雞源A型產(chǎn)氣莢膜梭菌致病性及藥物療效分析

臧江華，安一娜，王 婧，王科智，楊靜靜，高 敏，馮嵐迪，譚姝瑜，胡艷欣，董彥君

(中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，北京 100193)

產(chǎn)氣莢膜梭菌(，CP)是革蘭陽(yáng)性、產(chǎn)芽胞的厭氧性桿菌，普遍存在于雞料槽、糞便、污水、土壤以及健康雞的腸道中，是雞壞死性腸炎(necrotizing enteritis，NE)的主要致病菌。依據(jù)CP分泌的四種主要毒素α、β、ε、τ，可將CP分為A～E共5種血清型，大規(guī)模流行的為A型。NE以腸道嚴(yán)重出血，腸黏膜嚴(yán)重?fù)p傷、潰瘍和壞死為特征，是家禽養(yǎng)殖業(yè)危害最大的疾病之一，每年給養(yǎng)禽業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。對(duì)于NE的防控，我國(guó)養(yǎng)殖業(yè)主要通過(guò)在飼料或飲水中添加抗生素來(lái)預(yù)防和治療CP感染。青霉素、阿維拉霉素、四環(huán)素、泰樂(lè)菌素、林可霉素、桿菌肽等幾種抗生素較常用，且療效較好。然而抗生素的濫用也使得越來(lái)越多的CP產(chǎn)生了耐藥性，藥效明顯降低。近年來(lái)，抗生素被禁止作為抗生素促生長(zhǎng)劑后，雞NE的發(fā)病率急劇上升。我國(guó)已于2020年開(kāi)始全面實(shí)施禁抗措施。目前，全面禁抗后，臨床上流行的菌株對(duì)常用藥物的敏感性有無(wú)發(fā)生變化還不清楚，常用藥物的防治效果需要進(jìn)一步調(diào)查。本文研究了有NE發(fā)病史的規(guī)?；怆u養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)CP分離株的毒素型、致病力以及它們對(duì)臨床上常用3種藥物阿維拉霉素、泰樂(lè)菌素和林可霉素的敏感性，并根據(jù)藥敏結(jié)果選定阿維拉霉素和磷酸泰樂(lè)菌素對(duì)NE發(fā)病雞場(chǎng)的無(wú)癥狀雞群進(jìn)行預(yù)防試驗(yàn)，評(píng)價(jià)藥物效果，從而為規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)由CP引起的NE防治提供指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥物 鹽酸林可霉素、磷酸泰樂(lè)菌素、阿維拉霉素、阿維拉霉素預(yù)混劑、磷酸泰樂(lè)菌素預(yù)混劑，來(lái)自中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院獸醫(yī)藥理毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)室。

1.1.2 菌株 雞源A型產(chǎn)氣莢膜梭菌(C57-85)CVCC2030、雞源C型產(chǎn)氣莢膜梭菌(C59-2)CVCC60102，購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所中國(guó)獸醫(yī)微生物菌種保藏管理中心；脆弱擬桿菌ATCC25285，購(gòu)自美國(guó)模式菌種收集中心(ATCC)。

1.1.3 主要培養(yǎng)基與耗材 液體硫乙醇酸鹽(FTG)培養(yǎng)基、 胰胨-亞硫酸鹽-環(huán)絲氨酸(TSC)瓊脂、腦心浸液瓊脂(BHA)培養(yǎng)基、無(wú)菌脫纖維羊血均購(gòu)自北京陸橋技術(shù)股份有限公司，CHROMagar沙門氏菌顯色培養(yǎng)基、MH液體培養(yǎng)基購(gòu)自北京普納德科技有限公司，2.5 L厭氧培養(yǎng)包購(gòu)自日本三菱瓦斯化學(xué)株式會(huì)社，美藍(lán)染色液購(gòu)自青島海博生物技術(shù)有限公司。

