一種生物色標(biāo)在冰余石蠟制片中的應(yīng)用體會

李 曉，曹 卓，李明顯，劉紅英，黃鎮(zhèn)棟，鄭廣娟，何青蓮

近年來隨著醫(yī)療水平的迅速發(fā)展，術(shù)中冷凍技術(shù)成為病理診斷不可或缺的手段之一，但由于冷凍制片的局限性，術(shù)中冷凍病理診斷存在一定的誤診率[1-2]。冰余術(shù)后石蠟切片技術(shù)能夠明確診斷，并進(jìn)一步佐證術(shù)中冷凍診斷的準(zhǔn)確性，為臨床后續(xù)治療提供可靠依據(jù)。實(shí)際工作中有時(shí)會出現(xiàn)兩者診斷相悖的情況[3]，這是因?yàn)楸嘟M織經(jīng)脫水后難以還原冷凍的情況，從而導(dǎo)致原冷凍切面中具有診斷意義的病灶在石蠟切片中無法體現(xiàn)。為解決上述問題，本科室通過不斷實(shí)踐，運(yùn)用生物色標(biāo)來標(biāo)記乳腺癌切緣標(biāo)本的冷凍樣本頭，其能夠有效提高冰余包埋及切片的工作質(zhì)量和效率，從而提高冷凍診斷與石蠟診斷的符合率，現(xiàn)介紹如下。

1 材料與方法

1.1 材料收集2021年1～8月廣東省中醫(yī)院術(shù)中快速冷凍病理診斷為乳腺癌，且同時(shí)送檢乳腺癌切緣標(biāo)本進(jìn)行術(shù)中冷凍切片106例，隨機(jī)抽取53例作為實(shí)驗(yàn)組，53例作為對照組。對照組與實(shí)驗(yàn)組均由同一位病理技師分別應(yīng)用傳統(tǒng)方法與實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行術(shù)中快速冷凍切片的相關(guān)操作。

1.2 主要設(shè)備及耗材Thermo NX70冷凍切片機(jī)，漢谷醫(yī)療HRS-18C冷凍切片快速染色機(jī)，SAKURA VIP6全自動組織脫水機(jī)，SAKURA TEC5組織包埋機(jī)，Leica RM2245石蠟切片機(jī)，SAKURA全自動染色封片工作站，OLYNPUS BX51顯微鏡，SAKURA OCT包埋劑，BLADEX綠色生物色標(biāo)，冰醋酸。

1.3 方法(1)對照組(圖1)：按照傳統(tǒng)方法將已完成術(shù)中冷凍診斷的乳腺癌切緣組織固定于10%中性福爾馬林中，依次脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、染色。(2)實(shí)驗(yàn)組(圖2)：對于已完成術(shù)中冷凍診斷的乳腺癌切緣組織，用干凈棉簽蘸取適量綠色生物色標(biāo)涂抹于冷凍樣本頭的切面，放回冷凍切片機(jī)內(nèi)等待3 s，待生物色標(biāo)略干后，另取干凈的棉簽蘸取1%冰醋酸水溶液涂抹于冷凍樣本頭切面，等待6 s，待冰醋酸略干后，固定于10%中性福爾馬林中，依次脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、染色。

圖1 A.對照組傳統(tǒng)未標(biāo)記冷凍樣本頭；B.未標(biāo)記組織石蠟包埋效果 圖2 A.實(shí)驗(yàn)組生物色標(biāo)標(biāo)記冷凍樣本頭；B.已標(biāo)記組織石蠟包埋效果

2 結(jié)果

對照組冷凍切片與常規(guī)石蠟切片病理診斷判定為符合49例，基本符合3例，不符合1例，此例乳腺癌切緣組織冷凍切片HE染色結(jié)果為未見癌，石蠟切片HE染色結(jié)果為原位癌(圖3A、B)，符合率為92.45%(表1)；實(shí)驗(yàn)組冷凍切片與常規(guī)石蠟切片病理診斷判定為符合53例，符合率為100%(表1)，如冷凍切片與石蠟切片HE染色結(jié)果均為導(dǎo)管上皮不典型增生(圖3C、D)。

