奶牛乳腺炎模型的建立及炎癥相關(guān)因子基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平的分析

羅仍卓么，王晉鵬，焦 鵬，李彥霞，董益聞，魏大為，王興平*

(1.寧夏大學(xué)農(nóng)學(xué)院，銀川 750021； 2.寧夏回族自治區(qū)反芻動(dòng)物分子細(xì)胞育種重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，銀川 750021)

奶牛乳腺炎是一種由細(xì)菌等病原體引起的乳腺疾病，可導(dǎo)致奶牛產(chǎn)奶量下降、獸醫(yī)護(hù)理費(fèi)用增加和死淘率上升，從而影響奶牛場的經(jīng)濟(jì)效益。金黃色葡萄球菌()和大腸桿菌()是引起乳腺炎的主要致病菌，其中，為革蘭陰性菌，其感染經(jīng)常會(huì)引起急性、癥狀嚴(yán)重的臨床乳腺炎，甚至?xí)鹉膛Ｋ劳?；而是引起乳腺炎的最常見的革蘭陽性菌，可在乳腺吞噬細(xì)胞中存活，逃避乳腺免疫系統(tǒng)的殺傷，因此感染奶牛乳腺組織后很難被機(jī)體清除，也極易產(chǎn)生耐藥性，常常會(huì)引起難以治愈的亞臨床隱性乳腺炎。上述兩種細(xì)菌具有不同的病原體相關(guān)分子模式，引起的奶牛乳腺炎具有不完全相同的臨床癥狀。因此，和也分別作為引起臨床和亞臨床乳腺炎的主要病原體，用于乳腺炎活體模型的制備。在基因表達(dá)方面，感染奶牛可立即激活促炎因子基因的表達(dá)，而感染的反應(yīng)較為緩慢，其引起炎癥因子基因的表達(dá)程度較低。但是，乳腺炎相關(guān)的差異表達(dá)基因有很多，在型和型乳腺炎中，仍有很多基因的表達(dá)情況尚不清楚，有待于進(jìn)一步探討。

作者前期通過乳腺炎奶牛乳腺組織的轉(zhuǎn)錄組測序分析，初步獲得了趨化因子家族的C-C基序趨化因子配體2(C-C motif chemokine ligand 2，2)、C-C基序趨化因子配體8(C-C motif chemokine ligand 8，8)、C-X-C基序趨化因子受體1(C-X-C motif chemokine receptor 1，1)、C-X-C基序趨化因子2(C-X-C motif chemokine 2，2)、C-X-C基序趨化因子13(C-X-C motif chemokine 13，13)、補(bǔ)體因子Ⅰ(complement factor I，Ⅰ)、補(bǔ)體因子B(complement factor B，)、自噬調(diào)節(jié)因子孕酮誘導(dǎo)的蛻膜蛋白1(decidual protein induced by progesterone 1，1)和白細(xì)胞介素21受體(interleukin 21 receptor，21)共9個(gè)候選基因，但是它們在型和型乳腺炎奶牛的乳腺組織中的mRNA轉(zhuǎn)錄水平尚不完全清楚。因此，本研究建立了型和型奶牛乳腺炎活體模型，檢測了上述9個(gè)基因在對照組和誘導(dǎo)組奶牛乳腺組織中的mRNA轉(zhuǎn)錄水平，以期為深入研究不同類型乳腺炎的分子調(diào)控機(jī)制提供參考。

1 材料與方法

1.1 主要試劑與儀器

(ATCC 25923)和(ATCC 25922)凍干粉購自上海復(fù)祥生物科技有限公司；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(貨號RR047A)、熒光定量試劑盒TB Green Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus) (貨號RR820A)和TriZol試劑均購自TaKaRa寶日醫(yī)生物技術(shù)(北京)有限公司；TLR4抗體(sc-29372)、TNFα抗體(sc-133192)、NF-κB p50抗體(sc-8414)和羊抗兔IgG-HRP(sc-2030)均購自圣克魯斯生物技術(shù)(上海)有限公司；Synergy LX多功能酶標(biāo)儀購自BioTek(美國)；CFX 96 Touch熒光定量PCR儀均購自Bio-Rad公司(美國)。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

