藏黨參提取物對(duì)酵母膏聯(lián)合氧嗪酸鉀致高尿酸血癥小鼠的保護(hù)作用研究*

袁瑞瑛，普 珍，王敏竹，范成德，李 斌，卓瑪東智，王聚樂

（1.西藏大學(xué)，西藏 拉薩 850012；2.武漢大學(xué)，湖北 武漢 430072；3.青島科技大學(xué)，山東 青島 266042）

人體嘌呤代謝失調(diào)導(dǎo)致尿酸過量生成，或由于尿酸排泄受到抑制，可引起血清尿酸含量急劇升高。當(dāng)男性血尿酸濃度超過417 μmol/L，女性超過357 μmol/L時(shí)，則被認(rèn)定為高尿酸血癥（hyperuricemia，HUA）[1]。流行病學(xué)研究表明，HUA發(fā)病率逐年上升，并伴隨糖尿病、高脂血癥、原發(fā)性高血壓及心血管疾病等慢性疾病的發(fā)生，已成為嚴(yán)重危害社會(huì)居民健康的代謝性疾病之一[2-4]。目前，治療HUA的藥物多為西藥，如別嘌醇、丙磺舒和苯溴馬隆，但長(zhǎng)期服用副作用較大，血尿酸水平易反彈，甚至損傷肝臟、腎臟等器官[5-6]。近年來，傳統(tǒng)藥物因藥效溫和、多成分、多靶點(diǎn)、多途徑作用等特點(diǎn)，廣泛受到國(guó)內(nèi)外學(xué)者的重視，已成為開發(fā)治療HUA新藥的主要來源之一[7]。

藏黨參為桔梗科植物長(zhǎng)花黨參[Codonopsis thalictrifolia Wall.var.mollis(Chipp.)L.T.Shen]的全草，藏藥名為羅堆多吉、魯堆多吉。藏黨參生長(zhǎng)于我國(guó)西藏南部及中部，具有干黃水、消腫之功效，在當(dāng)?shù)爻Ｓ糜谥委燂L(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、神經(jīng)痛、神經(jīng)麻痹等病癥[8-11]。孫杰等[12]研究發(fā)現(xiàn)，在體外實(shí)驗(yàn)中藏黨參提取物及其單體成分均有抑制黃嘌呤氧化酶（XOD）的作用，并表現(xiàn)出良好的量效關(guān)系，表明藏黨參具有降血尿酸的作用，其機(jī)制可能為抑制嘌呤核苷酸代謝。然而，目前筆者未見有關(guān)于藏黨參體內(nèi)抗高尿酸的研究，因此本實(shí)驗(yàn)通過建立酵母膏聯(lián)合氧嗪酸鉀誘導(dǎo)的高尿酸血癥小鼠模型，進(jìn)一步評(píng)估藏黨參提取物的降尿酸作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物4周齡SPF級(jí)雄性昆明種小鼠60只，體質(zhì)量18～20 g，購(gòu)于湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（鄂）2015-0018，飼養(yǎng)于武漢大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（鄂）2019-0013。將小鼠飼養(yǎng)于清潔級(jí)動(dòng)物房，室溫控制在（22±2）℃，相對(duì)濕度為50%～70%，12 h/12 h光照晝夜循環(huán)，所有小鼠均自由攝食與飲水。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，觀察小鼠身體狀況良好，行為正常。所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作均符合國(guó)家《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例》，并經(jīng)武漢大學(xué)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理與使用委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 藥物與試劑 藏黨參采集于西藏林芝地區(qū)，經(jīng)西藏大學(xué)王聚樂教授鑒定為正品。將干燥的藏黨參地上部分進(jìn)行粉碎，與70%乙醇按質(zhì)量比1∶20混合后加熱至微沸，回流提取2 h，過濾；濾渣與70%乙醇按照相同比例繼續(xù)提取2 h。合并兩次濾液，減壓濃縮至浸膏，置于烘箱中烘干至粉末，得率為19.5%，用蒸餾水溶解，得不同濃度的藏黨參提取物。