1.1.4 主要儀器設(shè)備 恒溫培養(yǎng)箱，上海一恒科技有限公司產(chǎn)品。密封培養(yǎng)罐，美國(guó)Thermo公司產(chǎn)品。SPF雞隔離器，蘇州市馮氏實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)備有限公司產(chǎn)品。PCR 擴(kuò)增儀，電泳成套設(shè)備，凝膠成像系統(tǒng)，美國(guó) Bio-rad 公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 樣品采集、CP的分離、毒素型鑒定 2019、2020年，于山西、河北兩地有NE發(fā)生的規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行采樣，使用微生物采樣管采集肉雞肛門或泄殖腔內(nèi)新鮮糞便，置于4 ℃低溫保存箱中帶回實(shí)驗(yàn)室。將糞樣放入FTG內(nèi)增菌，吸取增菌液與50 ℃左右的 TSC 瓊脂混勻，凝固后再倒一層TSC，再次凝固后，置于密封培養(yǎng)罐內(nèi)，放入2袋厭氧培養(yǎng)包，合上蓋子密閉，37 ℃培養(yǎng) 24 h。挑取CP單菌落在綿羊血瓊脂平板上劃線置于放有厭氧產(chǎn)氣袋的密封培養(yǎng)罐內(nèi)37 ℃培養(yǎng)24 h。將疑似CP的分離株送去測(cè)序公司進(jìn)行16S rRNA測(cè)序，鑒定細(xì)菌種屬。合成 CPA、CPB、ETX、IAP引物，通過(guò)多重PCR方法進(jìn)行毒素型鑒定。

1.2.2 CP的致病力試驗(yàn) 在中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物平臺(tái)隔離器中，使用SPF雞開(kāi)展試驗(yàn)。購(gòu)入60只1日齡雞(記為D1)進(jìn)行前期飼養(yǎng)，正常雛雞料飼養(yǎng)至12日齡，在D12將試驗(yàn)雞隨機(jī)分配到4組(A、B、C、D組)，每組15只，更換為50%魚粉+50%燕麥粉飼喂。培養(yǎng)3株臨床分離株(菌株20HB6RK39、20SJ5RX172、20SJ5RX66，分別對(duì)應(yīng)A組、B組和C組)，D14日分別對(duì)A、B、C組試驗(yàn)雞進(jìn)行攻菌，每只雞經(jīng)灌胃感染1 mL 1×10CFU·mL的菌液，連續(xù)攻菌5 d，分別在DM(攻菌結(jié)束次日)、DM+7、DM+14日剖殺5只雞進(jìn)行剖檢并按Liu等的0～4分評(píng)分系統(tǒng)進(jìn)行腸道病變?cè)u(píng)分，0分正常，4分最嚴(yán)重。無(wú)菌采取回腸內(nèi)容物，按“1.2.1”的方法檢測(cè)CP，用接種環(huán)蘸取適量回腸內(nèi)容物，在CHROMagar沙門菌顯色培養(yǎng)基平板上劃線，37 ℃培養(yǎng)24 h，檢測(cè)沙門菌，將紫色菌落轉(zhuǎn)接到MH液體培養(yǎng)基中進(jìn)行純培養(yǎng)后PCR擴(kuò)增并測(cè)序，鑒定是否為沙門菌。用接種環(huán)蘸取回腸內(nèi)容物在載玻片上涂片，用美藍(lán)進(jìn)行染色，在顯微鏡下觀查是否有球蟲(chóng)卵囊。在DM～DM+14期間每日觀察各組雞群主要臨床癥狀，對(duì)并精神食欲和腹瀉癥狀進(jìn)行評(píng)分。記錄死亡雞數(shù)。菌株致病有效性評(píng)估主要指標(biāo)為DM+7日出現(xiàn)明顯NE病變，即各組雞群有50%的雞出現(xiàn)死亡或有NE臨床癥狀或有剖檢雞腸道存在NE病變且剖檢雞回腸內(nèi)容物均檢出CP。

