董思啟 僧雪雁 劉 洋 樊青珂 呂 璇

（鄭州市婦幼保健院生殖遺傳科，河南 鄭州，450000）

男性不育發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，臨床尚未對(duì)致病原因做出全面闡述，但男性不育普遍受吸煙、遺傳、感染等因素影響，其中生殖道支原體感染為男性不育主要發(fā)病因素之一。不育不僅會(huì)為男女雙方帶來(lái)極大的社會(huì)和心理壓力，并會(huì)影響男女雙方感情，甚至導(dǎo)致家庭破裂。生殖道支原體感染會(huì)在病原菌侵襲影響下，累及睪丸、附睪等器官，誘發(fā)附睪內(nèi)精子成熟異常，增加精子畸形率，并易誘發(fā)生精障礙，導(dǎo)致不育。如何有效予以干預(yù)措施，在臨床引起較高關(guān)注，深入探討生殖道支原體感染對(duì)男性不育的影響，利于指導(dǎo)臨床診療。本研究回顧性分析鄭州市婦幼保健院收治的284 例生殖道支原體感染男性不育患者和同期284 例無(wú)生殖道支原體感染男性不育患者、同期284 例健康體檢男性的臨床資料信息，探討生殖道支原體感染和男性不育精液質(zhì)量的關(guān)聯(lián)性，旨在為臨床干預(yù)提供科學(xué)依據(jù)。詳情如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2019 年4 月～2020 年12 月鄭州市婦幼保健院收治的568 例男性不育患者臨床資料信息，按照是否發(fā)生生殖道支原體感染分為感染組與未感染組，每組284例，并將同期在鄭州市婦幼保健院進(jìn)行健康體檢的284 例男性組成健康對(duì)照組。感染組患者年齡23～37 歲，平均年齡（28.64±2.31）歲；不育時(shí)間2～4 年，平均不育時(shí)間（3.01±0.23）年。未感染組患者年齡22～38 歲，平均年齡（29.01±2.45）歲；不育時(shí)間2～5 年，平均不育時(shí)間（3.05±0.26）年。健康對(duì)照組患者年齡21～39 歲，平均年齡（27.91±2.16）歲。三組研究對(duì)象一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)鄭州市婦幼保健院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批通過，所有研究對(duì)象均知情并簽署知情同意書。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①感染組和未感染組不育男性患者均符合《男性不育癥中西醫(yī)結(jié)合診療指南（試行版）》中男性不育診斷標(biāo)準(zhǔn)，感染組患者均符合《生殖道支原體感染診治專家共識(shí)》中生殖道支原體感染診斷標(biāo)準(zhǔn)；②感染組和未感染組患者均正常性生活1 年、無(wú)避孕措施且不育；③女方婦科檢查、排卵檢測(cè)等正常；④近6 個(gè)月內(nèi)未應(yīng)用過治療不育的相關(guān)藥物；無(wú)生殖毒性物質(zhì)接觸史；⑤無(wú)家族遺傳史；⑥感染組患者均經(jīng)病原學(xué)檢查確診為生殖道支原體感染；⑦健康體檢者無(wú)生殖道支原體感染或不育疾病。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①存在無(wú)精子癥者；②合并其他生殖道疾病或其他感染者；③其他慢性疾病所致不育者；④先天性腺發(fā)育不良者；⑤存在附睪結(jié)核者；⑥輸精管異常者；⑦病歷資料缺失者。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)本采集

采集精液標(biāo)本前，禁欲3～7 d，囑患者排尿，后清洗陰莖，常規(guī)消毒清潔處理，以手淫法采集精液，將精液置于干燥無(wú)菌杯，37 ℃恒溫保存，在完全液化后進(jìn)行檢測(cè)。

1.3.2 支原體培養(yǎng)

使用支原體培養(yǎng)試劑盒（生產(chǎn)企業(yè)：珠海迪爾生物功能有限公司），將100 μL 精液標(biāo)本接種于無(wú)菌培養(yǎng)基中，將培養(yǎng)基放置在CO培養(yǎng)箱中，37 ℃恒溫環(huán)境下培養(yǎng)24 ～36 h，培養(yǎng)基無(wú)變色即判定為陰性，培養(yǎng)基變紅色即判定為陽(yáng)性。