氧嗪酸鉀（批號(hào)：20190427，純度≥98%）購(gòu)于合肥博美生物科技有限責(zé)任公司；別嘌醇片（批號(hào)：20190101）購(gòu)于廣東彼迪藥業(yè)有限公司；酵母膏（批號(hào)：20190318，純度≥98%）購(gòu)于北京奧博星生物技術(shù)責(zé)任有限公司；尿酸檢測(cè)試劑盒（UA）（批號(hào)：20191023）、肌酐檢測(cè)試劑盒（Cr）（批號(hào)：20191023）、尿素氮檢測(cè)試劑盒（UN）（批號(hào)：20191023）、黃嘌呤氧化酶檢測(cè)試劑盒（XOD）（批號(hào)：20191117）、谷草轉(zhuǎn)氨酶檢測(cè)試劑盒（AST）（批號(hào)：20191117）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶檢測(cè)試劑盒（ALT）（批號(hào)：20191117）均購(gòu)于南京建成生物工程研究所；Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒（批號(hào)：20210609）、RIPA裂解液（批號(hào)：20200917）均購(gòu)于北京索萊寶生物科技有限公司；葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白9兔單克隆抗體（GLUT9）（批號(hào)：GR3189763-16）購(gòu)于美國(guó)Abcam公司；有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白3小鼠單克隆抗體（OAT3）（批號(hào)：A0719）購(gòu)于美國(guó)Santa Cruz公司；尿酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1兔單克隆抗體（URAT1）（批號(hào)：16i9411）、有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1兔單克隆抗體（OAT1）（批號(hào)：DF8582）、辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG二抗（批號(hào)：4358j982）、山羊抗兔IgG二抗（批號(hào)：7573s21）均購(gòu)于美國(guó)Affinity公司；其余試劑均為分析純。

1.3 主要儀器AS110R2型分析天平（波蘭Radwag公司）；ELX800型多功能酶標(biāo)儀（美國(guó)Bio-Tek公司）；Mini P-4型小型垂直電泳系統(tǒng)（北京凱元信瑞儀器有限公司）；Tanon-4600型化學(xué)發(fā)光成像儀（上海天能科技有限公司）；TDZ5-WS型冷凍離心機(jī)（湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司）。

1.4 造模與分組 將60只小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為空白組、模型組、藏黨參提取物低劑量組、藏黨參提取物中劑量組、藏黨參提取物高劑量組、別嘌醇組，每組10只。除空白組外，其余小鼠每日08∶00∶00灌胃給予酵母膏（30 g/kg），15∶00∶00灌胃給藥，持續(xù)14 d。末次給藥后，取24 h尿液，后禁食12 h，測(cè)量小鼠體質(zhì)量，腹腔注射氧嗪酸鉀（300 mg/kg），間隔1 h后摘眼球取血并脫頸處死。

1.5 實(shí)驗(yàn)給藥 依據(jù)《部頒藏藥標(biāo)準(zhǔn)》中藏黨參臨床劑量3 g/d為低劑量組，中、高劑量以此加倍，通過人鼠劑量換算公式“小鼠劑量（g/kg）=人體用量（g）/70 kg×9.1”計(jì)算得每天藏黨參提取物低劑量為76 mg/kg（相當(dāng)于生藥量390 mg/kg），中劑量為152 mg/kg，高劑量為304 mg/kg，別嘌醇劑量為5 mg/kg（相當(dāng)于人38.46mg/kg），造模與給藥同時(shí)進(jìn)行，1次/d，持續(xù)14d。

1.6 觀察指標(biāo)