1.2.3 最小抑菌濃度(MIC)測(cè)定先將阿維拉霉素、林可霉素、泰樂(lè)菌素藥物貯備液(初始濃度)用FTG培養(yǎng)基進(jìn)行連續(xù)的二倍倍比稀釋，將稀釋后的藥液各取100 μL，按照濃度由高至低依次加到微孔板的第1～11孔，每孔對(duì)應(yīng)濃度分別為256、128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25 μg·mL。在第12孔加100 μL不含藥物的FTG培養(yǎng)基，作為陰性對(duì)照孔；在96孔板的第H11孔、H12孔加200 μL不含藥物不含菌的FTG培養(yǎng)基，作為陽(yáng)性對(duì)照孔。用FTG增菌至菌液濁度達(dá)到0.5麥?zhǔn)蠞岫?10CFU·mL)，再稀釋至到5×10CFU·mL，作為測(cè)試菌液。分別吸取100 μL測(cè)試菌液加到微孔板第1～12孔中，微孔板加蓋并用膠帶固定，37 ℃厭氧培養(yǎng)24 h。第1～11孔對(duì)應(yīng)藥液終濃度由高至低分別變?yōu)?28、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125 μg·mL。每批藥敏試驗(yàn)均用脆弱擬桿菌標(biāo)準(zhǔn)株(ATCC25285)作為質(zhì)量控制對(duì)照。當(dāng)陰性對(duì)照孔沒(méi)有細(xì)菌生長(zhǎng)、陽(yáng)性對(duì)照孔有細(xì)菌生長(zhǎng)，加藥無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)孔的最低濃度即為藥物對(duì)測(cè)試菌株的MIC。

1.2.4 預(yù)防效果試驗(yàn) 在確診某肉雞場(chǎng)正在發(fā)生由CP引起NE的雞群中，遴選132只無(wú)NE癥狀雞，轉(zhuǎn)入隔離舍開(kāi)展試驗(yàn)，記為D0日。將132只無(wú)NE癥狀雞隨機(jī)分配到3個(gè)組(PA、PB和PC)組，每組44只雞，開(kāi)展試驗(yàn)。從D1日開(kāi)始，PA組飼喂含有阿維拉霉素預(yù)混劑30 g·t(以阿維拉霉素含量計(jì))的飼料，連續(xù)21 d；PB組飼喂含有磷酸泰樂(lè)菌素預(yù)混劑100 g·t(以磷酸泰樂(lè)菌素含量計(jì))的飼料，連續(xù)7 d；PC組飼喂正常飼料。每日觀察雞臨床癥狀并評(píng)分，包括精神食欲(0分：活潑好動(dòng)，反應(yīng)敏捷，食欲旺盛；1分：反應(yīng)變慢，羽毛松亂，離群呆立，食欲減退；2分：精神萎頓，反應(yīng)遲鈍，翅膀下垂，食欲嚴(yán)重下降；3分：趴臥不起，食欲廢絕)和腹瀉癥狀(0分：排淺灰綠色柔軟柱狀糞便，表面有少量白色尿酸鹽；1分：排黃白色稀糞，有未消化飼料，肛周有糞污；2分：排黃褐色水樣臭糞； 3分：排紅色、黑褐色糞便，混有血液和腸黏膜組織)。分別在D0、D7、D21、D28每組選11只雞剖檢，對(duì)腸道病變進(jìn)行評(píng)分，并收集回腸內(nèi)容物進(jìn)行病原檢測(cè)。試驗(yàn)結(jié)束后，按檢測(cè)時(shí)間節(jié)點(diǎn)(D0、D7、D21、D28)和試驗(yàn)階段(D0～D7、D8～D21、D22～D28)收集整理數(shù)據(jù)，用SPSS對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析。以腸道NE病變發(fā)生率、CP檢出率為主要指標(biāo)，以腸道NE病變?cè)u(píng)分、精神食欲和腹瀉癥狀評(píng)分為次要指標(biāo)，評(píng)估用藥磷酸泰樂(lè)菌素預(yù)混劑7 d和阿維拉霉素預(yù)混劑21 d對(duì)預(yù)防肉雞NE的有效性。

2 結(jié) 果

2.1 細(xì)菌的分離以及鑒定

在河北省保定市2個(gè)肉雞養(yǎng)殖場(chǎng)、山西省晉中市1個(gè)肉雞養(yǎng)殖場(chǎng)、山西省晉城市1個(gè)肉雞養(yǎng)殖場(chǎng)共收集753份泄殖腔拭子，分離到91株CP，分離率為12%。CP在TSC平板上為中心黑色的菌落。在綿羊血瓊脂平板上生長(zhǎng)的菌落為圓形、邊緣整齊、凸起、表面光澤、半透明的菌落，周圍形成雙層溶血環(huán)，內(nèi)層溶血環(huán)明顯。挑選12株分離的CP進(jìn)行16S rRNA測(cè)序，結(jié)果顯示分離株與標(biāo)準(zhǔn)菌株C57-85 60102的相似性高達(dá)99%，表明分離菌株是CP。多重PCR方法測(cè)得，91株CP均只擴(kuò)增出一條約324 bp的DNA條帶，如圖1，結(jié)果顯示，91株CP均為A型，無(wú)其他毒素型。

