基于Caspase－1/GSDMD焦亡通路探討復(fù)方血栓通膠囊對(duì)視網(wǎng)膜血管炎的作用機(jī)制

吳越，張?zhí)?，李笑，張秀園，劉炬，2?

（1.山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東 濟(jì)南 250013；2.山東省千佛山醫(yī)院，山東 濟(jì)南 250014）

視網(wǎng)膜血管炎（retinal vasculitis，RV）是以視網(wǎng)膜血管的炎癥性改變?yōu)橹鞯募膊?，其主要表現(xiàn)為視網(wǎng)膜血管擴(kuò)張，血管周圍有黃白色炎性滲出或白鞘，且伴有脈絡(luò)膜、玻璃體的眼后段炎癥反應(yīng)［1］。目前視網(wǎng)膜血管炎的發(fā)生機(jī)制尚不明確，大多認(rèn)為與自身免疫反應(yīng)有關(guān)。細(xì)胞焦亡是一種炎癥性、程序性細(xì)胞死亡方式［2］。它主要通過炎癥小體介導(dǎo)多種半胱天冬氨酸蛋白酶（Caspase）激活，導(dǎo)致多種Gasdermin 家族成員發(fā)生剪切和多聚化，引發(fā)細(xì)胞膜孔道形成，釋放細(xì)胞內(nèi)容物和成熟的炎癥因子至胞外，并擴(kuò)大炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)，例如白細(xì)胞介素－1β（interleukin－1β，IL－1β）、白細(xì)胞介素－18（interleukin－18，IL－18）等［2］。Gasdermin D（GSDMD）是Gasdermin 家族中研究廣泛的成員之一，也是焦亡過程中的執(zhí)行者［3］。研究表明，IL－1β 等細(xì)胞因子驅(qū)動(dòng)炎癥改變，對(duì)視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞造成損傷，導(dǎo)致糖尿病視網(wǎng)膜病變［4］、白塞?。?］的標(biāo)志性血管病變。已有研究表明［6］，焦亡在自身免疫性疾病中發(fā)揮作用。因此，焦亡可能是視網(wǎng)膜血管炎的發(fā)生機(jī)制之一。

近年來(lái)，臨床上治療視網(wǎng)膜血管炎常使用糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑、激光手術(shù)等療法。然而，這些療法存在治療周期長(zhǎng)、毒副作用大且價(jià)格昂貴等不足。中醫(yī)學(xué)從整體觀念出發(fā)，對(duì)視網(wǎng)膜血管炎進(jìn)行辨證論治并取得良好的臨床療效。復(fù)方血栓通膠囊是由三七、丹參、黃芪和玄參四味中藥構(gòu)成的中成藥制劑，在活血化瘀、保護(hù)視網(wǎng)膜血管結(jié)構(gòu)［7］、改善微循環(huán)［8］、抗炎［9］等方面具有突出療效，且價(jià)格適中。在臨床上，常用來(lái)治療糖尿病視網(wǎng)膜病變［9］、黃斑水腫［10］、視網(wǎng)膜靜脈阻塞［11］、青光眼［12］等疾病。目前，復(fù)方血栓通膠囊對(duì)視網(wǎng)膜血管炎的治療作用及其機(jī)制尚未見有文獻(xiàn)報(bào)道，復(fù)方血栓通膠囊是否通過焦亡介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)改善視網(wǎng)膜血管炎尚需進(jìn)一步的研究。

本實(shí)驗(yàn)通過建立小鼠視網(wǎng)膜血管炎模型，觀察復(fù)方血栓通膠囊對(duì)視網(wǎng)膜血管炎的治療作用，并探討其治療視網(wǎng)膜血管炎的作用機(jī)制，為臨床治療提供更多生物靶點(diǎn)和用藥依據(jù)。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF 級(jí)雄性8周齡C57BL/6小鼠60只，體質(zhì)量20～25 g，購(gòu)自浙江維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，合格證編號(hào)：20210927Abzz0619000395。正常飼料喂養(yǎng)，12 h晝夜交替7 d后進(jìn)入實(shí)驗(yàn)。本動(dòng)物實(shí)驗(yàn)經(jīng)山東省千佛山醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)進(jìn)行（編號(hào)：QFSYY20210006）。