購于同一飼養(yǎng)條件、處于泌乳盛期的2～3歲 頭胎荷斯坦奶牛。所有奶牛泌乳周期相同，體況健康，牛奶體細(xì)胞數(shù)(somatic cell count，SCC)<20萬·mL。 隨機(jī)分為對照組、誘導(dǎo)組和誘導(dǎo)組，每組各3頭。

1.3 奶牛乳腺炎活體模型的建立

為消除由于奶?？赡苡衅渌装Y性疾病而引起的試驗(yàn)誤差，給奶牛注射抗生素7 d進(jìn)行平衡處理。然后繼續(xù)飼養(yǎng)21 d以消除抗生素殘留，使奶牛達(dá)到體況良好，無炎癥且牛奶SCC<20萬·mL。

將和凍干粉溶解、劃線接種、挑取單菌落和擴(kuò)大培養(yǎng)，用PBS稀釋至10CFU·mL的接種密度。清潔奶牛乳房和乳頭，75%乙醇消毒，用通乳針將5 mL 1×10CFU·mL的和懸浮液經(jīng)乳導(dǎo)管分別一次性注入到試驗(yàn)組奶牛乳房的右后乳區(qū)內(nèi)，對照組奶牛注射等量的無菌PBS。在接種后的第7天，采用無菌手術(shù)法活體采集奶牛的乳腺組織，用于乳腺炎病理鑒定和組織RNA提取。

1.4 乳腺炎奶牛模型的鑒定

1.4.1 臨床診斷和組織病理檢測 奶牛乳腺感染細(xì)菌后，測定奶牛體溫和牛奶SCC，并診斷奶牛感染后的臨床癥狀。此外，將采集到的乳腺組織經(jīng)過石蠟包埋、組織切片、蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin，HE)染色和顯微拍照，觀察對照組、誘導(dǎo)組和誘導(dǎo)組奶牛乳腺組織的病理變化。

1.4.2 乳腺組織免疫相關(guān)蛋白質(zhì)的檢測 Toll樣受體4(toll-like receptor 4，TLR4)/ 核因子激活的B細(xì)胞的κ-輕鏈增強(qiáng)子(nuclear factor kappa light chain enhancer of activated B cells，NF-κB)信號通路在動(dòng)物固有免疫和炎癥反應(yīng)中具有重要的作用。為了驗(yàn)證奶牛乳腺炎模型的構(gòu)建結(jié)果，本試驗(yàn)采用組織免疫熒光技術(shù)檢測了對照組、誘導(dǎo)組和誘導(dǎo)組奶牛乳腺組織中TLR4/NF-κB信號通路關(guān)鍵分子TLR4、NF-κB和腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor alpha，TNFα)的表達(dá)水平，采用Image J軟件進(jìn)行表達(dá)量統(tǒng)計(jì)，-檢驗(yàn)進(jìn)行差異表達(dá)顯著性檢驗(yàn)。

1.5 RNA提取與qPCR

1.5.1 RNA提取與cDNA合成 采用TRIzoL法提取對照組、誘導(dǎo)組和誘導(dǎo)組奶牛乳腺組織的總RNA，利用多功能酶標(biāo)儀檢測RNA的純度(OD/OD≥1.8；OD/OD≥1.0)和濃度(總RNA濃度≥800 ng·μL)。按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書，以經(jīng)檢測合格的1 000 ng RNA為模板，進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄PCR，獲得cDNA。

1.5.2 qPCR引物 根據(jù)GenBank公布的基因序列，利用Primer Premier 5.0軟件設(shè)計(jì)qPCR引物(表1)。引物由通用生物系統(tǒng)(安徽)有限公司合成，無菌超純水溶解。

表1 qPCR引物信息

1.5.3 qPCR反應(yīng) 分別以對照組、誘導(dǎo)組和誘導(dǎo)組奶牛乳腺組織的cDNA為模板，利用qPCR試劑盒進(jìn)行相關(guān)基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平的檢測。qPCR反應(yīng)體系為2×TB Green Premix ExⅡ 10 μL，上、下游引物各0.8 μL，cDNA模板100 ng，加無菌無酶的ddHO至20 μL。 qPCR反應(yīng)程序：95 ℃預(yù)變性30 s;95 ℃ 5 s，60 ℃ 30 s，共40個(gè)循環(huán)；95 ℃ 10 s，65 ℃ 5 s。每個(gè)檢測進(jìn)行3次重復(fù)。