M. DNA相對(duì)分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；1. A型菌標(biāo)準(zhǔn)菌株；2. C型菌標(biāo)準(zhǔn)菌株；3. 陰性；4～7. 樣品M. DNA marker; 1. Standard strain of type A bacteria; 2. Standard strain of type C bacteria; 3. Negative; 4-7. Samples圖1 產(chǎn)氣莢膜梭菌毒力基因的多重PCR檢測(cè)Fig.1 Multiplex PCR detection of virulence genes in C. perfringence

2.2 致病力試驗(yàn)

CP經(jīng)灌胃感染SPF雞，觀察NE病變，從而驗(yàn)證CP致病力。腸道剖檢顯示，在DM、DM+7和DM+14 d，攻毒組與未攻毒組相比，NE病變?cè)u(píng)分和NE發(fā)生率均有顯著上升(<0.05)。試驗(yàn)期間，各組雞精神食欲良好，均未出現(xiàn)明顯的癥狀。腹瀉癥狀顯示，在DM日，所有組都出現(xiàn)水樣便，在DM+7 d，攻毒組排白色稀糞，肛門周圍絨毛有糞污，未攻毒組排糞正常，為淺灰綠色柔軟柱狀，并附有少量白色尿酸鹽。DM+14 d，C組有少數(shù)雞排稀糞，存在腹瀉現(xiàn)象，其他組正常。試驗(yàn)期間，無(wú)病死雞，存活率為100%。腸道內(nèi)容物中未檢出沙門菌和球蟲(chóng)，所有攻毒組A、B、C組的雞腸道內(nèi)容物的CP檢出率均為100%；未攻毒組D組未檢出CP。

2.3 最小抑菌濃度(MIC)

本試驗(yàn)每批次陰性孔均無(wú)菌生長(zhǎng)，陽(yáng)性孔均有菌生長(zhǎng)。把91株菌的MIC值從小到大排列，第46個(gè)菌株的MIC值為MIC，第82個(gè)菌株的MIC值為MIC。阿維拉霉素對(duì)91株雞源CP的MIC范圍為0.25～4 μg·mL，MIC為0.5 μg·mL，MIC為0.5 μg·mL。鹽酸林可霉素的MIC范圍為0.125～128 μg·mL，MIC為4 μg·mL，MIC>128 μg·mL。磷酸泰樂(lè)菌素的MIC范圍為0.25～32 μg·mL，MIC為0.5 μg·mL，MIC為8 μg·mL。

2.4 臨床預(yù)防效果試驗(yàn)

在確定菌株對(duì)藥物敏感性后，選用阿維拉霉素預(yù)混劑和磷酸泰樂(lè)菌素預(yù)混劑進(jìn)行臨床預(yù)防效果試驗(yàn)。

2.4.1 NE病變發(fā)生率 在D0、D7、D21、D28時(shí)，各組選擇11只雞進(jìn)行剖檢，觀察腸道NE病變情況。統(tǒng)計(jì)剖檢雞的NE病變發(fā)生率，結(jié)果見(jiàn)表1， 與對(duì)照組相比，PA組的NE病變發(fā)生率在D21和D28時(shí)均顯著低于PC組(<0.05)；PB組的NE病變發(fā)生率在D7為0，D21、D28逐漸升高至54.5%、63.6%，這與PC組在D7之后的上升趨勢(shì)一致，但是各時(shí)間段差異均不顯著(>0.05)。對(duì)照組的NE病變發(fā)生率在D0、D7、D21逐漸升高，在D21時(shí)到達(dá)最高81.2%，并且與D0時(shí)相比有顯著差異(<0.05)，在D28時(shí)仍然維持63.6%的高NE病變發(fā)生率。PA與PB組相比，兩組的NE病變發(fā)生率在D0、D7時(shí)相同，在D21和D28時(shí)，PB組顯著高于PA組(<0.05)。PA組在整個(gè)試驗(yàn)期間都維持較低水平(0或者9.1%)，而PB組在D0、D7時(shí)維持較低水平，D21、D28時(shí)則分別增高至54.5%、63.6%，D21、D28時(shí)均顯著高于D7日(<0.05)。