1.2 藥品與試劑

復(fù)方血栓通膠囊（廣東眾生藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：210215）；醋酸潑尼松片（天津天藥藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：2011143）；復(fù)方托吡卡胺滴眼液（沈陽(yáng)興齊眼藥股份有限公司，批號(hào)：200801）；氧氟沙星眼膏（沈陽(yáng)興齊眼藥股份有限公司，批號(hào)：210302）；人IRBP（1－20）肽（美國(guó)Med Chem Express 公司，批號(hào)：298202－25－2）；百日咳毒素（北京博蕾德科技發(fā)展有限公司，批號(hào)：181242A1）；完全弗氏佐劑（美國(guó)Sigma 公司，批號(hào)：9007812）；4%多聚甲醛通用型組織固定液（北京蘭杰柯科技有限公司，批號(hào)：69111800）；蘇木素染色劑（北京索萊寶科技有限公司，批號(hào)：ZH190905）；伊紅染色劑（北京索萊寶科技有限公司，批號(hào)：XH184205）；RNA 組織/細(xì)胞快速提取試劑盒（TIAN GEN 公司，批號(hào)：W9928）；4 × g DNA wiper Mix（南京諾唯贊生物科技股份有限公司，批號(hào)：7E581k1）；5×HiScript?ⅢRT SuperMix for qPCR（+gDNA wiper）（南京諾唯贊生物科技股份有限公司，批號(hào)：7E542I1）；ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix（南京諾唯贊生物科技股份有限公司，批號(hào)：027E2222BA）；GSDMD（Affinity Boisciences 公 司，批號(hào)：AF4012）；Caspase－1（Proteintech 公司，批號(hào)：22915－1－AP）；Cleave－IL－1β（Affinity Biosciences 公 司，批號(hào)：38c0979）；吐溫－20（Solarbio 公司，批號(hào)：923V011）；Pierce?BCA 蛋白檢測(cè)試劑盒（Thermo Fisher Scientific公司，批號(hào)：UJ290653）；小鼠白介素（IL－1β）酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒（武漢伊萊瑞特生物科技有限公司，批號(hào)：E－MSEL－M0003）。

1.3 儀器

小動(dòng)物視網(wǎng)膜成像系統(tǒng)（Optoprobe，型號(hào)：Opto－Ris Pro）；普通臺(tái)式離心機(jī)（Thermo Fisher Scientific，型號(hào)：micro17＆21）；光學(xué)顯微鏡（Primotech，型號(hào)：蔡司ZEISS）；顯微鏡（Olympus，型號(hào)：CX33）；超聲波破碎儀（寧波新芝生物科技股份有限公司，型號(hào)：JY96－IIN）；生物病理切片機(jī)（濟(jì)南童鑫生物科技有限公司，型號(hào)：QPJ－1C）；制冰機(jī)（Ziegra，型號(hào)：ZBE 70－35）；Milli－Q?臺(tái)式純水系統(tǒng)（Merck，型號(hào)：ZIQ7003T0）；Western blot 凝膠電泳系統(tǒng)（Bio Rad，型號(hào)：164－5052）；超靈敏多功能成像儀（GE，型號(hào)：Amersham Imager 680）；PCR 擴(kuò)增儀（Bio－Rad，型號(hào)：T100）；實(shí)時(shí)熒光定量PCR 儀（Bio－Rad，型號(hào)：CFX96）；移液器（Eppendorf，型號(hào)：3120 000.283）；漩渦振蕩器（其林貝爾，型號(hào)：VORTEX-5）；酶標(biāo)儀（Thermo Fisher，型號(hào)：1510）。

