楊銘玉,劉強,王鎧,趙淑江
(浙江海洋大學(xué)海洋科學(xué)與技術(shù)學(xué)院,浙江 舟山 316022)
【研究意義】浮游病毒(Viruses, Vir)是指漂浮于水體中的噬菌體和真核藻類病毒在內(nèi)的各種群病毒,是絕大多數(shù)水體環(huán)境中最豐富的浮游物種,它在海洋能流、地球物理化學(xué)循環(huán)、全球氣候、種間遺傳物質(zhì)交換以及控制赤潮方面都有重要的影響[1]。異養(yǎng)細菌(Heterotrophic Bacteria, HB)是海洋微生物群落的重要部分,在維持海洋生態(tài)系統(tǒng)多樣性與穩(wěn)定性中起重要作用[2]。1983年Azam等[3]首次提出的“微食物環(huán)”,指出異養(yǎng)細菌是可以達到10%~80%初級生產(chǎn)力的“二級生產(chǎn)力”。在Fuhrman等[4]提出的“病毒環(huán)”中,浮游病毒可以通過侵染、裂解特定的宿主,從而對微生物群落的結(jié)構(gòu)以及多樣性進行調(diào)控。浮游病毒和異養(yǎng)細菌在物質(zhì)循環(huán)與能量流中都起到十分重要的作用。舟山位于我國三大邊緣海之一的東海,因特殊的地理環(huán)境與氣候條件,使其成為我國具有典型近岸海洋系統(tǒng)特點的最大漁場[5],但由于近年來人類的肆意捕撈和污水排放等污染現(xiàn)象,使該海域的海洋生態(tài)系統(tǒng)受到嚴重威脅。作為生命系統(tǒng)與非生命系統(tǒng)之間聯(lián)系的重要環(huán)節(jié),同樣也是生源要素循環(huán)重要驅(qū)動力的浮游病毒和異養(yǎng)細菌[6-7],逐漸受到研究者的重視?!厩叭搜芯窟M展】自1999年首次利用熒光計數(shù)法對病毒豐度進行調(diào)查后,我國也陸續(xù)開始使用該技術(shù)對長江口、渤海[8]、南黃海[9]、廈門[10]、青島近岸以及臺灣北部沿海[11]等海域進行浮游病毒豐度的調(diào)查研究。我國從20世紀80年代開始對長江口[12]、廣東大鵬灣[13]、東海[14]等海域進行異養(yǎng)細菌的豐度研究。【本研究切入點】處于長江口的舟山海域不僅是世界重要漁場,同時在營養(yǎng)物質(zhì)輸送、轉(zhuǎn)換,以及海洋碳匯方面具有重要生態(tài)價值,海水中的浮游病毒和異養(yǎng)細菌對于這些生態(tài)過程具有重要生態(tài)功能?!緮M解決的關(guān)鍵問題】本研究首次將舟山附近不同功能區(qū)劃近岸海域與浮游病毒和異養(yǎng)細菌豐度及其環(huán)境因子變化的研究相結(jié)合,分析浮游病毒和異養(yǎng)細菌在不同人為干預(yù)活動下的豐度變化,以期為舟山附近不同功能區(qū)劃海域生態(tài)環(huán)境的保護提供有價值的參考資料,為更全面研究舟山近岸海域的生態(tài)環(huán)境提供基礎(chǔ)資料。
本研究首次根據(jù)舟山市海洋功能區(qū)劃,結(jié)合島礁分布和行政區(qū)劃,在基本覆蓋舟山功能海域的基礎(chǔ)上選擇6個站位:枸杞島(GQ),貽貝養(yǎng)殖區(qū);沈家門(SJM),港口航運區(qū);東極島(DJ),大黃魚養(yǎng)殖區(qū)、旅游區(qū);岱山(DS),鹽田區(qū);六橫(LH),污染排污區(qū);白峰(BF),工業(yè)用海區(qū)(圖1)。分別于2017年冬季和2018年春、夏、秋進行連續(xù)一周年的采樣,共獲得24個樣品。
圖1 舟山群島海域采樣站位分布Fig.1 The sampling station in Zhoushan Archipelago
