楊 恒，李利財

(西南大學(xué) 動物醫(yī)學(xué)學(xué)院，重慶 榮昌 402460)

黃體(corpus luteum，CL)是雌性哺乳動物發(fā)情排卵后，由殘留的卵泡顆粒細(xì)胞和內(nèi)膜細(xì)胞迅速增生變大，吸收大量黃色類脂質(zhì)形成的一個暫時性內(nèi)分泌器官。其主要由大、小CL細(xì)胞組成，能夠合成和分泌類固醇激素孕酮(progesterone，P4)，對于維持妊娠具有不可或缺的作用[1-2]。正常繁殖周期內(nèi)，如果卵子受精，這些CL細(xì)胞將分泌P4參與調(diào)節(jié)受精卵著床以及妊娠的早期維持。相反，在沒有受精的情況下，CL將會消融、體積縮小、功能降低，并在其位置留下一個小的疤痕狀結(jié)構(gòu)，稱為白體。這一過程導(dǎo)致體內(nèi)P4濃度下降，卵泡抑制被解除，從而促進(jìn)卵泡生長、發(fā)情周期啟動[3]?？梢姡珻L形態(tài)和功能的改變在哺乳動物正常的生殖周期中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用。

目前，普遍認(rèn)為前列腺素家族(PGs)是調(diào)控CL形態(tài)和功能的主要“開關(guān)”，決定著周期性CL的壽命及其發(fā)展方向[2-4]。作為一種內(nèi)源性的局部激素，PGs廣泛分布于哺乳動物體內(nèi)，并涉及大量的生殖過程，例如排卵、著床、分娩、CL消融等[5-8]。早在1966年，BABOCK[9]報道并提出了子宮端釋放的PGs家族成員PGF2α是導(dǎo)致母體卵巢端CL發(fā)生周期性變化的重要物質(zhì)，繼而開啟了PGF2α在哺乳動物繁殖領(lǐng)域的深入研究及廣泛應(yīng)用。例如，JUENGEL等[10]研究發(fā)現(xiàn)低劑量PGF2α可引起CL功能減弱、體內(nèi)P4含量呈現(xiàn)短暫降低，但并未導(dǎo)致CL體質(zhì)量降低(即結(jié)構(gòu)性溶解尚未發(fā)生)；然而，高劑量PGF2α處理(10倍劑量)時，發(fā)現(xiàn)其體內(nèi)P4含量顯著下降，并伴隨CL發(fā)生結(jié)構(gòu)性溶解。類似地，CEZINANDE等[11]報道也發(fā)現(xiàn)，較低劑量PGF2α處理時，母體體內(nèi)P4水平24 h后會發(fā)生明顯降低,但在48 h后又再次升高；但較高劑量PGF2α處理時，其CL則會發(fā)生完全的功能性退化和結(jié)構(gòu)性溶解，可見雌性動物CL溶解退化的程度可能與PGF2α劑量有關(guān)。然而，另一研究發(fā)現(xiàn)，與單劑量相比，雙倍劑量PGF2α誘導(dǎo)母體發(fā)生完全CL溶解的比例更高，但3倍劑量時并未出現(xiàn)更有效的處理效果[12]，提示在PGF2α誘導(dǎo)CL溶解退化過程中似乎存在一個臨界值，即在該臨界值范圍內(nèi)PGF2α劑量的增加會使其CL溶解退化效果呈現(xiàn)相應(yīng)的劑量依賴性關(guān)系。不過，有關(guān)PGF2α對雌性動物個體CL組織的功能變化及形態(tài)改變的劑量依賴性影響仍有待進(jìn)一步研究。為此，本試驗設(shè)置5個不同劑量梯度，通過H.E染色觀察CL形態(tài)差異，ELISA檢測體內(nèi)P4含量變化，同時利用RT-PCR檢測CL功能基因及凋亡相關(guān)基因表達(dá)情況，旨在探析雌性動物CL溶解與PGF2α劑量依存關(guān)系，為后續(xù)雌性動物繁殖技能障礙(如持久CL)及優(yōu)化PGs主導(dǎo)的高效繁殖技術(shù)方案研究奠定堅實的理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及飼養(yǎng)管理試驗動物購自重慶恩斯維爾生物技術(shù)有限公司，取60只60日齡、體質(zhì)量相近(32±2)g，無繁殖障礙性疾病的健康雌性昆明小鼠(SPF級),飼養(yǎng)于西南大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院動物房。同一飼養(yǎng)環(huán)境，室內(nèi)溫度控制為25℃，自然光照，自由采食、飲水，定期更換墊料，做好消毒，保證飼養(yǎng)環(huán)境舒適。適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后用于試驗。

