李懿，曾莉，何麗雯，譚冬梅，張倩，譚毅

(重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心，重慶 400016)

抑郁癥是情感、情緒表達(dá)和調(diào)節(jié)紊亂的一類精神疾病，常伴有焦慮癥狀，有高患病率、高復(fù)發(fā)率、高致殘率、高致死率等特點(diǎn)，嚴(yán)重危害人類身心健康[1]。 抑郁癥的發(fā)病機(jī)制迄今尚未完全闡明，主要包括單胺遞質(zhì)失調(diào)、 下丘腦- 垂體- 腎上腺(hypothalamic-pituitary-adrenal axis， HPA) 激 素 紊亂、神經(jīng)營養(yǎng)因子學(xué)說和炎癥因子上調(diào)等學(xué)說。 目前抑郁癥治療方式主要包括藥物治療與心理治療[2]。 然而，迄今為止，沒有一種抗抑郁藥能夠覆蓋臨床的抑郁癥狀譜，且長期服用會造成一系列副作用。 因此，抑郁癥的預(yù)防和治療手段的優(yōu)化正成為我國醫(yī)療衛(wèi)生工作的重點(diǎn)之一。

國內(nèi)外已有研究顯示，音樂因具有調(diào)節(jié)生理和心理的雙重功效而成為抑郁治療的潛在方法[3-4]，但仍存在很多挑戰(zhàn)。 與常規(guī)治療最大的區(qū)別在于音樂治療所使用的媒介即音樂是不可定量的，以“聆聽音樂的時間長短”作為音樂治療的劑量沒有科學(xué)依據(jù)，而且音樂的風(fēng)格、節(jié)奏、音色、旋律等特征都可以影響個體的感知和治療效果[5]。 音樂治療具有一定程度的經(jīng)驗(yàn)性和主觀性，需要更加深入的實(shí)證研究來探索音樂中各種元素的效應(yīng)。 因此，本研究利用抑郁癥研究使用最廣泛的CUMS 動物模型，通過采取不同風(fēng)格的音樂進(jìn)行干預(yù)，初步探討音樂改善大鼠的抑郁樣行為及其相關(guān)機(jī)制，為音樂治療抑郁的臨床應(yīng)用奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動物

52 只 SPF 級雄性 SD 大鼠，6 ～ 8 周齡，體重220 ～280 g，購買并飼養(yǎng)觀察于重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心【SCXK(渝)2018-003】【SYXK(渝)2018-0003】。 飼養(yǎng)環(huán)境:相對濕度40% ～ 70%，溫度控制在(22 ± 3)℃。 光照周期為 12 h 明暗交替，自由采食、飲水。 實(shí)驗(yàn)方案已獲得重慶醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)倫理委員會審批通過(倫理審批號:2021047)。

1.1.2 主要試劑與儀器

山羊抗大鼠BDNF 多克隆抗體(PB9075，武漢博士德生物工程有限公司)、NT-3 多克隆抗體(BA1293，武漢博士德生物工程有限公司)、小鼠抗β-actin 單克隆抗體(AB8226，美國 Abcam)、過氧化物酶標(biāo)記兔抗山羊二抗(ZB2303，北京中山金橋公司)、免疫組化試劑盒(PV9001，北京中山金橋公司)、大鼠5-HT ELISA 試劑盒(RX303050，莫納生物科技生物有限公司)、大鼠 BDNF ELISA 試劑盒(RX302461R，莫納生物科技生物有限公司)，大鼠CORT ELISA 試劑盒(RX302425R，莫納生物科技生物 有 限 公 司 )、 大 鼠 IL-1β ELISA 試 劑 盒(RX302869R，莫納生物科技生物有限公司)。 R12U臺式音箱(漫步者，中國)、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(Agilent， 美 國 )、 Thermo 高 速 離 心 機(jī) (Thermo Scientific，美國)、石蠟切片機(jī)(Leica，德國)、光學(xué)顯微鏡(Leica，德國)、凝膠成像儀(Gene，美國)，行為學(xué)分析軟件(Anymaze，美國)。