1.6.1 臟器指數(shù)、血清與尿液指標(biāo)測(cè)定 將小鼠摘眼球取血，收集的血樣靜置30 min后，在4℃下3 500 r/min離心15 min，分離血清，試劑盒檢測(cè)血清中尿酸含量，模型組大鼠血清尿酸水平明顯高于空白組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），即為造模成功[13]。解剖小鼠，取肝臟、腎臟樣本，生理鹽水洗凈，濾紙吸干稱肝臟與腎臟質(zhì)量，計(jì)算臟器指數(shù)（臟器指數(shù)=臟器質(zhì)量/體質(zhì)量×100%）；試劑盒測(cè)定血尿酸（SUA）、血肌酐（SCr）、血尿素氮（BUN）、尿尿酸（UUA）、尿肌酐（UCr）、尿尿素氮（UUN）及血清中AST、ALT、XOD水平，并測(cè)定尿酸排泄分?jǐn)?shù)（FEUA）。FEUA=[（尿尿酸×血肌酐）/（血尿酸×尿肌酐）]×100%。肝臟XOD活性測(cè)定：取小鼠肝臟，在冰水浴中制成10%肝組織勻漿（組織質(zhì)量與生理鹽水體積比為1∶9），離心收集上清液，按試劑盒說明書測(cè)定肝臟XOD活性。

1.6.2 尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白表達(dá)測(cè)定 取各組小鼠腎臟部位，并將其剪碎，按每100 mg組織加入1 mL裂解液（RIPA裂解液與PMSF按體積比100∶1配制），研磨成勻漿，于冰上裂解30 min，4℃下15 000 r/min離心20 min，取上清液，用BCA法進(jìn)行蛋白定量，按上樣量計(jì)算，加入4倍上樣緩沖液，混勻，金屬浴95℃加熱5 min。定量后的蛋白樣品上樣40 μg，10% SDS-PAGE分離膠電泳分離，電泳結(jié)束后轉(zhuǎn)膜，將膠上蛋白轉(zhuǎn)至PVDF膜，室溫下封閉于5%脫脂奶粉封閉液中2 h。孵育相關(guān)一抗（1∶1 000）2 h，再以HRP標(biāo)記相應(yīng)二抗（1∶5 000）孵育1 h。ECL顯色后利用成像儀成像，使用軟件Image J_v1.8.0分析URAT1、GLUR9、OAT1、OAT3條帶灰度值。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 22.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料以“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”（±s）表示，經(jīng)正態(tài)性檢驗(yàn)和方差齊性分析，多組比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組小鼠肝臟指數(shù)、腎臟指數(shù)比較 與空白組比較，模型組小鼠肝臟指數(shù)明顯升高（P＜0.01）；與模型組比較，藏黨參提取物高劑量組和別嘌醇組小鼠肝臟指數(shù)均明顯降低（P＜0.05），且藏黨參提取物高劑量組小鼠肝臟指數(shù)與別嘌醇組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；藏黨參提取物低、中劑量組小鼠肝臟指數(shù)與模型組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。各組小鼠腎臟指數(shù)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。（見表1）

表1 各組小鼠肝臟指數(shù)、腎臟指數(shù)比較 （±s，%）

表1 各組小鼠肝臟指數(shù)、腎臟指數(shù)比較 （±s，%）

注：與空白組比較，aP＜0.05，bP＜0.01；與模型組比較，cP＜0.05；與別嘌醇組比較，eP＜0.05

組別 動(dòng)物數(shù)（只）給藥劑量（mg/kg）肝臟指數(shù) 腎臟指數(shù)空白組 10 - 3.41±0.10 0.96±0.06模型組 10 - 3.72±0.22b 1.01±0.07藏黨參提取物低劑量組10 76 3.62±0.21be 1.03±0.07藏黨參提取物中劑量組10 152 3.51±0.19a 1.03±0.09藏黨參提取物高劑量組10 304 3.42±0.21c 1.03±0.09別嘌醇組 10 5 3.40±0.27c 0.98±0.08 F 47.931 0.253 P 0.000 0.895

