文/許昊川 葛明峰 徐開(kāi)崇 夏武強(qiáng) 王雯瓊 徐勝威

為了解寧波市南美白對(duì)蝦苗種病原攜帶情況，于2021年在寧波市象山、寧海、奉化、余姚、慈溪、鄞州等區(qū)縣主要南美白對(duì)蝦養(yǎng)殖產(chǎn)區(qū)采集522批次蝦苗樣品，以PCR方法檢測(cè)樣品攜帶蝦肝腸胞蟲(chóng)（EHP）、急性肝胰腺壞死?。ˋHPND）、十足目虹彩病毒1（DIV1）和白斑綜合征病毒（WSSV）病原情況，結(jié)果表明近年來(lái)寧波市南美白對(duì)蝦苗種病原攜帶狀況日漸改善，并為下一步寧波市開(kāi)展南美白對(duì)蝦疾病防控工作提供參考。

南美白對(duì)蝦作為一種生長(zhǎng)迅速、廣泛耐鹽、適應(yīng)性強(qiáng)的水產(chǎn)動(dòng)物，自引入寧波市以來(lái)，在象山、寧海、慈溪、奉化、余姚、鄞州等地形成了一定養(yǎng)殖規(guī)模。目前寧波市南美白對(duì)蝦養(yǎng)殖面積超過(guò)10萬(wàn)畝，每年產(chǎn)值超過(guò)10億元。

與此同時(shí)，養(yǎng)殖病害問(wèn)題日漸嚴(yán)重，蝦肝腸胞蟲(chóng)病、白斑綜合征、急性肝胰腺壞死病、十足目虹彩病毒病等疾病時(shí)有發(fā)生，導(dǎo)致養(yǎng)殖南美白對(duì)蝦大量死亡，給養(yǎng)殖戶造成巨大經(jīng)濟(jì)損失，對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖造成較大影響。

為了摸清寧波市南美白對(duì)蝦疾病情況，降低疾病發(fā)生概率，寧波市于2021年采集象山、寧海、奉化、余姚、慈溪、鄞州等地蝦苗進(jìn)行蝦肝腸胞蟲(chóng)（EHP）、急性肝胰腺壞死病（AHPND）、十足目虹彩病毒1（DIV1）和白斑綜合征病毒（WSSV）等病原檢測(cè)，統(tǒng)計(jì)寧波市南美白對(duì)蝦蝦苗病原攜帶率，以期為寧波市南美白對(duì)蝦疾病防控工作提供參考。

一、材料與方法

（一）試驗(yàn)材料

2021年從象山、寧海、奉化、余姚、慈溪、鄞州等地養(yǎng)殖區(qū)和南美白對(duì)蝦苗種標(biāo)粗場(chǎng)采集樣品，共計(jì)522批次，每批次樣品不少于400尾。樣品置于充氧袋中或無(wú)水乙醇中固定后送至實(shí)驗(yàn)室，24h內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。具體采樣信息見(jiàn)表1。

表1 樣品采集時(shí)間及數(shù)量信息（單位：批次）

（二）方法

1.樣品處理

樣品送達(dá)實(shí)驗(yàn)室后，瀝干水分并以超純水沖洗，隨機(jī)取150尾左右蝦苗混合后研磨均質(zhì)待用，剩余蝦樣作為備份于-80℃保存。

2.DNA提取

利用DNA提取試劑盒提取樣品總DNA，于-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

3.病原PCR檢測(cè)

采用套式PCR檢測(cè)，引物序列及目的條帶大小見(jiàn)表2。

表2 引物序列和產(chǎn)物片段大小

4.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物檢測(cè)

取5μL PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，于1.5%瓊脂糖凝膠中（含核酸染料）電泳檢測(cè)，并記錄檢測(cè)結(jié)果。

5.數(shù)據(jù)處理

使用Origin9.1軟件對(duì)采樣檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析及數(shù)據(jù)對(duì)比。其中陽(yáng)性樣品指攜帶任意一種或多種檢測(cè)病原的蝦苗樣品，整體陽(yáng)性數(shù)指來(lái)自同一區(qū)域的陽(yáng)性樣品總數(shù)。整體陽(yáng)性率=整體陽(yáng)性數(shù)/樣品總數(shù)×100%。