1.2 主要試劑PGF2α購自上海梯希愛化成工業(yè)發(fā)展有限公司;H.E染色試劑盒購自北京索萊寶科技有限公司;PrimeScriptTMRT Master Mix和TB Green Premix Ex TagⅡ購自日本TaKaRa公司；小鼠P4ELISA試劑盒購自江蘇晶美生物科技有限公司。

1.3 小鼠發(fā)情周期監(jiān)測試驗小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，逐一編號并標(biāo)記。采用外陰觀察法、陰道脫落細(xì)胞涂片(H.E染色)監(jiān)測發(fā)情周期。觀察小鼠陰門開張狀態(tài)、黏膜顏色、陰道分泌物及其性質(zhì)和外陰腫脹情況，拍照記錄。(1)小鼠陰道脫落細(xì)胞及觀察：將雌鼠保定，暴露陰道口，用無菌生理鹽水浸泡過的棉簽伸入小鼠陰道約0.5 cm，輕輕轉(zhuǎn)動棉簽，采集細(xì)胞，先橫向再縱向輕輕且均勻涂抹在干凈的載玻片上，自然晾干后進(jìn)行H.E染色。(2)H.E染色操作步驟：95% 乙醇固定3 min；自來水沖洗30 s；蘇木素染色1 min 20 s；自來水沖洗30 s；伊紅染色1 min 30 s；自來水沖洗30 s；自然晾干，顯微鏡下觀察。參考文獻(xiàn)[13]，各發(fā)情時期小鼠陰門狀態(tài)和陰道脫落細(xì)胞特點總結(jié)見表1。

表1 小鼠發(fā)情周期外部觀察和陰道細(xì)胞H.E染色鑒定方法

1.4 試驗小鼠腹腔注射處理通過外陰觀察法和陰道脫落細(xì)胞涂片，選擇發(fā)情周期正常的60只小鼠，隨機(jī)分為6組(n=10)，進(jìn)行陰道脫落細(xì)胞涂片直到發(fā)情間期(CL活躍期)時，按照不同劑量梯度(1,10,50,100,200 μg)，腹腔注射PGF2α。

1.5 CL形態(tài)學(xué)觀察各組小鼠經(jīng)腹腔注射藥物36 h 后(避免此時CL組織發(fā)生生理性周期性退化)頸椎脫臼方式處死，皮膚消毒后剪開皮膚，剝離皮下組織和肌肉。打開腹腔，快速摘取卵巢，在體視顯微鏡下將卵巢周圍的脂肪組織剝離干凈，分離CL，轉(zhuǎn)入無菌無酶凍存管。采集的子宮、卵巢組織于-80℃保存、備用。采集的CL用4%多聚甲醛直接固定，待包埋切片后，利用蘇木素-伊紅(H.E)染色，直接觀察CL組織形態(tài)。

1.6 血液采集、處理與激素測定小鼠斷頸處死前先采用眼眶取血法采血，轉(zhuǎn)入1.5 mL離心管中，室溫靜置1 h，4℃，3 000 r/min離心5 min，吸取上層淡黃色血清，轉(zhuǎn)入新的1.5 mL離心管，置于-20℃冰箱保存?zhèn)溆?。利用酶?lián)免疫測定(ELISA)試劑盒檢測血清中的P4濃度，分析不同處理組中上述激素在體內(nèi)的濃度變化。