2 方法

2.1 動(dòng)物分組與造模

將8 周齡60 只雄性C57BL/6 小鼠在溫度25 ℃，濕度50%～70%實(shí)驗(yàn)室規(guī)范下飼養(yǎng)，自由飲水進(jìn)食。將小鼠隨機(jī)分為5 組：空白組（Control）、模型組（Model）、復(fù)方血栓通低劑量組（FXST－L）、復(fù)方血栓通中劑量組（FXST－M）和復(fù)方血栓通高劑量組（FXST－H）。待小鼠活動(dòng)穩(wěn)定后，對(duì)Model、FXST－L、FXST－M、FXST－H 組小鼠進(jìn)行麻醉，將人IRBP1－20 肽溶液（100 μL，5 mg/mL）與完全弗氏佐劑（100 μL，含5 mg/mL結(jié)核分枝桿菌）1∶1 混勻并充分乳化，再將200 μL 的白色乳劑分別在Model、FXST－L、FXST－M、FXST－H組小鼠的頭頸部、左右大腿根部及尾根部皮下注射；給予Control 組小鼠等容積的生理鹽水進(jìn)行皮下注射造模。在進(jìn)行主動(dòng)免疫造模后，再向Model、FXST－L、FXST－M、FXST－H 組小鼠皮下注射免疫佐劑百日咳毒素（100 μL，5 μg/mL）；給予Control 組小鼠等容積生理鹽水進(jìn)行腹腔注射。

2.2 動(dòng)物給藥及處理

造模24 h 后，各組小鼠灌胃給藥，頻率為每日1次，灌胃容積均為0.02 mL/g。其中，Control、Model組灌胃0.02 mL/g 蒸餾水；FXST－L、FXST－M、FXST－H組分別為灌胃0.6、1.2、2.4 g/kg 復(fù)方血栓通溶液。21 d 后，各組取2 只小鼠利用小動(dòng)物視網(wǎng)膜成像系統(tǒng)觀察小鼠視網(wǎng)膜組織病理變化。其余小鼠腹腔注射40 mg/kg 戊巴比妥鈉麻醉處死并摘取小鼠眼球。各組小鼠的右眼球用PBS 沖洗，迅速置入眼球固定液中備用，左眼球置于顯微鏡下分離視網(wǎng)膜，液氮保存?zhèn)溆谩?/p>

2.3 活體眼底照相

采用小動(dòng)物視網(wǎng)膜成像系統(tǒng)，取各組2 只小鼠，腹腔下注射進(jìn)行全身麻醉，麻醉后再固定小鼠。采用復(fù)方托吡卡胺滴眼液給小鼠眼球散瞳，氧氟沙星眼膏保護(hù)角膜免受強(qiáng)光損害。調(diào)整小動(dòng)物視網(wǎng)膜成像系統(tǒng)進(jìn)光角度，進(jìn)行小鼠活體眼底照相。

2.4 HE染色法觀察小鼠視網(wǎng)膜組織的病理變化

首先，將眼球固定液固定后的小鼠右眼球進(jìn)行石蠟包埋。沿角膜－視神經(jīng)軸方向，用生物病理切片機(jī)將石蠟塊切成6 μm厚的切片移至載玻片上。然后，將石蠟切片常規(guī)脫蠟水化，進(jìn)行蘇木素－伊紅（HE）染色后，梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹脂膠封片。最后，在顯微鏡下觀察小鼠眼底視網(wǎng)膜及玻璃體腔的組織結(jié)構(gòu)病理改變、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)情況。

2.5 RT－PCR法檢測(cè)各組小鼠視網(wǎng)膜組織Caspase－1、GSDMD、IL－1β mRNA表達(dá)水平

將小鼠視網(wǎng)膜組織分離后，使用Omega 總RNA 提取試劑盒提取小鼠視網(wǎng)膜組織RNA，用HiScript?ⅢRT SuperMix for qPCR（+ gDNA wiper）進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，之后用ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix 進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR，使用2-ΔΔCt法計(jì)算相對(duì)表達(dá)量。引物序列見表1。

