頭花蓼提取物對(duì)左氧氟沙星血漿蛋白結(jié)合率的影響

王玲，袁麗，鄭林，鞏仔鵬，李月婷，潘潔，黃勇*（.貴州醫(yī)科大學(xué)貴州省藥物制劑重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/藥用植物功效與利用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴陽(yáng) 550004；2.貴州醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，貴陽(yáng) 550004；.貴州醫(yī)科大學(xué)民族藥與中藥開發(fā)應(yīng)用教育部工程研究中心，貴陽(yáng) 550004）

左氧氟沙星作為喹諾酮類廣譜抗菌藥物，在臨床上廣泛用于治療泌尿生殖系統(tǒng)感染、呼吸道感染和皮膚軟組織感染等[1]，在治療尿路感染方面療效尤為顯著。頭花蓼（Polygonum capitatum）是一種貴州苗族習(xí)用藥材，具有清熱利濕、利尿通淋、解毒止痛等功效[2]。臨床上頭花蓼提取物制成的單方制劑熱淋清顆粒與左氧氟沙星聯(lián)用十分廣泛，聯(lián)合使用可提高療效，縮短療程，減少抗菌藥物的不良反應(yīng)[3-5]。盡管兩者聯(lián)合應(yīng)用的臨床療效評(píng)價(jià)研究較多，但尚未見國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)有關(guān)于頭花蓼提取物對(duì)左氧氟沙星血漿蛋白結(jié)合率影響方面的研究報(bào)道。藥物血漿蛋白結(jié)合率是藥代動(dòng)力學(xué)的重要參數(shù)之一，血漿蛋白結(jié)合率的變化可引起藥物血藥濃度的變化，從而改變其藥代動(dòng)力學(xué)行為，在臨床聯(lián)合用藥方面有重要意義[6]。

中藥的成分復(fù)雜，絕大多數(shù)情況是吸收入血的成分才可以發(fā)揮其療效，其中各成分不僅與化學(xué)藥產(chǎn)生相互作用，成分間也會(huì)相互競(jìng)爭(zhēng)蛋白結(jié)合位點(diǎn)。因此，本文采用連續(xù)灌胃大鼠頭花蓼提取物后的含藥血漿與左氧氟沙星，同時(shí)，基于2×2析因設(shè)計(jì)，以左氧氟沙星的濃度和作用方式為考察因素，研究?jī)蓚€(gè)因素的主效應(yīng)以及其交互作用[7]，可更真實(shí)客觀地了解兩藥聯(lián)用后在體內(nèi)與血漿蛋白結(jié)合的過程。本文將采用平衡透析法結(jié)合UPLC-MS/MS法對(duì)左氧氟沙星與大鼠血漿蛋白的結(jié)合進(jìn)行測(cè)定，探討頭花蓼提取物對(duì)左氧氟沙星蛋白結(jié)合率的總體影響，為進(jìn)一步研究?jī)烧咴谂R床聯(lián)合用藥的安全合理性及藥代動(dòng)力學(xué)特征提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

ACQUITY UPLC超高效液相色譜儀，TQ-D三重四極桿質(zhì)譜儀（包括自動(dòng)進(jìn)樣器、二元梯度泵、柱溫箱、真空脫氣機(jī)、Masslynx 4.1質(zhì)譜工作站，美國(guó)沃特世公司）；高速離心機(jī)（Allegra X-30 R，美國(guó)貝克曼公司）；超聲波清洗器（KQ-300DE，昆山市超聲儀器有限公司）；氮?dú)獯蹈蓛x裝置（MTN-2800D，天津奧特塞恩斯儀器有限公司）；多管渦旋振蕩器（VX-Ⅲ，北京踏錦科技有限公司）；萬(wàn)分之一電子天平（EL204，上海METTLER TOLEDO公司）；實(shí)驗(yàn)室專用超純水機(jī)（WP-UP-III-20，四川沃特爾科技發(fā)展有限公司）；微量移液器（德國(guó)eppendorf股份公司）；低溫冰箱（BD-328WL，海爾集團(tuán)公司）；透析袋MD-25kD（截留相對(duì)分子量8000～14 000，塞蘭博生物制品有限公司）。