利用滅菌便攜式采水器采集表層海水(0.5 m)的樣品,使用20 μm篩絹對樣品進行預(yù)過濾至已經(jīng)潤洗過2~3次的小燒杯中,吸取1980 μm預(yù)過濾樣品至2 mL凍存管中,并加入適量終濃度為0.5%的戊二醛,在4 ℃黑暗環(huán)境中固定后放入液氮中速凍,最后轉(zhuǎn)入-80 ℃超低溫冰箱保存。
浮游病毒:將水樣從-80 ℃超低溫冰箱中取出,在黑暗避光處用37 ℃水浴解凍,解凍完全后吸取1 mL待測水樣轉(zhuǎn)移至流式分析試管中,用Tris-EDTA緩沖液對樣品進行稀釋,加入SYBR Green I染色,混勻后置于80 ℃水浴鍋中加熱10 min,取出在室溫中黑暗或避光環(huán)境下培養(yǎng)5 min,并加入1 μm標(biāo)準熒光小球當(dāng)作內(nèi)部參照,混合均勻,樣品濃度保持在1%左右,將樣品置入流式細胞儀(貝克曼FC500)進行分析,記錄實驗數(shù)據(jù)。
異養(yǎng)細菌:將凍存樣品避光在37 ℃水浴解凍,解凍完全后吸取1 mL溶液轉(zhuǎn)移至流式分析試管中,加入SYBR Green I進行染色,混勻后置于黑暗或避光環(huán)境下培養(yǎng)15 min,并加入1 μm標(biāo)準熒光小球當(dāng)作內(nèi)部參照,混合,控制樣品濃度保持在1%左右,將樣品放置入流式細胞儀(貝克曼FC500)進行分析,并且記錄實驗數(shù)據(jù)。
運用FCS Express V3軟件獲得浮游病毒與異養(yǎng)細菌豐度。使用ArcGIS 地理信息系統(tǒng)軟件制作采樣站位圖。使用ArcGIS 將24個樣品豐度與站位結(jié)合進行分析。并利用SPSS 22軟件對24個樣品與環(huán)境因子間相關(guān)性進行分析。
利用各類微微型浮游生物細胞碳轉(zhuǎn)換系數(shù)的不同,計算各類微微型浮游生物的碳生物量。本文使用國際上普遍使用的微微型浮游植物細胞碳轉(zhuǎn)換系數(shù)。自養(yǎng)組分:Syn的碳轉(zhuǎn)換系數(shù)為250 fg/個;Euk的碳轉(zhuǎn)換系數(shù)為1500 fg/個;異養(yǎng)組分:HB的碳轉(zhuǎn)換量系數(shù)為20 fg/個[15-17]。
春季浮游病毒的豐度為1.23×105~ 2.26×106個/mL,平均值為8.08×105個/mL。夏季的豐度范圍為1.16×106~ 5.84×106個/mL,平均值為2.59×106個/mL。秋季,浮游病毒的豐度為1.34×105~ 1.71×105個/mL,平均值為6.48×105個/mL。冬季,浮游病毒的豐度為1.24×104~ 1.17×107個/mL,平均值為4.83×105個/mL。春、夏、秋、冬4個季節(jié)浮游病毒豐度表現(xiàn)為人為干預(yù)較少的東極島和枸杞2個站位較高,污染較為嚴重的4個功能區(qū)站位:六橫、白峰、沈家門、岱山豐度相對較低。其中春季、秋季、冬季豐度的峰值均來自東極島,枸杞站位是夏季浮游病毒的峰值站位。春、夏兩季豐度最低值均來自沈家門站位,秋、冬兩季的數(shù)量豐富度均表現(xiàn)為岱山站位較其他5個站位低(圖2)。
C.春季;X.夏季;Q.秋季;D.冬季C.Spring;X.Summer;Q.Autumn;D.Winter圖2 浙江近岸海域浮游病毒豐度分布Fig.2 Distribution of Virioplankton abundance in the coastal water of Zhejiang
對連續(xù)一周年的浮游病毒豐度進行獨立樣本均值檢驗,得到豐度結(jié)果為:夏季>春季>秋季>冬季。