表1 PCR引物序列

2.6 Western blot 法檢測(cè)各組小鼠視網(wǎng)膜組織中Caspase－1、GSDMD－N、IL－1β蛋白表達(dá)情況

提取各組小鼠視網(wǎng)膜組織蛋白后，將制備的蛋白樣品通過BCA法進(jìn)行蛋白濃度測(cè)定，依次進(jìn)行蛋白變性、制備12.5%凝膠、蛋白上樣、恒壓電泳、恒流轉(zhuǎn)膜、脫脂牛奶封閉、一抗Caspase－1（1∶1 000）、GSDMD（1∶1 000）、Cleave－IL－1β（1∶1 000）、GAPDH（1∶10 000）稀釋后孵育、二抗（1∶10 000）稀釋后孵育抗原抗體反應(yīng)、顯影曝光、拍照等步驟。

2.7 ELISA 法檢測(cè)各組小鼠血清中IL－1β 的表達(dá)水平

提取各組小鼠眼眶血后，低溫3 000 rpm 離心15 min，分離血清。根據(jù)小鼠白介素（IL－1β）酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作，采用酶標(biāo)儀于450 nm 處進(jìn)行吸光度測(cè)定，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出血清IL－1β水平。

2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)采用GraphPad Prism 8.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，以±s表示，采用one－way ANOVA進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，P ＜0.05代表差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 小鼠視網(wǎng)膜組織的血管變化

給藥21 d后，利用小動(dòng)物視網(wǎng)膜成像系統(tǒng)觀察小鼠眼底視網(wǎng)膜組織的血管變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Control組小鼠視網(wǎng)膜血管自視盤發(fā)出，呈放射狀分枝形態(tài)，血管徑直，血管周圍無(wú)炎癥浸潤(rùn)。與Control組比較，Model組小鼠視盤邊緣模糊，可見彌漫性或局限性浸潤(rùn)；視網(wǎng)膜血管可見靜脈增粗變形，血管中有白色袖帶廣泛浸潤(rùn)；部分血管被遮擋，袖帶的尺寸大于血管直徑；此外，視網(wǎng)膜組織可見孤立性和線性病變。與Model組比較，F(xiàn)XST－L、FXST－M、FXST－H 組的病理情況均有改善。其中，F(xiàn)XST－H組的改善效果最為突出，其視網(wǎng)膜血管徑直且逐漸均勻變細(xì)，無(wú)迂曲擴(kuò)張病變。見圖1。

圖1 視網(wǎng)膜成像系統(tǒng)觀察各組小鼠視網(wǎng)膜組織的血管變化

3.2 小鼠視網(wǎng)膜組織的病理變化

給藥21 d 后，利用HE 染色法觀察小鼠視網(wǎng)膜組織的病理變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Control 組視野中視網(wǎng)膜各層結(jié)構(gòu)清晰，厚薄均勻，未見其他明顯異常。與Control組比較，Model 組視野中視網(wǎng)膜增厚，內(nèi)外顆粒層厚薄不均，細(xì)胞排列不規(guī)則（黑色箭頭），內(nèi)網(wǎng)狀層及內(nèi)界膜以內(nèi)可見較多粒細(xì)胞為主的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)（紅色箭頭）。與Model 組比較，F(xiàn)XST－L、FXST－M、FXST－H組的病理變化有明顯改善。其中FXST－L 組視野中視網(wǎng)膜增厚，內(nèi)外顆粒層厚薄不均，細(xì)胞排列不規(guī)則（黑色箭頭），局灶性的結(jié)構(gòu)紊亂（黃色箭頭），內(nèi)網(wǎng)狀層及內(nèi)界膜以內(nèi)可見較多粒細(xì)胞為主的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)（紅色箭頭）。FXST－M 組視野中神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層可見少量血管擴(kuò)張（黑色箭頭）。FXST－H 組視野中各層結(jié)構(gòu)清晰，厚薄均勻，僅見炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，其余未見明顯異常。見圖2。