1.2 試藥

頭花蓼提取物[參照《中國(guó)藥典》[8]熱淋清顆粒的提取方式提取，出膏率：9.32%，沒食子酸含量：42.06 mg·g－1）]；左氧氟沙星對(duì)照品（批號(hào)：130455-201607，純度：97.3%）、葛根素對(duì)照品（批號(hào)：110752-201512，純度：95.4%）（中國(guó)食品藥品檢定研究院）；甲酸、甲醇（色譜純，德國(guó)默克公司）；純凈水（廣州屈臣氏食品飲料有限公司）；其他試劑均為分析純。

1.3 動(dòng)物

SPF級(jí)SD大鼠，雌雄各半，體質(zhì)量為（230±10）g [長(zhǎng)沙天勤生物技術(shù)有限公司，許可證號(hào)：SCXK（湘）2019-0014]。飼養(yǎng)條件：動(dòng)物房照明充足（12/12 h光/暗周期調(diào)節(jié)），空調(diào)通風(fēng)良好，相對(duì)濕度（50±10）%，室溫（22±2）℃，定期對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行消毒。

2 方法

2.1 溶液的配制

2.1.1 對(duì)照品溶液和內(nèi)標(biāo)的配制

① 精密稱取左氧氟沙星適量，用甲醇定容至10 mL，即得左氧氟沙星對(duì)照品（1.002 mg·mL－1）的儲(chǔ)備液，置－20℃保存，備用。

② 精密稱取葛根素（4.722 mg），用50%甲醇定容至10 mL，即得葛根素（0.4722 mg·mL－1）的儲(chǔ)備液。取內(nèi)標(biāo)葛根素儲(chǔ)備液適量至100 mL量瓶中，用50%甲醇定容至刻度，配制成1μg·mL－1的內(nèi)標(biāo)溶液，置－20℃保存，備用。

2.1.2 磷酸緩沖液（PBS）的配制 精密稱取KH2PO40.2 g，Na2HPO42.88 g，KCl 0.2 g，NaCl 8.0 g，用適量超純水溶解，加1% NaOH調(diào)節(jié)pH 7.4，將溶液轉(zhuǎn)移至1000 mL量瓶中，超純水定容至刻度，即得0.01 mol·L－1PBS溶液，儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

2.2 色譜條件

色譜柱：Waters BEH C18（2.1 mm×100 mm，1.7μm）柱；保護(hù)柱：Waters Van Guard BEH C18（2.1 mm×5 mm，1.7 μm）柱；柱溫：45℃，進(jìn)樣器溫度：25℃；流速：0.30 mL·min－1，進(jìn)樣體積：1μL；流動(dòng)相：0.1%甲酸乙腈（A）-0.1%甲酸水（B），梯度洗脫（0～0.3 min，10%A；0.3～1.5 min，10%～40%A；1.5～3 min，40%～90%A；3～3.2 min，90%A；3.2～4.0 min，90%～10%A）。

2.3 質(zhì)譜條件

采用電噴霧電離源（ESI）；正離子模式掃描；毛細(xì)管電離電壓：3 kV；離子源溫度：120℃；噴霧氣與反吹氣：N2；去溶劑氣流速：650 L·h－1，去溶劑氣溫度：350℃；掃描方式為多反應(yīng)離子監(jiān)測(cè)（MRM），質(zhì)譜數(shù)據(jù)采集及處理軟件為Masslynx 4.1質(zhì)譜工作站。左氧氟沙星及內(nèi)標(biāo)用于定量分析的監(jiān)測(cè)離子見表1。

