黃連解毒湯對急性鼻竇炎模型大鼠鼻竇黏膜MAPK/NF-κB信號通路的影響

徐輝聰，鐘零珠，梁衛(wèi)勤，王少軍

（?？谑械谌嗣襻t(yī)院，海南 ?？?571100）

急性鼻竇炎（acute rhinosinusitis，ARS）是鼻旁竇和鼻腔的一種急性炎癥，主要表現(xiàn)為少于12周的膿性鼻腔引流，且伴有鼻塞，嗅覺喪失，和/或面部疼痛/壓力/充盈[1]。ARS是耳鼻喉科門診最常見的疾病之一，也是使用抗生素的最常見原因之一。研究[2]表明，ARS的細菌感染發(fā)生率在0.5%～2%之間。臨床上，ARS的鼻黏膜炎癥反應包括液體滲出、黏液分泌過多、水腫和黏膜破裂。ARS的炎癥級聯(lián)包括與Ⅰ型炎癥相關的細胞因子，如TNF-α、TNF-β、干擾素-γ、IL-1β、IL-6，它們與疾病的病理過程和結局有關[3]。最近的研究[4]顯示，絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）/核因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）信號通路參與了許多炎癥性疾病的發(fā)病機制。有證據(jù)[5]表明，MAPK/NF-κB信號通路與慢性鼻竇炎TGF-β1誘導的鼻黏膜重塑的發(fā)病機制有關。然而，其在ARS中的作用仍不清楚。黃連解毒湯來源于《肘后備急方》，由黃連、黃柏、黃芩、梔子4種藥材組成，具有清熱解毒的功效。在臨床上黃連解毒湯被廣泛應用于敗血癥、炎癥性疾病的治療[6-7]。其抗炎作用可能與對多種蛋白靶點的作用有關[8-9]。但黃連解毒湯對ARS的治療作用及其機制尚不清楚。本研究以大鼠為研究對象，探討黃連解毒湯對ARS的影響及其對MAPK/NF-κB信號通路的調(diào)控作用，旨在為ARS臨床治療提供新思路。

1 材料與方法

1.1 實驗動物7～8周齡SPF級成年雄性SD大鼠69只，體質(zhì)量250～280 g，購于上海靈暢生物科技有限公司，動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（滬）2018-0003。大鼠均在SPF級動物房飼養(yǎng)，自由攝食及飲水，12 h光照/12 h黑暗，室溫24～26℃，相對濕度40%～70%。該研究經(jīng)本院醫(yī)學實驗動物管理委員會批準（倫理批準號：2019-013）。

1.2 藥物與試劑 克拉霉素分散片（批號：H19990375）購自揚子江藥業(yè)集團有限公司；桉檸蒎腸溶軟膠囊（批號：H20052401）購自北京九和藥業(yè)有限公司；玉米胚芽油購自山東玉膳房食品有限公司；肺炎鏈球菌（批號：49619）購自上海碩欣生物科技有限公司；蘇木精-伊紅（HE）染色試劑盒（批號：ME9200-200T）購自上海邁基生物技術有限公司；TNF-α ELISA檢測試劑盒（批號：JN4759）、IL-6 ELISA檢測試劑盒（批號：JN3398）均購自上海紀寧生物公司；Trizol（批號：15596026）購自美國Invitrogen公司；cDNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒（批號：PR036A）、SYBR Green I PCR試劑盒（批號：DRR420A）購自日本TaKaRa公司；TNF-α一抗（批號：ab215188）、IL-6一抗（批號：ab259341）、C-Jun N末端激酶（C-Jun N-terminal kinase，JNK）一抗（批號：ab225572）、p-JNK一抗（批號：ab219584）、細胞外信號調(diào)節(jié)激酶（extracellular signal-regulated kinase，ERK1/2）一抗（批號：ab184699）、p-ERK1/2一抗（批號：ab201015）、p38一抗（批號：ab170099）、p-p38一抗（批號：ab195049）、NF-κB p65一抗（批號：ab32536）、p-NF-κB 65一抗（批號：ab76302）、GAPDH一抗（批號：ab9485）、與辣根過氧化物酶結合的二抗（批號：ab6728）均購自美國Abcam公司。

