公司稻田基地，開展養(yǎng)殖試驗(yàn)。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)分為3組，分別為玉米淀粉組、α-淀粉組、小麥淀粉組，每組做3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)試驗(yàn)用鱉8只。稻田養(yǎng)鱉試驗(yàn)時(shí)間為98 d，于每天18：00投喂飼料1次，投喂量不超過(guò)平均體質(zhì)量的5%。投喂1 h后記錄鱉的投喂量、死亡數(shù)量。試驗(yàn)水溫（24.0±2.0）℃，pH值（7.3±0.2），ρ（溶解氧）≥5 mg/L，ρ（氨氮）<0.05 mg/L。

1.3 試劑與儀器

測(cè)定黃沙鱉血清的T-CHO、TG、肝糖原和肌糖原的血清總膽固醇（T-CHO）試劑盒、甘油三酯（TG）試劑盒、肝糖原試劑盒、肌糖原試劑盒、葡萄糖試劑盒，來(lái)源于上海生工生物工程有限公司；測(cè)定黃沙鱉腸道的胃蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶的胃蛋白酶活性測(cè)定試劑盒、脂肪酶活性測(cè)定試劑盒、淀粉酶活性測(cè)定試劑盒，來(lái)源于上海酶聯(lián)生物公司；磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）活性測(cè)定試劑盒，來(lái)源于廣州賽思博科技有限公司；測(cè)定黃沙鱉肌肉糖酵解水平的己糖激酶（HK）活性測(cè)定試劑盒、丙酮酸激酶（PK）活性測(cè)定試劑盒、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC）活性測(cè)定試劑盒，來(lái)源于武漢華美生物公司。

采用SDACM-4000氧彈式熱量?jī)x檢測(cè)飼料能量（上海生工股份有限公司）；Sysmex Chemix-800全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定黃沙鱉肌肉的常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分（上海生工股份有限公司）。

1.4 黃沙鱉營(yíng)養(yǎng)配制

自制黃沙鱉的飼料基礎(chǔ)營(yíng)養(yǎng)成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為：40%魚粉、19%酪蛋白、8%菜籽油、0.75%微晶纖維素、0.25%氯化膽堿、4%羧甲基纖維素鈉、1%維生素預(yù)混料（100 mg/kg V，40 mg/kg V，5 000 mg/kg V，2 000 mg/kg V，50 mg/kg V，200 mg/kg V，50 mg/kg V，0.5 mg/kg V，325 mg/kg V，175 mg/kg煙酸；5 mg/kg葉酸；1 000 mg/kg肌醇，2.5 mg/kg生物素，50 mg/kg泛酸鈣）、5%礦物質(zhì)預(yù)混料（5 000 mg/kg NaCl，15 000 mg/kg Ca（HPO），1 000 mg/kg FeSO·7HO，350 mg/kg ZnSO·7HO，40 mg/kg MnSO·4HO，12 mg/kg CuSO·5HO，80 mg/kg CoCl·6HO，5 mg/kg KIO），以等氮等能形式分別向基礎(chǔ)營(yíng)養(yǎng)成分添加24%玉米淀粉、α-淀粉、小麥淀粉3種不同多糖，將3組配制的混合飼料分別粉碎、混勻，隨后過(guò)孔徑0.25 mm的篩。混合飼料用電子天平精準(zhǔn)稱量，用絞肉機(jī)制成直徑2 mm短條狀料，風(fēng)干，水分保持低于9%。條狀飼料破碎機(jī)破碎為直徑2 mm的顆粒飼料。各試驗(yàn)糖源組營(yíng)養(yǎng)水平見表1。

表1 各試驗(yàn)糖源組營(yíng)養(yǎng)水平（干物質(zhì)）

1.5 生長(zhǎng)指標(biāo)測(cè)定

于開始投喂（0周）和試驗(yàn)結(jié)束（14周）分別取樣，測(cè)定黃沙鱉生長(zhǎng)指標(biāo)，計(jì)算質(zhì)量增加率（WGR）、成活率（SR）、特定生長(zhǎng)率（SGR）、蛋白質(zhì)效率（PER）、飼料效率（FE）、臟體指數(shù)（VIS）、肝體指數(shù)（HIS）、肥滿度（）。

