QuEChERS-氣相色譜質(zhì)譜法快速測(cè)定水產(chǎn)品中撲草凈殘留

馬麗莎，尹 怡，田 斐，謝文平，單 奇，鄭光明，李麗春，劉書(shū)貴，戴曉欣，趙 城，魏琳婷，林嘉薇

1. 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院珠江水產(chǎn)研究所/農(nóng)業(yè)農(nóng)村部外來(lái)入侵水生生物防控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/廣東省水產(chǎn)動(dòng)物免疫技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510380

2. 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所/廣東省漁業(yè)生態(tài)環(huán)境重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510300

撲草凈 (Prometryn) 屬三嗪類(lèi)除草劑，曾廣泛用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)活動(dòng)[1]，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中用于清除水草和有害藻類(lèi)[2]。但撲草凈會(huì)引起生物機(jī)體的內(nèi)分泌紊亂、腫瘤產(chǎn)生等不良危害[3-4]。因此，歐盟自2004年1月1日起，禁止撲草凈作為農(nóng)藥在歐盟銷(xiāo)售及使用[5]，美國(guó)僅將撲草凈作為除草劑使用，并制定了胡蘿卜等19種植物中撲草凈的最大殘留限量[6]，中國(guó)也于2010年在中華人民共和國(guó)公告1 435中將其列入《獸藥試行標(biāo)準(zhǔn)廢止目錄》，但當(dāng)前仍有撲草凈違規(guī)使用等問(wèn)題，近年來(lái)中國(guó)養(yǎng)殖水產(chǎn)品中多次檢出撲草凈殘留[7-9]；2020年的“山東省海參事件”更將撲草凈污染問(wèn)題推向食品安全的風(fēng)口浪尖，對(duì)此中國(guó)迅速開(kāi)展“海參養(yǎng)殖中違法使用撲草凈和甲氰菊酯兩種農(nóng)藥專(zhuān)項(xiàng)整治行動(dòng)”；2021年，撲草凈被正式納入“國(guó)家產(chǎn)地水產(chǎn)品獸藥殘留監(jiān)控計(jì)劃”，由原無(wú)公害漁業(yè)產(chǎn)品認(rèn)證分中心牽頭的水產(chǎn)品中撲草凈殘留隱患排查的專(zhuān)項(xiàng)行動(dòng)也已開(kāi)展[7]，可見(jiàn)水產(chǎn)品中撲草凈殘留問(wèn)題已引起社會(huì)的高度關(guān)注。

當(dāng)前有關(guān)水產(chǎn)品中撲草凈的檢測(cè)方法較少，更無(wú)相關(guān)的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)?，F(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)SN/T 1968—2007《進(jìn)出口食品中撲草凈殘留量檢測(cè)方法 氣相色譜-質(zhì)譜法》適用于食品中撲草凈的檢測(cè)，但該標(biāo)準(zhǔn)適用范圍并不包括水產(chǎn)品，且方法采用串聯(lián)固相萃取柱凈化樣品，完成一次前處理需10 h，存在有機(jī)溶劑消耗量大、操作繁瑣、耗時(shí)、工作效率低等缺點(diǎn)，不利于樣品批量化檢測(cè)。朱曉華等[10]建立的水產(chǎn)品中撲草凈殘留固相萃取-氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法雖可用于魚(yú)、蝦及紫菜中撲草凈的檢測(cè)，但并不涉及海參及雙殼貝類(lèi)等重點(diǎn)品種，且同樣存在前處理操作繁瑣的問(wèn)題；報(bào)道的其他檢測(cè)方法，更只涉及一種或兩種水產(chǎn)品[11-13]。由于水產(chǎn)品種類(lèi)繁多，基質(zhì)差異大，若直接采用文獻(xiàn)報(bào)道的方法可能得不到理想的萃取效率。鑒于目前中國(guó)水產(chǎn)品已出現(xiàn)因撲草凈超標(biāo)而被廢棄或退貨的現(xiàn)象[14]，故為保障水產(chǎn)品質(zhì)量安全，維護(hù)大國(guó)形象，避免貿(mào)易壁壘，丞需建立適用于多種水產(chǎn)品中的撲草凈快速篩查方法。