1.3 主要儀器NanoDrop 2000/2000C型NanoDrop（美國Thermo Fisher公司）；Prism7500型ABI 7500 PCR儀（美國應用生物系統(tǒng)公司）。

1.4 造模與分組69只大鼠隨機選取10只作為空白對照組，其余59只建立急性鼻-鼻竇炎模型。造模方法如下：將肺炎鏈球菌在血瓊脂平板上培養(yǎng)，在注射大鼠之前將肺炎鏈球菌菌落懸浮在無菌的生理鹽水中。根據(jù)WU T等[10]提供的方法建立大鼠急性鼻-鼻竇炎模型：腹腔注射10%水合氯醛溶液，標準注射劑量為3～4 mL/kg，膨脹海綿填塞大鼠雙側(cè)鼻腔，將小滴的細菌溶液經(jīng)鼻腔給藥，持續(xù)7 d。7 d后使用大鼠鼻竇炎癥狀評分對模型大鼠進行檢測：鼻竇炎癥狀評分＞7分則認為造模成功。共成功建模50只，造模成功率為84.75%（50/59）。

造模成功后，將50只模型大鼠按隨機數(shù)字表法分為模型組、黃連解毒湯低劑量組、黃連解毒湯中劑量組、黃連解毒湯高劑量組和陽性對照組，每組10只。

1.5 實驗給藥 根據(jù)劉書芹等[11]的方法制備黃連解毒湯：取黃連、黃芩、黃柏、梔子各10 g，加入10倍量的水煮沸1.5 h后過濾；藥渣加10倍量的水煮沸1 h后過濾；合并兩次過濾后的藥液，繼續(xù)煮沸并蒸干濃縮至300 mL。黃連解毒湯低、中、高劑量組分別以生藥量5、10、20 g/kg鼻腔灌洗[11]；克拉霉素分散片研磨成粉末后溶入生理鹽水后進行超聲并以78 mg/kg的劑量鼻腔灌洗，桉檸蒎腸溶軟膠囊和玉米胚芽油以1∶2的質(zhì)量比混合后以138 mg/kg的劑量鼻腔灌洗[12]，模型組及空白對照組大鼠鼻腔灌洗等量的生理鹽水，1次/d，連續(xù)用藥7 d。各組大鼠采用頸椎脫臼法處死，取血、鼻竇黏膜和鼻腔灌洗液。

1.6 觀察指標

1.6.1 大鼠體征觀察及鼻竇炎癥狀評分 觀察并記錄各組大鼠在造模、給藥后的鼻部癥狀和體征，如鼻癢、流涕、噴嚏等，并根據(jù)表1進行評分[10]。

表1 ARS癥狀評分標準

1.6.2 樣本收集 水合氯醛麻醉大鼠，眶靜脈竇采血。然后以5 000 r/min離心5 min，收集血清，并在-20℃下保存，備用。手術中仔細解剖鼻竇黏膜，用10%中性緩沖福爾馬林固定，備用。

1.6.3 鼻腔灌洗液培養(yǎng)觀察肺炎鏈球菌生長情況 大鼠麻醉后鼻腔灌洗300 μL PBS。將回收的灌洗液稀釋100倍后，置于哥倫比亞綿羊血瓊脂板上。培養(yǎng)48 h，計數(shù)肺炎鏈球菌菌落數(shù)。菌落形成單位（CFU）用于估計菌落數(shù)量，并以各組大鼠每微升鼻竇灌洗液菌落形成單位進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計。

