藥物性肝損傷(DILI)是藥物本身及其代謝產(chǎn)物綜合作用導(dǎo)致的肝功能改變，相較于其他肝損傷缺乏明顯的特異性，但具有潛在肝臟毒性，嚴(yán)重時(shí)可發(fā)展為肝衰竭甚至死亡，占爆發(fā)性肝衰竭的25%

。目前，臨床缺乏治療DILI的特效藥物，該病發(fā)病機(jī)制與氧化應(yīng)激及腸源性內(nèi)毒素等有關(guān)。人體腸道內(nèi)有大量微生物，其菌群分布易受環(huán)境因子影響，維持腸道微生態(tài)平衡對(duì)確保人體健康至關(guān)重要。進(jìn)年來(lái)研究顯示，DILI的發(fā)病過(guò)程中伴隨有腸道菌群結(jié)構(gòu)的改變，隨著腸-肝軸研究的深入，腸道菌群與DILI關(guān)系的研究成為熱點(diǎn)

。有研究表明，有效調(diào)節(jié)腸道菌群結(jié)構(gòu)有助于緩解藥物治療所致的肝損傷

。故研究腸道菌群分布情況對(duì)DILI患者臨床治療有一定參考價(jià)值。本研究選取83例DILI患者為研究對(duì)象，探究其腸道菌群結(jié)構(gòu)與肝損傷程度、生化指標(biāo)等的關(guān)系，為DILI的防治提供可靠參考依據(jù)。

一方面，完善財(cái)務(wù)崗位的管理制度，注重財(cái)務(wù)人員專(zhuān)業(yè)素養(yǎng)提升。對(duì)于財(cái)務(wù)人員而言，崗位管理制度影響著個(gè)人的工作行為、理念和專(zhuān)業(yè)素養(yǎng)等各方面。新時(shí)代下，應(yīng)當(dāng)從財(cái)務(wù)崗位管理制度的完善入手，要求財(cái)務(wù)人員從計(jì)劃管理、預(yù)算、決策和整理分析等方面提升加大學(xué)習(xí)力度，以逐步提升專(zhuān)業(yè)素養(yǎng)；

1 資料與方法

1.1 一般資料 經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批，選取2018年2月至2020年10月我院收治療的DILI患者83例為研究對(duì)象。83例DILI患者包括男39例，女44例；年齡27～60歲，平均(43.64±3.94)歲；肝損傷程度：輕度型28例，中度型34例，重度型21例。另外選取病毒性肝炎、自身免疫性肝炎等非藥物導(dǎo)致的肝損傷患者80例為對(duì)照組，其中男41例，女39例；年齡26～60歲，平均(45.56±3.17)歲。兩組年齡、性別等一般資料比較無(wú)顯著差異(

>0.05)。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn) ①符合DILI診斷標(biāo)準(zhǔn)

，用藥后4周內(nèi)出現(xiàn)肝損傷臨床癥狀

，所用藥物包括中草藥、中成藥、免疫抑制劑、抗腫瘤藥及保健品；②年齡26～60歲；③均簽署同意書(shū)。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn) ①病毒性肝炎、酒精性肝病及自身免疫等其他原因?qū)е碌母螕p傷；②合并胃腸慢性疾病、糖尿病及代謝綜合征等影響研究結(jié)果疾病；③妊娠期婦女。

1.4 觀察指標(biāo) 分析所有受試者腸道菌群alpha多樣性；比較兩組受試者腸道菌群屬于水平分布結(jié)構(gòu)；比較兩組受試者肝臟生化指標(biāo)水平；計(jì)算腸道失衡指數(shù)(GDI)，比較不同肝損傷程度GDI指數(shù)差異；分析腸道菌群失衡與各生化指標(biāo)及肝損傷程度間的關(guān)系。

2.3 不同肝損傷程度與GDI指數(shù)的關(guān)系 三組患者GDI指數(shù)分別為-(6.23±0.87)、-(7.14±1.06)、-(10.26±2.07)，三組患者GDI指數(shù)組間比較有顯著差異(

<0.05)。

養(yǎng)殖戶在養(yǎng)殖中應(yīng)該密切觀察牛的活動(dòng)情況、身體狀況以及精神狀態(tài)等，若發(fā)現(xiàn)疑似結(jié)核病的牛，需要立即進(jìn)行隔離治療，向當(dāng)?shù)貏?dòng)物防疫監(jiān)督機(jī)構(gòu)報(bào)告疫情。該部門(mén)確認(rèn)疫情后根據(jù)《動(dòng)物疫情報(bào)告管理辦法》及時(shí)上報(bào)后安排專(zhuān)業(yè)人員進(jìn)行調(diào)查核實(shí)，并進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷。

