郭文麗，劉香萍，陳信，張倩

深圳市寶安區(qū)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東 深圳 518101

因β珠蛋白基因的缺失或缺陷，引起β珠蛋白鏈合成受到抑制，進(jìn)而致使珠蛋白鏈比例失衡的溶血性貧血為β地中海貧血，其為常染色體隱性遺傳性血紅蛋白疾病，該病臨床特征主要表現(xiàn)為貧血、特殊面容、肝脾腫大、腎臟受損等[1-2]。目前臨床上尚無能改變β地中海貧血異?；虻臏?zhǔn)確治療方法，多數(shù)患兒只能采取定期紅細(xì)胞輸注配合鐵螯合劑去鐵治療，以此維持體內(nèi)血紅蛋白濃度，保證正常生活質(zhì)量[3]。同種異體輸血弊端在于會導(dǎo)致免疫功能抑制，造成細(xì)胞防御功能受到損害，患兒在治療過程中易受到細(xì)菌病毒及腫瘤的侵害；長期輸血治療造成紅細(xì)胞不斷分解，進(jìn)而使鐵質(zhì)大量聚集，引發(fā)鐵過載，過量的鐵沉積在重要臟器，導(dǎo)致多組織及臟器功能受損，極易出現(xiàn)心力衰竭、糖代謝紊亂等嚴(yán)重并發(fā)癥，威脅到患兒生命安全[4-5]。β地中海貧血患兒的長期貧血和輸血治療，使其常出現(xiàn)反復(fù)感染，這會進(jìn)一步造成惡性循環(huán)，影響患兒生活質(zhì)量，為家庭及社會帶來沉重負(fù)擔(dān)[6]。因此，臨床檢測T淋巴細(xì)胞亞群、自然殺傷(NK)細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞水平變化，以此為基礎(chǔ)正確評價患兒免疫狀況，制定針對性免疫干預(yù)治療，達(dá)到減少患兒反復(fù)感染、提升長期生存質(zhì)量的目的。為此，本研究旨在探討β地中海貧血患兒T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞水平的變化及臨床意義，現(xiàn)報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2017年3月至2020年3月深圳市寶安區(qū)人民醫(yī)院收治的84例β地中海貧血患兒作為研究組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①患兒經(jīng)診斷確診為β地中海貧血[7]；②患兒長期接受高量輸血治療；③臨床資料完整；④患兒家屬均知曉此研究，且同意參與。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并惡性腫瘤；②有內(nèi)分泌疾病；③合并其他血液疾病；④嚴(yán)重心臟、肝、腎功能異常；⑤嚴(yán)重精神、意識障礙。研究組中男性45例，女性39例；年齡2～15歲，平均(6.82±3.04)歲；體質(zhì)量指數(shù)(BMI)14～19 kg/m2，平均(18.21±1.48)kg/m2；發(fā)病年齡3個月～4歲，平均(1.15±0.28)歲；病程1～11年，平均(3.47±1.49)年。選取同期84例健康兒童作為對照組，其中男性44例，女性40例；年齡2～16歲，平均(6.75±2.98)歲；BMI 15～20 kg/m2，平均(18.33±1.54)kg/m2。兩組兒童的性別、年齡和BMI比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)我院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 檢測方法選用BeckmanCoulter DxFLEX檢測T淋巴細(xì)胞亞群(CD3+細(xì)胞、CD4+細(xì)胞、CD8+細(xì)胞、CD4+/CD8+比值)、NK細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞(CD19+細(xì)胞)水平。具體步驟：(1)于清晨采集兒童空腹靜脈血1 mL，將其置于EDTA抗凝管中，并于6 h內(nèi)進(jìn)行處理；(2)采用四色直接免疫熒光法進(jìn)行檢測，將熒光素標(biāo)記的各種單克隆抗體加入到全血中，與白細(xì)胞膜上相應(yīng)的抗原結(jié)合，經(jīng)過溶血、洗滌(和固定)等步驟后，在流式細(xì)胞儀上進(jìn)行分析；(3)根據(jù)檢測樣本的數(shù)量，一個樣本需要做兩管檢測，分別向已編好號的試管中加入10μL T亞群混合抗體，10μL BNK亞群混合抗體；(4)分別向試管中加入混勻的100μL抗凝血，渦旋混勻，避光，室溫(19℃～22℃)孵育15 min；(5)向每個檢測管中加入OptiLyse C 500μL，并渦旋10 s，充分混勻，避光，室溫(19℃～22℃)孵育10 min至溶液由渾濁變?yōu)槌吻澹?6)每管中加入200μL生理鹽水或者PBS，混勻；(7)小心加入100μL絕對計(jì)數(shù)微球，上機(jī)進(jìn)行檢測。

1.3 觀察指標(biāo)比較兩組兒童T淋巴細(xì)胞亞群(CD3+細(xì)胞、CD4+細(xì)胞、CD8+細(xì)胞、CD4+/CD8+比值)、NK細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞(CD19+細(xì)胞)水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組兒童的T淋巴細(xì)胞亞群比較研究組患兒的CD3+細(xì)胞、CD4+細(xì)胞、CD4+/CD8+比值明顯低于對照組，CD8+細(xì)胞明顯高于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表1。

表1 兩組兒童的T淋巴細(xì)胞亞群比較(±s)

表1 兩組兒童的T淋巴細(xì)胞亞群比較(±s)

2.2 兩組兒童的NK細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞比較研究組患兒的NK細(xì)胞水平明顯低于對照組，CD19+細(xì)胞水平明顯高于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表2。

表2 兩組兒童的NK細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞比較(±s，%)

表2 兩組兒童的NK細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞比較(±s，%)