表1 左氧氟沙星及內(nèi)標(biāo)的質(zhì)譜條件Tab 1 Mass spectrometry conditions for the levofloxacin and internal standards

2.4 樣品處理方法

精密量取血漿樣品（透析內(nèi)液）和緩沖液（透析外液）各100 μL，置1.5 mL EP管中，加入2%甲酸水50 μL，渦旋混勻（1 min），加入50 μL葛根素內(nèi)標(biāo)溶液（1 μg·mL－1），再加入甲醇400 μL，渦旋混勻（1 min），超聲10 min，離心（12 000 r·min－1、4℃，10 min），取上清液置EP管中，37℃ N2吹干，150 μL 50%甲醇復(fù)溶，渦旋混勻1 min，超聲10 min，離心（12 000 r·min－1、4℃，10 min），取上清液進(jìn)樣分析。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，結(jié)果用±s表示，組間比較采用單因素方差分析，各因素間交互作用采用析因設(shè)計(jì)方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.6 方法學(xué)考察

2.6.1 專屬性 取100 μL大鼠空白血漿（不加內(nèi)標(biāo)）、加入對(duì)照品和葛根素的血漿、大鼠給藥后的血漿，按“2.4”項(xiàng)下方法操作，進(jìn)樣記錄各血漿樣品色譜圖，考察方法專屬性。

2.6.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備和LLOQ 取左氧氟沙星對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，分別加入空白血漿和空白緩沖液，得到在血漿中質(zhì)量濃度為1.002、2.505、5.010、10.020、20.040、25.050、30.060 μg·mL－1的對(duì)照品溶液，在緩沖液中的質(zhì)量濃 度 為1.002、2.505、5.010、10.020、20.040、25.050 μg·mL－1的對(duì)照品溶液。按“2.4”項(xiàng)下方法操作，以待測(cè)成分與相應(yīng)葛根素內(nèi)標(biāo)峰面積之比（A/Ai）為縱坐標(biāo)y，各物質(zhì)濃度（C）為橫坐標(biāo)x進(jìn)行線性回歸，即得標(biāo)準(zhǔn)曲線。左氧氟沙星的定量下限（LLOQ）定義為S/N＝10。

2.6.3 準(zhǔn)確度和精密度 分別配制左氧氟沙星大鼠血漿低、中、高（2.505、10.020、25.050 μg·mL－1）和緩沖液低、中、高（2.505、10.020、20.040 μg·mL－1）三種質(zhì)量濃度的質(zhì)控（QC）樣品，各濃度平行5份，按“2.4”項(xiàng)下方法處理，日內(nèi)連續(xù)進(jìn)樣，連續(xù)測(cè)定3 d，計(jì)算日內(nèi)和日間精密度。同法平行配制低、中、高三個(gè)濃度的QC樣品5份，將測(cè)得峰面積代入隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算左氧氟沙星的實(shí)際濃度，以實(shí)際測(cè)得左氧氟沙星的濃度與加入時(shí)左氧氟沙星濃度之比計(jì)算準(zhǔn)確度。

2.6.4 提取回收率和基質(zhì)效應(yīng) 取100 μL大鼠空白血漿和緩沖液，按“2.6.3”項(xiàng)下方法分別配制低、中、高三個(gè)濃度的QC樣品，每種濃度平行配制5份，按“2.4”項(xiàng)下操作（A樣品）；另取100 μL空白血漿和緩沖液，除不加左氧氟沙星對(duì)照品溶液外，其他按“2.4”項(xiàng)下方法操作，向離心后獲得的上清液中加入相應(yīng)低、中、高三種濃度的左氧氟沙星對(duì)照品溶液和內(nèi)標(biāo)葛根素，37℃N2吹干，殘留物以50%甲醇150 μL溶解（B樣品）；另取上述低、中、高三種濃度的左氧氟沙星對(duì)照品溶液與內(nèi)標(biāo)葛根素，37℃ N2吹干，殘留物以50%甲醇150 μL溶解（C樣品）。以A樣品與B樣品得到的色譜峰面積之比計(jì)算提取回收率，以B樣品與C樣品得到的色譜峰面積之比計(jì)算基質(zhì)效應(yīng)。