1.4.1 腸道菌群檢測(cè) 樣本采集：用采樣管采集所有受試者糞便樣本約1 g，將其快速放入微生物保存管，并轉(zhuǎn)入冰箱，-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2 結(jié)果

2.4 兩組患者肝臟生化指標(biāo)水平 見(jiàn)表3。

1.4.3 肝臟生化指標(biāo)檢測(cè) 所有受試者空腹抽取5 ml肘靜脈血，3 000 r/min 的轉(zhuǎn)速離心10 min，分離血清-20℃保存待檢。采用雅培c16000全自動(dòng)生化分析儀及其配套試劑檢測(cè)肝臟生化指標(biāo)：丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、白蛋白(Alb)、總膽紅素(TBil)。

2.2 腸道菌群菌屬豐富度差異 研究組患者腸球菌屬、鏈球菌屬、普氏菌屬豐富度顯著高于對(duì)照組，乳桿菌屬、雙歧桿菌屬、梭桿菌屬豐富度顯著低于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

<0.05)；兩組患者糞便樣本中擬桿菌屬豐富度比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

>0.05)。見(jiàn)表2。

2.5 腸道菌群失衡與肝損傷嚴(yán)重程度、肝臟生化指標(biāo)的相關(guān)性 部分腸道菌群失衡與肝損傷嚴(yán)重程度、肝臟生化指標(biāo)呈顯著相關(guān)性(

<0.05)。見(jiàn)表4。

1.4.2 檢測(cè)方法 采用MasterPure DNA 純化試劑盒(OMEGA，美國(guó))抽提DNA，使用瓊脂凝膠電泳技術(shù)測(cè)定DNA濃度及純度；取30 ngDNA提取物，使用Phusion High-Fidelity PCR Master Mix體系(美國(guó)ThermoFisher公司)對(duì)V3～V5指定區(qū)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，應(yīng)用武漢華大基因公司的Illumina Miseq平臺(tái)進(jìn)行16S rDNA基因高通量測(cè)序，采用Ion Plus Fragment Library Kit 48 rxns(美國(guó)Thermo Fisher公司)建庫(kù)。引物341F：5′-CCTAYGGGRBGCASCAG-3′，806R：5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3′。應(yīng)用北京奧維森基因科技有限公司的COPE軟件統(tǒng)計(jì)樣品序列數(shù)目，應(yīng)用北京環(huán)中睿馳科技有限公司的QIIME序列分析軟件，將序列聚類(lèi)為用于物種分類(lèi)的OTUs，結(jié)合物種組成信息結(jié)果，分析腸道菌群多樣性。

2.1 糞便樣本菌群多樣性分析 見(jiàn)表1。

②外源性融資渠道狹窄。中小企業(yè)多采用債務(wù)融資方式。由于我國(guó)目前的金融管理體制仍比較嚴(yán)格，這種管制對(duì)金融機(jī)構(gòu)主體資格做出了嚴(yán)格限制，并對(duì)各種業(yè)務(wù)準(zhǔn)入實(shí)行審核批準(zhǔn)制度，這些制度一定程度上抵擋了金融風(fēng)險(xiǎn)，但在一定程度上也擋住了大量資金進(jìn)入融資領(lǐng)域限制了我國(guó)資本市場(chǎng)的正常發(fā)展，其后果就是資本供給不足、融資渠道單一。

3 討論

引發(fā)DILI的藥物有很多，其中抗結(jié)核藥、中藥、抗腫瘤藥及抗微生物藥等最容易引發(fā)DILI。正常生理狀態(tài)下腸道菌群處于平衡狀態(tài)，當(dāng)受到疾病、藥物不合理使用等機(jī)體內(nèi)外因素刺激時(shí)，便會(huì)導(dǎo)致腸道菌群失衡。腸道菌群失衡與各種疾病存在緊密聯(lián)系，肝臟生理狀態(tài)受腸道菌群影響，而腸道菌群增值又受肝臟制約

。大量研究表明

，肝硬化患者使用抗生素會(huì)對(duì)腸道菌群產(chǎn)生重大影響，但DILI與腸道菌群關(guān)系的研究仍存在欠缺。

對(duì)于新加坡的中學(xué)生來(lái)說(shuō)，經(jīng)過(guò)小學(xué)階段的洗禮，他們已經(jīng)獲得了足夠的能力去了解這個(gè)世界，然而當(dāng)前的世界，在歷經(jīng)科技革命之后，信息爆炸，各類(lèi)資訊魚(yú)龍混雜，難以分辨。