1.7 qRT-PCR測定參照總RNA提取試劑盒說明書提取子宮、CL組織中總RNA，使用Nanodrop2000檢測RNA的純度及濃度。按照HiFiscript cDNA Synthesis Kit試劑盒說明書反轉(zhuǎn)錄成cDNA，使用Nanodrop 2000檢測cDNA的純度及濃度，保存于-20℃。qRT-PCR檢測3個引物(表1)，由Sangon Biotech公司合成。按照TB Green Premix Ex Taq Ⅱ(Tli RNaseH Plus)試劑盒說明書操作實施qRT-PCR檢測：TB Green Premix Ex Tag Ⅱ(Tli RNaseH Plus)(2×)10 μL，PCR Forward Primer(10 μmol/L)0.8 μL，PCR Reverse Primer(10 μmol/L)0.8 μL，ROX Reference Dye(50×)0.4 μL，DNA模板2 μL，滅菌水6 μL。PCR擴(kuò)增程序為95℃預(yù)變性30 s；55個循環(huán)：95℃ 5 s，56℃ 30～34 s。

表1 實時熒光定量PCR反應(yīng)引物序列

1.8 統(tǒng)計分析試驗所得數(shù)據(jù)用GraphPad Prism 8.0軟件進(jìn)行t檢驗分析，分析結(jié)果用柱狀圖表示,其中*表示差異顯著(P<0.05)，**表示差異極顯著(P<0.01)。

2 結(jié)果

2.1 小鼠發(fā)情周期不同階段的陰門狀態(tài)及陰道細(xì)胞涂片使用陰門外部觀察法和卵巢切片H.E染色的方法監(jiān)測小鼠發(fā)情周期，每次涂片前記錄觀察其陰門開張、陰門黏膜顏色及外陰腫脹情況，連續(xù)跟蹤監(jiān)測3個發(fā)情周期。外觀結(jié)果顯示：發(fā)情前期(圖1A1)陰道口微張，外陰略有腫脹，黏膜呈淡粉紅色、較濕潤，有少量清亮陰道分泌物；發(fā)情期(圖1B1)陰門顯著擴(kuò)張，黏膜潮紅，外陰皺襞腫脹明顯、濕潤，分泌物黏稠；發(fā)情后期(圖1C1)陰道口回縮、陰唇腫脹基本消退，黏膜呈灰白色，無分泌物；發(fā)情間期(圖1D1)陰門緊閉、如“Y”樣，黏膜蒼白、干燥、無分泌物，腫脹完全消退。H.E染色結(jié)果顯示：發(fā)情前期(圖1A2)以有核上皮細(xì)胞為主，部分白細(xì)胞，白細(xì)胞胞核溶解；發(fā)情期(圖1B2)幾乎為大而扁平的完全角化上皮細(xì)胞；發(fā)情后期(圖1C2)多為完全角化上皮細(xì)胞和白細(xì)胞，有核上皮細(xì)胞少量分布；發(fā)情間期(CL活躍期，圖1D2)細(xì)胞數(shù)量少，以白細(xì)胞為主，可見極少有核上皮細(xì)胞。通過上述監(jiān)測結(jié)果，發(fā)現(xiàn)昆明小鼠發(fā)情周期約為5～7 d，其中發(fā)情間期(即CL活躍期)約為3～4 d，這為準(zhǔn)確判斷昆明小鼠CL活躍期及在此期開展PGF2α有關(guān)研究奠定了堅實基礎(chǔ)。

A.發(fā)情前期;B.發(fā)情期;C.發(fā)情后期;D.發(fā)情間期

2.2 不同PGF2α劑量處理后CL形態(tài)學(xué)變化采集不同劑量PGF2α處理小鼠的卵巢分別進(jìn)行H.E染色，結(jié)果顯示：對照組中，小鼠的卵巢縱切面幾乎全部被CL組織覆蓋，各CL之間相互鄰接，且外周CL組織突出于卵巢表面(圖2A)；1 μg PGF2α處理組中1/3卵巢縱切面被CL組織覆蓋，染色較淺，部分CL組織突出于卵巢表面，并伴有部分結(jié)構(gòu)性溶解(圖2B)；10 μg PGF2α處理組中卵巢縱切面僅有少部分CL組織覆蓋，CL發(fā)生明顯的結(jié)構(gòu)性溶解(圖2C)；50 μg PGF2α處理組中卵巢縱切面已無CL組織覆蓋，CL已發(fā)生完全結(jié)構(gòu)性溶解，并伴有少量成熟卵泡發(fā)生(圖2D)；100 μg PGF2α處理組中卵巢縱切面尚有大小不等的CL殘跡，CL組織僅發(fā)生不完全退化(圖2E)；200 μg PGF2α處理組中4/5卵巢縱切面被CL組織覆蓋，且CL組織結(jié)構(gòu)未發(fā)生明顯溶解，CL結(jié)構(gòu)清晰可見(圖2F)。