1.5.4 統(tǒng)計(jì)分析 以甘油醛-3-磷酸脫氫酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，)和前折疊蛋白樣伴侶(ubiquitously expressed prefoldin like chaperone transcript，)作為內(nèi)參，采用2-△△方法計(jì)算基因的相對表達(dá)量。利用GraphPad Prism 8.0軟件，通過單因素方差分析法進(jìn)行組間基因表達(dá)量的差異顯著性檢驗(yàn)，<0.01表示差異極顯著。

2 結(jié) 果

2.1 奶牛乳腺炎模型的建立

2.1.1 乳腺炎臨床檢查 用和分別感染奶牛乳房，在感染1 d后，兩個(gè)感染組奶牛體溫明顯升高，在第4、5天達(dá)到40 ℃左右，并表現(xiàn)出典型的乳腺炎臨床癥狀：乳頭發(fā)紅、腫脹、疼痛、發(fā)熱和牛奶產(chǎn)生絮狀沉淀。其中，組在第4、5天時(shí)奶樣絮狀嚴(yán)重，乳汁變清水樣，第7天乳房出現(xiàn)結(jié)塊。組反應(yīng)較激烈，在第3天時(shí)奶樣出現(xiàn)豆渣樣，第4天乳清變黃色，第5天乳房出現(xiàn)結(jié)塊，第6天牛開始出現(xiàn)下痢，糞便呈灰綠色。第3天以后，兩組牛的奶樣體細(xì)胞數(shù)大于90萬·mL， 且產(chǎn)奶量顯著下降，到第6～7天出現(xiàn)停乳。上述診斷結(jié)果顯示，奶牛已產(chǎn)生嚴(yán)重的乳腺炎。

2.1.2 乳腺組織病理鑒定 乳腺組織HE病理觀察結(jié)果表明，與對照組相比，誘導(dǎo)組和誘導(dǎo)組奶牛的乳腺小葉結(jié)構(gòu)破壞，乳腺腺泡受損，腺泡腔減小，部分乳腺上皮細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生變化，并出現(xiàn)中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等炎性細(xì)胞浸潤(圖1)。

A. 對照組；B. S. aureus誘導(dǎo)組；C. E. coli誘導(dǎo)組A. Control group; B. S. aureus-induced group; C. E. coli-induced group圖1 乳腺組織的HE染色(100×)Fig.1 HE staining of mammary gland tissue (100×)

2.1.3 TLR4/NF-κB信號通路關(guān)鍵分子的表達(dá)量檢測 TLR4、NF-κB和TNF-α是TLR4/NF-κB固有免疫和炎癥信號通路的關(guān)鍵分子。為驗(yàn)證奶牛乳腺炎模型的可靠性，采用組織免疫熒光技術(shù)檢測了它們在對照組、誘導(dǎo)組和誘導(dǎo)組中的表達(dá)情況，結(jié)果表明，與對照組相比，誘導(dǎo)組和誘導(dǎo)組奶牛乳腺組織的TLR4、NF-κB和TNF-α蛋白質(zhì)的表達(dá)水平均極顯著上調(diào)(<0.01)(圖2)，說明了和可使奶牛乳腺組織啟動(dòng)TLR4/NF-κB固有免疫信號通路，并產(chǎn)生了炎癥反應(yīng)。上述結(jié)果從蛋白質(zhì)水平上說明了本試驗(yàn)所建立的乳腺炎模型是可靠的。

A. TLR4免疫熒光；B. NF-κB免疫熒光；C. TNF-α免疫熒光。**.P<0.01A. TLR4 immunofluorescence; B. NF-κB immunofluorescence; C. TNF-α immunofluorescence. **. P<0.01圖2 奶牛乳腺組織TLR4、NF-κB和TNF-α蛋白的免疫熒光檢測(40×)Fig.2 Expression of TLR4, NF-κB and TNF-α in bovine mammary tissues by immunofluorescence (40×)