表1 各組雞不同時(shí)間點(diǎn)的NE病變發(fā)生率Table 1 Incidence of NE lesions at different time in each group %

結(jié)果表明，在連續(xù)給藥阿維拉霉素21 d，NE病變發(fā)生率呈降低趨勢(shì)，由9.1%降至0，對(duì)NE有很好的預(yù)防和治療效果；連續(xù)給藥磷酸泰樂(lè)菌素7 d，與給藥阿維拉霉素21 d效果相同。但停藥后到試驗(yàn)結(jié)束，磷酸泰樂(lè)菌素對(duì)NE的預(yù)防效果逐漸降低明顯，NE病變發(fā)生率均呈上升趨勢(shì)。

2.4.2 CP檢出率 在D0、D7、D21、D28，采集各組每組11只剖檢雞的回腸內(nèi)容物檢測(cè)CP，統(tǒng)計(jì)CP檢出率，結(jié)果見(jiàn)表2，與對(duì)照組相比，PA組的CP檢出率在D0、D7、D28時(shí)均與PC組無(wú)顯著差異(>0.05)，在D21時(shí)PA組顯著低于PC組(<0.05)；PB組與PC組無(wú)顯著差異(<0.05)。對(duì)照組的CP檢出率在D0、D7、D21逐漸升高，從9.1%升高到45.5%，D28日又下降到36.4%，但是對(duì)照組各時(shí)間段均無(wú)顯著差異(>0.05)。PA與PB組相比，兩組的CP檢出率在D0、D7時(shí)相同，在D21和D28日，PB組均高于PA組，但差異不顯著(>0.05)。PA組在整個(gè)試驗(yàn)期間都維持較低水平，并且整體呈下降趨勢(shì)，從18.2%降至9.1%；而PB組在D0、D7、D21時(shí)維持較低水平，并且從18.2%降至9.1%，但在D28日又輕微增高至27.3%，組內(nèi)差異不顯著(>0.05)。

表2 各組雞不同時(shí)間點(diǎn)的CP檢出率Table 2 CP detection rate at different time in each group %

在連續(xù)給藥阿維拉霉素21 d或者連續(xù)給藥磷酸泰樂(lè)菌素7 d后，CP檢出率均呈下降趨勢(shì)，如果不給藥，21 d后則雞群CP的檢出率會(huì)升高，結(jié)果表明，兩種藥物均可降低CP感染率。阿維拉霉素用藥21 d效果顯著。

2.4.3 精神食欲和腹瀉癥狀評(píng)分 在試驗(yàn)D0～D28日，每日觀察每組試驗(yàn)雞的臨床表現(xiàn)。各組雞在D0、D7、D21、D28均只有個(gè)別雞出現(xiàn)精神食欲下降，組別之間無(wú)顯著差異(>0.05)。各組雞在D0、D7、D21、D28日均只有個(gè)別雞出現(xiàn)腹瀉，組別之間無(wú)顯著差異(>0.05)。因此，精神食欲和腹瀉癥狀各組之間無(wú)顯著差異。

2.4.4 NE病變?cè)u(píng)分 在D0、D7、D21、D28日，各組剖殺11只雞觀察腸道病變，CP對(duì)十二指腸、空腸、回腸的損傷最為明顯，可形成明顯的壞死點(diǎn)。如圖2所示，與對(duì)照組相比，PA組在D7日、D21、D28日均未見(jiàn)明顯的出血點(diǎn)，PC組可見(jiàn)隨著時(shí)間延長(zhǎng)，小腸內(nèi)壁的出血點(diǎn)明顯增多，甚至出現(xiàn)融合性壞死。PB組小腸在D7日時(shí)無(wú)明顯壞死點(diǎn)，但是D21、D28日也逐漸出現(xiàn)壞死點(diǎn)，但明顯不如PC組嚴(yán)重。