春季異養(yǎng)細菌的豐度范圍為0.89×105~6.09×105個/mL,平均值為2.31×105個/mL。夏季,異養(yǎng)細菌的豐度范圍為1.06×105~ 4.19×105個/mL,平均值為2.43×105個/mL。秋季,異養(yǎng)細菌的豐度范圍為0.68×105~ 5.90×105個/mL,平均值為1.94×105個/mL。冬季,異養(yǎng)細菌的豐度范圍為:0.92×105~ 3.08×105個/mL,平均值為1.55×105個/mL。連續(xù)一周年內(nèi)異養(yǎng)細菌豐度表現(xiàn)為東極島和枸杞2個站位的的豐度相較于六橫、白峰、沈家門、岱山豐度高。其中春季、夏季、秋季、冬季豐度的峰值均來自東極島。春、冬季2個季節(jié)豐度最低值均來自白峰站位,夏季的最低值來自六橫站位,秋季的最低豐度為沈家門站位(圖3)。
圖3 浙江近岸海域異養(yǎng)細菌豐度分布Fig.3 Distribution of HB abundance in the coastal water of Zhejiang
對連續(xù)一周年的異養(yǎng)細菌豐度進行獨立樣本均值檢驗,得到豐度結(jié)果為夏季>春季>秋季>冬季。
夏季溫度最高為23.83~27.87 ℃,平均值25.27 ℃;冬季的溫度最低為1.1~4.3 ℃,平均值3.32 ℃。冬季鹽度最高為29.56~33.70,平均值31.21;秋季鹽度最低為29.02~31.03,平均值為29.34。Chl-a的最高值在夏季(1.39~12.80 mg/m3),平均值為8.95 mg/m3;最低值在冬季(0.83~4.75 mg/m3),平均值為2.42 mg/m3。COD的最高值在夏季(1.26~2.76),平均值為1.93;最低值在冬季(0.71~1.29),平均值為0.87(表1)。春季,浮游病毒與pH、VBR呈顯著正相關(guān)(P<0.05,r=0.041,r=0.028),與COD呈顯著負相關(guān)(P<0.05,r=-0.018)。異養(yǎng)細菌與pH呈顯著正相關(guān)(P<0.05,r=0.913),與COD呈顯著負相關(guān)(P<0.05,r=0.047,表2)。
表1 浮游病毒與異養(yǎng)細菌豐度、生物量和相關(guān)環(huán)境參數(shù)
表2 春季浮游病毒和異養(yǎng)細菌之間與環(huán)境因子的Pearson 相關(guān)系數(shù)
夏季,異養(yǎng)細菌與Chl-a呈顯著正相關(guān)(P<0.05,r=0.042),與COD呈顯著負相關(guān)(P<0.05,r=0.043,表3)。
表3 夏季浮游病毒和異養(yǎng)細菌之間與環(huán)境因子的Pearson 相關(guān)系數(shù)
續(xù)表3 Continued table 3
秋季,浮游病毒與Chl-a呈顯著正相關(guān)(P<0.05,r=0.048),與COD呈顯著負相關(guān)(P<0.05,r=-0.022)。異養(yǎng)細菌與pH呈顯著正相關(guān)(P<0.01,r=0.0001),與SiO32-呈顯著負相關(guān)(P<0.01,r=0.0001),COD呈顯著負相關(guān)(P<0.05,r=-0.022,表4)。
表4 秋季浮游病毒和異細菌之間與環(huán)境因子的Pearson 相關(guān)系數(shù)
冬季,浮游病毒與Chl-a呈顯著正相關(guān)(P<0.05,r=0.043),與鹽度、pH、DO、NH4+、NO2-、VBR呈正相關(guān),與溫度、PO43-、COD、SiO32-呈負相關(guān)。異養(yǎng)細菌與pH呈顯著正相關(guān)(P<0.05,r=0.039),與COD呈顯著負相關(guān)(P<0.05,r=-0.019,表5)。