1.2 方法

1.2.1 音樂曲目的選取

根據(jù)音樂的風(fēng)格類型，篩選出10 首音樂。 通過音樂的結(jié)構(gòu)、和弦、樂理將音樂分為輕音樂組(Light)和古典音樂組(Classical)，輕音樂組包含《龍貓》《能看見海的街道》《伴隨著你》《晴朗的日子》《鳥人》《風(fēng)之谷》曲目，古典音樂組包含《Piano Conceto No.23 in Major，K488(Ⅰ Ⅱ Ⅲ)》。 輕音樂組完整播放1 次26 min 38 s，古典音樂組完整播放1 次24 min 50 s。 輕音樂組中的6 首曲目列表循環(huán)播放。

1.2.2 CUMS 抑郁模型的建立方法

SD 大鼠于實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周，依據(jù)SPT 結(jié)果剔除糖水偏好百分比小于80%的個體。 CUMS 刺激方式包括空籠盒(24 h)、潮濕墊料(24 h)、禁食(12 h)、禁水(24 h)、頻閃(12 h)、4℃冷水游泳應(yīng)激(5 min)、45℃熱水游泳應(yīng)激(5 min)、白噪音(24 h)、鼠籠傾斜 45°(24 h)、夾尾(1 min)、束縛(4 h)、明暗交替(12 h)、晝夜顛倒。 為避免大鼠對單一或有規(guī)律的刺激產(chǎn)生耐受性，每天隨機(jī)選取兩種刺激，且相同刺激不連續(xù)出現(xiàn)，持續(xù)刺激4 周。 刺激結(jié)束后，通過SPT 和FST 實(shí)驗(yàn)篩選出糖水偏好百分比降低與強(qiáng)迫游泳不動時間增加的CUMS 模型大鼠，共39 只。 對照組13 只大鼠不給予任何刺激。

1.2.3 音樂干預(yù)

抑郁模型大鼠隨機(jī)分為模型組(Model)、輕音樂組(Light)、古典音樂組(Classical)，每組 13 只。模型組每天繼續(xù)給予刺激，輕音樂組、古典音樂組除了給予與模型組相同的刺激外，還每天分別給予輕音樂和古典音樂4 h(21:00 ～23:00，2:00 ～4:00)，鼠籠距播放源1 m 左右，呈弧形散開，音量60～ 70 dB，持續(xù) 3 周。

1.2.4 行為學(xué)測試

(1)SPT:在第0 周(即環(huán)境適應(yīng)后)、第4 周末(即造模結(jié)束后)和第7 周末(即音樂干預(yù)完成后)進(jìn)行。 實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行4 d 的適應(yīng)性訓(xùn)練，第1、2 天提供兩瓶純水，第3 天提供兩瓶1%蔗糖水，第4 天提供純水和1%蔗糖水各1 瓶。 正式實(shí)驗(yàn)時，白天禁食禁水12 h(8:00 ～20:00)，隨后給予純水和1%蔗糖水12 h(20:00 ～8:00)，記錄12 h 溶液的消耗量。 糖水偏好百分比(%)= 蔗糖溶液飲用量(g)/[蔗糖溶液飲用量(g)+純水飲用量(g)]× 100%。

(2)FST:在第4 周末和第7 周末進(jìn)行。 每只大鼠在實(shí)驗(yàn)前24 h 進(jìn)行15 min 的適應(yīng)性游泳。 泳桶高80 cm，直徑15 cm，水面高度30 cm，水溫22 ～26℃左右。 實(shí)驗(yàn)持續(xù)6 min，用數(shù)碼相機(jī)記錄實(shí)驗(yàn)過程，any-maze 視頻分析軟件統(tǒng)計6 min 內(nèi)小鼠不動總時間。

(3)O-maze:將大鼠放進(jìn)迷宮中央的封閉臂中，any-maze 視頻分析軟件分析其行走路程、進(jìn)入開放臂次數(shù)和在開放臂內(nèi)的停留時間。