撲草凈的檢測(cè)方法主要有氣相色譜-質(zhì)譜法 (GC-MS) 和液相色譜-質(zhì)譜法 (HPLC-MS-MS)等[10-13,15-17]，其中液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀價(jià)格昂貴，而氣相色譜-質(zhì)譜儀價(jià)格相對(duì)適中，因此GC-MS更易于普及。當(dāng)前，創(chuàng)新開(kāi)發(fā)快速、精準(zhǔn)的篩查方法是食品檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展趨勢(shì)。QuEChERS法利用基質(zhì)分散萃取機(jī)理來(lái)吸附樣品中的雜質(zhì)，達(dá)到保留目標(biāo)物和凈化樣品的目的，其與傳統(tǒng)固相萃取法相比，具有快速、簡(jiǎn)單、廉價(jià)及適用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)[18]，因此被廣泛用于蔬菜[19-20]、畜禽[21-22]及水產(chǎn)品[23-25]等食品中藥物殘留檢測(cè)的前處理。本文結(jié)合QuEChERS法及GC-MS技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)，針對(duì)多種水產(chǎn)品 [草魚(yú) (Ctenopharyngodon idellus)、鱖(Siniperca chuatsi)、中國(guó)對(duì)蝦 (Penaeus chinensis)、海參(Holothuriasp.) 和文蛤 (Meretrix meretrix)]的檢測(cè)需求，建立了撲草凈殘留的快速檢測(cè)方法。該方法與行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SN/T 1968—2007相比，完成一次前處理僅需2 h，極大提高了檢測(cè)效率，具有普及性強(qiáng)、適用范圍廣、有機(jī)溶劑損耗少、操作簡(jiǎn)單、高效、價(jià)格低廉等優(yōu)點(diǎn)。方法的建立對(duì)撲草凈在養(yǎng)殖水產(chǎn)品中違禁使用的監(jiān)管監(jiān)測(cè)、水產(chǎn)品中撲草凈殘留檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的制定及開(kāi)展撲草凈在水生生物體內(nèi)的降解代謝、安全性評(píng)價(jià)等研究工作提供了重要的理論依據(jù)和技術(shù)支撐，有助于促進(jìn)我國(guó)水產(chǎn)品質(zhì)量提升和擴(kuò)大出口需求。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Agilent 7890A-5975C氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀[配電子轟擊源 (EI)，美國(guó)安捷倫]；AIKA MS3 basic 渦旋振蕩儀 (德國(guó)IKA)；TDL-5-A飛鴿牌離心機(jī) (上海安亭)；氮吹儀 (美國(guó)organomation)。

撲草凈 (純度 99%)、D6-撲草凈 (質(zhì)量濃度 100 mg·L?1，德國(guó)Dr. Ehrenstorfor公司)；乙腈、二氯甲烷 (色譜純，美國(guó)霍尼韋爾)；乙二胺-N-丙基硅烷PSA、石墨化炭黑GCB、中性氧化鋁Alumina-N (美國(guó)Agela)；納米二氧化鋯(上海麥克林)；無(wú)水硫酸鈉 (Na2SO4)、氯化鈉 (NaCl，分析純，廣州化學(xué)試劑廠)。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液

稱(chēng)取適量的撲草凈標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)用乙腈溶解，配制成1 000 mg·L?1的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，使用時(shí)用乙腈稀釋成 1 mg·L?1的標(biāo)準(zhǔn)使用液，現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.2.2 內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備溶液

移取適量的D6-撲草凈標(biāo)準(zhǔn)溶液，用乙腈溶解配制成10 mg·L?1的內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液，使用時(shí)用乙腈稀釋成 1 mg·L?1的標(biāo)準(zhǔn)使用液，現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的配制

