馮曉林

不同種植條件與不同干燥方法對(duì)苦玄參各部位苦玄參苷IA和IB的影響

馮曉林

（廣西梧州制藥（集團(tuán)）股份有限公司，廣西 梧州 543000）

目的：研究不同種植條件及不同干燥方法對(duì)苦玄參不同部位苦玄參苷IA、IB含量的影響。方法：采用高效液相色譜法測(cè)定各樣品中苦玄參苷IA、IB的含量。結(jié)果：覆膜與不覆膜管理對(duì)不同部位苦玄參苷IA、IB有不同的影響，而施肥有利于苦玄參苷IA、IB的累積。不同干燥方法考察中，苦玄參苷IA、IB的含量從高到低均為葉＞全草＞果；對(duì)于苦玄參葉部位，沸水燙后60℃烘干苦玄參苷IA含量最高，50 ℃烘干苦玄參苷IB含量最高；100 ℃快速干燥和60 ℃干燥比較中，葉片中苦玄參苷IA含量大小為100℃＞60℃，而苦玄參苷IB含量相差不大。結(jié)論：種植過(guò)程可采取定期施肥管理；苦玄參不同部位中苦玄參苷IA、IB含量不同，葉片中苦玄參苷IA、IB含量最高，且高溫干燥有利于葉中苦玄參苷IA的保留。

種植條件；干燥方法；不同部位；苦玄參苷IA；苦玄參苷IB；含量測(cè)定

引言

本品為玄參科植物苦玄參（Lour）的干燥全草，系玄參科苦玄參屬唯一一種植物，為一年生草本[1]?？嘈⑿院?，味苦，能入肺、胃經(jīng)，苦玄參苷IA、苦玄參苷IB作為苦玄參藥材主要活性成分，其含量高低是評(píng)價(jià)藥材質(zhì)量的重要指標(biāo)。苦玄參具清熱涼血、解熱瀉火、解毒滋陰、消腫止痛等功效，可用于咽喉腫痛、鼻咽干燥、痄腮、胃熱腹痛、毒蛇咬傷等癥[2,3]。現(xiàn)有含苦玄參藥材的中成藥制劑有婦炎凈膠囊、炎見(jiàn)寧片、清肺散結(jié)丸等，臨床療效反映較好[4,5]?？嘈⒃谖覈?guó)主要分布于廣東、廣西和云南南部，在廣西民間應(yīng)用已經(jīng)有二百多年的歷史[6]，是廣西常用中藥。近年來(lái)，關(guān)于苦玄參的研究多集中在有效成分動(dòng)態(tài)積累以及化學(xué)成分的分離提取，而對(duì)藥材種植方式、干燥方法研究相對(duì)較少[7-13]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)考查不同種植條件與不同干燥方法對(duì)苦玄參不同部位苦中玄參苷IA、IB含量的影響，為保證臨床使用療效、確定苦玄參較優(yōu)的種植條件與干燥方法提供研究思路。

1　材料

1.1　試藥

苦玄參苷IA對(duì)照品（廠家：中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：111745-200501）、苦玄參苷IB對(duì)照品（批號(hào)：K-016-170426）；甲醇（廠家：西隴科學(xué)股份有限公司，批號(hào)：180701，純度：分析純）；乙腈（廠家：北京迪馬科技有限公司，批號(hào)：R141579，純度：色譜純）。苦玄參藥材采自廣西壯族自治區(qū)蒼梧縣嶺腳鎮(zhèn)武烈村苦玄參種植基地。

1.2　儀器

Thermo U3000高效液相色譜儀（賽默飛世爾科技有限公司），XPE204電子分析天平（梅特勒-托利多（上海）有限公司），HH-ZK8恒溫水浴鍋（鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司），F(xiàn)W80粉碎機(jī)（天津泰斯特儀器有限公司），GZX-9140MBE鼓風(fēng)干燥箱（上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠），HNY-500型超聲波清洗器（廣州市華南超聲設(shè)備有限公司）。

2　方法與結(jié)果

2.1　種植方式

于種植基地分別選取5個(gè)不同地塊，進(jìn)行施肥與未施肥、覆膜與不覆膜管理，種植方式詳見(jiàn)表1。于不同地塊分別隨機(jī)采收適量苦玄參藥材，取部分樣品將莖、葉、果分開(kāi)，保存待用，剩余樣品全草保存待用。

表1 不同地塊種植方式

2.2　干燥方法

2.2.150℃烘干

取新鮮苦玄參藥材莖、葉、果及全草置不同托盤內(nèi)，剪成2 cm的長(zhǎng)段，于50℃烘箱中進(jìn)行干燥，干燥過(guò)程中上下翻動(dòng)以促進(jìn)藥材烘干，干燥時(shí)長(zhǎng)約為13 h，各部位及全草分別用密封袋包裝，保存待用。