(4)OFT:將大鼠置于 100 cm × 100 cm × 40 cm的黑色曠場箱的中心，自由探索環(huán)境5.5 min，安裝在曠場中心上方的攝像機(jī)記錄大鼠的運(yùn)動軌跡，前30 s 用于適應(yīng)環(huán)境，后5 min 用于分析大鼠在曠場箱的運(yùn)動情況，包括大鼠在曠場箱運(yùn)動的總距離、進(jìn)入中心區(qū)域(中心30 cm × 30 cm 的正方形區(qū)域)的次數(shù)和時間。 每次測試后，用75%的乙醇擦拭曠場箱的內(nèi)壁和底面，以消除大鼠的氣味。

1.2.5 取材

第7 周末行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，麻醉大鼠，經(jīng)眼眶后靜脈叢取血之后，二氧化碳過量吸入安樂死處死大鼠，分離頭身。 在冰袋上剪開頭皮，打開顱腔取出全腦。 每組取3 只大鼠全腦固定于4%多聚甲醛液中，其余大鼠腦組織分離海馬組織，冰凍保存。

1.2.6 HE 染色

取多聚甲醛中固定的組織樣本，經(jīng)梯度乙醇脫水、二甲苯透明、浸蠟，制作石蠟包埋塊，4 μm 切片并經(jīng)過脫蠟水化后，將切片浸入蘇木精染液染色5 min，緩流自來水沖洗3 min，再用1%鹽酸乙醇溶液分色30 s，自來水沖洗后，浸入伊紅染液染色2 min，經(jīng)脫水封片后光鏡觀察。

1.2.7 免疫組化

將切片37℃烘烤30 min，二甲苯梯度脫蠟。 每個組織滴加3%過氧化氫，消除過氧化氫酶活性?？乖迯?fù)、封閉，與抗 BDNF 一抗(1 ∶500 稀釋)4℃孵育過夜，清洗后與生物素標(biāo)記的羊抗兔二抗孵育、DAB 顯色、蘇木素復(fù)染，封片。 光鏡下觀察海馬CA1，CA3 和 DG 區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞中 BDNF 的表達(dá)情況，并進(jìn)行圖像采集。

1.2.8 Western Blot

按照1 ∶9(W/V)比例在勻漿管中加入冰冷的RIPA 裂解液(含 100 μg/mL PMSF)，充分研磨，形成 10% 的組織勻漿液，4℃，11 200 r/min 離心10 min，取上清液，使用BCA 試劑盒測定蛋白濃度。使用SDS-PAGE 膠試劑盒配置PAGE 膠，在樣品槽中加入5 × Loading Buffer 預(yù)處理的蛋白樣本，恒壓電泳后將蛋白轉(zhuǎn)到PVDF 膜上，經(jīng)封閉、TBST 清洗3 次后，與 BDNF 一抗(1 ∶1000 稀釋)4℃ 孵育過夜，TBST 清洗3 次，加二抗(1 ∶5000)室溫孵育 2 h后進(jìn)行ECL 顯色。 Image J 分析各條帶灰度值，用光密度比值表示其相對表達(dá)。

1.2.9 ELISA

用ELISA 試劑盒測定血清 BDNF、CORT、5-HT和IL-1β 水平，檢測靈敏度為 pg/mL。 同一指標(biāo)的重復(fù)檢測使用同一批次產(chǎn)品，以避免批間變異。

1.2.10 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)

按照1 ∶3(W/V)比例在勻漿管中加入冰冷的超純水，充分研磨，形成25%的組織勻漿液，4℃，4600 r/min 離心 10 min，取上清液，按照 1 ∶9 比例加入冰冷的乙腈，混勻后4℃，15 000 r/min 離心10 min，取 60 μL 上清液，加入 110 μL 乙腈和 10 μL IS溶液，混勻后 4℃，15 000 r/min 離心10 min，取2 μL上清液上機(jī)檢測。 所有蛋白均在正離子模式下掃描，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用MassLynx(4.1)軟件進(jìn)行處理。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

使用SPSS 23 進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，所有測試計量資料以平均值± 標(biāo)準(zhǔn)誤差()表示，每個實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)3 次。 兩組數(shù)據(jù)比較使用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。 多組數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析(One-way ANOVA)，使用Levene 做方差齊性檢驗(yàn)，事后兩兩比較，使用LSD 法進(jìn)行檢驗(yàn)，P＜0.05 被認(rèn)為具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 音樂干預(yù)改善CUMS 模型大鼠的抑郁樣行為