2.2 各組小鼠血清ALT、AST水平比較 與空白組比較，模型組小鼠血清中ALT、AST水平均明顯升高（P＜0.01）；與模型組比較，藏黨參提取物高劑量組和別嘌醇組小鼠血清中ALT、AST水平均明顯降低（P＜0.05或P＜0.01）；與模型組比較，藏黨參提取物中劑量組小鼠血清中AST水平明顯降低（P＜0.05），ALT水平與模型組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；藏黨參提取物低劑量組小鼠血清中ALT、AST水平與模型組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；藏黨參提取物高劑量組小鼠血清中ALT、AST水平與別嘌醇組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。（見表2）

表2 各組小鼠血清ALT、AST水平比較 （±s，U/L）

表2 各組小鼠血清ALT、AST水平比較 （±s，U/L）

注：與空白組比較，aP＜0.05，bP＜0.01；與模型組比較，cP＜0.05，dP＜0.01；與別嘌醇組比較，eP＜0.05

組別 動(dòng)物數(shù)（只）給藥劑量（mg/kg）ALT AST空白組 10 - 26.55±1.59 106.27±2.84模型組 10 - 34.23±1.53b 129.91±7.81b藏黨參提取物低劑量組10 76 34.60±1.76b e 129.96±5.15b e藏黨參提取物中劑量組10 152 32.76±0.99a 123.11±6.55a c藏黨參提取物高劑量組10 304 30.46±1.29a d 115.19±5.65a d別嘌醇組 10 5 31.49±1.76a d 119.45±3.62a c F 232.384 63.206 P 0.000 0.001

2.3 各組小鼠XOD活性比較 與空白組比較，模型組小鼠血清及肝臟中XOD活性均明顯升高（P＜0.01）；與模型組比較，藏黨參提取物中、高劑量組和別嘌醇組小鼠血清及肝臟中XOD活性均明顯降低（P＜0.01或P＜0.05）；藏黨參提取物低劑量組小鼠血清及肝臟中XOD活性與模型組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；藏黨參提取物高劑量組小鼠血清及肝臟中XOD活性與別嘌醇組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。（見表3）

表3 各組小鼠XOD活性比較 （±s）

表3 各組小鼠XOD活性比較 （±s）

注：與空白組比較，aP＜0.05，bP＜0.01；與模型組比較，cP＜0.05，dP＜0.01；與別嘌醇組比較，eP＜0.05，fP＜0.01

組別 動(dòng)物數(shù)（只）給藥劑量（mg/kg）血清中XOD活性（U/L）肝臟中XOD活性（U/g）空白組 10 - 14.47±2.58 83.19±6.18模型組 10 - 29.49±3.03b 133.31±10.49b藏黨參提取物低劑量組 10 76 27.66±2.11b f 150.83±19.21b f藏黨參提取物中劑量組 10 152 24.19±2.41b c e 109.25±9.76b c e藏黨參提取物高劑量組 10 304 17.14±1.65d 100.63±8.62a d別嘌醇組 10 5 17.55±1.43d 94.34±7.27a d F 73.904 55.772 P 0.003 0.000

2.4 各組小鼠血液和尿液中尿酸、肌酐和尿素氮水平比較 與空白組比較，模型組小鼠SUA、SCr、BUN水平均明顯升高（P＜0.01），UUA、UCr、UUN水平均明顯降低（P＜0.01）；與模型組比較，別嘌醇組、藏黨參提取物高劑量組小鼠SUA、SCr、BUN水平均明顯降低（P＜0.01），UUA、UCr、UUN水平均明顯升高（P＜0.01）；與模型組比較，藏黨參提取物中劑量組小鼠UUA、UCr、UUN水平均明顯升高（P＜0.05），SUA水平明顯降低（P＜0.05）；藏黨參提取物高劑量組小鼠SUA、BUN、UCr和UUN水平與空白組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；藏黨參提取物低劑量組小鼠SUA、SCr、BUN、UUA、UCr、UUN水平與模型組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。（見表4）