2.6.5 樣品穩(wěn)定性 按“2.6.3”項(xiàng)下方法配制左氧氟沙星的空白血漿和緩沖液低、中、高三個(gè)濃度QC樣品，考察樣品處理后分別置于室溫6 h（約20℃）中，4℃下冷藏12 h，反復(fù)凍融3次三種條件下的穩(wěn)定性。重復(fù)5樣本分析。

2.7 析因?qū)嶒?yàn)設(shè)計(jì)

采用2×2析因?qū)嶒?yàn)設(shè)計(jì)，A因素（濃度）和B因素（作用方式）各選擇2個(gè)水平：A1（3 μg·mL－1）、A2（6 μg·mL－1），B1（左氧氟沙星）、B2（頭花蓼提取物預(yù)處理），共4個(gè)組，每組重復(fù)6次，實(shí)驗(yàn)方案見表2。

表2 2×2析因設(shè)計(jì)及實(shí)驗(yàn)方案Tab 2 2×2 factor design and experiment plan

2.8 血漿蛋白結(jié)合率測(cè)定

將大鼠分為兩組：左氧氟沙星組（股動(dòng)脈取空白血）及頭花蓼提取物預(yù)處理組[連續(xù)給予大鼠頭花蓼提取物（1.86 g·kg－1，參照前期藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)研究[9]的劑量）3 d]，一天兩次，末次給藥2 h后股動(dòng)脈取血。

參照文獻(xiàn)[10]，將透析袋進(jìn)行預(yù)處理，處理后的透析袋一端折疊用線結(jié)扎。按照析因?qū)嶒?yàn)分組，取1 mL空白血漿（左氧氟沙星組）或取1 mL灌胃頭花蓼提取物的血漿（頭花蓼提取物預(yù)處理組）加入透析袋內(nèi)，透析袋內(nèi)留一小空氣泡，將透析袋另一端扎緊，使其懸浮于盛有20 mL緩沖液的廣口瓶中，膜外緩沖液左氧氟沙星質(zhì)量濃度分別為3 μg·mL－1、6 μg·mL－1，調(diào)節(jié)透析袋內(nèi)外液面，使其保持在同一水平面，并避免透析袋貼于瓶壁。將瓶口密封后，于4℃靜置48 h至藥物擴(kuò)散平衡。透析結(jié)束后，用10%的高氯酸溶液檢查透析外液是否有蛋白漏出，有漏出者則該樣品作廢。分別測(cè)定透析袋內(nèi)藥物濃度Dt（總濃度）與袋外藥物濃度Df（游離藥物濃度），根據(jù)公式計(jì)算血漿蛋白結(jié)合率：血漿蛋白結(jié)合率（%）＝（Dt－Df）/Dt×100%。

3 結(jié)果

3.1 方法學(xué)考察結(jié)果

3.1.1 專屬性 空白血漿、空白血漿＋左氧氟沙星對(duì)照品＋內(nèi)標(biāo)葛根素、大鼠給藥后血漿色譜圖見圖1，表明血漿中內(nèi)源性物質(zhì)不干擾各個(gè)成分的測(cè)定。

圖1 典型UPLC-MS/MS色譜圖Fig 1 Typical UPLC-MS/MS chromatograms

3.1.2 線性關(guān)系及定量下限 大鼠血漿和緩沖液中左氧氟沙星在相應(yīng)的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系（見表3）。

表3 血漿和緩沖液中左氧氟沙星的標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性范圍Tab 3 Standard curve and linearity of levofloxacin in plasma and buffer

