“三步消毒法”對(duì)豁眼鵝種蛋消毒效果的研究

邱文然

（遼寧職業(yè)學(xué)院，遼寧鐵嶺 112099）

豁眼鵝是我國(guó)優(yōu)秀的地方良種，其突出的優(yōu)點(diǎn)是年產(chǎn)蛋量多，繁殖能力強(qiáng)，是最理想的育種素材和雜交綜合利用的首選品種[1]。因其趾間有蹼、圈舍潮濕，使腳底特別污濁，產(chǎn)蛋時(shí)會(huì)污染產(chǎn)蛋箱中的其他種蛋，導(dǎo)致種蛋污染嚴(yán)重。據(jù)本課題組2016 年對(duì)鐵嶺市部分豁眼鵝養(yǎng)殖場(chǎng)種蛋污染狀況調(diào)查，重度污染的臟蛋率達(dá)2%～5%，中、輕度污染的臟蛋率高達(dá)90%以上主要是種蛋消毒不當(dāng)，導(dǎo)致受精卵孵化率和健雛率較低。

本試驗(yàn)從提升和規(guī)范豁眼鵝種蛋消毒技術(shù)著手，參考家禽種蛋消毒的相關(guān)研究成果，精選碘液浸洗、福爾馬林熏蒸和新潔爾滅噴灑3 種種蛋消毒方法，依據(jù)種蛋保存和孵化過(guò)程特點(diǎn)，依次排列為：種蛋收集后浸洗、入孵前熏蒸和孵化過(guò)程中噴灑的三步消毒，并規(guī)范種蛋消毒操作技術(shù)，構(gòu)建豁眼鵝種蛋“三步消毒法”，并與傳統(tǒng)消毒方法對(duì)比，探討種蛋“三步消毒法”消毒效果及其對(duì)孵化效果的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 種蛋

種蛋購(gòu)自昌圖金秋豁鵝原種場(chǎng)。每天收集種蛋經(jīng)初選和試驗(yàn)處理后，送到蛋庫(kù)種保存7d，保存溫度12～18℃，相對(duì)濕度70%～75%[2]。

1.1.2 儀器設(shè)備

箱體式孵化出雛一體機(jī)(型號(hào)為EIFTPC-YM1500)購(gòu)自青島興儀電子設(shè)備有限責(zé)任公司；三用恒溫水浴槽（型號(hào)為HH-600）購(gòu)自由上海百碘儀器設(shè)備有限公司。

1.1.3 藥品

甲醛溶液（批號(hào)為2020072101），碘化鉀（批號(hào)為2020010601）購(gòu)自成都市科隆化學(xué)品有限公司；高錳酸鉀（批號(hào)為20071019）購(gòu)自沈陽(yáng)瑞豐精細(xì)化學(xué)品有限公司；碘片（批號(hào)為20150922）購(gòu)自天津市瑞豐特化學(xué)品有限公司；新潔爾滅（批號(hào)為200302）購(gòu)自山東利爾康醫(yī)療科技股份有限公司；營(yíng)養(yǎng)瓊脂（批號(hào)為20201102，普通瓊脂平板及薩布羅氏瓊脂平板）購(gòu)自北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司。

1.2 方法

隨機(jī)選取1000 枚合格種蛋，隨機(jī)分為兩組后編號(hào)，每組500 枚。對(duì)照組收集種蛋后在蛋庫(kù)保存7d，在種蛋入孵前實(shí)施福爾馬林熏蒸消毒。將種蛋放置在孵化機(jī)的蛋盤內(nèi)，送到消毒柜中，按照消毒柜容積稱量消毒藥品，即含甲醛40%的福爾馬林30mL/m3、高錳酸鉀15g/m3；將稱量好的高錳酸鉀放置于廣口瓷盆中，送入消毒柜內(nèi)備用，將稱量好的福爾馬林迅速倒入裝有高錳酸鉀瓷盆內(nèi)，并置于消毒柜內(nèi)下方，關(guān)閉消毒柜，保持消毒柜內(nèi)溫度為25～27℃、相對(duì)濕度為70%～80%。消毒30min 后開(kāi)啟消毒柜通風(fēng)系統(tǒng)，排除消毒氣體，打開(kāi)消毒柜門，取出種蛋，檢測(cè)消毒效果[3]。