2.2 qPCR檢測結(jié)果

為探討奶牛感染和后炎癥相關(guān)基因的mRNA轉(zhuǎn)錄水平，采用qPCR技術(shù)檢測對照組、誘導(dǎo)組和誘導(dǎo)組的趨化因子家族2、8、1、2和13，補(bǔ)體因子和，以及自噬調(diào)節(jié)因子1和白介素受體21共9個(gè)基因的mRNA 轉(zhuǎn)錄水平。

2.2.1 趨化因子基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平的檢測結(jié)果 qPCR檢測結(jié)果顯示，與對照組相比，誘導(dǎo)組和誘導(dǎo)組的趨化因子2、8、1和2基因的mRNA轉(zhuǎn)錄水平均極顯著上調(diào)(<0.001)；2、8和1在誘導(dǎo)組的mRNA轉(zhuǎn)錄水平極顯著高于誘導(dǎo)組(<0.001)；13僅在誘導(dǎo)組中的mRNA轉(zhuǎn)錄水平極顯著上調(diào)(<0.001)，在誘導(dǎo)組中的上升趨勢不顯著(>0.05)(圖3)。結(jié)果說明，在和感染奶牛乳腺后，上述基因可能在組織炎癥反應(yīng)中具有重要的作用。

**.P<0.001圖3 奶牛乳腺組織趨化因子基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平的檢測結(jié)果Fig.3 Detection results of mRNA transcription levels of chemokine genes in dairy cow mammary tissues

2.2.2 補(bǔ)體因子基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平的檢測結(jié)果 qPCR檢測結(jié)果表明，與對照組相比，誘導(dǎo)組和誘導(dǎo)組中補(bǔ)體因子和基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平極顯著上調(diào)(<0.001)，尤其是在誘導(dǎo)組和誘導(dǎo)組的mRNA轉(zhuǎn)錄水平分別上調(diào)51倍和42倍。此外，在誘導(dǎo)組的mRNA轉(zhuǎn)錄水平極顯著高于誘導(dǎo)組(<0.001)，而在誘導(dǎo)組的mRNA轉(zhuǎn)錄水平極顯著低于誘導(dǎo)組(<0.001)(圖4)，推測這兩個(gè)基因在和誘導(dǎo)的乳腺炎中可能具有不同的調(diào)控方式。

**. P<0.001圖4 奶牛乳腺組織 CFI和CFB基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平的檢測結(jié)果Fig.4 Detection results of mRNA transcription levels of CFI and CFB genes in dairy cow mammary tissues

2.2.3 自噬調(diào)節(jié)因子1和白細(xì)胞介素受體21基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平的檢測結(jié)果 qPCR檢測結(jié)果表明，與對照組相比，誘導(dǎo)組和誘導(dǎo)組中自噬調(diào)節(jié)因子1基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平均極顯著下降(<0.001)(圖5)，說明在炎癥發(fā)生中細(xì)胞維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)遭到嚴(yán)重破壞。21基因在誘導(dǎo)組和誘導(dǎo)組mRNA轉(zhuǎn)錄水平均極顯著上升(<0.001)，且誘導(dǎo)組mRNA轉(zhuǎn)錄水平極顯著高于誘導(dǎo)組(<0.01)(圖5)。鑒于21基因具有重要的免疫抑制作用，表明在和感染后，奶牛免疫力急劇下降，并且感染后對免疫力的影響作用更明顯。

*. P<0.01; **. P<0.001圖5 奶牛乳腺組織DEPP1和IL21R基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平的檢測結(jié)果Fig.5 Detection results of mRNA transcription levels of DEPP1 and IL21R genes in dairy cow mammary tissues

