霍佳歡，郭思柔，栗佳寧，王建華，溫曉蕾，馮麗娜，齊慧霞*

（1板栗產(chǎn)業(yè)技術(shù)教育部工程研究中心 秦皇島 066004；2河北科技師范學(xué)院農(nóng)學(xué)與生物科技學(xué)院/河北省作物逆境生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（籌））

板栗富含多種維生素及礦物質(zhì)，具有補(bǔ)脾健胃，緩解高血壓、冠心病等功效[1]。作為板栗原產(chǎn)國(guó)，近年來(lái)我國(guó)板栗栽培面積和產(chǎn)量穩(wěn)定增長(zhǎng)，均居世界首位，據(jù)統(tǒng)計(jì)，2018年我國(guó)板栗種植面積達(dá)34.1萬(wàn)hm2，總產(chǎn)量高達(dá)196.5萬(wàn)t[2]。伴隨板栗產(chǎn)業(yè)高速發(fā)展，板栗病害也愈發(fā)嚴(yán)重，在貯存不當(dāng)?shù)那闆r下板栗內(nèi)腐病造成種仁腐爛率高達(dá)50%左右，嚴(yán)重制約板栗經(jīng)濟(jì)效益的穩(wěn)定和提升[3]。

加強(qiáng)板栗內(nèi)腐病的防治是提高板栗品質(zhì)的重要環(huán)節(jié)，目前化學(xué)防治仍是防治板栗內(nèi)腐病的重要手段。本試驗(yàn)針對(duì)兩種板栗內(nèi)腐病菌進(jìn)行了有效藥劑篩選，旨在為田間開(kāi)展防治板栗內(nèi)腐病工作提供理論支撐。

1 材料與方法

1.1 材料 供試殺菌劑相關(guān)信息見(jiàn)表1。供試菌株為可可毛色二孢菌（L.theobromae）、茄病鐮刀菌（F.solani）。

表1 供試殺菌劑名稱(chēng)及使用濃度

1.2 方法

1.2.1 室內(nèi)殺菌劑初篩 采用生長(zhǎng)速率法[4]測(cè)定不同殺菌劑對(duì)L.theobromae和F.solani的抑制效果，針對(duì)2種致病菌株選用了7種殺菌劑，分別采用7種殺菌劑推薦使用的濃度作為中間濃度，進(jìn)行室內(nèi)抑菌試驗(yàn)，篩選出對(duì)致病菌株抑制效果較好的殺菌劑。

1.2.2 殺菌劑室內(nèi)毒力測(cè)定 室內(nèi)殺菌劑初篩試驗(yàn)后，對(duì)L.theobromae和F.solani抑制效果較好的殺菌劑，設(shè)置5種不同濃度進(jìn)行室內(nèi)毒力測(cè)定，同樣采用生長(zhǎng)速率法測(cè)定。將供試菌株在PDA平板上純化培養(yǎng)，選用直徑7 mm的打孔器從菌落外緣打取菌餅備用。在無(wú)菌環(huán)境下，將殺菌劑用無(wú)菌水稀釋到所需濃度后，添加到裝有100 mL PDA培養(yǎng)基的錐形瓶中，迅速搖勻，分裝于9 cm培養(yǎng)皿中，殺菌劑使用濃度見(jiàn)表2、表3，每個(gè)濃度重復(fù)3次，以不加藥的培養(yǎng)基作對(duì)照。將其置于25℃恒溫黑暗條件下培養(yǎng)，24 h后觀察記錄菌落直徑。使用SPASS軟件計(jì)算毒力回歸方程，并通過(guò)回歸方程計(jì)算EC50[5]。

表2 可可毛色二孢菌株室內(nèi)毒力測(cè)定殺菌劑使用濃度 /（mg/L）

表3 茄病鐮刀菌株毒力室內(nèi)測(cè)定殺菌劑使用濃度 /（mg/L）

生長(zhǎng)抑制率/%=[（CK菌落直徑-處理菌落直徑）/（CK菌落直徑-7 mm）]×100

2 結(jié)果與分析

2.1 7種殺菌劑對(duì)2種板栗內(nèi)腐病菌毒力測(cè)定 通過(guò)對(duì)7種殺菌劑進(jìn)行初步的篩選，發(fā)現(xiàn)7種殺菌劑對(duì)可可毛色二孢菌均有一定的抑制效果，抑菌率如表4所示，其中咯菌腈抑菌效果最好，菌落生長(zhǎng)2 d抑菌率為100%，其次為丙硫菌唑和苯醚甲環(huán)唑，抑菌效果分別在92.52%和79.49%，此外其它殺菌劑對(duì)該菌株也有一定的抑制效果，但抑菌率相對(duì)較低，抑菌效果均在50%以下；7種殺菌劑對(duì)茄病鐮刀菌也有明顯的抑制效果，其中抑菌率最高的為丙硫菌唑，培養(yǎng)6 d，抑菌率達(dá)82.25%，其次為苯醚甲環(huán)唑，抑菌率為62.95%，其余殺菌劑對(duì)該菌株抑制率均在50%以下。