3 討論

β地中海貧血是危害性極大的遺傳病，多發(fā)于我國廣西、廣東等華南地區(qū)。為保證β地中海貧血患兒正常的生長發(fā)育及生活質(zhì)量，患兒需要長期接受輸血治療[8]。但在長期的貧血狀態(tài)下，患兒進(jìn)行大量輸血會增加其機(jī)體鐵負(fù)荷，導(dǎo)致患兒出現(xiàn)免疫功能下降，進(jìn)而出現(xiàn)呼吸道感染等各種并發(fā)癥，危及患兒生命安全；且輸血治療過程中若不進(jìn)行去鐵治療，過量的鐵負(fù)荷也會導(dǎo)致患兒出現(xiàn)生長發(fā)育遲滯、肝硬化、糖尿病等疾病[9-10]?；純航邮芡N異體輸血會引起免疫功能的抑制，由此推測患兒長期進(jìn)行輸血治療會抑制其固有免疫系統(tǒng)。因此，臨床通過檢測T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞水平診斷患兒病情，評估其免疫狀況，并在此基礎(chǔ)上采取針對性干預(yù)治療，對改善患兒免疫紊亂、提升患兒生活質(zhì)量、減輕家庭及社會負(fù)擔(dān)有重要意義。

T淋巴細(xì)胞亞群水平關(guān)系到患兒病情進(jìn)展與預(yù)后效果，有研究表明T淋巴細(xì)胞亞群比例失調(diào)是惡性腫瘤病情發(fā)展的重要原因之一[11]。總T細(xì)胞的值由CD3+代表，其水平的降低表示免疫功能下降，CD4+則表達(dá)于輔助T細(xì)胞，CD8+主要表達(dá)于抑制細(xì)胞殺傷性T細(xì)胞，若CD3+、CD4+、CD8+水平發(fā)生異常變化則提示患兒免疫功能發(fā)生紊亂[12]?；純洪L期生存率受T細(xì)胞免疫重建影響，若其免疫重建推遲會導(dǎo)致病毒感染或疾病復(fù)發(fā)幾率的增加。本研究顯示，相比健康兒童，β地中海貧血患兒的CD3+細(xì)胞、CD4+細(xì)胞、CD4+/CD8+比值明顯降低，CD8+細(xì)胞水平明顯升高，這表明β地中海貧血患兒會出現(xiàn)CD8+細(xì)胞活性增高，CD3+細(xì)胞、CD4+細(xì)胞活性降低等情況，細(xì)胞免疫功能紊亂會導(dǎo)致CD4+/CD8+比值倒置，進(jìn)而造成患兒細(xì)胞免疫功能失調(diào)。臨床檢測β地中海貧血患兒的T淋巴細(xì)胞亞群水平，有利于評估其機(jī)體免疫狀況，對早期采取針對性治療干預(yù)措施促進(jìn)患兒預(yù)后有重要意義。

機(jī)體細(xì)胞受NK細(xì)胞監(jiān)視，在其發(fā)揮作用的同時能夠促進(jìn)B淋巴細(xì)胞的成熟及分化，調(diào)節(jié)胸腺細(xì)胞，進(jìn)而提高各臟器免疫功能。NK細(xì)胞是固有免疫系統(tǒng)的重要組成部分，能夠分泌多種細(xì)胞因子起到細(xì)胞毒殺傷功能；即無需抗原預(yù)先致敏，也無需抗體參與，在出現(xiàn)病毒感染細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞的早期能夠及時識別清除，充分發(fā)揮橋梁作用鏈接固有免疫與適應(yīng)性免疫，促進(jìn)免疫調(diào)節(jié)[13-14]。CD4+T細(xì)胞的分化、增殖、功能受NK細(xì)胞的影響，與膜上CDl6+CD56+、輔助性T細(xì)胞細(xì)胞膜上的CD4+發(fā)生免疫黏附，通過影響CD4+T細(xì)胞調(diào)節(jié)T細(xì)胞免疫效應(yīng)，若其水平降低則會影響到機(jī)體免疫功能[15]。本研究顯示，相比健康兒童，β地中海貧血患兒的NK細(xì)胞水平明顯降低，其原因可能在于患兒長期反復(fù)接受同種異體輸血，導(dǎo)致人體調(diào)節(jié)性T細(xì)胞抑制功能增強(qiáng)，進(jìn)一步抑制了NK細(xì)胞活性。臨床檢測β地中海貧血患兒的NK細(xì)胞水平，能夠清晰觀察患兒臨床免疫狀況，為后續(xù)免疫干預(yù)治療提供新策略。B淋巴細(xì)胞參與機(jī)體體液免疫反應(yīng)的方式為分泌血清Ig，而CD19+是其特有的表面分化蛋白，能夠作為B淋巴細(xì)胞特異性標(biāo)志[16]。本研究顯示，相比健康兒童，β地中海貧血患兒的CDl9+細(xì)胞水平明顯升高。其原因可能在于患兒長期接受輸血治療導(dǎo)致諸如病毒等外來病原體侵入風(fēng)險大幅提升；加之患兒體弱易發(fā)生各種感染，免疫系統(tǒng)受到刺激會導(dǎo)致體內(nèi)淋巴細(xì)胞增生；在此基礎(chǔ)上B淋巴細(xì)胞增殖分化的加強(qiáng)，顯著提升其活性，Ig分泌進(jìn)一步提升，致使體液免疫功能受到影響[17-18]。

綜上所述，β地中海貧血患兒T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞水平明顯異于健康兒童，普遍存在免疫功能紊亂，臨床加強(qiáng)對T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞水平的檢測，監(jiān)測其水平變化，有利于患兒病情診斷、免疫狀況評估及早期針對性干預(yù)治療，對降低患兒的感染風(fēng)險、顯著提高其生存質(zhì)量意義重大。