3 討 論

奶牛乳腺炎受多基因組成的分子網(wǎng)絡(luò)共同調(diào)控，其發(fā)生與發(fā)展機(jī)制非常復(fù)雜。為進(jìn)一步解析乳腺炎的分子調(diào)控機(jī)制，近年來，人們利用奶牛乳腺上皮細(xì)胞(bovine mammary epithelial cells，bMECs)炎癥模型和奶牛乳腺炎活體誘導(dǎo)模型開展分子水平上的研究。在這兩種模型中，奶牛乳腺炎活體誘導(dǎo)模型接近于臨床乳腺炎，是更合理的研究材料。迄今為止，幾乎全部研究均采用高濃度菌液短時(shí)(24 h)感染奶牛乳房，誘導(dǎo)產(chǎn)生奶牛急性乳腺炎。但是，上述模型所檢測基因的表達(dá)量差異很大，甚至出現(xiàn)表達(dá)趨勢不一致的結(jié)果，可見基因表達(dá)水平與乳腺炎癥程度、奶牛個(gè)體遺傳、病原菌的類型和劑量、以及感染時(shí)間等多種因素有關(guān)。和是引起奶牛乳腺炎的常見病原菌。乳腺炎是奶牛養(yǎng)殖過程中被病原體長期感染的過程。因此，為了更接近乳腺炎自然發(fā)生與發(fā)展的過程，作者分別將較低濃度的和長時(shí)間(7 d)感染奶牛乳房，成功建立了型和型乳腺炎模型，并進(jìn)行了趨化因子基因、補(bǔ)體因子、細(xì)胞因子受體和自噬調(diào)節(jié)因子共9個(gè)基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平的檢測分析，以期為奶牛乳腺炎的分子機(jī)制研究提供參考。

本研究發(fā)現(xiàn)，和分別感染奶牛乳房后，乳腺組織內(nèi)趨化因子家族的2、8、1、2和13基因的mRNA轉(zhuǎn)錄水平在s誘導(dǎo)組和誘導(dǎo)組均上升，說明2種病原菌感染可使乳腺產(chǎn)生固有免疫反應(yīng)，有助于白細(xì)胞募集。在細(xì)胞水平上，人們發(fā)現(xiàn)bMECs對和s具有不同的免疫反應(yīng)。脂多糖(LPS)是的主要致毒因子，能刺激Toll樣受體2(toll-like receptor 2，TLR2)和TLR4蛋白而啟動(dòng)NF-κB和Fas信號通路，而s的致毒因子LTA能刺激TLR2，啟動(dòng)AP-1和IL-17A信號通路。研究表明，、2、-6和-8、6、-1在LPS誘導(dǎo)的bMECs中的mRNA轉(zhuǎn)錄水平顯著高于LTA誘導(dǎo)的bMECs。Zhang等研究發(fā)現(xiàn)LPS和LTA誘導(dǎo)炎性bMECs可觸發(fā)基質(zhì)成纖維細(xì)胞不同的免疫反應(yīng)。本研究發(fā)現(xiàn)，誘導(dǎo)組趨化因子家族的2、8和1基因的mRNA轉(zhuǎn)錄水平比誘導(dǎo)組顯著升高，與上述細(xì)胞水平的研究結(jié)果一致。趨化因子蛋白超家族的表達(dá)量升高，可介導(dǎo)白細(xì)胞和其他效應(yīng)細(xì)胞向炎癥損傷部位的遷移和黏附，從而引起組織炎癥。同時(shí)，上述結(jié)果解釋了通常引起急性臨床乳腺炎，而引起慢性乳腺炎的原因。

補(bǔ)體系統(tǒng)在免疫反應(yīng)中的作用具有兩面性：它可通過對免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)以及對炎癥細(xì)胞的直接殺傷作用，促進(jìn)免疫監(jiān)視并抑制炎癥的發(fā)展；但是，過度激活的補(bǔ)體可激活免疫抑制微環(huán)境，促進(jìn)炎癥的快速發(fā)展。CFB為C3激活劑前體，主要由肝和巨噬細(xì)胞合成，是補(bǔ)體旁路活化途徑的關(guān)鍵因子，與唐氏綜合征、惡性腫瘤、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等多種疾病有關(guān)。CFI是補(bǔ)體激活途徑中的一種重要抑制因子，與年齡相關(guān)性黃斑變性、急性出血性白質(zhì)腦炎等疾病相關(guān)。在本研究中，相比于對照組，補(bǔ)體因子和基因在誘導(dǎo)組和誘導(dǎo)組奶牛乳腺中mRNA轉(zhuǎn)錄水平均極顯著上升，特別基因的上調(diào)倍數(shù)分別達(dá)到51倍和42倍，這種異常激活則可能對奶牛機(jī)體免疫產(chǎn)生抑制作用，從而促進(jìn)了乳腺炎的發(fā)展。