2.2.260℃烘干

取新鮮苦玄參藥材莖、葉、果及全草置不同托盤內(nèi)，剪成2 cm的長(zhǎng)段，于60℃烘箱中進(jìn)行干燥，干燥過(guò)程中上下翻動(dòng)以促進(jìn)藥材烘干，干燥時(shí)長(zhǎng)約為12 h，各部位及全草分別用密封袋包裝，保存待用。

2.2.370℃烘干

取新鮮苦玄參藥材莖、葉、果及全草置不同托盤內(nèi)，剪成2 cm的長(zhǎng)段，于70℃烘箱中進(jìn)行干燥，干燥過(guò)程中上下翻動(dòng)以促進(jìn)藥材烘干，干燥時(shí)長(zhǎng)約為5.5 h，各部位及全草分別用密封袋包裝，保存待用。

2.2.4自然曬干

取新鮮苦玄參藥材莖、葉、果及全草，剪成2 cm的長(zhǎng)段，平鋪于樓頂上進(jìn)行曬干，干燥過(guò)程中上下翻動(dòng)以促進(jìn)藥材干燥，干燥時(shí)長(zhǎng)約為21.5 h，各部位及全草分別用密封袋包裝，保存待用。

2.2.5自然陰干

取新鮮苦玄參藥材莖、葉、果及全草，剪成2 cm的長(zhǎng)段，置實(shí)驗(yàn)室內(nèi)陰涼通風(fēng)處陰干，干燥過(guò)程中上下翻動(dòng)以促進(jìn)藥材干燥，干燥時(shí)長(zhǎng)約為15 d，各部位及全草分別用密封袋包裝，保存待用。

2.2.6沸水燙后60℃烘干

取新鮮苦玄參莖、葉、果、及全草，在沸水中燙約2 min，撈起后瀝干水分，剪成2 cm的長(zhǎng)段，置于托盤內(nèi)，在60℃烘箱中進(jìn)行干燥，干燥時(shí)長(zhǎng)約為11.5 h，各部位及全草分別用密封袋包裝，保存待用。

2.2.760℃烘干和100℃快速干燥

將新鮮苦玄參藥材莖、葉、果及全草均分為2份并置托盤內(nèi)，分別置60℃烘箱干燥4 h和置100℃烘箱快速干燥1 h，各部位及全草分別用密封袋包裝，保存待用。

2.3　苦玄參苷IA、IB的含量測(cè)定

2.3.1 對(duì)照品溶液的制備

分別精密稱取苦玄參苷IA對(duì)照品、苦玄參苷IB對(duì)照品適量，置量瓶?jī)?nèi)，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成每1 mL含苦玄參苷IA 0.1001 mg、含苦玄參苷IB 0.0997 mg的混合對(duì)照品溶液，用微孔濾膜（0.45 μm）過(guò)濾，即得。

2.3.2供試品溶液的制備

分別取干燥的苦玄參莖、葉、果、全草，粉碎為過(guò)3號(hào)篩的細(xì)粉。各樣品平行稱取2份，每份約1 g，精密稱定，置100 mL具塞錐形瓶中，精密加入60%甲醇25 mL，密塞，稱定重量，加熱回流30 min，放冷至室溫，再稱定重量，用60%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，微孔濾膜濾過(guò)（0.45 μm），取續(xù)濾液，即得。

2.3.3色譜條件

參照《中國(guó)藥典》（2015年版）“第一部苦玄參藥材含量測(cè)定方法”，色譜柱ODS-3（4.6*250 mm，5 μm S/N： 1A7187053），流動(dòng)相乙腈-水（35∶65），流速1.0 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)264 nm，柱溫35℃，進(jìn)樣量10 μL。色譜圖見(jiàn)圖1。

1.苦玄參苷IB 2.苦玄參苷IA A.苦玄參全草供試品 B.苦玄參葉供試品 C.苦玄參果供試品 D.苦玄參莖供試品 E.苦玄參苷IA、IB混合對(duì)照品

圖1苦玄參莖、葉、果及全草的HPLC

2.3.4 不同種植方式含量測(cè)定

取不同種植方式下新鮮苦玄參藥材，置60℃烘箱烘干，按“2.3.2”項(xiàng)方法進(jìn)行提取，按“2.3.3”項(xiàng)色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄苦玄參苷IA、苦玄參苷IB的峰面積，計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

由表2和圖2、圖3可知，在覆膜種植條件下，地塊5（有地膜，剛施第3次肥）苦玄參莖與葉中苦玄參苷IA含量、莖中苦玄參苷IB含量均相對(duì)較高；對(duì)于部位果，則是地塊4（有地膜，施肥3次）苦玄參苷IA、IB含量最高。在相同未施肥條件下，對(duì)于部位莖而言，地塊2（有地膜，未施肥）苦玄參苷IA、IB含量均高于地塊1（無(wú)地膜，未施肥）；對(duì)于部位葉和果，苦玄參苷IA含量為地塊1（無(wú)地膜，未施肥）高于地塊2（有地膜，未施肥），苦玄參苷IB含量則為地塊2（有地膜，未施肥）高于地塊1（無(wú)地膜，未施肥）。