圖2 D7、D21、D28日各組雞小腸腸道病變Fig.2 Intestinal lesions in each group on D7, D21 and D28

統(tǒng)計(jì)各組剖檢雞的NE病變?cè)u(píng)分，見(jiàn)表3。與對(duì)照組相比，PA組的平均NE病變?cè)u(píng)分在D7、D21和D28時(shí)均顯著低于PC組(<0.05)；PB組的平均NE病變?cè)u(píng)分在D7和D21日顯著低于PC組(<0.05)，在D28時(shí)兩組無(wú)差異。對(duì)照組的平均NE病變?cè)u(píng)分在D0、D7、D21逐漸升高，在D21日PC組最高平均評(píng)分為1.64分，顯著高于D0日的

表3 各組雞不同時(shí)間點(diǎn)的NE病變?cè)u(píng)分Table 3 The NE lesion scores at different time in each group

0.09分(<0.05)。PA與PB組相比，兩組的平均NE病變?cè)u(píng)分在D0、D7日相同，在D21和D28日PB組顯著高于PA組(<0.05)。PA組在整個(gè)試驗(yàn)期間都維持較低水平，而PB組在D0、D7日維持較低水平，D21、D28日則分別增高至0.73、1.36，顯著高于用藥期間的0.09和0(<0.05)

連續(xù)給藥阿維拉霉素21 d或者連續(xù)給藥磷酸泰樂(lè)菌素7 d，能保護(hù)雞腸道不被CP損傷，如果不給雞群用藥，雞群小腸尤其是十二指腸、空腸會(huì)被破壞，發(fā)生壞死，結(jié)果表明，兩種藥物均可以保護(hù)雞腸道不出現(xiàn)出血、壞死等癥狀，抑制NE癥狀的出現(xiàn)。

3 討 論

本研究采集分離的CP均為A型菌株，這與Xu等、Mwangi等和Fancher等結(jié)果均為A型一致，致病力試驗(yàn)中腹瀉評(píng)分和NE病變發(fā)生率結(jié)果表明：換料對(duì)雞腹瀉評(píng)分有干擾，換料后所有組均出現(xiàn)水樣便，當(dāng)更換回正常飼料未攻毒組糞便恢復(fù)正常，攻毒組仍存在腹瀉現(xiàn)象，腸道損傷更為嚴(yán)重。可初步得出結(jié)論：試驗(yàn)中所選取的3株CP在魚粉和燕麥改變的腸道環(huán)境下，能誘發(fā)雞壞死性腸炎，出現(xiàn)明顯的腸道損傷，但不會(huì)造成雞死亡。能引起雞NE的CP大部分都是A型，但也有少數(shù)是C型， 由于β毒素的存在，C 型CP可能會(huì)引起動(dòng)物感染后致死。

關(guān)于藥物敏感性，阿維拉霉素對(duì)目前我國(guó)的雞源CP仍具有良好的體外抗菌活性，山西、河北兩地的雞源CP對(duì)阿維拉霉素的體外敏感性無(wú)明顯差異性，與中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所早期分離保存的兩株雞源CP的MIC較一致。2008年，Silva等檢測(cè)了分離自巴西55株雞源CP對(duì)阿維拉霉素的敏感性，結(jié)果MIC范圍為0.25～0.5 μg·mL；鄒君彪等2013年檢測(cè)了雞源CP CVCC52 標(biāo)準(zhǔn)株對(duì)阿維拉霉素的敏感性，結(jié)果MIC值為0.25 μg·mL；周宇晴2019年檢測(cè)了分離自中國(guó)山西、北京兩地60株雞源CP對(duì)阿維拉霉素的敏感性，結(jié)果MIC范圍為0.06～2 μg·mL，MIC為1 μg·mL。本試驗(yàn)檢測(cè)獲得的阿維拉霉素對(duì)雞源CP臨床分離株的MIC與上述國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道一致。由于目前沒(méi)有CP對(duì)阿維拉霉素藥物敏感性的折點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)，臨床上是否出現(xiàn)了阿維拉霉素耐藥株仍不得而知。2009年，Silva 等測(cè)檢了巴西的55株CP的MIC，林可霉素的MIC范圍是0.25～64 μg·mL，敏感率為89.1%。2013年，鄒君彪等測(cè)得林可霉素的MIC為100 μg·mL；2016年，F(xiàn)an等測(cè)得我國(guó)臺(tái)灣地區(qū)MIC>256 μg·mL。2019年，周宇晴檢測(cè)林可胺類藥物克林霉素結(jié)果為MIC為2 μg·mL，MIC>128 μg·mL。2019年，方向紅等得出CP對(duì)林可霉素耐藥率為76.42%，2020年，修麗得出耐藥率為62.79%。本試驗(yàn)測(cè)得鹽酸林可霉素的MIC范圍為0.125～128 μg·mL，MIC為4 μg·mL，MIC>128 μg·mL。由此可見(jiàn)，國(guó)內(nèi)外鹽酸林可霉素對(duì)CP的敏感性有一定的差異，而隨著時(shí)間的推移，部分CP對(duì)鹽酸林可霉素的敏感性也在降低。較高的MIC提示存在雞源CP對(duì)林可霉素耐藥問(wèn)題，具體是否存在耐藥還需更多研究證實(shí)。本試驗(yàn)測(cè)得磷酸泰樂(lè)菌素的MIC范圍為0.25～32 μg·mL，1997年，Watkins等測(cè)得美國(guó)、比利時(shí)、北歐等國(guó)家泰樂(lè)菌素對(duì)CP的MIC為0.25～8 μg·mL。2004年，Martel等測(cè)得的MIC范圍為0.03～0.5 μg·mL，2020年，Wei等測(cè)得101株CP的MIC范圍為2～16 μg·mL。從MIC范圍的最大值可以看出，部分CP對(duì)磷酸泰樂(lè)菌素的體外藥物敏感性降低，本次試驗(yàn)檢測(cè)出MIC為0.5 μg·mL，MIC為8 μg·mL，這與以上結(jié)果較為一致。研究表明，分離到的大部分CP仍然對(duì)泰樂(lè)菌素敏感。