糖水偏好百分比和強(qiáng)迫游泳不動時間是評價抑郁模型快感缺失的有效客觀指標(biāo)。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:(1)模型組較對照組大鼠的糖水偏好百分比顯著降低(P= 0.0023)，模型組強(qiáng)迫游泳不動時間極顯著延長(P＜0.001)，提示模型組大鼠保持了抑郁狀態(tài)(圖1A，1B)。 (2)輕音樂組與古典音樂組大鼠的糖水偏好百分比較模型組均明顯增加，其差異均具有顯著性(P=0.0060，P=0.0211)。 輕音樂和古典音樂組大鼠強(qiáng)迫游泳不動時間較模型組也均顯著縮短(P=0.0017，P=0.0058)(圖 1A，1B)，提示輕音樂與古典音樂均能有效改善CUMS 模型大鼠的抑郁樣行為。

圖1 不同風(fēng)格音樂干預(yù)對抑郁模型大鼠行為的影響Note. A. Percentage of sucrose preference test. B. Immobile time of forced swimming test. C， D. Times and staying time into the open arms of elevated O maze. E， F. Total moving distance and staying time in the central area in the open field test. Compared with model group，*P ＜0.05，**P ＜ 0.01，***P ＜ 0.001.Figure 1 Effects of different styles of music intervention on behavior of depressed rats

抑郁癥常伴有焦慮等情緒改變，高架O 迷宮和曠場實(shí)驗(yàn)可進(jìn)一步評價大鼠的焦慮和自主活動等狀況。 音樂干預(yù)3 周后，與正常對照組相比，模型組大鼠進(jìn)入O 迷宮開放臂的次數(shù)和停留時間均顯著減少(P= 0.0109，P＜ 0.0001)(圖 1C，1D)，在曠場箱內(nèi)移動的總距離減少(P= 0.0391)(圖1E，1F)，提示模型組大鼠伴有焦慮情緒，自主活動能力和探索能力均下降。 與模型組相比，輕音樂和古典音樂組大鼠進(jìn)入O 迷宮開放臂次數(shù)(P= 0.0049，P= 0.0012)和停留時間(P= 0.0280，P= 0.0156)均顯著增多(圖1C，1D)。 同時，在曠場實(shí)驗(yàn)中，兩兩比較發(fā)現(xiàn)古典音樂組大鼠與模型組相比，在曠場箱內(nèi)移動的總距離和在曠場中心區(qū)域停留的時間均顯著增加(P= 0.0023，P= 0.0104)(圖 1E，1F)。 提示輕音樂與古典音樂改善了抑郁大鼠的焦慮行為，古典音樂明顯增強(qiáng)了大鼠的活動能力與探索行為。

此外，隨著時間增長，大鼠體重均表現(xiàn)出明顯增加:其中對照組增加明顯，模型組增加緩慢。 與模型組相比，輕音樂組和古典音樂組大鼠的體重增加顯著(P= 00065，P= 0.0057)。 輕音樂組增加幅度較古典音樂組較大，但相互之間差異無顯著性(P＞0.05)。 表1 提示輕音樂與古典音樂能拮抗CUMS 刺激導(dǎo)致的體重降低，使其恢復(fù)到正常水平。

表1 音樂干預(yù)后大鼠體重變化()Table 1 Effects of music intervention on weight gain and growth rate of rats()

表1 音樂干預(yù)后大鼠體重變化()Table 1 Effects of music intervention on weight gain and growth rate of rats()

注:與對照組比，##P ＜ 0.01；與模型組比，*P ＜ 0.05，**P ＜ 0.01。Note. Compared with control group， ##P ＜ 0.01. Compared with model group， *P ＜ 0.05， **P ＜ 0.01.