圖2 HE染色法觀察各組小鼠視網(wǎng)膜組織的病理變化（HE，×200）

3.3 各組小鼠視網(wǎng)膜組織中Caspase－1、GSDMD、IL－1β mRNA的表達(dá)水平

結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與Control 組比較，Model 組小鼠視網(wǎng)膜組織中Caspase－1、GSDMD、IL－1β mRNA 的相對(duì)表達(dá)量顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.01）。與Model比較，F(xiàn)XST－L、FXST－M、FXST－H組Caspase－1、GSDMD、IL－1β mRNA 的相對(duì)表達(dá)量顯著下降。其中，F(xiàn)XST－H組中Caspase－1、GSDMD、IL－1β mRNA 的相對(duì)表達(dá)量下降較為明顯，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.01）。見圖3。

圖3 各組小鼠視網(wǎng)膜組織中Caspase－1、GSDMD、IL－1β mRNA的相對(duì)表達(dá)比較情況

3.4 各組小鼠視網(wǎng)膜組織中Caspase－1、GSDMD－N、IL－1β的蛋白表達(dá)水平

與Control 組比較，Model 組小鼠視網(wǎng)膜組織中GSDMD－N、Caspase－1、IL－1β的蛋白相對(duì)表達(dá)水平顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與Model組比較，F(xiàn)XST－M 組小鼠視網(wǎng)膜組織中Caspase－1、GSDND－N、IL－1β 的蛋白相對(duì)表達(dá)水平降低。其中，F(xiàn)XST－H組小鼠視網(wǎng)膜組織中Caspase－1、GSDND－N、IL－1β的蛋白水平明顯下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。見圖4、圖5。

圖4 各組小鼠視網(wǎng)膜組織中Caspase－1、GSDMD－N、IL－1β的蛋白表達(dá)情況

圖5 各組小鼠視網(wǎng)膜組織中Caspase－1、GSDMD－N、IL－1β 蛋白相對(duì)表達(dá)比較情況

3.5 各組小鼠血清中IL－1β的表達(dá)水平

與Control 組比較，Model 組小鼠血清中IL－1β 的表達(dá)水平顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與Model 組比較，F(xiàn)XST－L、FXST－M 組小鼠血清中IL－1β 的表達(dá)水平降低。其中，F(xiàn)XST－H 組小鼠血清中IL－1β 的水平明顯下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.01）。見圖6。

圖6 各組小鼠血清中IL－1β的表達(dá)情況

4 討論

視網(wǎng)膜血管炎（RV）是以視網(wǎng)膜中血管炎癥為主要病變的疾患，常伴有脈絡(luò)膜、玻璃體的眼后段炎癥反應(yīng)［1］。本病好發(fā)于20～40 歲青壯年［13］，既可以單獨(dú)發(fā)?。?4］，也可以是全身性疾病的眼部臨床表現(xiàn)［15-16］。視網(wǎng)膜血管炎病因和發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，并且易反復(fù)發(fā)作，給患者及家庭帶來(lái)嚴(yán)重的身心負(fù)擔(dān)。臨床最常用的治療藥物是皮質(zhì)類固醇聯(lián)合免疫抑制劑，但治療周期長(zhǎng)，長(zhǎng)期使用會(huì)引起全身嚴(yán)重并發(fā)癥，毒副作用大且易復(fù)發(fā)。由于本病難以治愈，病情往往隨時(shí)間延長(zhǎng)而加重。因此，目前本病研究中急需解決的重要問題是尋求特異且有效的治療方法。