試驗(yàn)組種蛋采用“三步消毒法”消毒。第一步收集種蛋后實(shí)施碘液浸洗消毒：下午14 點(diǎn)開(kāi)始收集種蛋，初選后進(jìn)行蛋殼細(xì)菌數(shù)量檢測(cè)。配制0.1%碘液：10g 碘片和15g 碘化鉀，研磨后溶解于1000mL 清水中，然后再加入9000mL 溫水（37～40℃）。將配制好的碘液置于水浴槽中，保持水溫在40℃左右。將收集后的種蛋分批放入0.1%的溫碘液中，浸泡30～60s，洗凈污物后取出晾干，檢測(cè)消毒效果后送到蛋庫(kù)中保存7d，保存溫度12～18℃，相對(duì)濕度為70%～75%。第二步在種蛋入孵前實(shí)施福爾馬林熏蒸消毒，消毒步驟同對(duì)照組。消毒30min 后開(kāi)啟消毒柜通風(fēng)系統(tǒng)，排除消毒氣體，打開(kāi)消毒柜門，取出種蛋，檢測(cè)消毒效果[3]。第三步在種蛋入孵第16d 結(jié)合涼蛋實(shí)施新潔爾滅噴灑消毒1 次：用5%的新潔爾滅原液加25倍30℃溫水配制成0.2%溶液；關(guān)閉孵化器，拉出蛋車，消毒前檢測(cè)蛋殼細(xì)菌數(shù)量，用噴霧器將配制好的0.2%新潔爾滅溫溶液均勻噴灑在種蛋表面；將種蛋涼約30min 左右，待蛋溫降至30℃左右時(shí)，檢測(cè)消毒效果后送至孵化器內(nèi)繼續(xù)孵化[4]。

1.2.1 蛋殼細(xì)菌數(shù)量檢測(cè)

在消毒操作前后每組隨機(jī)抽取10 枚種蛋，進(jìn)行蛋殼細(xì)菌數(shù)量測(cè)定。在無(wú)菌操作下，分別用滅菌純凈水沾濕棉簽擦洗被檢樣本鈍端蛋殼1.0cm2面積內(nèi)的細(xì)菌，用滅菌純凈水進(jìn)行1∶10、1∶100、1∶1000 倍稀釋，最后將稀釋后的液體加至培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)24h，統(tǒng)計(jì)消毒前后每枚種蛋蛋殼1.0cm2面積內(nèi)的細(xì)菌數(shù)量[4]。

1.2.2 孵化處理

將消毒處理的種蛋放入同一臺(tái)孵化機(jī)進(jìn)行孵化，將各試驗(yàn)處理后的種蛋預(yù)熱后碼盤入孵。孵化過(guò)程溫濕度見(jiàn)表1；隨著胚齡增大逐漸開(kāi)大通風(fēng)口；每2h 翻蛋1 次，翻蛋角度為90°；16 胚齡開(kāi)始上午、下午各凉蛋1 次，每次30min 左右，待蛋溫降至30℃左右時(shí)放回孵化器內(nèi)繼續(xù)孵化；在孵化到第8、21 和28天時(shí)各進(jìn)行1 次照蛋[5]。種蛋入孵前逐個(gè)編號(hào)，分別統(tǒng)計(jì)對(duì)照組和試驗(yàn)組的入孵蛋數(shù)、受精蛋數(shù)、受精卵孵化率、出雛數(shù)、健雛數(shù)、健雛率和胚胎死亡率。

表1 豁眼鵝種蛋孵化過(guò)程溫濕度設(shè)置情況表

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS 軟件對(duì)種蛋蛋殼表面細(xì)菌數(shù)量、細(xì)菌減少率、授精卵孵化率、健雛率、胚胎早期死亡率、胚胎后期死亡率等數(shù)據(jù)進(jìn)行t 檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 消毒效果分析