表4 不同殺菌劑對(duì)2種致病菌株的室內(nèi)抑菌效果

2.2 所篩殺菌劑對(duì)2種板栗內(nèi)腐病菌毒力測(cè)定 對(duì)7種殺菌劑進(jìn)行初篩，將抑菌率在50%以上的殺菌劑繼續(xù)進(jìn)行室內(nèi)毒力測(cè)定，咯菌腈、丙硫菌唑和苯醚甲環(huán)唑?qū)煽擅呔志瘦^好；丙硫菌唑和苯醚甲環(huán)唑?qū)η巡＄牭毒暌志Ч^好。將這幾種殺菌劑針對(duì)供試菌株進(jìn)行室內(nèi)毒力測(cè)定，由表5可知：3種殺菌劑對(duì)可可毛色二孢菌抑制作用從大到小為丙硫菌唑＞咯菌腈＞苯醚甲環(huán)唑，丙硫菌唑?qū)υ摼种菩Ч^好，EC50為0.076 mg/L。由表6可知，2種殺菌劑丙硫菌唑和苯醚甲環(huán)唑?qū)η巡＄牭毒泻芎玫囊种菩Ч?，丙硫菌唑?qū)υ摼囊种菩Ч^好，EC50為1.327 mg/L；而苯醚甲環(huán)唑的EC50為53.835 mg/L，相對(duì)丙硫菌唑而言效果較差。

表5 供試殺菌劑對(duì)可可毛色二孢菌毒力測(cè)定結(jié)果

表6 供試殺菌劑對(duì)茄病鐮刀菌毒力測(cè)定結(jié)果

3 結(jié)論與討論

通過(guò)對(duì)7種殺菌劑進(jìn)行室內(nèi)初步篩選發(fā)現(xiàn)，對(duì)L.theobromae菌株抑菌率較好的為咯菌腈、丙硫菌唑和苯醚甲環(huán)唑，3種殺菌劑的抑菌率分別為100%、92.52%、79.49%，將3種殺菌劑繼續(xù)進(jìn)行室內(nèi)毒力測(cè)定，得出丙硫菌唑的EC50為0.076 mg/L，其次為咯菌腈和苯醚甲環(huán)唑；初篩試驗(yàn)中對(duì)F.solani抑制效果較好的為丙硫菌唑和苯醚甲環(huán)唑，抑菌率分別為82.25%和62.59%，通過(guò)進(jìn)一步對(duì)2種殺菌劑進(jìn)行室內(nèi)毒力測(cè)定發(fā)現(xiàn)丙硫菌唑的效果優(yōu)于苯醚甲環(huán)唑，其EC50為1.327 mg/L，遠(yuǎn)低于苯醚甲環(huán)唑。

目前國(guó)內(nèi)關(guān)于板栗上L.theobromae和F.solani的有效防治殺菌劑鮮有研究，但關(guān)于兩種病原菌室內(nèi)毒力試驗(yàn)也有相關(guān)報(bào)道，鄒東霞[6]等人對(duì)引起桉樹(shù)枝枯病的L.theobromae菌株進(jìn)行室內(nèi)殺菌劑篩選發(fā)現(xiàn)，25%苯醚甲環(huán)唑?qū)﹁駱?shù)枝枯病菌（L.theobromae）具有一定的防治效果，其EC50為3.473 mg/L，經(jīng)換算與本試驗(yàn)中苯醚甲環(huán)唑的EC50為8.445 mg/L較為接近；劉樹(shù)森等[7]研究指出，96%苯醚甲環(huán)唑?qū).theobromae具有良好的抑制效果，其EC50為1.327 mg/L；試驗(yàn)中97%咯菌腈對(duì)L.theobromae防治效果最佳，EC50為0.09 mg/L；與本試驗(yàn)中咯菌腈對(duì)L.theobromae的EC50有所不同；翟雅娟等[8]對(duì)引起紅花根腐病的茄病鐮刀菌進(jìn)行了藥敏試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)10%苯醚甲環(huán)唑?qū).solani具有良好的防治效果，其EC50為0.4605 mg/L，與本試驗(yàn)中苯醚甲環(huán)唑有效防治F.solani的EC50相差較多。

綜上可知同樣有效殺菌劑針對(duì)同種病原菌，其在不同的寄主植物上或在不同的環(huán)境、氣候等條件下，有效防治用藥量具有一定差異，因此在病害防治過(guò)程中，應(yīng)綜合考慮影響因素，從而確定出有效的防治方案。本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)板栗內(nèi)腐病菌的殺菌劑篩選發(fā)現(xiàn)，丙硫菌唑和苯醚甲環(huán)唑2種殺菌劑對(duì)均有很好的抑制效果。本試驗(yàn)對(duì)2種板栗內(nèi)腐病菌進(jìn)行了有效藥劑篩選，篩選出了咯菌腈、丙硫菌唑和苯醚甲環(huán)唑，為田間開(kāi)展防治板栗內(nèi)腐病工作提供理論支撐。