式 中：——末 體 質(zhì) 量，g；——初 體 質(zhì) 量，g；——試驗(yàn)初鱉個(gè)數(shù)；——試驗(yàn)?zāi)M個(gè)數(shù)；——試驗(yàn)時(shí)間，d；——攝入蛋白質(zhì)干質(zhì)量，g；——總攝入飼料干質(zhì)量，g；——內(nèi)臟質(zhì)量，g；——肝質(zhì)量，g；——體質(zhì)量，g；——體積，cm；——肥滿度，g/cm。

1.6 常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分測(cè)定

粗蛋白質(zhì)、水分、粗脂肪、灰分的含量及飼料能量，按照美國(guó)分析化學(xué)家協(xié)會(huì)（AOAC）標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定。

1.7 血清指標(biāo)測(cè)定

按照試劑盒操作步驟，測(cè)定血清的肝糖原、肌糖含量，TG和T-CHO的含量按照AOAC方法測(cè)定。

1.8 消化酶活測(cè)定

胃蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶活性嚴(yán)格按照試劑盒操作步驟執(zhí)行。

1.9 糖代謝關(guān)鍵酶測(cè)定

按照試劑盒操作步驟測(cè)定HK、PK、PEPCK、PEPC的活性。

1.10 統(tǒng)計(jì)分析

采用軟件Origin 10.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果以（平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤）表示。利用Duncan多重比對(duì)方法檢測(cè)組間數(shù)據(jù)的差異性，>0.05表示差異不顯著，<0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 生長(zhǎng)性能分析

不同糖源對(duì)稻田養(yǎng)殖鱉的生長(zhǎng)性能影響見表2。由表2可見，SR和在3組間差異不顯著（>0.05），WGR、SGR、PER和FE在玉米淀粉組最高。HIS和VIS差異顯著（<0.05），在α-淀粉組最高（<0.05），在小麥淀粉組最低（<0.05）。

表2 不同糖源對(duì)稻田養(yǎng)殖鱉的生長(zhǎng)性能影響①

2.2 營(yíng)養(yǎng)組成成分分析

不同糖源對(duì)肌肉和肝成分的影響見表3。由表3可見，水分和灰分的含量在3組的肌肉與肝中差異不顯著（>0.05），粗蛋白含量在小麥淀粉組和玉米淀粉組的肌肉和肝中比α-淀粉組高（<0.05），小麥淀粉組和玉米淀粉組之間差異不顯著（>0.05）。粗脂肪含量在α-淀粉組和玉米淀粉組的肌肉和肝比小麥淀粉組低（<0.05），在α-淀粉組和玉米淀粉組差異不顯著（>0.05）。3個(gè)不同多糖組中，肌肉的肝糖原和肌糖原含量差異顯著（<0.05），肝糖原和肌糖原的含量在α-淀粉組最高，小麥淀粉組最低，α-淀粉組的肌肝糖原含量比玉米淀粉組和小麥淀粉組分別高1.37倍和4.04倍，α-淀粉組的肝糖原含量比玉米淀粉組和小麥淀粉組分別高1.92倍和2.73倍。

表3 不同糖源對(duì)肌肉和肝成分的影響①

2.3 血清指標(biāo)分析

不同糖源對(duì)鱉血清生化指標(biāo)的影響見表4。由表4可見，小麥淀粉組的血清葡萄糖、TG、T-CHO的含量最低，α-淀粉組顯著最高（<0.05）。

表4 不同糖源對(duì)鱉血清生化指標(biāo)的影響① mmol/L

2.4 消化酶分析

不同糖源對(duì)鱉胃和腸道消化酶活性的影響見表5。由表5可見，3種糖源組中，胃和腸道的消化酶活性呈現(xiàn)顯著性差異（<0.05），胃蛋白酶活性在小麥淀粉組最高，玉米淀粉組最低。腸脂肪酶活性在玉米淀粉組和α-淀粉組差異不顯著（>0.05），但兩者均顯著高于小麥淀粉組（<0.05）。小麥淀粉組的腸淀粉酶活性顯著低于α-淀粉組和玉米淀粉組（<0.05），但在α-淀粉組和玉米淀粉組差異不顯著（>0.05）。