關(guān)于藥物預(yù)防試驗(yàn)，雞群發(fā)生NE，同群的部分無(wú)癥狀雞已發(fā)生CP感染，腸道已存在不同程度的NE病變，若不及時(shí)給藥預(yù)防部分個(gè)體也會(huì)發(fā)生NE而出現(xiàn)精神食欲下降和腹瀉癥狀，且在一定時(shí)間內(nèi)病雞數(shù)將越來(lái)越多，CP將在雞群中傳播，造成CP檢出率在一定時(shí)間內(nèi)顯著上升，越來(lái)越多的雞出現(xiàn)NE病變甚至病情進(jìn)一步惡化，通過(guò)拌料連續(xù)21 d給予阿維拉霉素預(yù)混劑，給藥期間及停藥后1周可有效避免無(wú)癥狀雞出現(xiàn)NE癥狀，有效阻止無(wú)癥狀雞的腸道出現(xiàn)NE病變或防止病變惡化，顯著降低NE病變發(fā)生率和NE病變?cè)u(píng)分，顯著降低CP檢出率，這和梁先明與湯樹(shù)生的結(jié)果一致。阿維拉霉素有助于提升肉雞的生長(zhǎng)性能。通過(guò)拌料連續(xù)7 d給予磷酸泰樂(lè)菌素預(yù)混劑，給藥期間也可有效阻止無(wú)癥狀雞出現(xiàn)NE癥狀，效果與阿維拉霉素預(yù)混劑相當(dāng)，但停藥后少部分雞又出現(xiàn)NE癥狀，推測(cè)由未用藥NE病雞傳播CP再感染造成。泰樂(lè)菌素屬生長(zhǎng)期快效抑菌劑，通過(guò)與細(xì)菌核糖體的50S亞基進(jìn)行可逆性結(jié)合，阻斷轉(zhuǎn)肽作用和mRNA位移而抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)合成。對(duì)快速分裂的細(xì)菌效果明顯， 所以用藥7 d可以顯著降低腸道NE病變，但由于CP是正常菌群的一種，常存在于腸道中，所以一旦停藥，可能會(huì)引起CP的快速繁殖。阿維拉霉素預(yù)混劑、磷酸泰樂(lè)菌素預(yù)混劑預(yù)防由CP引起的雞NE效果明顯。

4 結(jié) 論

目前，河北、山西省部分規(guī)?；u養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)臨床上流行的CP以A型為主，并且能誘發(fā)雞NE。阿維拉霉素和磷酸泰樂(lè)菌素對(duì)臨床分離的雞源CP仍具有良好的體外抗菌活性，林可霉素的體外抗菌活性下降。阿維拉霉素和磷酸泰樂(lè)菌素預(yù)混劑可以有效預(yù)防由CP引起的雞NE。