3.1.3 準(zhǔn)確度和精密度 左氧氟沙星在大鼠血漿和緩沖液中的日內(nèi)精密度和日間精密度RSD均小于15%，準(zhǔn)確度為89.12%～ 106.16%，提示該方法準(zhǔn)確、可靠、重現(xiàn)性好，符合生物樣品分析方法要求（見表4）。

表4 左氧氟沙星在大鼠血漿及緩沖液中的準(zhǔn)確度、日內(nèi)和日間精密度(±s，n＝5)Tab 4 Accuracy of levofloxacin in the rat plasma and the buffer，intra-day and inter-day precision (±s，n＝5)

表4 左氧氟沙星在大鼠血漿及緩沖液中的準(zhǔn)確度、日內(nèi)和日間精密度(±s，n＝5)Tab 4 Accuracy of levofloxacin in the rat plasma and the buffer，intra-day and inter-day precision (±s，n＝5)

樣品 QC樣品濃度/（μg·mL－1）日內(nèi)日間濃度/（μg·mL－1）精密度（RSD）/% 準(zhǔn)確度/% 濃度/（μg·mL－1） 精密度（RSD）/% 準(zhǔn)確度/%緩沖液 2.505 2.36±0.10 4.1 94.39 2.65±0.17 6.6 106.16 10.020 8.91±0.48 5.4 89.12 9.16±0.28 3.0 91.61 20.040 18.84±1.74 9.2 94.21 20.82±1.24 6.0 104.12血漿 2.505 2.44±0.15 6.1 97.43 2.33±0.22 9.5 93.02 10.020 8.99±0.75 8.3 89.87 9.41±0.71 7.6 94.15 25.050 23.39±1.11 4.7 93.58 24.34±1.25 5.2 97.34

3.1.4 提取回收率和基質(zhì)效應(yīng) 低、中、高三個(gè)濃度下左氧氟沙星提取回收率在91.11%～105.42%，基質(zhì)效應(yīng)在87.99%～ 103.97%，RSD均小于15%。結(jié)果表明該方法提取回收率良好，不存在明顯的基質(zhì)效應(yīng)，均滿足生物樣品分析方法要求（見表5）。

表5 左氧氟沙星在大鼠血漿及緩沖液中的提取回收率和基質(zhì)效應(yīng)(±s，n＝5)Tab 5 Extraction recovery and matrix effect of levofloxacin in the rat plasma and the buffer (±s，n＝5)

表5 左氧氟沙星在大鼠血漿及緩沖液中的提取回收率和基質(zhì)效應(yīng)(±s，n＝5)Tab 5 Extraction recovery and matrix effect of levofloxacin in the rat plasma and the buffer (±s，n＝5)

樣品 QC樣品濃度/（μg·mL－1）提取回收率 基質(zhì)效應(yīng)濃度 RSD/% 濃度 RSD/%緩沖液 2.505 91.11±3.19 3.5 87.99±2.46 2.8 10.020 93.28±3.02 3.2 90.37±4.58 5.1 20.040 105.42±5.80 5.5 103.97±5.46 5.3血漿 2.505 95.27±9.74 10.2 101.82±6.35 6.2 10.020 103.69±6.13 5.9 96.46±4.70 4.9 25.050 94.19±6.25 6.6 89.10±4.38 4.9

3.1.5 樣品穩(wěn)定性 左氧氟沙星血漿和緩沖液樣品在室溫6 h、冷藏12 h和反復(fù)凍融3次均比較穩(wěn)定，滿足生物樣品分析方法要求（見表6）。

表6 左氧氟沙星在大鼠血漿和緩沖液中的穩(wěn)定性(±s，n＝5)Tab 6 Stability of levofloxacin in the rat plasma and the buffer (±s，n＝5)

表6 左氧氟沙星在大鼠血漿和緩沖液中的穩(wěn)定性(±s，n＝5)Tab 6 Stability of levofloxacin in the rat plasma and the buffer (±s，n＝5)