用乙腈稀釋標(biāo)準(zhǔn)使用液配制成質(zhì)量濃度分別為5、10、20、80、100 和 200 μg·L?1的系列標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液，內(nèi)標(biāo)工作液質(zhì)量濃度為 80 μg·L?1，現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.3 樣品處理方法

1.3.1 樣品制備

魚(yú)、海參取肌肉可食部分，文蛤、對(duì)蝦去殼取可食部分，均質(zhì)后 ?20 ℃貯存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 提取

魚(yú)、蝦、文蛤：稱(chēng)取 (5±0.01) g 樣品于 50 mL 離心管中，加入內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液 40 μL，8 mL 去離子水，渦旋 30 s，加入 12 mL 乙腈-二氯甲烷 (V∶V=8∶2)，渦旋 2 min，加入 1 g NaCl和 6 g 無(wú)水 Na2SO4，渦旋 1 min，5 000 r·min?1離心 5 min，取上清液于 25 mL 比色管中，重復(fù)提取 1 次，合并上清液并用乙腈定容至刻度線，混勻。

海參：稱(chēng)取 (5±0.01) g 樣品于 50 mL 離心管中，加入內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液 40 μL，加入 12 mL 乙腈-二氯甲烷 (V∶V=8∶2)，渦旋 2 min，加入 5 g 無(wú)水 Na2SO4，渦旋 1 min，5 000 r·min?1離心 5 min，取上清液于 25 mL 比色管中，重復(fù)提取 1 次，合并上清液并定容至刻度線，混勻。

1.3.3 凈化

分取上清液5 mL，于50 ℃水浴氮吹至干，1 mL乙腈定容，將定容液于2 mL離心管中，加入200 mg中性氧化鋁、200 mg 二氧化鋯、50 mg PSA 及 20 mg GCB，漩渦震蕩 1 min，以 10 000 r·min?1離心 5 min，取上清液，供 GCMS檢測(cè)。

1.4 儀器條件

1.4.1 色譜柱

HP-5MS 柱 (30 m×0.25 mm×0.25 μm)；升溫程序：初始柱溫 70 ℃，保持 1 min，以 25 ℃·min?1升至 180 ℃，以5 ℃·min?1升至 220 ℃，以 15 ℃·min?1升至 280 ℃，保持3 min。高純氦氣載氣，流速 1.0 ℃·min?1；進(jìn)樣口溫度260 ℃；不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣體積1 μL。

1.4.2 質(zhì)譜

電離方式為EI源；電離能量70 eV；離子源溫度230 ℃；四極桿溫度150 ℃；輔助加熱溫度280 ℃；檢測(cè)方式選擇離子監(jiān)測(cè)模式 (SIM)，溶劑延遲3 min，監(jiān)測(cè)離子(m/z)：撲草凈為 m/z 184、m/z 199、m/z 226、m/z 241，其中 m/z 241 為定量離子，D6-撲草凈為 m/z 190、m/z 205、m/z 232、m/z 247，其中 m/z 247 為定量離子。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件的優(yōu)化

為獲得較佳的峰型、靈敏度及分離效果，實(shí)驗(yàn)以標(biāo)準(zhǔn)工作液0.2 mg·L?1，從進(jìn)樣口溫度、流速等方面優(yōu)化色譜條件。進(jìn)樣口是樣品完成氣化的地方，其溫度顯著影響目標(biāo)物靈敏度、重現(xiàn)性及峰型。溫度過(guò)低，目標(biāo)物氣化速度慢，靈敏度低、重現(xiàn)性差，樣品峰擴(kuò)展；溫度過(guò)高可導(dǎo)致目標(biāo)物分解，靈敏度下降。通過(guò)實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)進(jìn)樣口溫度為260 ℃時(shí)，目標(biāo)物靈敏度、重現(xiàn)性均最佳，峰型尖銳；進(jìn)樣口溫度為250和270 ℃時(shí)，目標(biāo)物靈敏度均低于260 ℃時(shí)的靈敏度 (圖1)。因此，本文確定最佳進(jìn)樣口溫度為 260 ℃。