表4 各組小鼠血液和尿液中尿酸、肌酐和尿素氮水平比較 （±s）

表4 各組小鼠血液和尿液中尿酸、肌酐和尿素氮水平比較 （±s）

注：與空白組比較，aP＜0.05，bP＜0.01；與模型組比較，cP＜0.05，dP＜0.01；與別嘌醇組比較，eP＜0.05，fP＜0.01

組別 動(dòng)物數(shù)（只） 給藥劑量（mg/kg）SUA（mmol/L）SCr（μmol/L）BUN（mmol/L）UUA（μmol/L） UCr（μmol/L）UUN（mmol/L）空白組 10 - 76.35±4.02 24.33±2.35 5.67±0.76 232.17±22.81 234.41±18.78 1 159.06±102.58模型組 10 - 132.87±10.8b 35.01±2.31b 9.54±1.35b 179.89±14.38b 198.04±19.94b 632.87±21.53b藏黨參提取物低劑量組 10 76 134.30±9.24bf 35.52±2.66bf 9.52±0.88bf 174.63±9.64bf 204.62±22.32bf 645.14±33.41bf藏黨參提取物中劑量組 10 152 115.83±12.7bce 33.69±2.61ae 8.14±0.76b 191.20±13.85ac 223.23±8.45ac 749.61±39.41bce藏黨參提取物高劑量組 10 304 91.40±9.78ad 26.66±3.22d 6.54±0.54ad 211.97±9.43d 251.17±26.78ade 969.83±46.89ade別嘌醇組 10 5 81.46±6.16ad 27.26±3.55ad 7.37±0.79ad 197.61±11.96ad 232.36±20.23d 861.03±77.83ad F 36.368 243.183 117.264 21.782 538.286 446.914 P 0.000 0.000 0.002 0.000 0.001 0.000

2.5 各組小鼠FEUA比較 與空白組比較，模型組小鼠FEUA值明顯降低（P＜0.01）；與模型組比較，別嘌醇組和藏黨參提取物高、中劑量組小鼠FEUA值均明顯升高（P＜0.05或P＜0.01）；藏黨參提取物低劑量組小鼠FEUA值與模型組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。（見表5）

表5 各組小鼠FEUA比較 （±s，%）

表5 各組小鼠FEUA比較 （±s，%）

注：與空白組比較，aP＜0.05，bP＜0.01；與模型組比較，cP＜0.05，dP＜0.01；與別嘌醇組比較，eP＜0.05，fP＜0.01

組別 動(dòng)物數(shù)（只）給藥劑量（mg/kg）FEUA空白組 10 - 31.56±2.41模型組 10 - 23.93±3.14b藏黨參提取物低劑量組10 76 22.57±2.17bf藏黨參提取物中劑量組10 152 27.25±2.21a c藏黨參提取物高劑量組10 304 32.61±2.06d別嘌醇組 10 5 28.46±2.71a d F 275.194 P 0.000

2.6 各組小鼠尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白表達(dá)比較 與空白組比較，模型組小鼠腎臟尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白表達(dá)異常，其中URAT1和GLUT9蛋白表達(dá)均明顯升高（P＜0.01），而OAT1、OAT3蛋白表達(dá)均明顯降低（P＜0.01或P＜0.05）；與模型組比較，藏黨參提取物中劑量組URAT1和GLUT9蛋白表達(dá)水平均明顯降低（P＜0.01或P＜0.05），OAT1和OAT3蛋白表達(dá)水平均明顯升高（P＜0.01或P＜0.05）；與模型組比較，藏黨參提取物高劑量組與別嘌醇組URAT1、GLUT9、OAT1和OAT蛋白表達(dá)均有明顯改善（P＜0.01）；藏黨參提取物低劑量組OAT3蛋白表達(dá)高于模型組（P＜0.05），URAT1、GLUT9、OAT1蛋白表達(dá)與模型組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。（見圖1、表6）

圖1 各組小鼠尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白表達(dá)的Westem blotting圖

表6 各組小鼠尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白相對(duì)表達(dá)量比較 （±s，%）