1.6.4 HE染色觀察大鼠鼻竇黏膜病理損傷 固定頭骨在Surgipath DecalcifierⅡ中脫鈣，并在PBS中洗滌3次。用乙醇和二甲苯在48℃下快速脫水，然后用低溫石蠟在真空壓力下浸潤。用切片機在5 μm處切開鼻腔，然后仔細解剖鼻竇黏膜并固定在玻片上。切片用蘇木精和伊紅染色。用計算機輔助光學顯微鏡結合重建和成像軟件對單個切片進行分析。

1.6.5 ELISA檢測血清中炎癥因子水平 根據(jù)說明書，使用特異性ELISA試劑盒檢測血清樣本中TNF-α和IL-6的水平。

1.6.6 qRT-PCR檢測鼻竇黏膜TNF-α mRNA、IL-6 mRNA水平 用Trizol試劑提取總RNA。然后根據(jù)說明書，使用NanoDrop檢測濃度，并采用cDNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒進行反轉(zhuǎn)錄。然后，用SYBR GreenⅠPCR試劑盒對獲得的cDNA進行qRT-PCR。qRT-PCR反應均在ABI PRISM 7500系統(tǒng)上進行。GAPDH作為內(nèi)參。使用2-ΔΔCt方法計算mRNA表達的相對定量，并歸一化至GAPDH。引物序列設計如下：TNF-α正向：5’-CAGCCTCTTCT CCTTCCTGA-3’，反向：5’-GGAAGACCCCTCCCAGATAGA-3’；IL-6正向：5’-GGCCCTTGCTTTCTCTTCG-3’，反向：5’-ATAAT AAAGTTTTGATTATGT-3’；GAPDH正向：5’-TGCACCACCAA CTGCTTAG-3’，反向：5’-GATGCAGGGATGATGTTC-3’。

1.6.7 Western blotting法 檢 測 鼻 竇 黏 膜TNF-α、IL-6及MAPK/NF-κB信號通路蛋白水平 提取鼻竇黏膜總蛋白，然后進行SDS-PAGE，電轉(zhuǎn)到PVDF膜上。用5%牛血清白蛋白或脫脂牛奶在室溫下封閉膜1.5 h，然后用TNF-α、IL-6、JNK、p-JNK、ERK1/2、p-ERK1/2、p38、p-p38、NF-κB p65、p-NF-κB p65或GAPDH一抗在4℃下孵育過夜。上述一抗按說明書稀釋至1∶1 000。用含0.1% Tween 20的緩沖鹽水（TBST）洗滌5次后，將二抗與辣根過氧化物酶結合在TBST中室溫孵育2 h。用增強的化學發(fā)光檢測系統(tǒng)檢測免疫反應條帶，用Image Lab軟件定量蛋白含量。

1.7 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 26.0軟件對數(shù)據(jù)進行分析。計量資料以“均數(shù)±標準差”（±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用Dunnett’s t檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 各組大鼠體征及鼻竇炎癥狀評分比較 空白對照組大鼠體征良好；模型組大鼠表現(xiàn)為撓鼻、流鼻涕、打噴嚏；黃連解毒湯低、中、高劑量組和陽性對照組大鼠流鼻涕、打噴嚏癥狀明顯改善，且黃連解毒湯高劑量組和陽性對照組的效果最好。給藥前，模型組、黃連解毒湯低劑量組、黃連解毒湯中劑量組、黃連解毒湯高劑量組和陽性對照組大鼠鼻竇炎癥狀評分均明顯高于空白對照組（P＜0.05）。給藥后，黃連解毒湯低劑量組、黃連解毒湯中劑量組、黃連解毒湯高劑量組和陽性對照組大鼠鼻竇炎癥狀評分均明顯低于給藥前（P＜0.05）；黃連解毒湯低劑量組、黃連解毒湯中劑量組、黃連解毒湯高劑量組和陽性對照組大鼠鼻竇炎癥狀評分均低于模型組（P＜0.05），黃連解毒湯具有劑量依賴性。黃連解毒湯高劑量組大鼠鼻竇炎癥狀評分與陽性對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。（見表2）