細(xì)胞自噬是真核生物維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)的一種保護(hù)性機(jī)制，即通過依賴溶酶體降解細(xì)胞質(zhì)內(nèi)破損的細(xì)胞器、致病性微生物和錯(cuò)誤折疊的蛋白質(zhì)，從而維持真核細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)。在正常生理情況下，自噬不影響細(xì)胞的生存和正常功能；而當(dāng)機(jī)體內(nèi)細(xì)胞自噬平衡被破壞時(shí)，自噬不足或過度均可引起細(xì)胞功能異常，導(dǎo)致相關(guān)組織細(xì)胞病理損害加重甚至死亡。自噬調(diào)節(jié)因子DEPP1是一個(gè)參與自噬激活的主要缺氧誘導(dǎo)因子，其N端含有一個(gè)過氧化物酶體靶向信號類型2(peroxisomal targeting signal type 2，PTS2)序列，該序列可與過氧化物酶體生物發(fā)生因子7(peroxisomal biogenesis factor 7，PEX7)受體結(jié)合并進(jìn)入過氧化物酶體，調(diào)節(jié)過氧化氫酶的活性，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞活性氧(reactive oxygen species，ROS)的解毒能力，對叉頭框蛋白O3(forkhead box protein O3，F(xiàn)OXO3)誘導(dǎo)的自噬起關(guān)鍵調(diào)節(jié)作用。在本研究中，和感染乳腺造成奶牛的應(yīng)激增加，導(dǎo)致1基因的mRNA 轉(zhuǎn)錄水平顯著降低，說明在和所致的乳腺炎發(fā)生過程中，減弱了細(xì)胞自噬，從而促進(jìn)了組織炎癥過程。

21是機(jī)體免疫調(diào)節(jié)的基因之一。21結(jié)合-21后可激活MAPK、PI3K/AKT和JAKs-STATs等多種信號通路，調(diào)節(jié)不同基因的表達(dá)，進(jìn)而調(diào)節(jié)T細(xì)胞、B細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞的活化和增殖，從而參與機(jī)體的固有免疫和適應(yīng)性免疫。作為新型的免疫調(diào)節(jié)因子，-21在艾滋病、胰腺導(dǎo)管腺癌和風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等多種自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展中扮演著重要的角色。在本研究中，21基因的mRNA轉(zhuǎn)錄水平在誘導(dǎo)組和誘導(dǎo)組中顯著上升，提示在2種奶牛乳腺炎中，乳腺組織21基因表達(dá)上調(diào)可激活更多T細(xì)胞和B細(xì)胞等免疫細(xì)胞，參與乳腺固有免疫和適應(yīng)性免疫的調(diào)節(jié)，以應(yīng)對乳腺炎的發(fā)生與發(fā)展過程。

4 結(jié) 論

S.和感染奶牛乳房后，可造成嚴(yán)重的臨床型乳腺炎癥狀；兩種病原菌可上調(diào)乳腺組織中趨化因子2、8、1、2和13基因，補(bǔ)體因子和基因，以及白細(xì)胞介素受體21基因的mRNA轉(zhuǎn)錄水平，同時(shí)下調(diào)自噬調(diào)節(jié)因子1基因的mRNA轉(zhuǎn)錄水平，從而應(yīng)對奶牛乳腺炎癥過程。此外，誘導(dǎo)組乳腺組織中的2、8、1、和21基因的mRNA轉(zhuǎn)錄水平均顯著高于組，解釋了是引起急性乳腺炎，而是引起慢性乳腺炎的原因。上述結(jié)果可為深入研究奶牛乳腺炎的分子調(diào)節(jié)機(jī)制提供參考，其深入的機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。