1.3.3 精液質(zhì)量檢查

對(duì)比感染組和未感染組液化時(shí)間、精液量、精子存活率、精子畸形率。將精液置于37 ℃溫水內(nèi)，觀察液化時(shí)間，采用伊紅-Y 染色法，將伊紅溶液和精液進(jìn)行混合，混合充分后置于載玻片中，存活精子無(wú)變色，死亡精子染色呈紅色狀態(tài)，以此判定精子存活率；并常規(guī)測(cè)定精液量、精子畸形率、精子形態(tài)正常率。

1.3.4 精子運(yùn)動(dòng)參數(shù)測(cè)定

對(duì)比感染組和未感染組前向運(yùn)動(dòng)率、VCL、VAP、VSL。使用計(jì)算機(jī)輔助精子分析系統(tǒng)，嚴(yán)格按照儀器操作步驟，檢測(cè)前向運(yùn)動(dòng)率、曲線速度（VCL）、平均路徑（VAP）、直線速度（VSL）精子運(yùn)動(dòng)情況。

1.3.5 耐藥性檢測(cè)

使用支原體分離培養(yǎng)藥敏試劑盒（生產(chǎn)企業(yè)：珠海迪爾生物功能有限公司）進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)支原體對(duì)常見抗菌藥物耐藥性。

1.4 觀察指標(biāo)

①比較感染組、未感染組和健康對(duì)照組精液質(zhì)量指標(biāo)，包括液化時(shí)間、精液量、精子存活率、精子畸形率、精子形態(tài)正常率；②比較感染組、未感染組和健康對(duì)照組精子運(yùn)動(dòng)參數(shù)指標(biāo)，包括前向運(yùn)動(dòng)率、VCL、VAP、VSL；③相關(guān)性分析，分析液化時(shí)間、精液量、精子存活率、精子畸形率、精子形態(tài)正常率、前向運(yùn)動(dòng)率、VCL、VAP、VSL 和生殖道支原體感染的相關(guān)性；④分析支原體對(duì)臨床常用抗菌藥物的耐藥性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 三組患者精液質(zhì)量比較

感染組、未感染組、健康對(duì)照組精液質(zhì)量指標(biāo)比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；感染組和未感染組液化時(shí)間較健康對(duì)照組長(zhǎng)，精液量較健康對(duì)照組少，精子存活率、精子形態(tài)正常率較健康對(duì)照組低，精子畸形率較健康對(duì)照組高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且感染組各精液質(zhì)量指標(biāo)劣于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

2.2 三組患者精子運(yùn)動(dòng)參數(shù)比較

感染組、未感染組、健康對(duì)照組精子運(yùn)動(dòng)參數(shù)指標(biāo)比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。感染組和未感染組前向運(yùn)動(dòng)率、VCL、VAP、VSL 參數(shù)較健康對(duì)照組低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且感染組前向運(yùn)動(dòng)率、VCL、VAP、VSL 參數(shù)較未感染組低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

2.3 相關(guān)性分析

Pearson 分析結(jié)果顯示，液化時(shí)間、精子畸形率和生殖道支原體感染呈正相關(guān)，精液量、精子存活率、精子形態(tài)正常率、前向運(yùn)動(dòng)率、VCL、VAP、VSL 和生殖道支原體感染呈負(fù)相關(guān)，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

2.4 耐藥性分析

支原體對(duì)環(huán)丙沙星耐藥率高達(dá)94.72%，對(duì)交沙霉素、強(qiáng)力霉素耐藥率均為0.00%。見表4。

3 討論

據(jù)相關(guān)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國(guó)不育癥夫婦患病率為13%～16%，男性不育在全部不育中占比40%～50%，生殖道支原體感染在男性不育發(fā)病原因中占比5%～42%，并逐年增長(zhǎng)。明確生殖道支原體感染和男性不育患者精液質(zhì)量的關(guān)聯(lián)性，利于針對(duì)性進(jìn)行治療，改善不育癥狀，提高預(yù)后效果。