表5 冬季浮游病毒和異養(yǎng)細菌之間與環(huán)境因子的Pearson 相關(guān)系數(shù)
微微型浮游生物的生物量來源分為兩大部分,一部分是由自養(yǎng)生物提供,另一部分由異養(yǎng)生物提供,而異養(yǎng)細菌產(chǎn)生的生物量是異養(yǎng)部分的主要承擔(dān)者。春季的生物量為4.62×106fg,夏季為4.86×106fg,秋季為3.88×106fg,冬季為3.10×106fg。占微微型浮游生物總生物量的28.25%、6.24%、11.77%、11.09%(圖4)。
Syn.聚球藻;Euk.微微型真核浮游植物;HB.異養(yǎng)細菌Syn. Synechococcus;Euk. Picoeukaryotes;HB. Heterotrophic bacteria圖4 4個季節(jié)聚球藻、微微型真核浮游植物和浮游細菌對微微型浮游生物總生物量的貢獻Fig.4 The biomass contribution of Syn, Euk and HB to the picoplankton biomass over 4 successive seasons
3.1.1 浮游病毒豐度的時空分布差異 對舟山附近近岸海域進行連續(xù)一周年的采樣發(fā)現(xiàn),浮游病毒的豐度均表現(xiàn)為東極島和枸杞豐度高,六橫、白峰、沈家門、岱山豐度低。原因可能是這4個站位均屬于污染較嚴重的站位。根據(jù)舟山市海洋功能區(qū)劃,沈家門為港口區(qū),平時停放大量漁船,有時也會有漁民在此販賣海貨,將一些不新鮮的海貨和他們的生活污水排入海水中,造成該海域的水體污染;岱山為鹽田區(qū),六橫為排污區(qū),也是居民較多的生活區(qū),人類活動頻繁,將廢水未經(jīng)處理直接排放入海中是造成該海域污染的原因之一;白峰為工業(yè)區(qū),工業(yè)廢水直接入海造成該海域水體污染嚴重。
大量的生活廢水以及工業(yè)廢水流入,使浮游植物與異養(yǎng)細菌大量繁殖,同時使浮游病毒的繁殖和釋放加快,導(dǎo)致浮游病毒豐度發(fā)生變化。但同時這4個站位離岸較近,沿岸多條河流入海,淡水大量流入,并且長江每年都會攜帶超過50%的懸浮泥沙進入該海域[18],并且大量污水排放,也會造成長江口海域水體透明度下降,影響初級生產(chǎn)力,使生物量減少,進而造成浮游病毒豐度下降。
夏季浮游病毒的豐度是4個季節(jié)中最高的,原因可能在于夏季的光照強度更強,光合作用增強,營養(yǎng)鹽隨長江沖淡水大量流入該海域,進而促使異養(yǎng)細菌和微微型浮游植物的豐度增加,營養(yǎng)鹽還會影響病毒宿主的生物量以及代謝率[19],從而導(dǎo)致病毒的大量繁殖和裂解,間接影響夏季水體中浮游病毒的豐度增加。這與以往的研究[20](夏季浮游病毒豐度最高,冬季豐度最低)結(jié)果一致。4個季節(jié)的浮游病毒豐度均與Chl-a呈正相關(guān),這與Maranger等[21]在加拿大魁北克省的22個湖體浮游病毒豐度與相關(guān)葉綠素a含量呈明顯正相關(guān)的結(jié)果一致,可以推測浮游病毒的豐度受浮游植物的豐度影響而變化。
3.1.2 異養(yǎng)細菌豐度的時空分布差異 異養(yǎng)細菌的豐度整體體現(xiàn)為東極島和枸杞島2個站位的豐度高于六橫、白峰、沈家門以及岱山4個站位。原因可能在于這2個站位相對其他站位離岸較遠,且從東海海底地貌來看,二者均處于現(xiàn)代河口水下三角洲之上[22],特殊的地理位置造成其水深較淺,透光性強等特點,并受長江沖淡水的影響,大量有機物與營養(yǎng)鹽隨長江等多條河流輸入,致使初級生產(chǎn)力增強,異養(yǎng)細菌的豐度也隨之增加。對于六橫、白峰、沈家門和岱山這4個站位,采樣點均為離岸較近,長江和其他河流攜帶大量泥沙流入,致使水體渾濁度較高,水色以及透明度均較低[19],從而初級生產(chǎn)力較低,異養(yǎng)細菌豐度較少。且這4個站位臨近人類活動密集區(qū),是污染較為嚴重的站位。導(dǎo)致該海域懸浮物含量高,因為顆粒物質(zhì)的沉積率大[23-24],附著在這些顆粒物質(zhì)上的異養(yǎng)細菌也因此沉降于海底,造成豐度降低。