表1 兩種方法冷凍切片與常規(guī)石蠟切片病理診斷符合情況

圖3 兩種方法乳腺癌切緣標(biāo)本HE染色結(jié)果對比：A.對照組冷凍切片染色，未見癌；B.對照組石蠟切片染色，原位癌；C.實(shí)驗(yàn)組冷凍切片染色，可見導(dǎo)管上皮不典型增生；D.實(shí)驗(yàn)組石蠟切片染色，可見導(dǎo)管上皮不典型增生

3 討論

冷凍條件下，腫瘤組織內(nèi)的細(xì)胞形態(tài)會發(fā)生改變，使得腫瘤細(xì)胞被拉長或破壞，而石蠟制片具有定位準(zhǔn)確、定量可測、定性可靠的特點(diǎn)，一般術(shù)中冷凍切片質(zhì)量不及術(shù)后石蠟切片的質(zhì)量[4-6]。因此，冷凍診斷難以確診的標(biāo)本，經(jīng)過對冰余組織石蠟制片而變得容易診斷，比如術(shù)中診斷為可疑癌的病例在石蠟制片后可以確診為癌。然而由于冰余組織經(jīng)脫水后難以還原冷凍的情況，特別是乳腺癌切緣標(biāo)本等較小的組織，石蠟包埋時(shí)冰余組織切面不易辨認(rèn)，本對照組采用傳統(tǒng)方法時(shí)發(fā)生冷凍切面與其對應(yīng)石蠟切面不一致的情況，嚴(yán)重時(shí)可造成診斷結(jié)果不一致。因此對于乳腺癌切緣等較小組織，從取材、包埋、切片等步驟都應(yīng)注意哪一面是“真正的切緣”[7]。本實(shí)驗(yàn)組借助生物色標(biāo)涂墨標(biāo)記冷凍切面的方法，能清晰明確地標(biāo)記冷凍切面，即“真正的切緣”，使冷凍切面與石蠟切面一一對應(yīng)，提高包埋質(zhì)量和效率，進(jìn)而提高術(shù)中冷凍切片與術(shù)后石蠟切片病理診斷的符合率。

使用生物色標(biāo)以標(biāo)記冷凍切面的方法不僅適用于乳腺癌切緣標(biāo)本，也適合于其他組織的冷凍標(biāo)本切面標(biāo)記，特別是甲狀腺微小乳頭狀癌的標(biāo)記。由于甲狀腺微小乳頭狀癌結(jié)節(jié)直徑小于10 mm[8]，如果用生物色標(biāo)標(biāo)記出結(jié)節(jié)所在的位置，可提醒技術(shù)員包埋時(shí)高度重視，注意包埋切面并仔細(xì)包埋平整，還有助于技術(shù)員切片時(shí)少修，以切到涂墨的結(jié)節(jié)為準(zhǔn)，防止過度修蠟把結(jié)節(jié)修沒了。應(yīng)用生物色標(biāo)進(jìn)行標(biāo)記時(shí)需注意以下幾點(diǎn)：(1)在涂抹生物色標(biāo)的時(shí)候要均勻，并且需要其稍微干燥后再進(jìn)行下一步操作，避免卸樣本頭時(shí)由于OCT包埋劑的融化導(dǎo)致生物色標(biāo)浸染到標(biāo)本冷凍切面的反面而影響實(shí)驗(yàn)。(2)若冷凍切緣中存在較小的癌結(jié)節(jié)或具有診斷意義的小病灶，標(biāo)記切緣時(shí)對該區(qū)域進(jìn)行準(zhǔn)確、重點(diǎn)地涂墨，這樣在石蠟包埋及石蠟切片時(shí)都能為技術(shù)員提供必要的提醒作用，從而保護(hù)了組織的重點(diǎn)部位，防止造成同一標(biāo)本冷凍與石蠟切片前后診斷不一致的醫(yī)療差錯(cuò)。

綜上所述，術(shù)中冷凍制片后使用生物色標(biāo)涂墨以標(biāo)記冷凍切面的方法在乳腺癌切緣標(biāo)本等較小組織的冰余石蠟制片中起到較好的提醒效果，提高了冰余石蠟制片質(zhì)量，為提高病理診斷的準(zhǔn)確率提供了重要依據(jù)。