圖1 進(jìn)樣口不同溫度對(duì)撲草凈靈敏度的影響Fig. 1 Effect of different temperatures of injection port on sensitivity of prometryn

此外，流速過(guò)低會(huì)使樣品峰擴(kuò)展，流速過(guò)高，目標(biāo)物與雜質(zhì)得不到較好分離，通過(guò)實(shí)驗(yàn)，本文確定最佳流速為1.0 mL·min?1。

2.2 質(zhì)譜條件的確定

在m/z介于50～550內(nèi)進(jìn)行全掃描，確定各組分的保留時(shí)間和特征離子。為降低干擾、提高靈敏度，采用選擇離子監(jiān)測(cè)模式，每個(gè)化合物選擇1個(gè)定量離子、3個(gè)定性離子。撲草凈及D6-撲草凈的定性與定量離子見(jiàn)1.4儀器條件，撲草凈保留時(shí)間為11.057 min，D6-撲草凈保留時(shí)間為11.009 min。

2.3 樣品前處理?xiàng)l件的優(yōu)化

2.3.1 提取溶劑的選擇

乙腈具有穿透力強(qiáng)可沉淀蛋白并對(duì)脂類(lèi)干擾物溶解度小的優(yōu)點(diǎn)，是多數(shù)農(nóng)藥萃取首選的提取液[23,26]，撲草凈屬中等極性化合物[27]與乙酸乙酯極性相近，故實(shí)驗(yàn)選用草魚(yú)樣品比較上述兩種溶劑對(duì)撲草凈的萃取效果。結(jié)果顯示，采用乙酸乙酯提取目標(biāo)物時(shí)基線噪音大、雜峰多，這是由于乙酸乙酯具有較強(qiáng)的脂溶性，其溶解了樣品中大量脂肪，表現(xiàn)為乙酸乙酯提取液氮吹后玻璃管壁附有一層淡黃色油脂 (圖2)，導(dǎo)致樣品的后續(xù)凈化不徹底，彭捷等[28]也指出乙酸乙酯能溶解水產(chǎn)品中大量脂肪，給后續(xù)凈化增加了困難。而草魚(yú)中直接加入乙腈后其表面凝結(jié)成團(tuán)，阻礙了乙腈與樣品接觸，回收率僅為45.8%。水緩沖劑可提高樣品分散性[29]，故實(shí)驗(yàn)先用去離子水分散樣品再用乙腈提取撲草凈，回收率提升至80%左右，但仍偏低，分析回收率偏低的原因可能與乙腈極性較強(qiáng)有關(guān)。鑒于此，實(shí)驗(yàn)采用二氯甲烷混合乙腈的方式降低提取液極性，結(jié)果表明，乙腈-二氯甲烷 (V∶V=6∶4)、乙腈-二氯甲烷 (V∶V=8∶2) 溶液的提取效率均優(yōu)于乙腈，回收率在90%左右(圖3)，但乙腈-二氯甲烷 (V∶V=6∶4) 對(duì)樣品脂肪的提取效率大，提取液顏色偏黃。

圖2 不同提取溶劑提取效果的比較Fig. 2 Comparison of extraction effects of different extraction solvents

圖3 不同提取溶劑對(duì)撲草凈回收率的影響Fig. 3 Effects of differents extraction solvent on recoveries of prometryn