表5 不同糖源對(duì)鱉胃和腸道消化酶活性的影響①U/mg

2.5 肝糖代謝關(guān)鍵酶活性分析

不同糖源對(duì)羅氏沼蝦糖代謝關(guān)鍵酶活性的影響見表6。由表6可見，HK和PEPCK的活性在小麥淀粉組最低（<0.05），而在玉米淀粉組和α-淀粉組差異不顯著（>0.05）。PK和PEPC的活性在3種不同多糖組中差異不顯著（>0.05），但在α-淀粉組最高。

表6 不同糖源對(duì)羅氏沼蝦糖代謝關(guān)鍵酶活性的影響①U/mg

3 討論

動(dòng)物攝食大分子糖后不能被直接吸收，需經(jīng)一系列水解或磷酸解等化學(xué)反應(yīng)降解為葡萄糖，才能被機(jī)體的消化器官吸收利用。本研究結(jié)果揭示了玉米淀粉能改善稻田鱉的生長(zhǎng)性能和免疫特性，原因可能是玉米淀粉分子質(zhì)量小于α-淀粉和小麥淀粉，容易被鱉的消化器官分解和迅速吸收利用，因此，認(rèn)為玉米淀粉可作為鱉飼料的主要多糖源添加物，合適的添加量和比例能改善鱉的生長(zhǎng)和免疫功能。本研究結(jié)果與其他鱉類如越南鱉、泰國(guó)鱉、云南鱉、緬甸鱉的研究結(jié)果一致，但不同鱉類對(duì)玉米淀粉的吸收利用效率略有不同，可能是受到不同的品種、生存環(huán)境及試驗(yàn)操作影響所致。

動(dòng)物機(jī)體的肝糖原含量與其攝食飼料的糖水平、多糖種類與分子質(zhì)量有關(guān)，飼料的糖含量高和其被動(dòng)物機(jī)體吸收利用率高是引起機(jī)體肝體比增大的主要原因之一。本研究結(jié)果顯示，玉米淀粉組的肝體比和肝糖原的含量最高（<0.05），3種多糖的總能和添加量無(wú)顯著差異，可能是玉米淀粉分子質(zhì)量小于α-淀粉和小麥淀粉的原因。多糖是水產(chǎn)養(yǎng)殖品種的主要營(yíng)養(yǎng)與能量來(lái)源，不同糖類被不同品種及亞種的利用率有差異。本研究中，3個(gè)組的肌肉粗蛋白和粗脂肪的含量存在差異，小麥淀粉組的粗蛋白和粗脂肪的含量均最高，可能是由于機(jī)體對(duì)小麥淀粉的選擇性吸收利用能力強(qiáng)。機(jī)體肌糖原、肝糖原和血糖含量偏高，可促使糖酵解生成的磷酸二羥丙酮還原為3-磷酸甘油，它和丙酮酸徹底脫氫氧化生成的乙酰輔酶A都是脂肪合成的重要部分。本研究未發(fā)現(xiàn)α-淀粉組、小麥淀粉組代謝酶活性顯著提高，鱉攝食小麥淀粉后粗脂肪過(guò)高的原因有待于深入研究。

此外，本研究也發(fā)現(xiàn)α-淀粉組的肝糖原和肌糖原的含量最低，而小麥淀粉組最高，表明小麥淀粉雖然能導(dǎo)致鱉肉積累脂肪和蛋白質(zhì)積累，但對(duì)免疫指標(biāo)不利，不能作為稻田鱉優(yōu)先選取的糖源。本研究結(jié)果顯示，α-淀粉組的肝粗蛋白含量過(guò)低，可能是α-淀粉分解了過(guò)量的葡萄糖，消化道內(nèi)壁大量吸收位點(diǎn)被占據(jù)，導(dǎo)致鱉類氨基酸吸收受阻，引起蛋白質(zhì)沉積降低。綜上所述，玉米淀粉能改善稻田鱉的生長(zhǎng)免疫功能，比小麥淀粉和α-淀粉的綜合效果較好，可以作為稻田鱉飼料的主要添加物。