不同消毒方式種蛋蛋殼細(xì)菌數(shù)量情況見(jiàn)表2，從表中可以看出，在種蛋進(jìn)入蛋庫(kù)前，對(duì)照組和試驗(yàn)組雞蛋表面細(xì)菌數(shù)差異不顯著，但由于對(duì)照組在種蛋收集時(shí)未進(jìn)行消毒，入孵前蛋殼表面細(xì)菌數(shù)量（21320±2499 個(gè)/cm2）顯著高于試驗(yàn)組，即使經(jīng)過(guò)福爾馬林熏蒸，細(xì)菌數(shù)仍在十萬(wàn)級(jí)以上。而試驗(yàn)組在種蛋收集時(shí)經(jīng)碘液浸洗消毒，細(xì)菌數(shù)量減少81.5%（3940±993），種蛋在蛋庫(kù)保存7d 后細(xì)菌增殖1 倍左右（8320±2295 個(gè)/cm2），入孵前經(jīng)福爾馬林熏蒸消毒后，細(xì)菌數(shù)減少了72.5%，不足3000 個(gè)/cm2，遠(yuǎn)低于對(duì)照組的細(xì)菌數(shù)。試驗(yàn)組孵化過(guò)程中細(xì)菌雖有增殖，但由于細(xì)菌基數(shù)較低，入孵后16 天也未超過(guò)10000 個(gè)/cm2，而對(duì)照組則仍在十萬(wàn)級(jí)以上。試驗(yàn)組種蛋通過(guò)“三步消毒法”的消毒，蛋殼表面細(xì)菌綜合減少率為91.0%，對(duì)照組種蛋通過(guò)福爾馬林熏蒸消毒，蛋殼表面細(xì)菌減少率為66.7%，試驗(yàn)組顯著高于對(duì)照組。

表2 不同消毒方式種蛋蛋殼細(xì)菌數(shù)量情況

表3 孵化試驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)表

2.2 孵化試驗(yàn)結(jié)果分析

對(duì)照組與試驗(yàn)組種蛋放入同一臺(tái)孵化器內(nèi)進(jìn)行孵化，孵化結(jié)果見(jiàn)表4。從表中可以看出，試驗(yàn)組比對(duì)照組受精卵孵化率高出8.5 個(gè)百分點(diǎn)，健雛率高出7.2個(gè)百分點(diǎn)，胚胎早期死亡率低7.0 個(gè)百分點(diǎn)，胚胎后期死亡率低1.6%。

3 結(jié)論

與僅在入孵前采用福爾馬林熏蒸消毒相比，實(shí)施“三步消毒法”消毒豁眼鵝種蛋可大幅度減少種蛋保存與孵化過(guò)程中蛋殼表面的細(xì)菌數(shù)量，可明顯提高種蛋受精卵孵化率及健雛率，降低種蛋胚胎早期死亡率。

本試驗(yàn)精選碘液浸洗、福爾馬林熏蒸和新潔爾滅噴灑3 種種蛋消毒法，依據(jù)種蛋保存和孵化特點(diǎn)，依次排列為：種蛋收集后浸洗、入孵前熏蒸和孵化過(guò)程中噴灑的三步消毒，并規(guī)范操作技術(shù)，構(gòu)建豁眼鵝種蛋“三步消毒法”，獲得顯著的消毒效果和孵化效果。隨著新型種蛋消毒藥物的研制，也可用新型種蛋消毒藥物替代上述消毒藥物，其消毒效果和孵化效果有待進(jìn)一步研究。種蛋“三步消毒法”及規(guī)范消毒技術(shù)的消毒效果和孵化效果顯著優(yōu)于種蛋入孵前熏蒸消毒，但增加了消毒藥物及用量，進(jìn)而增加了消毒成本，有關(guān)種蛋“三步消毒法”的經(jīng)濟(jì)效益有待進(jìn)一步研究。