以往研究表明，肝臟疾病與腸道菌群存在緊密聯(lián)系，菌群失調(diào)可以影響肝功能，肝臟疾病也可誘發(fā)或加重菌群失調(diào)，二者相互作用，互為因果

。藥物導(dǎo)致肝損傷的研究較多，但有關(guān)此類(lèi)患者肝損傷與腸道菌群失衡間關(guān)系的研究較少，大多數(shù)研究?jī)H限于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。鄧紅等

探究何首烏給藥情況與腸道菌群分布間的關(guān)系，結(jié)果表明何首烏導(dǎo)致肝損傷大鼠存在不同程度的菌群失衡。本研究檢測(cè)了83例DILI患者糞便中菌群分布情況，并與非藥物導(dǎo)致的肝損傷患者腸道菌群菌群結(jié)構(gòu)對(duì)比分析。結(jié)果證實(shí)，研究組糞便樣本菌群Simpson指數(shù)較對(duì)照組顯著增大，Shannon指數(shù)、Sobs指數(shù)顯著減小，提示DILI患者腸道中菌群多樣性下降，與以往研究結(jié)果相似。進(jìn)一步分析其菌屬分布結(jié)構(gòu)，發(fā)現(xiàn)DILI患者腸道中乳桿菌、雙歧桿菌及梭菌屬等益生菌豐富度顯著下降，而腸球菌屬、鏈球菌屬、普氏菌屬等豐富度顯著增大。雙歧桿菌和乳酸桿菌是腸道主要益生菌，具有預(yù)防和維持肝功能作用。梭菌具有改善肝臟脂肪變性、修復(fù)肝細(xì)胞功能，降低血清ALT/AST等水平，進(jìn)而發(fā)揮護(hù)肝作用

。長(zhǎng)期使用利福平、異煙肼、乙胺丁醇等抗結(jié)核藥是導(dǎo)致以上菌屬水平下降的主要原因。GDI指數(shù)通過(guò)腸道中“有害菌”對(duì)“有益菌”的豐度差異來(lái)指征腸道菌群的失調(diào)情況，研究組GDI值顯著大于對(duì)照組，且重度病例GDI指數(shù)較輕、中度高，說(shuō)明隨著DILI病情加重，其腸道菌群失衡情況也在加重。ALT、AST、ALP是肝臟生化實(shí)驗(yàn)主要指標(biāo)，一般ALT或AST>40 U/L則表明肝功能異常。本研究中研究組ALT、AST、ALP、TBil及DBil水平處于較高水平，而對(duì)照組肝功能指標(biāo)在正常范圍內(nèi)。經(jīng)Pearson相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn)乳桿菌屬、雙歧桿菌屬、梭桿菌屬、鏈球菌屬等與肝臟生化指標(biāo)呈顯著相關(guān)，說(shuō)明腸道菌群參與DILI發(fā)病，腸道菌群失衡與DILI患者肝臟生化指標(biāo)及疾病嚴(yán)重程度有緊密聯(lián)系，與其他同類(lèi)研究結(jié)果存在相似之處；分析原因，腸道菌群可通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞自噬、抑制致病菌等途徑發(fā)揮護(hù)肝作用，當(dāng)受到藥物不良反應(yīng)等外界刺激時(shí)，腸道微生物環(huán)境發(fā)生改變，使其菌群結(jié)構(gòu)隨之發(fā)生巨大改變，與藥物本身的副作用一起共同加重肝臟損傷。DILI患者腸道菌群主要表現(xiàn)為菌群多樣性下降，乳桿菌、雙歧桿菌屬等益生菌豐富度下降，鏈球菌、腸球菌屬豐富度上升。腸道菌群失衡指數(shù)GDI與患者肝臟生化指標(biāo)及肝損傷嚴(yán)重程度呈顯著相關(guān)性，說(shuō)明腸道菌群變化可能參與DILI發(fā)病。

引物的設(shè)計(jì)與合成根據(jù)‘索邦’花蕾轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)設(shè)計(jì)引物MYB12(Clone)F和MYB12(Clone)R，根據(jù)獲得的LhsorMYB12基因序列，利用Primer 5.0軟件設(shè)計(jì)半定量PCR引物MYB12(RT-PCR)F和MYB12(RT-PCR)R(表1)。

本文只研究了DILI患者腸道菌群屬水平與其他指標(biāo)的關(guān)系，未進(jìn)行種、科水平菌群分析，且未對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行深入研究，這些內(nèi)容有待進(jìn)一步闡述。

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