支原體屬于介于病毒、細(xì)菌二者之間無(wú)細(xì)胞壁原核微生物，主要在生殖道中寄生，會(huì)誘發(fā)生殖道炎癥，生殖道支原體感染會(huì)產(chǎn)生精子抗體，且支原體原生質(zhì)膜也會(huì)對(duì)精子產(chǎn)生損害，影響精子健康發(fā)育，誘發(fā)男性不育。本研究結(jié)果顯示，感染組液化時(shí)間較對(duì)照組長(zhǎng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），與謝輝霞等研究結(jié)果一致。且研究數(shù)據(jù)顯示，感染組和未感染組精液量較健康對(duì)照組少，精子存活率、精子形態(tài)正常率、前向運(yùn)動(dòng)率、VCL、VAP、VSL 參數(shù)較健康對(duì)照組低，精子畸形率較健康對(duì)照組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且感染組各精液質(zhì)量指標(biāo)、精子運(yùn)動(dòng)參數(shù)指標(biāo)劣于未感染組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。進(jìn)一步證實(shí)生殖道支原體感染是男性不育患者精液質(zhì)量和精子運(yùn)動(dòng)情況的影響因素。分析原因在于，支原體感染后會(huì)黏附于生精細(xì)胞上，使生精細(xì)胞脫落，誘導(dǎo)其凋亡，干擾精子成熟；且生殖道支原體感染后精子頭尾部位會(huì)存在顆粒物質(zhì)吸附，且物質(zhì)大小存在差異，會(huì)誘發(fā)結(jié)構(gòu)異常、排列紊亂等情況，增加精子畸形率，降低精液質(zhì)量。同時(shí)，生殖道支原體感染后，支原體會(huì)融入精子細(xì)胞，抑制精子活力，破壞精子細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能，使精子胞漿內(nèi)鈣離子流失，降低精子運(yùn)動(dòng)速度，影響精子運(yùn)動(dòng)能力。

經(jīng)進(jìn)一步研究，Pearson 分析結(jié)果顯示，液化時(shí)間、精子畸形率和生殖道支原體感染呈正相關(guān)，精液量、精子存活率、精子形態(tài)正常率、前向運(yùn)動(dòng)率、VCL、VAP、VSL 和生殖道支原體感染呈負(fù)相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示合并生殖道支原體感染患者精液液化時(shí)間越長(zhǎng)，精子畸形率越高，VSL 參數(shù)越低，精子質(zhì)量和精子運(yùn)動(dòng)參數(shù)越差。充分證實(shí)生殖道支原體感染和男性不育患者精液質(zhì)量的關(guān)聯(lián)。

在男性不育患者中，支原體感染會(huì)導(dǎo)致精液內(nèi)酸性磷酸酶含量改變，且支原體會(huì)對(duì)精子產(chǎn)生吸附作用，導(dǎo)致其卷曲畸形，影響精子活動(dòng)能力；支原體感染會(huì)損害精子膜，進(jìn)而影響其功能和精液質(zhì)量；在感染刺激影響下，睪丸組織無(wú)法正常生成精子、并會(huì)影響精子發(fā)育，導(dǎo)致精液質(zhì)量降低。藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示，支原體對(duì)環(huán)丙沙星耐藥率高達(dá)94.72%，對(duì)交沙霉素、強(qiáng)力霉素耐藥率均為0.00%。表明在治療支原體感染男性不育患者中，可將交沙霉素、強(qiáng)力霉素作為首選抗菌藥物。但本研究尚未探討生殖道支原體感染時(shí)間長(zhǎng)短對(duì)精液質(zhì)量的影響，關(guān)于感染時(shí)間和精液質(zhì)量之間的關(guān)聯(lián)性，有待日后進(jìn)行深入研究。

綜上所述，生殖道支原體感染和男性不育患者精液質(zhì)量、精子運(yùn)動(dòng)參數(shù)具有明顯相關(guān)性，臨床應(yīng)及時(shí)進(jìn)行精液檢測(cè)和常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)，結(jié)合男性不育患者有無(wú)感染等情況，進(jìn)行針對(duì)性干預(yù)，以及時(shí)控制感染，降低對(duì)精液質(zhì)量和精子運(yùn)動(dòng)參數(shù)的影響。