表2 不同種植方式苦玄參含量測(cè)定結(jié)果

圖2 不同種植方式比較（IA）

圖3 不同種植方式比較（IB）

2.3.5 不同干燥方法含量測(cè)定

取采集自同一地塊的苦玄參藥材按“2.2”項(xiàng)干燥方法進(jìn)行干燥，將不同干燥方法處理的樣品按照“2.3.2”項(xiàng)方法進(jìn)行提取，按2.3.3項(xiàng)色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算各樣品中苦玄參苷IA、IB的含量。

結(jié)果顯示，在不同干燥方法下，苦玄參苷IA的含量大小為：葉＞全草＞果＞莖，苦玄參苷IB的含量大小為：葉＞全草＞莖≈果，與其它部位相較，苦玄參葉中IA、IB含量均為最高。不同干燥方法對(duì)莖、果、全草中苦玄參苷IA、IB含量影響相對(duì)較?。ū?、圖4、圖5），而對(duì)于苦玄參葉部位，干燥方法6（沸水燙后60℃烘干）中的苦玄參苷IA含量最高，干燥方法1（50℃烘干）中的苦玄參苷IB含量最高。因此，實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步比較在100 ℃快速干燥（1 h）和60 ℃干燥（4 h）下苦玄參不同部位苦玄參苷IA、IB的含量，結(jié)果顯示，苦玄參葉中苦玄參苷IA含量大小為100℃＞60℃，其他部位在100℃快速干燥（1 h）和60℃干燥（4 h）下苦玄參苷IA、IB的含量差異均較?。ū?、圖6、圖7）。

2.4 不同提取方式和不同提取溶劑考察

2.4.1 提取方法考察

用超聲提取法和回流提取法考察成分是否提取完全，結(jié)果表明回流提取法中苦玄參苷IA含量為0.53%、苦玄參苷IB含量為0.40%，超聲提取法中苦玄參苷IA含量為0.49%、苦玄參苷IB含量為0.40%，回流提取苦玄參苷IB含量無(wú)明顯差異，但苦玄參苷IA的含量更高，因此確定回流提取法使得有效成分提取更完全。

2.4.2 提取溶劑考察

分別用不同提取溶劑（水、20%甲醇、40%甲醇、50%甲醇、60%甲醇、70%甲醇、80%甲醇、甲醇）考察成分提取是否完全，結(jié)果在上述不同提取溶劑中苦玄參苷IA含量分別為0.11%、0.32%、0.48%、0.46%、0.51%、0.48%、0.49%、0.40%，苦玄參苷IB含量分別為0.18%、0.32%、0.52%、0.36%、0.36%、0.37%、0.35%、0.26%，采用60%甲醇提取苦玄參藥材，苦玄參苷IA的含量最高，因此確定最佳的提取溶劑為60%甲醇。

表3 6種不同干燥方法苦玄參含量測(cè)定結(jié)果

表4 60℃烘干和100℃快速烘干苦玄參含量比較

圖46種不同干燥方法比較（IA）

圖56種不同干燥方法比較（IB）

圖6　60℃和100℃兩種干燥方法比較（IA）

圖760℃和100℃兩種干燥方法比較（IB）

3　結(jié)束語(yǔ)

根據(jù)不同種植方式中苦玄參苷含量測(cè)定結(jié)果可知，覆膜種植有利于苦玄參莖中苦玄參苷IA、IB的積累，并有利于葉和果中苦玄參苷IB的積累；而不覆膜種植則有利于苦玄參葉、果中苦玄參苷IA的積累；施加肥料可使苦玄參苷IA、IB含量增加，有利于其成分累積。不同部位苦玄參苷含量比較，對(duì)于同一種干燥方法而言，苦玄參苷IA含量由小到大依次為莖＜果＜全草＜葉，而苦玄參苷IB含量由小到大依次為莖≈果＜全草＜葉。不同干燥方法比較中，不同的干燥方法對(duì)莖、果、全草中苦玄參苷IA、IB含量影響相對(duì)較小，而在苦玄參葉部位，干燥方法6（沸水燙后60℃烘干）中的苦玄參苷IA含量最高，干燥方法1（50℃烘干）中的苦玄參苷IB含量最高，且在進(jìn)一步比較試驗(yàn)結(jié)果中顯示，苦玄參苷IA含量100℃＞60℃，苦玄參苷IB含量在100℃和60℃下相差不大。由此推測(cè)，在苦玄參葉部位中，高溫有利于苦玄參苷IA的保留，原因可能為高溫可達(dá)到“殺酶保苷”的作用，而水解苦玄參苷IA的酶類存在于葉部位，因此高溫較其他干燥方法對(duì)莖、果、全草中苦玄參苷IA影響較小，而對(duì)葉則能使苦玄參苷IA得到較好保留?！吨袊?guó)藥典》對(duì)苦玄參的要求是取全草，秋季采收，曬干。但本實(shí)驗(yàn)初步發(fā)現(xiàn)苦玄參的指標(biāo)性成分苦玄參苷IA有可能為酶破解的苷類，在葉部位的含量最高，且高溫能達(dá)到“殺酶保苷”的作用，為驗(yàn)證此結(jié)論，下一步將研究不同產(chǎn)地苦玄參在高溫和低溫條件下苦玄參苷IA的含量變化及考察不同干燥方法處理后存放過(guò)程中指標(biāo)性成分的下降程度和速度變化，為苦玄參藥材的干燥方法提供參考，為提高中藥材療效和保質(zhì)期提供一些思路。