組別Groups 3 周總增重量(g)Total weight gain in 3 weeks(g)體重增長率(%)Growth rate of body mass(%)對照組 Control 64.93 ± 4.86 17.41 ± 1.12模型組 Model 39.45 ± 4.17## 10.53 ± 1.13##輕音樂組 Light 59.34 ± 4.60** 16.96 ± 1.36**古典音樂組 Classical 54.87 ± 4.26* 16.26 ± 1.22**

2.2 音樂改善CUMS 抑郁大鼠行為的機(jī)制

2.2.1 音樂刺激對海馬形態(tài)結(jié)構(gòu)以及BDNF 的影響

大鼠腦組織的HE 結(jié)果顯示，對照組海馬錐體細(xì)胞排列整齊、密度較高、數(shù)量多、細(xì)胞核完整正常。 模型組海馬錐體細(xì)胞出現(xiàn)排列不齊，呈松散狀，胞體固縮、深染，胞質(zhì)溶解。 音樂干預(yù)3 周后，輕音樂組與古典音樂組中海馬神經(jīng)細(xì)胞與對照組類似(圖2A)。 免疫組化檢測發(fā)現(xiàn)，模型組大鼠海馬CA3 區(qū)神經(jīng)細(xì)胞的BDNF 蛋白呈弱陽性，古典音樂組與輕音樂組則為中強(qiáng)度陽性(圖2B)。 Western Blot 結(jié)果顯示，與對照組相比，模型組BDNF 蛋白表達(dá)顯著低于對照組(P= 0.001)，經(jīng)輕音樂和古典音樂干預(yù)后，BDNF 蛋白表達(dá)水平較模型組均明顯回升(P= 0.0044，P= 0.0022)(圖 2C，2D)。 以上結(jié)果說明，音樂一定程度改善了由于CUMS 造模帶來的神經(jīng)元損傷。

圖2 不同風(fēng)格音樂干預(yù)對海馬形態(tài)與BDNF 表達(dá)的影響Note. A. HE staining. B. Immunohistochemical staining of BDNF. C. Western Blot of hippocampal BDNF. D. Semi-quantitative analysis of BDNF expression level.Figure 2 Effects of different styles of music intervention on hippocampal morphology and BDNF expression level

對照組和模型組的BDNF 濃度分別為(163.92± 4.68)pg/mL，(88.13 ± 6.40)pg/mL，其差異具有顯著性(P=0.0001)。 經(jīng)過音樂干預(yù)后，輕音樂組為(123.55 ± 9.93)pg/mL，古典音樂組為(124.31±5.72)pg/mL，與模型組比較，兩組BDNF 含量均顯著升高(P= 0.0055，P= 0.0035)。

2.2.2 音樂刺激對HPA 軸的影響

HPA 軸的CORT 變化是判斷動物是否處于應(yīng)激狀況的常見指標(biāo)。 表2 顯示，較對照組，模型組血清與海馬的CORT 含量均顯著升高(P= 0.006，P= 0.0029)。 音樂干預(yù)后，輕音樂組的血清CORT含量較模型組無顯著變化(P= 0.9278)，但海馬CORT 含量顯著降低(P= 0.0023)。 古典音樂組血清和海馬CORT 含量均顯著降低(P= 0.045，P=0.0029)。 提示古典音樂減輕了抑郁大鼠的應(yīng)激狀態(tài)。

表2 大鼠CORT 含量比較(， n = 10)Table 2 Comparison of CORT content in hippocampus and serum(， n = 10)

表2 大鼠CORT 含量比較(， n = 10)Table 2 Comparison of CORT content in hippocampus and serum(， n = 10)

組別Groups海馬CORT 含量(ng/mL)CORT content in hippocampus(ng/mL)血清CORT 含量(pg/mL)CORT content in serum (pg/mL)對照組 Control 45.57 ± 8.38 1915.54 ± 36.75模型組 Model 88.52 ± 10.86## 2069.47 ± 26.86##輕音樂組 Light 27.66 ± 6.79** 2096.31 ± 23.38古典音樂組 Classical 25.21 ± 4.63** 1944.73 ± 35.99*

2.2.3 音樂刺激對血清單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的影響

單胺類神經(jīng)遞質(zhì)濃度水平下降是抑郁癥的生物學(xué)基礎(chǔ)之一。 表3 顯示，與對照組相比，模型組大鼠血清的5-HT 含量降低(P= 0.0016)。 音樂干預(yù)后，輕音樂組較模型組的5-HT 含量顯著增加(P=0.0033)。 各組大鼠血清 DA 含量無顯著差異。 提升輕音樂提高了抑郁大鼠的單胺神經(jīng)遞質(zhì)的水平。