?次樣品 QC樣品濃度/（μg·mL－1）室溫6 h 冷藏12 h 反復(fù)凍融3濃度/（μg·mL－1） 準(zhǔn)確度/% 濃度/（μg·mL－1） 準(zhǔn)確度/% 濃度/（μg·mL－1） 準(zhǔn)確度/%緩沖液 2.505 2.37±0.21 94.61 2.64±0.23 105.39 2.30±0.21 91.82 10.020 9.70±0.85 96.81 9.23±1.17 92.12 8.80±0.32 87.82 20.040 21.16±2.29 105.59 19.60±1.79 97.80 19.08±1.33 95.21血漿 2.505 2.33±0.22 93.01 2.44±0.32 97.41 2.36±0.24 94.21 10.020 9.41±0.71 93.91 9.50±1.02 94.81 10.44±1.04 104.19 25.050 23.09±1.11 92.18 23.87±2.10 95.20 25.60±0.87 102.20

3.2 頭花蓼提取物對(duì)左氧氟沙星血漿蛋白結(jié)合率的影響

左氧氟沙星在3 μg·mL－1、6 μg·mL－1下，灌胃頭花蓼提取物后，與單用左氧氟沙星組相比，聯(lián)用組左氧氟沙星的血漿蛋白結(jié)合率均顯著增加（P＜0.05）。隨著左氧氟沙星濃度增加，其蛋白結(jié)合率均降低（見表7）。析因方差分析結(jié)果見表8，各因素對(duì)左氧氟沙星的蛋白結(jié)合率的影響大小為：FB＞FA＞F（A*B），表明作用方式因素對(duì)左氧氟沙星的蛋白結(jié)合率影響大于濃度因素。

表7 頭花蓼提取物對(duì)左氧氟沙星血漿蛋白結(jié)合率的影響(±s，n＝6)Tab 7 Effect of Polygonum capitatum extract on the plasma protein binding rate of levofloxacin (±s，n＝6)

表7 頭花蓼提取物對(duì)左氧氟沙星血漿蛋白結(jié)合率的影響(±s，n＝6)Tab 7 Effect of Polygonum capitatum extract on the plasma protein binding rate of levofloxacin (±s，n＝6)

注（Note）：與單用組相比，*P＜0.05（Compared with the single group，*P＜0.05）。

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表8 主效應(yīng)及交互作用分析結(jié)果Tab 8 Main effect and interaction analysis

4 討論

目前，已報(bào)道的關(guān)于研究藥物血漿蛋白結(jié)合率的方法，主要包括平衡透析法、超濾法、超速離心法、凝膠過濾法等[11]，其中平衡透析法具有操作簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)、受實(shí)驗(yàn)因素干擾小等優(yōu)點(diǎn)[12]，故采用最為經(jīng)典的方法來測(cè)定血漿蛋白結(jié)合率。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，血漿蛋白分子量為69 kD，考慮到血漿中大量?jī)?nèi)源性物質(zhì)透析到袋外，可能對(duì)血漿蛋白的結(jié)合能力有影響，因此本實(shí)驗(yàn)采用截留分子量為 8000～14 000的25 kD透析袋進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，效果良好[13]。利用平衡透析法測(cè)定蛋白結(jié)合率最經(jīng)典的方法是在透析袋內(nèi)加入空白血漿，外液放入含藥PBS溶液，而本文首次將頭花蓼提取物多次灌胃后取其血漿研究對(duì)左氧氟沙星蛋白結(jié)合率的影響。中藥具有“多成分、多環(huán)節(jié)、多途徑、多靶點(diǎn)”的作用特點(diǎn)，因此，灌胃后取其血漿更能真實(shí)地反映頭花蓼口服進(jìn)入胃腸道后吸收入血的過程，再用體外實(shí)驗(yàn)進(jìn)行蛋白結(jié)合率的研究，更能客觀反映兩藥合用后其在體內(nèi)的蛋白結(jié)合情況。