視網(wǎng)膜血管炎屬“絡(luò)損暴盲”范疇［17］，該病名首見于《臨床必讀》。以絡(luò)損暴盲而論，肝郁、痰凝所致之氣滯血瘀，或氣逆、氣虛所致之血不歸經(jīng)，皆可產(chǎn)生血絡(luò)破損病理變化與瘀血病理產(chǎn)物。《素問·至真要大論》云：“堅(jiān)者削之，結(jié)者散之，留者攻之”，故見瘀血積滯，先逐其瘀血。復(fù)方血栓通膠囊是經(jīng)現(xiàn)代萃取工藝制成的中成藥制劑。方中選用活血化瘀之三七為君藥，破瘀生新而輔君之丹參為臣藥，大補(bǔ)元?dú)庵S芪和滋陰明目之玄參為佐藥，合用則具化瘀生新、活血養(yǎng)目之效。研究表明，復(fù)方血栓通膠囊具有促纖溶、抗血栓，增加微循環(huán)灌注，改善血液流變學(xué)的黏、濃、聚狀態(tài)，調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝［11，18-19］的藥理作用。通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析［8］，篩選出復(fù)方血栓通膠囊改善微循環(huán)的活性成分41 個(gè)，潛在作用靶點(diǎn)40 個(gè)，主要通過血管、免疫炎癥、神經(jīng)活性、糖尿病相關(guān)通路發(fā)揮作用。隨著中醫(yī)藥研究的不斷深入，復(fù)方血栓通膠囊已經(jīng)成為治療眼底血管性疾病的重要藥物之一。本實(shí)驗(yàn)建立小鼠視網(wǎng)膜血管炎模型，觀察到復(fù)方血栓通膠囊可有效改善視網(wǎng)膜組織的病理變化，F(xiàn)XST－H 組可明顯緩解小鼠眼底中血管以及視網(wǎng)膜組織中的病理變化，血管周圍炎癥浸潤(rùn)減輕，驗(yàn)證了復(fù)方血栓通膠囊可有效改善視網(wǎng)膜組織的炎癥病理，但其機(jī)制尚不清楚。

當(dāng)不同病原體感染宿主時(shí)，焦亡可作為宿主的一種防御機(jī)制，激活天然免疫系統(tǒng)來(lái)抵抗微生物的入侵。在焦亡過程中，炎癥小體激活Caspase－1/4/5/11 信號(hào)通路。激活的Caspase－1/4/5/11 將IL－1β、IL－18 剪切為成熟形式，并水解GSDMD 蛋白氨基端形成有活性的N端結(jié)構(gòu)（N－terminal domain，GSDMD－N）［3］。GSDMD－N具有脂溶性，能特異性地結(jié)合細(xì)胞膜形成膜孔道［20］。細(xì)胞內(nèi)容物和成熟的炎癥因子（IL－1β、IL－18）從膜孔中流出引發(fā)細(xì)胞焦亡。已有研究表明，焦亡在感染性疾?。?1］、自身免疫性疾?。?］、心血管性疾病［22］以及腫瘤［23］等疾病中發(fā)揮作用。以上研究提示，小鼠視網(wǎng)膜血管炎可能與焦亡相關(guān)，而復(fù)方血栓通膠囊是否通過焦亡介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)改善視網(wǎng)膜血管炎尚需進(jìn)一步的研究。

在本實(shí)驗(yàn)中，筆者檢測(cè)了不同組別視網(wǎng)膜組織中GSDMD、Caspase－1、IL－1β mRNA 和Caspase－1、GSDMD－N、IL－1β蛋白表達(dá)水平，血清中IL－1β的含量。結(jié)果顯示，與Control 組比較，Model 組視網(wǎng)膜組織中GSDMD、Caspase－1、IL－1β mRNA 和Caspase－1、GSDMD－N、IL－1β蛋白表達(dá)水平、血清中IL－1β的含量均明顯升高，以上結(jié)果表明視網(wǎng)膜血管炎中存在焦亡的炎癥表達(dá)；與Model組比較，F(xiàn)XST－H 組視網(wǎng)膜組織中Caspase－1、GSDMD、IL－1β mRNA 和Caspase－1、GSDMD－N、IL－1β 蛋白表達(dá)水平、血清中IL-1β 的含量均顯著降低，以上結(jié)果表明復(fù)方血栓通膠囊能緩解視網(wǎng)膜血管炎中焦亡的炎癥表達(dá)。

綜上所述，復(fù)方血栓通膠囊可有效改善視網(wǎng)膜血管炎的病理變化，其機(jī)制可能是通過抑制Caspase－1/GSDMD 焦亡通路降低炎癥反應(yīng)，最終達(dá)到治療作用。本研究闡述了復(fù)方血栓通膠囊對(duì)小鼠視網(wǎng)膜血管炎焦亡的作用及機(jī)制，為視網(wǎng)膜血管炎治療提供了有效靶點(diǎn)和用藥依據(jù)。