表3 大鼠血清單胺神經(jīng)遞質(zhì)含量比較(， n = 10)Table 3 Comparison of amine neurotransmitter content in serum(， n = 10)

表3 大鼠血清單胺神經(jīng)遞質(zhì)含量比較(， n = 10)Table 3 Comparison of amine neurotransmitter content in serum(， n = 10)

組別Groups 5-HT 含量(ng/mL)5-HT content(ng/mL)DA 含量(pg/mL)DA content(pg/mL)對照組 Control 3038.44 ± 61.89 1750.07 ± 194.07模型組 Model 2464.48 ± 133.61## 1700.71 ± 88.15輕音樂組 Light 3013.39 ± 140.86** 1687.14 ± 51.97古典音樂組 Classical 2799.15 ± 43.78 1587.03 ± 11.32

2.2.4 音樂刺激對血清炎癥因子的影響

細(xì)胞炎癥因子可通過調(diào)節(jié)細(xì)胞間相互作用，進(jìn)而影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)。 根據(jù)檢驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)模型組大鼠血清 IL-1β 含量為(22.86 ± 2.18)ng/mL，對照組的 IL-1β 含量為(6.88 ±1.25)ng/mL，兩組差異有顯著性(P= 0.0001)。 音樂干預(yù)后，輕音樂組與古典音樂組的血清 IL-1β 含量為(11.99 ± 1.99)ng/mL、(10.31 ± 2.48)ng/mL 均顯著低于模型組(P= 0.0028，P= 0.0005)。 提示音樂可以調(diào)整機(jī)體的免疫平衡，減輕機(jī)體的炎癥反應(yīng)。

3 討論

CUMS 抑郁模型是研究抑郁癥的常見動物模型，可連續(xù)給予大鼠3 ～5 周的多種溫和性應(yīng)激因子，致其出現(xiàn)情緒低落、快感缺失、絕望無助和體重減輕等[6]人類抑郁癥相似的表現(xiàn)，且這種癥狀會持續(xù)3 個月左右[7]。 本實(shí)驗(yàn)中，每天給予2 種不同的應(yīng)激刺激，連續(xù)4 周后，CUMS 模型組的糖水偏好百分比顯著下降、強(qiáng)迫游泳不動時間明顯延長，與研究報道一致[8-10]。 證實(shí)CUMS 抑郁模型建模成功，隨后3 周的音樂治療階段，除正常組大鼠外，其余組仍給予CUMS，第7 周的SPT 和FST 證實(shí)，模型組大鼠仍保持抑郁狀態(tài)。

音樂可能通過即時性提高體內(nèi)特定激素、調(diào)節(jié)神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)活動，以調(diào)節(jié)人體節(jié)律并影響心理、情緒[11]。 音樂治療在阿爾茲海默癥[12]、疼痛減緩[13]、抑郁[14-16]、腫瘤[16]、癲癇[17]等臨床疾病已有一些探索性實(shí)踐。 但使用的音樂常為單曲，音樂風(fēng)格各不相同。 大部分研究表明古典音樂對動物會產(chǎn)生積極影響。 其中莫扎特的作品在研究中應(yīng)用較多，具有純凈、新鮮、明亮、節(jié)奏穩(wěn)定、有獨(dú)立周期性的特點(diǎn)，符合人體內(nèi)部特有的生理規(guī)律，這種音樂結(jié)構(gòu)可能是產(chǎn)生莫扎特效應(yīng)的主要原因[18-19]。在本研究中，我們的研究結(jié)果與先前對古典音樂的研究結(jié)果一致，所篩選的古典音樂能明顯改善CUMS 大鼠的抑郁和焦慮行為。 我們選擇的另一組久石讓的輕音樂具有結(jié)構(gòu)小巧簡單、節(jié)奏明快舒展、旋律優(yōu)美動聽、輕快、輕松和輕盈的特點(diǎn)，CUMS抑郁大鼠經(jīng)3 周的干預(yù)后，抑郁和焦慮行為得到明顯緩解。 體重減輕是抑郁動物常見的癥狀之一，有研究認(rèn)為體重減輕可能是因?yàn)榻＿^程長時間禁食導(dǎo)致[20]。 課題組前期已證實(shí)，夜間禁食12 h 會極大降低大鼠體重，而白天禁食12 h 則不會，這與大鼠晝伏夜動的生活習(xí)性有關(guān)[21]。 本研究中采用白天禁食12 h 的策略，因此古典音樂和輕音樂干預(yù)后，大鼠體重較模型組明顯增加，是音樂改善抑郁的證據(jù)之一。 此外，古典音樂還能增強(qiáng)大鼠的自主活動和探索能力。 不同風(fēng)格的音樂對動物抑郁行為具有相同的效果，但在探索活動行為上效果不同。 有文獻(xiàn)報道，在其他條件相同情況下，快節(jié)奏音樂比慢節(jié)奏音樂更能喚起興奮情緒[22]。 所以我們推測這可能是導(dǎo)致音樂對動物產(chǎn)生不同行為反應(yīng)的原因。