表2 各組大鼠鼻竇炎癥狀評分比較 （±s）

表2 各組大鼠鼻竇炎癥狀評分比較 （±s）

注：與空白對照組比較，aP＜0.05；與模型組比較，bP＜0.05；與黃連解毒湯低劑量組比較，cP＜0.05；與黃連解毒湯中劑量組比較，dP＜0.05

給藥劑量 鼻竇炎癥狀評分（分）黃連解毒湯（g/kg）克拉霉素分散片（mg/kg）桉檸蒎腸溶軟膠囊（mg/kg）給藥前 給藥后空白對照組 10 - - - 0.16±0.02 0.13±0.01模型組 10 - - - 7.51±0.39a 7.26±0.58a黃連解毒湯低劑量組 10 5 - - 7.46±0.38a 2.89±0.21a b黃連解毒湯中劑量組 10 10 - - 7.69±0.45a 2.51±0.18a bc黃連解毒湯高劑量組 10 20 - - 7.31±0.80a 2.13±0.17a bc d陽性對照組 10 - 78 138 7.54±0.63a 2.09±0.21a bc d組別 動物數(shù)（只）

2.2 各組大鼠鼻腔灌洗液細菌菌株比較 與空白對照組比較，模型組大鼠鼻腔灌洗液CFU值明顯升高（P＜0.05）；與模型組比較，黃連解毒湯低、中、高劑量組和陽性對照組大鼠鼻腔灌洗液CFU值均明顯降低（P＜0.05），且黃連解毒湯呈劑量依賴性。黃連解毒湯高劑量組大鼠鼻腔灌洗液CFU值與陽性對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。（見表3）

表3 各組大鼠鼻腔灌洗液細菌菌株比較 （±s）

表3 各組大鼠鼻腔灌洗液細菌菌株比較 （±s）

注：與空白對照組比較，aP＜0.05；與模型組比較，bP＜0.05；與黃連解毒湯低劑量組比較，cP＜0.05；與黃連解毒湯中劑量組比較，dP＜0.05

給藥劑量黃連解毒湯（g/kg）克拉霉素分散片（mg/kg）桉檸蒎腸溶軟膠囊（mg/kg）空白對照組 10 - - - 53.48±4.69模型組 10 - - - 2 348.63±235.27a黃連解毒湯低劑量組 10 5 - - 2 156.92±214.18ab黃連解毒湯中劑量組 10 10 - - 786.49±89.67ab c黃連解毒湯高劑量組 10 20 - - 493.21±65.83ab c d陽性對照組 10 - 78 138 456.38±52.24ab c d組別 動物數(shù)（只） CFU（μL）

2.3 各組大鼠鼻竇黏膜病理損傷情況 空白對照組大鼠未發(fā)現(xiàn)鼻竇黏膜炎癥簇；模型組大鼠鼻竇黏膜上皮纖毛脫落、炎癥細胞浸潤、腺體損傷、血管擴張、水腫，符合急性鼻竇炎病理表現(xiàn)；陽性對照組大鼠鼻竇黏膜上皮細胞排列整齊，鼻竇黏膜及黏膜下層炎癥細胞少量浸潤；黃連解毒湯低劑量組大鼠鼻竇黏膜部分上皮纖毛脫落、炎癥細胞浸潤、腺體損傷、血管擴張、水腫，但較模型組明顯減輕；黃連解毒湯中劑量組大鼠鼻竇黏膜及黏膜下層炎癥細胞浸潤減少，上皮細胞較為整齊，局部仍有血管擴張、水腫；黃連解毒湯高劑量組大鼠鼻竇黏膜上皮細胞排列整齊，鼻竇黏膜及黏膜下層炎癥細胞浸潤減少，病變程度明顯改善，同陽性對照組相似。（見圖1）