[1] 寧德生. 苦玄參苷類成分的積累動(dòng)態(tài)研究[J]. 廣西植物，2012，32(1): 134-137.

[2] 李松. 清熱解毒的苦玄參[J]. 首都食品與醫(yī)藥，2016，23(19): 60.

[3] 李玲. HPLC法測(cè)定不同產(chǎn)地苦玄參中3種成分的含量[J]. 中藥材，2016，39(2): 355-357.

[4] 瞿京紅. 利咽清火含片中苦玄參苷IA的含量測(cè)定[J]. 中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2016，22(1): 48-50.

[5] 唐秀玲. HPLC法測(cè)定婦炎凈膠囊中苦玄參苷IA的含量[J]. 中國(guó)藥師，2011，14(3): 429-431.

[6] 謝陽(yáng)姣. 苦玄參育種材料遺傳多樣性SSR分析[J]. 南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2017，48(1): 20-25.

[7] 唐德智. 高效液相色譜波長(zhǎng)切換法測(cè)定萬(wàn)通炎康片中異嗪皮啶、迷迭香酸、苦玄參苷ⅠA和苦玄參苷IB的含量[J]. 中南藥學(xué)，2016，14(7): 763-767.

[8] 丘琴. 苦玄參種子石油醚部位化學(xué)成分研究[J]. 中藥材，2013，36(2): 230-232.

[9] 季新宇. 玄參化學(xué)成分研究[J]. 天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)，2014，26(11): 1775-1779，1848.

[10] 張新建. RP-HPLC法測(cè)定清炎滴丸中苦玄參昔IA的含量[J]. 中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2014，32(10): 2425-2427.

[11] 潘翠柳. 苦玄參生藥學(xué)與質(zhì)量分析的研究進(jìn)展[J]. 廣州化工，2016，44(14): 10-11.

[12] 方兔慧. 苦玄參近年研究的進(jìn)展[J]. 中國(guó)民族民間醫(yī)藥，2011，20(24): 62.

[13] 陳勇. 苦玄參藥材有效成分含量積累動(dòng)態(tài)的研究[J]. 時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2010，21(2): 371-372.

Effects of Different Planting Conditions and Different Drying Methods on Picfeltarraenin IA and IB in Different Parts ofLour

Objective: To study the effects of different planting conditions and different drying methods on the contents of picfeltarraenin IA and IB in different parts ofLour. Methods: HPLC was used to determine the content of picfeltarraenin IA and IB in each sample. Results: The effects of film mulching and non-film mulching on picfeltarraenin IA and IB in different parts were different, and fertilization was beneficial to the accumulation of picfeltarraenin IA and IB. In different drying methods, the contents of picfeltarraenin IA and IB from high to low were leaf>whole grass>fruit. Picfeltarraenin IA from the leaves ofLour, blanch with boiling water and drying at 60℃ has the highest content. Picfeltarraenin IB from the leaves ofLour, drying at 50℃ has the highest content. In the comparison of 100℃ rapid drying and 60℃ drying, the content of picfeltarraenin IA in leaves was 100℃>60℃, while the content of picfeltarraenin IB had little difference. Conclusion: Regular fertilization management can be adopted in planting process. The contents of picfeltarraenin IA and IB in different parts ofLour were different, the contents of picfeltarraenin IA and IB in leaves were the highest, and high temperature drying was beneficial to the retention of picfeltarraenin IA in leaves.

planting conditions; drying methods; different parts; picfeltarraenin IA; picfeltarraenin IB; content determination

R282

A

1008-1151(2022)10-0056-04

2022-08-19

馮曉林（1997－），女，廣西貴港人，廣西梧州制藥（集團(tuán)）股份有限公司藥材研究專員，從事中藥相關(guān)研究工作。