研究表明，大腦海馬體對情緒有著至關(guān)重要的調(diào)節(jié)功能[23]。 抑郁癥患者經(jīng)常伴有海馬體縮小、神經(jīng)元形態(tài)改變等病變[24]。 BDNF 在神經(jīng)元存活、分化及參與神經(jīng)可塑性調(diào)節(jié)、改善學(xué)習(xí)記憶具有重要作用[25]。 動物實(shí)驗(yàn)證明，慢性應(yīng)激會導(dǎo)致海馬部位BDNF 表達(dá)減少[26]，臨床試驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)抑郁癥患者的海馬和前額皮質(zhì)BDNF 表達(dá)水平較正常人降低[27]。本研究中CUMS 模型大鼠的海馬錐體細(xì)胞排列分布不均，出現(xiàn)明顯的核固縮。 海馬BDNF 含量較正常組明顯下降，但經(jīng)輕音樂與古典音樂干預(yù)后，海馬的形態(tài)學(xué)病變得以改善，BDNF 含量明顯高于模型組，提示音樂可直接對機(jī)體產(chǎn)生生理作用。 BDNF可通過5-HT 能神經(jīng)系統(tǒng)調(diào)節(jié)5-HT 表達(dá)。 本研究中我們也發(fā)現(xiàn)模型組大鼠5-HT 的表達(dá)明顯降低，與文獻(xiàn)報道相符。 而輕音樂干預(yù)后，5-HT 的含量升高到正常組水平。 此外，模型組因?yàn)閼?yīng)激反應(yīng)，海馬和血清CORT 的含量較對照組均顯著升高，古典音樂干預(yù)3 周后，二者含量均顯著下降，而輕音樂組僅海馬CORT 的含量下降，這可能與音樂風(fēng)格差異有關(guān)[28]。 在應(yīng)激狀態(tài)時，IL-1β 活性增強(qiáng)以誘發(fā)神經(jīng)炎癥反應(yīng)過度激活，使突觸間隙單胺遞質(zhì)含量減少以及CORT 分泌增多，參與抑郁癥的發(fā)生[29-30]。在應(yīng)激狀態(tài)下本研究中輕音樂與古典音樂干預(yù)明顯降低了血清IL-1β 含量，提示音樂可以調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫平衡，減輕機(jī)體的炎癥反應(yīng)，進(jìn)而參與抑郁情緒的調(diào)節(jié)。

綜上所述，本研究證實(shí)了輕音樂與古典音樂能夠調(diào)節(jié) BDNF、CORT、5-HT 和 IL-β 等多種抑郁相關(guān)因子的表達(dá)，改善大鼠焦慮和抑郁樣行為，特定音樂可作為抑郁癥機(jī)制和抑郁癥治療研究策略的新方向，為音樂治療提供了一定的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。 不過，音樂治療應(yīng)用于臨床還需要廣泛深入的研究，音樂的各個要素如節(jié)奏、頻率、情緒等，以及音樂給予的時長和頻率等方式都可能會影響音樂對特定疾病患者的干預(yù)效果。 同時，中樞神經(jīng)系統(tǒng)感受音樂刺激的信號通路，以及音樂誘導(dǎo)情緒心理、行為及生理變化的分子機(jī)制都還值得深入研究。