二、結(jié)果與討論

（一）病原檢出結(jié)果

檢測(cè)病原包括WSSV、DIV1、EHP、AHPND，522批次南美白對(duì)蝦蝦苗中共計(jì)檢出21批次攜帶病原，整體陽(yáng)性率為4.02%。其中，EHP陽(yáng)性15批次，陽(yáng)性率2.87%；AHPND陽(yáng)性4批次，陽(yáng)性率0.77%；DIV1陽(yáng)性2批次，陽(yáng)性率0.38%；WSSV未檢出。具體各月份病原檢出情況見(jiàn)表3。

表3 2021年度南美白對(duì)蝦苗種病原陽(yáng)性樣品月度分布情況（單位：批次）

（二）蝦苗整體質(zhì)量評(píng)價(jià)

由圖1可知，2016年以來(lái)，寧波市南美白對(duì)蝦苗種病原攜帶率持續(xù)下降。2021年監(jiān)測(cè)的522批次蝦苗中，共計(jì)檢出21批次攜帶病原，整體陽(yáng)性率為4.02%，顯著低于2020年15.30%的整體陽(yáng)性率。WSSV實(shí)現(xiàn)清零，DIV1和AHPND檢出率低于1%，EHP陽(yáng)性檢出率為2020年的32%。這說(shuō)明寧波市南美白對(duì)蝦苗種疾病防控工作取得了良好效果。

圖1 近五年寧波市蝦苗病原監(jiān)測(cè)陽(yáng)性率情況

（三）蝦苗病原檢出率與時(shí)間關(guān)系

從病原檢出時(shí)間來(lái)看，AHPND、DIV1均只在某一個(gè)月檢出，說(shuō)明不同月份該類病原出現(xiàn)有一定的偏向性；EHP在3、4、6、7、8月間均有檢出，且6月檢出陽(yáng)性率最高，EHP檢出的普遍性說(shuō)明寧波市蝦苗EHP攜帶風(fēng)險(xiǎn)仍較高，且6月份育苗條件可能更適合EHP繁衍。這一結(jié)果與2020年檢測(cè)結(jié)果相吻合，這表明6月是南美白對(duì)蝦感染EHP的高峰期，須提高警惕。

（四）EHP的防控建議

從多年的監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)來(lái)看，在苗種階段，EHP為寧波市近幾年南美白對(duì)蝦陽(yáng)性檢出率最高的病原。EHP已成為制約寧波市南美白對(duì)蝦養(yǎng)殖發(fā)展最重要和最為高發(fā)的疾病之一。

寧波市歷年對(duì)蝦苗種病原監(jiān)測(cè)分析結(jié)果表明：6月份為南美白對(duì)蝦蝦苗EHP檢出率最高的時(shí)段，而8月份為南美白對(duì)蝦養(yǎng)成期對(duì)蝦EHP檢出率最高期。這一數(shù)據(jù)提示本地養(yǎng)殖條件下，被EHP感染的蝦苗在養(yǎng)殖40天左右可能出現(xiàn)明顯癥狀，需要養(yǎng)殖戶密切觀察。

目前EHP仍無(wú)有效治療措施，EHP在環(huán)境中的傳播機(jī)制尚不明確，但已有證據(jù)表明EHP可以在環(huán)境中經(jīng)由養(yǎng)殖餌料、水體實(shí)現(xiàn)水平傳播，還可由親蝦傳染至子代實(shí)現(xiàn)垂直傳播，傳染能力較強(qiáng)?；鶎羽B(yǎng)殖戶應(yīng)重視每年養(yǎng)殖前的消毒工作，減少其環(huán)境傳播的風(fēng)險(xiǎn)。養(yǎng)殖過(guò)程中，也應(yīng)盡量做到養(yǎng)殖工具專池專用，降低養(yǎng)殖塘口之間的疾病傳播概率。在購(gòu)苗、選苗時(shí)應(yīng)加強(qiáng)苗種病原檢測(cè)，放養(yǎng)SPF苗種，在源頭上把關(guān)病原的輸入性傳播。