表6 各組小鼠尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白相對(duì)表達(dá)量比較 （±s，%）

注：與空白組比較，aP＜0.05，bP＜0.01；與模型組比較，cP＜0.05，dP＜0.01；與別嘌醇組比較，eP＜0.05，fP＜0.01

組別 動(dòng)物數(shù)（只）給藥劑量（mg/kg）URAT1 GLUR9 OAT1 OAT3空白組 10 - 100.00±4.59 100.00±8.71 100.00±6.23 100.00±5.83模型組 10 - 226.81±14.92b 183.28±10.66b 43.81±8.71b 73.44±10.57a藏黨參提取物低劑量組10 76 237.91±10.89bf 197.67±15.24bf 51.27±8.29be 83.22±8.55c藏黨參提取物中劑量組10 152 89.29±6.88d 147.39±8.77bce 119.29±9.44d 94.38±6.63c藏黨參提取物高劑量組10 304 81.48±6.78d 135.75±6.29ade 96.38±6.39d 115.93±7.63d別嘌醇組 10 5 93.29±7.91d 90.19±7.28d 93.88±6.72d 105.29±6.55d F 362.292 16.532 58.394 374.776 P 0.000 0.002 0.000 0.000

3 討 論

根據(jù)發(fā)病機(jī)制的不同，高尿酸血癥可分為原發(fā)性高尿酸血癥和繼發(fā)性高尿酸血癥，前者屬于遺傳性疾病，后者可由多種因素引起（如腎功能異常和藥物過度刺激等）[14-15]。目前，越來越多的證據(jù)顯示，飲食結(jié)構(gòu)的改變大大增加了高尿酸血癥的發(fā)病率，并呈現(xiàn)低齡化趨勢(shì)[16-17]。如畜肉類、水產(chǎn)品和豆類等富含嘌呤類食物的高攝入，大大增加了尿酸在體內(nèi)的代謝生成，從而加重腎臟的排泄負(fù)擔(dān)甚至誘發(fā)腎臟損傷[18]。酵母膏作為尿酸前體物質(zhì)，可增加體內(nèi)尿酸生成；此方法模擬人們?nèi)粘ｏ嬍持械泥堰矢邤z入，而同時(shí)氧嗪酸鉀作為尿酸酶抑制劑，能有效阻止尿酸的排泄，從而在體內(nèi)建立高尿酸環(huán)境。因此，本實(shí)驗(yàn)采用酵母膏聯(lián)合氧嗪酸鉀誘導(dǎo)小鼠高尿酸血癥模型。此方法操作簡(jiǎn)便，成功率高、穩(wěn)定性好，已廣泛適用于抗高尿酸血癥的藥物篩選評(píng)價(jià)及機(jī)制研究[19]。

腎臟是機(jī)體排泄的主要器官，體內(nèi)約2/3的游離尿酸由腎臟排泄。而一旦腎臟功能出現(xiàn)異常，則會(huì)引起肌酐清除率和濾過功能下降；尿酸排泄率隨之下降，易導(dǎo)致HUA的發(fā)生[20]。SUA水平是評(píng)估高尿酸血癥最直接的指標(biāo)[21]。本實(shí)驗(yàn)中，與空白組比較，模型組小鼠SUA水平大幅升高，UUA水平明顯降低，這說明酵母膏聯(lián)合氧嗪酸鉀誘導(dǎo)小鼠高尿酸血癥模型建立成功。同時(shí)，肌酐及尿素氮水平也是評(píng)價(jià)腎臟濾過功能的主要指標(biāo)。模型組小鼠SCr及BUN水平明顯升高，且UCr和UUN水平明顯降低，這說明酵母膏與氧嗪酸鉀的聯(lián)合誘導(dǎo)致使腎臟功能異常。而實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，藏黨參提取物能以劑量依賴性的方式有效恢復(fù)血液及尿液中尿酸、肌酐及尿素氮含量至正常水平。