夏季異養(yǎng)細菌的豐度最高,這可能與7月進入長江豐水期有關(guān),大量的長江水進入該海域,給異養(yǎng)細菌的生長帶來了大量的無機物和有機物,這與之前對于東海溶解有機物與異養(yǎng)細菌豐度呈正相關(guān)的研究結(jié)果基本一致[25]。本研究調(diào)查的豐度范圍,與2012年Tsai等[26]在東海夏季細菌的豐度范圍基本一致。其次,溫度是影響微型浮游生物豐度的重要原因之一[27],溫度是影響酶活性的重要因素,在一定溫度范圍內(nèi),溫度與酶活性呈正比,而酶的活性直接影響生物的新陳代謝,所以溫度會間接影響異養(yǎng)細菌的豐度[28-30]。另外,Chl-a濃度也是影響異養(yǎng)細菌豐度的原因之一,Chl-a濃度與溶解有機碳呈正相關(guān),高濃度Chl-a會導(dǎo)致高的溶解有機碳,而溶解有機碳是異養(yǎng)細菌的重要來源[31]。2016年對日本相模灣沿海水域細菌生長的研究也顯示,細菌豐度在很大程度上受溶解有機碳影響[32],這也與本研究的結(jié)果基本一致。
浮游病毒豐度的數(shù)量級一般為105~107個/mL,異養(yǎng)細菌豐度的數(shù)量級為104~106個/ mL[33-35],本研究海域浮游病毒和異養(yǎng)細菌豐度范圍與其他海域調(diào)查結(jié)果相近[36-37],但林燕順等[38]對南極、太平洋海域檢測到的浮游細菌最大數(shù)量級仍較本研究少2個數(shù)量級。其原因可能在于本研究的采樣地受工業(yè)、漁業(yè)以及生活污水等的影響較嚴重,為異養(yǎng)細菌的繁殖生長提供了豐富的營養(yǎng)物質(zhì)。
在研究浮游病毒與異養(yǎng)細菌的相關(guān)性時常用的指標(biāo)為浮游病毒與異養(yǎng)細菌豐度比(Virus-to-Bacterium Ratio,VBR), VBR高說明病毒的生產(chǎn)力與細菌裂解量高。一般在高營養(yǎng)鹽、高初級生產(chǎn)力的海域,細菌生長迅速,病毒與細菌的碰撞幾率高,病毒釋放量增加,進而產(chǎn)生大量的浮游病毒顆粒,導(dǎo)致VBR升高[39]。在本研究中,全年VBR為0.69~13.89,平均值為4.75。夏季的VBR明顯高于其他三季。李洪波等[8]檢測到北戴河和天津沿岸海域的VBR全年均值在6.22。李汝偉等[40]研究浙江近海海域浮游病毒和異養(yǎng)細菌關(guān)系中,檢測到的VBR全年均值為5.39,且春夏兩季VBR明顯高于秋冬兩季,基本與本研究結(jié)果一致。在4個季節(jié)中,浮游病毒與異養(yǎng)細菌的豐度均呈正相關(guān),尤其在春季、夏季、冬季3個季節(jié)中呈現(xiàn)顯著正相關(guān)(P<0.05,r=0.021;r=0.041;r=0.012)。表明該海域浮游病毒豐度與異養(yǎng)細菌豐度有較密切的關(guān)系,Nuria等[41]在“海洋浮游病毒對異養(yǎng)細菌的向往起重要作用”的理論中提到浮游病毒可能是異養(yǎng)細菌豐度變化的影響因素之一。在對臺灣北部沿海、大堡礁等海域、浙江近海海域等其他海域的微生物進行調(diào)查研究中得到相似的結(jié)果[42-43]。浮游病毒與異養(yǎng)細菌豐度呈正相關(guān)的原因也可能在于——作為病毒載體的橈足類等浮游動物可以提高病毒對宿主的接觸率,加速宿主的裂解[44]。