然而當(dāng)實(shí)驗(yàn)采用乙腈-二氯甲烷 (V∶V=8∶2) 溶液萃取海參樣品中撲草凈殘留時(shí)發(fā)現(xiàn)，海參樣品與去離子水渦旋后，表面形成了一層乳白色膠狀物，這層膠狀物是海參樣品中的膠原蛋白與水形成的膠凍，膠凍阻礙了提取液與樣品的接觸，導(dǎo)致萃取效率下降，故海參樣品前處理時(shí)不可加入去離子水。實(shí)驗(yàn)又比較了乙腈、乙腈-二氯甲烷 (V∶V=6∶4)、乙腈-二氯甲烷 (V∶V=8∶2) 溶液對(duì)海參中撲草凈的提取效率，結(jié)果顯示 (圖3)，乙腈-二氯甲烷 (V∶V=8∶2) 溶液是提取海參中撲草凈的最佳提取劑。

因此實(shí)驗(yàn)選擇乙腈-二氯甲烷 (V∶V=8∶2) 溶液作為水產(chǎn)品中撲草凈殘留的提取溶劑。

2.3.2 凈化條件的優(yōu)化

實(shí)驗(yàn)涉及的水產(chǎn)品種類(lèi)豐富，包括魚(yú)、蝦、海參及貝類(lèi)，基質(zhì)差異大，包含脂肪、蛋白、磷脂、碳水化合物、有機(jī)酸、色素等雜質(zhì)，僅使用一種吸附劑很難兼顧全部水產(chǎn)品基質(zhì)的凈化。QuEChERS方法能快速高效地去除水產(chǎn)品中各類(lèi)雜質(zhì)，常用的吸附劑有PSA、石墨化炭黑 (GCB)、二氧化鋯、C18粉、中性氧化鋁及佛羅里硅土等[22-23,25,30-31]，其中PSA能吸附提取液中的極性物質(zhì)、有機(jī)酸及金屬離子等雜質(zhì)，GCB去除色素、甾醇等，二氧化鋯去除磷脂，由于C18粉、中性氧化鋁及佛羅里硅土均可去除脂肪等干擾物，因此實(shí)驗(yàn)先比較了C18粉、中性氧化鋁及佛羅里硅土的凈化效果，以篩選出三者中凈化效果最佳的吸附劑。提取離子色譜圖 (圖4) 顯示，中性氧化鋁粉對(duì)5種水產(chǎn)品基質(zhì)的凈化能力均最佳，表現(xiàn)為雜質(zhì)干擾峰少、基線平整，佛羅里硅土的凈化能力一般，C18粉最差。

圖4 3種吸附劑凈化效果的比較Fig. 4 Comparison of purification effects of three adsorbents

之后實(shí)驗(yàn)采用中性氧化鋁、PSA、二氧化鋯及GCB共同凈化樣品，并比較了PSA (50、100和150 mg)、中性氧化鋁 (100、150 和 200 mg)、二氧化鋯 (100、150 和 200 mg)、GCB (10、15、20、25 和 30 mg) 不同用量、不同組合對(duì)回收率的影響，發(fā)現(xiàn)上述吸附劑對(duì)撲草凈均無(wú)吸附，但分散劑的不同配比可影響提取液的凈化效果及方法精密度。當(dāng)PSA為50 mg、GCB為20 mg時(shí)，色譜圖基線干擾及方法精密度隨中性氧化鋁及二氧化鋯加入量增加而減小，加入量為200 mg時(shí)達(dá)最佳；當(dāng)中性氧化鋁為200 mg、二氧化鋯為 200 mg、GCB 為 20 mg 時(shí)，50 mg PSA 的加入量已能獲得較好的凈化效果；當(dāng)中性氧化鋁為200 mg、二氧化鋯為200 mg、PSA為50 mg時(shí)，提取液的顏色隨GCB含量的增加變淺，加入量為20 mg時(shí)，提取液中色素被完全吸附。實(shí)驗(yàn)最終確定復(fù)合吸附劑組合為中性氧化鋁200 mg+二氧化鋯 200 mg+PSA 50 mg+GCB 20 mg，并將其用于水產(chǎn)品中撲草凈殘留的加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，獲得了滿(mǎn)意的回收率 (85.8%～111.8%)及較好的凈化效果，如蝦提取液經(jīng)復(fù)合吸附劑凈化后，溶液變得清澈透亮，色譜圖干擾峰顯著減少，基線噪音變小、較平整 (圖5)。