A～F.分別為對照組(Control),1,10,50,100，200 μg PGF2α處理小鼠的卵巢組織H.E染色

2.3 不同PGF2α劑量處理后小鼠血清孕酮濃度變化血清P4水平的變化是活體CL功能性退化的重要標(biāo)志。利用ELISA法檢測P4濃度，結(jié)果如圖3所示：與對照組相比，1，100 μg PGF2α處理組中小鼠血清中P4濃度呈顯著降低(P<0.05)；10，50 μg PGF2α處理組中P4濃度呈極顯著下降(P<0.01)；而高劑量200 μg PGF2α處理組中P4濃度變化不明顯。此外，結(jié)果顯示50 μg PGF2α處理時，小鼠血清中P4濃度出現(xiàn)明顯谷值(P<0.01)。

圖3 不同劑量PGF2α對CL溶解過程中P4濃度的影響

2.4 不同PGF2α劑量處理后孕酮合成關(guān)鍵基因表達(dá)變化StAR和3β-HSD是孕酮合成關(guān)鍵酶，可作為CL孕酮合成功能的可靠衡量指標(biāo)。結(jié)果如圖4所示：與對照組相比，10 μg PGF2α處理組中StAR mRNA 表達(dá)量呈顯著下調(diào)(P<0.05)，而50，100 μg 處理組中StAR mRNA 表達(dá)量呈極顯著下調(diào)(P<0.01)，其余處理組中StAR mRNA表達(dá)量稍有下調(diào)但均不顯著(圖4A)；同時，100 μg處理組中3β-HSD mRNA 表達(dá)量呈顯著下調(diào)(P<0.05)，而50 μg處理組中3β-HSD mRNA 表達(dá)量呈極顯著下調(diào)(P<0.01)，其余處理組中3β-HSD mRNA 表達(dá)量變化均不顯著(圖4B)。

圖4 不同組別中P4合成關(guān)鍵酶mRNA相對表達(dá)水平變化

2.5 不同PGF2α劑量處理后凋亡關(guān)鍵基因表達(dá)變化BAX/BCL-2/Caspase-3信號通路是CL發(fā)生結(jié)構(gòu)性溶解的重要指征。結(jié)果如圖5所示：與對照組相比，10,100 μg PGF2α處理組中BAX mRNA相對表達(dá)量呈顯著上調(diào)(P<0.05)，1，50,200 μg PGF2α處理組中BAX mRNA相對表達(dá)量呈極顯著上調(diào)(P<0.01)(圖5A)；同時，10,200 μg PGF2α處理組中BCL-2 mRNA相對表達(dá)量顯著下調(diào)(P<0.05)，50,100 μg PGF2α處理組中BCL-2 mRNA相對表達(dá)量呈極顯著下調(diào)(P<0.01)(圖5B)；然而，相較于上述二者單獨來說，BAX/BCL-2比率是決定凋亡調(diào)控的關(guān)鍵因素，結(jié)果發(fā)現(xiàn)50 μg PGF2α處理組中BAX/BCL-2比值呈極顯著上調(diào)(P<0.01)，其余4個處理組中BAX/BCL-2比值均呈顯著上調(diào)(P<0.05)(圖5 C)。此外，與對照組相比，10,100 μg PGF2α處理組中Caspase-3 mRNA相對表達(dá)量呈顯著上調(diào)(P<0.05)，50 μg PGF2α處理組中Caspase-3 mRNA相對表達(dá)量呈極顯著上調(diào)(P<0.01)，其余處理組Caspase-3 mRNA相對表達(dá)量變化均不顯著(圖5 D)。

圖5 不同組別中BAX/BCL-2/Caspase-3 mRNA相對表達(dá)水平變化

3 討論

CL是雌性動物排卵后，經(jīng)成熟卵泡轉(zhuǎn)變成的臨時性內(nèi)分泌腺體，是建立和維持妊娠所必需的器官[4,14]。CL有規(guī)律的形成和溶解，是雌性動物生殖活動正常進(jìn)行的關(guān)鍵。臨床上，CL溶解過早或功能不全會使P4分泌不足，導(dǎo)致母體妊娠時發(fā)生早產(chǎn)、流產(chǎn)或死胎[15]；然而，當(dāng)母體進(jìn)入空懷期，CL仍持續(xù)存在時則會形成持久CL或CL囊腫，導(dǎo)致母體空懷期延長、繁殖效率降低[16]。因此，CL溶解在雌性動物正常生殖功能調(diào)控和胚胎妊娠維持與建立過程中發(fā)揮至關(guān)重要的作用。