本實(shí)驗(yàn)采用UPLC-MS/MS技術(shù)結(jié)合平衡透析法測(cè)定左氧氟沙星的蛋白結(jié)合率，結(jié)果表明該法可快速、準(zhǔn)確地測(cè)定左氧氟沙星的含量。本研究采用平衡透析法，對(duì)實(shí)驗(yàn)平衡時(shí)間進(jìn)行了考察，在4℃條件下，平衡12、24、36、48和72 h后分別測(cè)定透析袋內(nèi)外濃度，結(jié)果在平衡48 h后，左氧氟沙星與血漿蛋白結(jié)合已達(dá)到平衡，最終選擇48 h為平衡時(shí)間。同時(shí)，本課題組前期藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，大鼠給予左氧氟沙星后Cmax為（6032.91±1960.11）ng·mL－1，因此，選擇6 μg·mL－1和3 μg·mL－1兩個(gè)濃度的左氧氟沙星進(jìn)行頭花蓼提取物對(duì)左氧氟沙星蛋白結(jié)合率的影響研究[9]。析因方差分析結(jié)果表明，兩者之間不存在明顯的交互作用。其中濃度和作用方式對(duì)左氧氟沙星的蛋白結(jié)合率均有顯著影響，但尚不能認(rèn)為是兩者間的交互作用對(duì)左氧氟沙星的蛋白結(jié)合率產(chǎn)生影響。

左氧氟沙星的血漿蛋白結(jié)合率約為20%～22%，與文獻(xiàn)報(bào)道血漿蛋白結(jié)合率24%～38%存在差異[14]，可能與透析膜的微量吸附有一定關(guān)系。另外，左氧氟沙星與大鼠血漿蛋白低度結(jié)合，說明其由于血漿蛋白結(jié)合率的改變而導(dǎo)致游離藥物濃度急劇升高所產(chǎn)生不良反應(yīng)的可能性不大，因此，增加了與其他藥物聯(lián)用的可能性。藥物與血漿蛋白結(jié)合的變化影響血液中游離藥物濃度，導(dǎo)致藥物在體內(nèi)的分布、代謝、排泄以及目標(biāo)靶點(diǎn)結(jié)合的變化，從而影響藥理效應(yīng)過程。本課題組前期在組織分布與排泄實(shí)驗(yàn)中，頭花蓼提取物和左氧氟沙星合用后左氧氟沙星在各組織中含量顯著降低，尿累積排泄率從20.69%下降到11.84%，糞便累積排泄率從26.08%下降到13.28%[15]。本研究結(jié)果表明聯(lián)合應(yīng)用頭花蓼提取物后左氧氟沙星的蛋白結(jié)合率顯著增加（P＜0.05），藥物從血液進(jìn)入各組織和器官中的藥量減少，影響藥物在體內(nèi)的分布和排泄過程，這與前期實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果基本一致。臨床研究報(bào)道將頭花蓼提取物與左氧氟沙星聯(lián)用來提高其治療泌尿系統(tǒng)感染的療效，目前，在藥代動(dòng)力學(xué)水平上的研究無(wú)法強(qiáng)有力地解釋這個(gè)問題。藥物相互作用可分為藥代動(dòng)力學(xué)相互作用和藥效學(xué)相互作用。在藥效學(xué)層面，藥物如何使機(jī)體發(fā)揮作用，其作用機(jī)制是全面而復(fù)雜的，推測(cè)可能是由于兩種藥物對(duì)病原菌的協(xié)同抑制作用[16-17]，降低細(xì)菌在尿路上皮細(xì)胞中的黏附能力，加快致病菌排出體外，從而提高療效，但是這些推測(cè)還需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)來證實(shí)。因此，通過頭花蓼提取物對(duì)左氧氟沙星血漿蛋白結(jié)合率影響的研究，可為兩者臨床合理用藥體內(nèi)過程研究提供更全面的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，后期可對(duì)兩者合用的具體機(jī)制進(jìn)行更深入的研究。