圖1 各組大鼠鼻竇黏膜病理損傷情況 （HE）

2.4 各組大鼠炎癥因子水平比較 模型組大鼠血清TNF-α、IL-6水平均明顯高于空白對照組（P＜0.05）；黃連解毒湯低、中、高劑量組和陽性對照組大鼠血清TNF-α、IL-6水平均明顯低于模型組（P＜0.05），且黃連解毒湯對血清TNF-α、IL-6的影響呈劑量依賴性；黃連解毒湯高劑量組大鼠血清TNF-α、IL-6水平與陽性對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。（見表4）

模型組大鼠鼻竇黏膜TNF-α、IL-6的mRNA及蛋白相對表達量均明顯高于空白對照組（P＜0.05）；黃連解毒湯低、中、高劑量組和陽性對照組大鼠鼻竇黏膜TNF-α、IL-6的mRNA及蛋白相對表達量均明顯低于模型組（P＜0.05）；黃連解毒湯對大鼠鼻竇黏膜TNF-α、IL-6的mRNA和蛋白表達的影響呈劑量依賴性；黃連解毒湯高劑量組大鼠鼻竇黏膜TNF-α、IL-6的mRNA及蛋白相對表達量與陽性對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。與血清TNF-α、IL-6結果趨勢一致。（見圖2、表4）

圖2 各組大鼠鼻竇黏膜TNF-α、IL-6表達Western blotting圖

表4 各組大鼠炎癥因子水平比較 （±s）

表4 各組大鼠炎癥因子水平比較 （±s）

注：與空白對照組比較，aP＜0.05；與模型組比較，bP＜0.05；與黃連解毒湯低劑量組比較，cP＜0.05；與黃連解毒湯中劑量組比較，dP＜0.05

給藥劑量 血清炎癥因子 鼻竇黏膜TNF-α mRNA、IL-6 mRNA鼻竇黏膜TNF-α、IL-6蛋白組別 動物數(shù)（只）黃連解毒湯 克拉霉素 桉檸蒎腸溶軟TNF-α IL-6 TNF-α mRNA IL-6 mRNA TNF-α蛋白 IL-6蛋白（g/kg） 分散片（mg/kg）膠囊（mg/kg） （pg/mL） （pg/mL）空白對照組 10 - - - 8.46±0.35 24.53±0.72 1.00±0.02 1.00±0.03 0.79±0.03 0.83±0.05模型組 10 - - - 29.38±3.69a 82.57±4.24a 7.65±0.87a 7.69±0.91a 1.84±0.22a 1.89±0.21a黃連解毒湯低劑量組 10 5 - - 25.85±3.46a b 78.36±3.48a b 6.78±0.75a b 6.68±0.89a b 1.61±0.19a b 1.63±0.22a b黃連解毒湯中劑量組 10 10 - - 21.23±2.34a b c 57.69±3.14a b c 5.93±0.64a b c 5.14±0.72a b c 1.38±0.21a b c 1.39±0.19a b c黃連解毒湯高劑量組 10 20 - - 15.42±1.25a b c d 32.43±2.6a b c d 3.05±0.31a b c d 3.23±0.38a b c d 1.16±0.15a b c d 1.18±0.17a b c d陽性對照組 10 - 78 138 13.48±1.09a b c d 30.56±2.13a b c d 2.89±0.27a b c d 3.04±0.29a b c d 1.12±0.13a b c d 1.16±0.15a b c d

2.5 各組大鼠鼻竇黏膜MAPK/NF-κB信號通路蛋白表達比較 與空白對照組比較，模型組大鼠鼻竇黏膜中p-JNK/JNK、p-ERK1/2/ERK1/2、p-p38/p38、p-NF-κB p65/NF-κB p65比值均明顯升高（P＜0.05）；與模型組比較，黃連解毒湯低、中、高劑量組和陽性對照組大鼠鼻竇黏膜中p-JNK/JNK、p-ERK1/2/ERK1/2、p-p38/p38、p-NF-κB p65/NF-κB p65比值均明顯降低（P＜0.05），且黃連解毒湯呈劑量依賴性；黃連解毒湯高劑量組大鼠鼻竇黏膜中p-JNK/JNK、p-ERK1/2/ERK1/2、p-p38/p38、p-NF-κB p65/NF-κB p65比值與陽性對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。（見圖3、表5）