圖5 蝦已凈化與未凈化基質(zhì)的提取離子色譜圖比較Fig. 5 Comparison of extracted ion diagrams of purified and unpurified shrimp

2.4 方法驗(yàn)證

2.4.1 基質(zhì)效應(yīng)

質(zhì)譜在電離和掃描過(guò)程中存在基質(zhì)效應(yīng)，為考察撲草凈在蝦、草魚(yú)、鱖、海參、文蛤5種水產(chǎn)品中的基質(zhì)效應(yīng)，實(shí)驗(yàn)配制濃度為100 μg·L?1的基質(zhì)標(biāo)樣，與同等濃度的溶劑標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行對(duì)比測(cè)定，依照公式ME=(Aι)基質(zhì)標(biāo)樣/(Aι)溶液標(biāo)樣(Aι為撲草凈的峰面積) 計(jì)算基質(zhì)效應(yīng)[30]。若ME>1，表示基質(zhì)對(duì)分析物的響應(yīng)產(chǎn)生增強(qiáng)效應(yīng)；若ME<1，表示基質(zhì)對(duì)分析物的響應(yīng)產(chǎn)生抑制效應(yīng)；若ME=1，表示不存在基質(zhì)效應(yīng)。當(dāng)ME介于0.8～1.2時(shí)，基質(zhì)干擾程度較低；當(dāng)0.51.5，表示干擾強(qiáng)烈[32]。結(jié)果表明，5種水產(chǎn)品基質(zhì)的基質(zhì)效應(yīng)介于0.91～0.96，表明水產(chǎn)品基質(zhì)對(duì)撲草凈響應(yīng)干擾程度較低，說(shuō)明該方法對(duì)水產(chǎn)品基質(zhì)的凈化效果良好。

2.4.2 線性范圍、檢出限與定量限

按1.2配制標(biāo)準(zhǔn)曲線，在選定的色譜條件和質(zhì)譜參數(shù)下測(cè)定分析，以目標(biāo)物定量離子峰面積和相應(yīng)內(nèi)標(biāo)物定量離子峰面積之比 (y) 為縱坐標(biāo)，以目標(biāo)物濃度 (x) 為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，實(shí)驗(yàn)分別以3倍信噪比 (S/N≥3) 和10 倍信噪比 (S/N≥10) 確定方法的檢出限 (LOD) 和定量限 (LOQ)。結(jié)果為撲草凈質(zhì)量濃度介于 5～200 μg·L?1，線性良好，線性方程為y=0.013 1x+0.027 9，線性相關(guān)系數(shù) (R2) 為0.999 9，檢出限為 5 μg·kg?1，定量限為 10 μg·kg?1；方法檢出限低于SN/T 1968—2007 《進(jìn)出口食品中撲草凈殘留量檢測(cè)方法 氣相色譜-質(zhì)譜法》的檢出限 (10 μg·kg?1)，低于日本規(guī)定的水產(chǎn)品中撲草凈殘留 10 μg·kg?1的基準(zhǔn)值[7]，同時(shí)與朱曉華等[10]建立的水產(chǎn)品中撲草凈殘留固相萃取-氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法相比，本研究建立的方法減少了有機(jī)溶劑的用量，具有操作簡(jiǎn)單、高效、價(jià)格低廉，樣品完成一次前處理僅需2 h，適用于批量樣品的檢測(cè)。