肝臟為嘌呤核苷酸合成反應(yīng)的主要器官。XOD為嘌呤代謝的限速酶，是調(diào)控尿酸必不可少的環(huán)節(jié)之一。黃嘌呤與次黃嘌呤經(jīng)過XOD的二次氧化進(jìn)而生成尿酸，呈現(xiàn)高尿酸血癥的癥狀，其活性檢測(cè)可反映尿酸的生成狀況[22]。與空白組比較，模型組小鼠肝臟XOD活性明顯升高，而藏黨參提取物顯著抑制了XOD活性，這與孫杰等[12]研究一致，即藏黨參提取物成分中可能含有XOD的抑制劑，通過抑制XOD的活性而減少嘌呤的代謝及尿酸的生成，最終改善高尿酸血癥。ALT與AST是評(píng)估肝臟損傷的重要指標(biāo)。肝細(xì)胞受到損傷，胞質(zhì)中的AST與ALT進(jìn)入血液，引起血液中含量增加[23]，而藏黨參提取物有效降低了血清中ALT與AST水平；另外，與空白組比較，模型組小鼠肝臟指數(shù)明顯升高，表明其肝臟可能由于代謝大量嘌呤產(chǎn)物而受到損傷，從而引起肝臟水腫，因此肝臟指數(shù)上升。結(jié)合以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，藏黨參對(duì)酵母膏聯(lián)合氧嗪酸鉀引起的肝臟損傷具有一定的保護(hù)作用。

除了評(píng)價(jià)藏黨參提取物降血尿酸水平和抑制XOD活性的作用，本研究還探討了其對(duì)腎臟尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)體的影響。腎臟中的多種尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)體共同維持著尿酸水平的動(dòng)態(tài)平衡[24-25]。URAT1作為尿酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)的主要蛋白之一，其功能主要為介導(dǎo)尿酸與近曲小管上皮細(xì)胞內(nèi)無機(jī)陰離子和有機(jī)陰離子的交換，從而將尿酸從管腔內(nèi)重吸收入細(xì)胞[26]。GLUT9是葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族的一員，其功能是將吸收到腎小球上皮細(xì)胞的尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)到腎間質(zhì)，參與近曲小管頂膜尿酸鹽的再吸收[27]。OAT1和OAT3是重要的尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)體[28]，其表達(dá)主要分布于腎臟。如OAT1和OAT3以α-酮戊二酸作為腎臟的交換底物，將有機(jī)陰離子和藥物泵入細(xì)胞，而OAT1主要介導(dǎo)尿酸的轉(zhuǎn)運(yùn)。OAT3的主要功能是通過基膜將有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)到近曲小管上皮細(xì)胞，并排泄到尿液中[29]。URAT1、GLUT9、OAT1和OAT3等轉(zhuǎn)運(yùn)體在腎臟共同介導(dǎo)尿酸鹽的轉(zhuǎn)運(yùn)，維持體內(nèi)尿酸水平的穩(wěn)定[30]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，模型組小鼠URAT1和GLUT9蛋白表達(dá)明顯升高，而OAT1和OAT3的蛋白表達(dá)明顯降低。藏黨參提取物能有效恢復(fù)上述轉(zhuǎn)運(yùn)體的表達(dá)水平，進(jìn)而調(diào)節(jié)血液中尿酸的水平，促進(jìn)尿酸排泄。

綜上所述，藏黨參提取物可有效改善HUA小鼠的高血尿酸水平，而潛在機(jī)制或許不僅僅是通過抑制肝臟XOD的活性，同時(shí)也可能通過恢復(fù)相關(guān)尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)體表達(dá)異常而起到保護(hù)作用。因此，藏黨參作為一種預(yù)防和治療高尿酸血癥的傳統(tǒng)藥物，具有進(jìn)一步研究與開發(fā)的價(jià)值。然而，本研究在藥物研究層面與深度上仍然有限，關(guān)于藏黨參的活性成分和具體分子機(jī)制還需要進(jìn)一步的研究與探討。