異養(yǎng)細菌是該海域內(nèi)異養(yǎng)組分中重要的生物量貢獻者,異養(yǎng)組分中的生物量主要是利用水中的溶解有機物和顆粒有機物,并將氮、磷等有機物釋放[45]。也有學(xué)者認為,異養(yǎng)細菌可以通過吸收利用水中的無機氮、磷等營養(yǎng)鹽,提高自身的生長率和新陳代謝速率[46-47]。但總體來說異養(yǎng)組分與自養(yǎng)組分的生物量產(chǎn)生可能存在競爭關(guān)系。研究表明,在營養(yǎng)鹽高的海域,自養(yǎng)組分對營養(yǎng)鹽的吸收速率明顯高于異養(yǎng)組分[46],這與本研究結(jié)果一致,調(diào)查海域受到污染以及自然環(huán)境等因素的影響,營養(yǎng)鹽較高,自養(yǎng)組分的生物量轉(zhuǎn)換率明顯高于異養(yǎng)組分。
化學(xué)需氧量(COD)是衡量海水受污染程度的1個重要檢測標(biāo)準,化學(xué)需氧量越大說明水中有機物的污染越嚴重。在春、秋2個季節(jié),浮游病毒與COD呈現(xiàn)顯著負相關(guān)。主要原因在于六橫、白峰、沈家門和岱山這4個站位均為污染較為嚴重的站位,有大量的生活、工業(yè)污水排放以及受到多條河流的影響,使該海域水體富營養(yǎng)化,造成宿主細菌、藻類大量繁殖,間接影響浮游病毒的豐度[40]。夏季COD最高,也與夏季常出現(xiàn)赤潮存在一定的關(guān)系,但總體來看,四季的變化不大。
浮游病毒在秋、冬兩季以及異養(yǎng)細菌在冬季均與pH、DO呈正相關(guān),且在夏季和冬季pH與DO呈現(xiàn)正相關(guān),王小平等[48]對廣東紅海灣水域溶解氧、pH分布特征的研究中發(fā)現(xiàn),溶解氧和pH升高的重要影響在于光合作用,而在本研究中夏季的光合作用最強烈;在石曉勇等[49]對東海溶解氧和pH分布的調(diào)查中發(fā)現(xiàn),海水pH與溶解氧之間存在間接正相關(guān)的結(jié)果一致。
冬、春、秋季3個季節(jié)中,浮游病毒與NH4+、NO2-均呈正相關(guān),在張喆[50]對山東近岸浮游病毒豐度的研究中也發(fā)現(xiàn),浮游病毒與海水中的硝酸鹽含量呈正相關(guān)。產(chǎn)生該現(xiàn)象的原因可能在于病毒裂解細菌和藻類后,將其體內(nèi)大量的N、P釋放到海水中,造成氨氮含量較高[51]。在夏季,異養(yǎng)細菌與氨氮、總磷均呈負相關(guān),這與異養(yǎng)細菌可以利用銨鹽作為氮源用于自身的生長和繁殖有關(guān)[52],表明氨氮是調(diào)節(jié)異養(yǎng)細菌豐度的重要因素之一。
海洋微微型浮游生物作為海洋中對環(huán)境變化極為敏感的群落,可以通過其豐度反映海域環(huán)境變化等情況,將其列為檢測水體污染的指標(biāo)之一。本次調(diào)查浮游病毒與異養(yǎng)細菌豐度以期為調(diào)查海域的生態(tài)環(huán)境的保護提供有價值的參考資料,為舟山附近海域不同功能區(qū)劃生態(tài)環(huán)境的保護、評估以及治理提供科學(xué)的依據(jù),分析海洋浮游病毒與異養(yǎng)細菌在不同人為干預(yù)活動的環(huán)境下的豐度變化。本論文首次將浮游病毒與異養(yǎng)細菌豐度調(diào)查與功能區(qū)劃相結(jié)合,希望可以通過這種方式使人們意識到人類活動與環(huán)境變化都在影響著海洋生態(tài)健康,也希望引起人們對海洋健康檢測機制建立的重視以及政府對海洋健康的監(jiān)督的力度。