2.5 精密度與回收率

選擇對(duì)蝦、草魚(yú)、鱖、海參、文蛤開(kāi)展加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)。草魚(yú)為草食性魚(yú)類(lèi)含脂量低，鱖為肉食性魚(yú)類(lèi)含脂量高，對(duì)蝦含大量色素，而海參、貝類(lèi)是目前撲草凈監(jiān)測(cè)重點(diǎn)關(guān)注的水產(chǎn)品且與魚(yú)、蝦基質(zhì)差異較大，表明實(shí)驗(yàn)所選品種有較好的代表性。向?qū)嶒?yàn)樣品中分別添加10、20、40和200 μg·kg?1的撲草凈標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個(gè)添加水平設(shè)6個(gè)平行，并做空白實(shí)驗(yàn)，計(jì)算回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，方法加標(biāo)回收率為85.8%～111.8%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.2%～8.8%，說(shuō)明方法的準(zhǔn)確度與精密度較好，能滿(mǎn)足國(guó)標(biāo)GB/T 27404—2008《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測(cè)》中實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 (表1)。就方法適用范圍而言，行標(biāo)SN/T 1968—2007適用范圍不包括水產(chǎn)品，而目前報(bào)道的撲草凈檢測(cè)方法[11-13]存在水產(chǎn)品覆蓋面不全、應(yīng)用性不強(qiáng)等不足，本研究建立的方法不僅涵蓋5種不同基質(zhì)類(lèi)型的水產(chǎn)品，還包含國(guó)家重點(diǎn)檢測(cè)的水產(chǎn)品種，具有適用范圍廣的優(yōu)點(diǎn)，可滿(mǎn)足我國(guó)水產(chǎn)品質(zhì)量安全的監(jiān)測(cè)需求。

表1 水產(chǎn)品中撲草凈的加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差 (N=6)Table 1 Spiked recoveries and relative standard deviations of aquatic product (N=6)

2.6 實(shí)際樣品

將建立的方法用于30份水產(chǎn)品中撲草凈檢測(cè)，其中15份養(yǎng)殖水產(chǎn)品采集于廣西、湖南、福建等地的農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)，15份捕撈水產(chǎn)品采集于中國(guó)南海海域，檢測(cè)結(jié)果顯示：養(yǎng)殖水產(chǎn)品中無(wú)撲草凈檢出，捕撈水產(chǎn)品中有2份樣品檢出撲草凈，分別為脊尾白蝦 (Palaemon carinicauda,20.4 μg·kg?1) 和僧帽牡蠣 (Ostrea cucullate, 24.3 μg·kg?1，圖6)。據(jù)有關(guān)報(bào)道，撲草凈在中國(guó)長(zhǎng)江、黃河等重點(diǎn)流域水體[33]及熱帶海域海南[34]亦有不同程度的檢出，表明中國(guó)部分自然水域已受到撲草凈殘留的影響，可能對(duì)水生生物健康和水產(chǎn)品質(zhì)量安全產(chǎn)生潛在威脅，因此建議進(jìn)一步加強(qiáng)撲草凈環(huán)境殘留及捕撈水產(chǎn)品殘留的監(jiān)控。

圖6 僧帽牡蠣樣品提取離子色譜圖Fig. 6 Extracted ion chromatograms of S. cucullata

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)建立了快速檢測(cè)水產(chǎn)品中撲草凈殘留的QuECh-ERS-氣相色譜-質(zhì)譜法。方法用乙腈-二氯甲烷 (V∶V=8∶2)混合溶液提取，提取液經(jīng)吸附劑中性氧化鋁、N-丙基乙二胺 (PSA)、納米二氧化鋯結(jié)合石墨化炭黑 (GCB) 凈化后上機(jī)檢測(cè)，內(nèi)標(biāo)法定量，加標(biāo)回收率為85.8%～111.8%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為 1.2%～8.8%，檢出限為 5 μg·kg?1，定量限為 10 μg·kg?1。方法可滿(mǎn)足草食性魚(yú)類(lèi)、肉食性魚(yú)類(lèi)、蝦類(lèi)、海參及貝類(lèi)中撲草凈殘留的檢測(cè)需求，具有操作簡(jiǎn)便、回收率高、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，可實(shí)現(xiàn)水產(chǎn)品中撲草凈殘留的批量化檢測(cè)，有利于撲草凈殘留風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)、預(yù)警及評(píng)估項(xiàng)目的開(kāi)展。