品種、飼料營(yíng)養(yǎng)水平、環(huán)境變化影響了水產(chǎn)養(yǎng)殖品種消化酶活性的分泌調(diào)節(jié)。本研究結(jié)果顯示，鱉的3種消化酶活性（胃蛋白酶、腸脂肪酶、腸淀粉酶）受3種多糖影響不同。胃蛋白酶活性以小麥淀粉組最高，與鱉肌肉粗蛋白含量高相對(duì)應(yīng)；腸脂肪酶活性以α-淀粉組最高；腸淀粉酶活性以玉米淀粉組最高。α-淀粉組和玉米淀粉組的粗脂肪含量均低于小麥淀粉組，可能是鱉攝食含有小麥淀粉的飼料后，小麥淀粉不能充分吸收利用，體內(nèi)糖含量過(guò)高，過(guò)多的糖源在三羧酸循環(huán)中更多地走向脂類合成，也進(jìn)一步佐證了上述小麥淀粉對(duì)鱉的免疫指標(biāo)產(chǎn)生不利影響，不能作為稻田鱉優(yōu)先選取的糖源。

糖酵解的2種關(guān)鍵酶是PK和HK，水生動(dòng)物的肝HK活性要比陸生機(jī)體低，制約了水生動(dòng)物的體內(nèi)葡萄糖代謝功能。HK專一性差，米氏常數(shù)（Km）值低，易飽和而失去活力，飼料組成的改變對(duì)其活性幾乎無(wú)影響。本研究結(jié)果顯示，HK活性在玉米淀粉組和α-淀粉組較高，表明飼料糖源變化導(dǎo)致了HK活性變化，與上述觀點(diǎn)矛盾，需要進(jìn)一步研究證實(shí)。種類不同其HK活性也有差異，含有碳水化合物的不同飼料對(duì)鱉的肝HK有顯著影響，如泰國(guó)鱉、中華鱉。水產(chǎn)養(yǎng)殖品種的PK活性受環(huán)境變化、營(yíng)養(yǎng)水平高低等影響，該研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PK活性在3種糖源間的差異不顯著，可能由于PK與這3種多糖利用程度的關(guān)聯(lián)性不大。糖異生的關(guān)鍵酶是PEPCK。該研究發(fā)現(xiàn)，α-淀粉組的機(jī)體糖水平較高，并且其PEPCK活性高于小麥淀粉組，而低于玉米淀粉組，推測(cè)可能由于鱉機(jī)體的糖水平高誘導(dǎo)了負(fù)反饋調(diào)節(jié)所致。PEPC參與三羧酸循環(huán)（TAC）回補(bǔ)反應(yīng)，是催化糖異生的一種限速酶。本研究中，小麥淀粉組的肌肉粗脂肪含量較高，可能是糖類在TAC過(guò)程中被轉(zhuǎn)化為脂類，導(dǎo)致脂肪積累。但是，稻田鱉的PEPC活性在3組間差異不顯著，原因需要進(jìn)一步探究。

4 結(jié)論

該研究發(fā)現(xiàn)，玉米淀粉組能顯著提高鱉生長(zhǎng)性能，增加蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)成分，改善免疫指標(biāo)，提高消化酶和糖代謝的活性。綜合來(lái)講，玉米淀粉組的鱉生長(zhǎng)性能、消化功能、糖代謝等指標(biāo)最佳，說(shuō)明玉米淀粉能顯著促進(jìn)鱉健康生長(zhǎng)，可作為飼料添加糖源。未來(lái)，玉米淀粉將與其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)相結(jié)合深入研究營(yíng)養(yǎng)鱉的飼料配方，提供精準(zhǔn)營(yíng)養(yǎng)策略。