圖3 各組大鼠鼻竇黏膜MAPK/NF-κB信號通路蛋白表達Western blotting圖

表5 各組大鼠鼻竇黏膜MAPK/NF-κB信號通路蛋白相對表達量比較（±s）

表5 各組大鼠鼻竇黏膜MAPK/NF-κB信號通路蛋白相對表達量比較（±s）

注：與空白對照組比較，aP＜0.05；與模型組比較，bP＜0.05；與黃連解毒湯低劑量組比較，cP＜0.05；與黃連解毒湯中劑量組比較，dP＜0.05

給藥劑量黃連解毒湯（g/kg）克拉霉素分散片（mg/kg）桉檸蒎腸溶軟膠囊（mg/kg）空白對照組 10 - - - 0.25±0.02 0.19±0.02 0.26±0.03 0.22±0.04模型組 10 - - - 1.23±0.15a 1.15±0.13a 1.33±0.10a 1.52±0.16a黃連解毒湯低劑量組 10 5 - - 0.89±0.09a b 0.96±0.10a b 0.98±0.11a b 0.83±0.09a b黃連解毒湯中劑量組 10 10 - - 0.72±0.08a b c 0.78±0.08a b c 0.74±0.05a b c 0.61±0.07a b c黃連解毒湯高劑量組 10 20 - - 0.58±0.05a b c d 0.67±0.08a b c d 0.59±0.08a b c d 0.43±0.06a b c d陽性對照組 10 - 78 138 0.55±0.07a b c d 0.65±0.06a b c d 0.53±0.06a b c d 0.49±0.06a b c d組別 動物數(shù)（只）p-JNK/JNK p-ERK1/2/ERK1/2 p-p38/p38 p-NF-κB p65/NF-κB p65

3 討 論

ARS是耳鼻喉科常見的炎癥性疾病。然而，ARS模型的建立非常困難，ARS動物模型的選擇有很長的發(fā)展歷史。BOMER K等[13]通過向小鼠鼻腔注射肺炎鏈球菌成功構建了鼻竇炎模型。此后，將肺炎鏈球菌吸入小鼠鼻腔已成為構建ARS模型的主流方法。一項研究表明，植入鼻海綿可誘導小鼠ARS模型，但炎癥反應比植入浸有金黃色葡萄球菌混懸液的鼻海綿要輕[14]。本研究發(fā)現(xiàn)將肺炎鏈球菌液體吸入膨脹海綿并填充大鼠鼻腔是誘發(fā)ARS的一種非常有效的方法。大鼠鼻竇黏膜和血清的提取比小鼠更容易。大鼠也比小鼠更強壯，在麻醉和建模過程中不容易死亡。當鼻腔被擴張海綿堵塞時，會阻礙通氣和引流，并且鼻腔滴加肺炎鏈球菌會加速急性鼻竇炎的發(fā)生發(fā)展，從而提高建模效率。因此，該方法取得了較好的效果。

細胞因子作為炎癥的關鍵調(diào)節(jié)因子，在ARS的病理過程中起著重要作用[15]。急性病毒性鼻炎中檢測到一系列上調(diào)的細胞因子，包括IL-1β、IL-6、IL-7、IL-17、IFN-γ、TNF-α、IL-8、G-CSF和GM-CSF11[16]。本研究結果表明，模型組大鼠血清中TNF-α和IL-6水平均明顯升高，這主要是Th1相關的細胞因子，符合ARS的發(fā)病機制。

黃連解毒湯除了在腫瘤[17]中發(fā)揮作用外，還具有明顯的抗炎、抗菌和抗內(nèi)毒素活性[7]，被廣泛用于敗血癥[6]、小兒高熱[18]等疾病的治療。黃連解毒湯在炎癥性疾病，如結腸炎[8]、肺炎[19]中表現(xiàn)出很強的抗炎作用。黃連解毒湯的抗炎作用與其干擾白細胞轉(zhuǎn)移的能力有關，這主要是由IL-6和TNF-α介導的。在本研究中，黃連解毒湯在鼻腔灌洗濃度達到20 g/kg時，能有效降低IL-6和TNF-α的釋放。黃連解毒湯可減輕ARS的炎癥狀態(tài)，從而減少細胞因子IL-6和TNF-α的大規(guī)模釋放。

雖然抗生素通常用于控制細菌源性急性呼吸道感染，但抗生素耐藥性是一個全球性問題，阻礙了細菌感染的治療。為了避免抗生素耐藥性，需開發(fā)非抗生素抗炎藥物治療細菌性炎癥。近年來，黃連解毒湯的抗炎作用引起了科學家們的廣泛關注。劉書芹等[11]發(fā)現(xiàn)黃連解毒湯可以改善鼻黏膜的炎癥反應。本研究發(fā)現(xiàn)，黃連解毒湯鼻腔灌洗能減少炎癥介質(zhì)的釋放，減少細菌菌落的形成。黃連解毒湯可以同時對抗炎癥介質(zhì)和抑制細菌生長，它的使用可能有助于解決抗生素濫用。

MAPK通路在機體炎癥中發(fā)揮重要作用。MAPK通路通過將應激信號從細胞表面?zhèn)鬟f到細胞核，從而引起特定的生物反應，并與細胞事件如增殖、衰老、分化和凋亡有關[20]。MAPK通路有4個主要分支，包括ERK、JNK、p38/MAPK和ERK5。每個MAPK信號通路都有相對獨立的功能。MAPK信號通路的一個重要作用是調(diào)節(jié)細胞對細胞外環(huán)境變化的反應。ERK途徑主要參與細胞的增殖和分化，而JNK途徑和p38MAPK途徑主要參與細胞的炎癥反應、應激反應和凋亡[21]。NF-κB是一種主要的轉(zhuǎn)錄因子，是有害細胞刺激的第一反應者，在調(diào)節(jié)炎癥和免疫反應中發(fā)揮重要作用。MAPK通路激活后誘導IκBα磷酸化和降解，使活性NF-κB進入細胞核，誘導促炎性細胞因子基因表達[4]。研究[5]表明，MAPK/NF-κB通路的阻滯有助于緩解慢性鼻竇炎中TGF-β1誘導的鼻黏膜重塑。黃連解毒湯可通過抑制MAPK通路降低脂多糖誘導的發(fā)熱大鼠體內(nèi)的炎癥因子，因此本研究將探討黃連解毒湯與MAPK/NF-κB通路在ARS中的相互作用機制。本研究發(fā)現(xiàn)，黃連解毒湯可通過抑制MAPK/NF-κB信號通路，引起炎癥細胞因子IL-6、TNF-α的釋放，黃連解毒湯對NF-κB p65的抑制作用與其在腦缺血模型中的作用一致。高濃度（20 g/kg）黃連解毒湯抑制作用最明顯。提示黃連解毒湯以劑量依賴的方式抑制MAPK/NF-κB通路，進而發(fā)揮其抗炎特性。

綜上所述，黃連解毒湯可以改善ARS的炎癥狀態(tài)，對大鼠鼻竇黏膜具有劑量依賴的保護作用。這一結果提示了ARS的進一步治療方式，并為預防抗生素濫用提供了新的建議。黃連解毒湯對ARS大鼠鼻竇黏膜的保護作用可能與抑制MAPK/NF-κB信號通路的激活，以劑量依賴的方式下調(diào)炎癥因子的基因轉(zhuǎn)錄，從而減少炎癥因子的產(chǎn)生有關。