前列腺素是膜磷脂的衍生物，其合成的底物來源于膜磷脂轉(zhuǎn)化得到的花生四烯酸，在花生四烯酸轉(zhuǎn)化為PGH2之后，根據(jù)存在的特定PG合酶，可以產(chǎn)生不同類型的PGs。目前，普遍認(rèn)為PGE2是維持CL的重要保護(hù)介質(zhì)，而PGF2α則是CL溶解的主效促溶素[17-18]。其中，作為在繁殖領(lǐng)域最受關(guān)注的PGs家族成員，PGF2α對于啟動CL溶解具有重要意義[18-19]。不過，大量研究發(fā)現(xiàn)在發(fā)情周期中處于CL早期階段的CL對PGF2α并不會產(chǎn)生應(yīng)答反應(yīng)[20-21]。基于此，本試驗為了確保PGF2α處理效果的準(zhǔn)確性，在試驗開展前期，課題組針對本次試驗動物群體(昆明小鼠)進(jìn)行了發(fā)情周期的監(jiān)測工作。通過陰門外部觀察和陰道細(xì)胞脫落H.E涂片，結(jié)果發(fā)現(xiàn)本試驗選擇的昆明小鼠發(fā)情周期為5～7 d；這與CALIGIONI[13]報道的小鼠發(fā)情周期特點相吻合，表明該組昆明小鼠群體發(fā)情周期正常、發(fā)情表現(xiàn)顯著，符合本試驗順利開展的先決條件。同時，依據(jù)發(fā)情周期的四期分法，我們發(fā)現(xiàn)該批次昆明小鼠間情期為3～4 d(CL活躍期)，這為本試驗選擇在CL應(yīng)答階段實施PGF2α處理提供了必要的試驗依據(jù)。

目前，大量研究證實母體的CL溶解過程與PGF2α之間存在一定的劑量依賴性關(guān)系。例如，JUENGEL等[10]和WATANABE等[22]研究發(fā)現(xiàn)低劑量PGF2α導(dǎo)致P4分泌減少，但不引起CL發(fā)生結(jié)構(gòu)性溶解；相反，高劑量PGF2α不僅能夠引起P4分泌減少，而且還能夠促使CL出現(xiàn)結(jié)構(gòu)性溶解。類似地，CUERVO-ARANGO等[23]研究報道，也進(jìn)一步證實與單劑量PGF2α處理相比，雙劑量PGF2α處理的母體CL表現(xiàn)出了更完全的“消溶”現(xiàn)象；但是，與前者不同的是CUERVO-ARANGO等[24]在進(jìn)行3倍劑量PGF2α處理時發(fā)現(xiàn)，此時母體的CL溶解效果并未隨著PGF2α劑量的遞增而出現(xiàn)明顯的優(yōu)勢“促溶”效應(yīng)，提示PGF2α在母體中對CL的“促溶”作用并非一直呈正相關(guān)性，而是存在劑量/效應(yīng)的臨界值。本試驗通過設(shè)置1，10，50，100，200 μg PGF2α5個不同劑量梯度處理間情期昆明小鼠，H.E染色觀察小鼠CL形態(tài)學(xué)變化發(fā)現(xiàn)，PGF2α在50 μg劑量處理時呈現(xiàn)出最佳的CL“促溶”效應(yīng)；而當(dāng)其劑量遞增或遞減時均會表現(xiàn)出弱于前者的“促溶”作用，這一結(jié)果與GRANADOS-VILLARREAL等[25]運用不同梯度處理母羊CL時觀察得到的CL溶解結(jié)果一致。因此，在本試驗中，研究表明PGF2α對母體內(nèi)的CL“促溶”效應(yīng)與其劑量之間存在特定的臨界值，即僅在該臨界值范圍內(nèi)，PGF2α對其母體的CL溶解效果才會呈現(xiàn)明顯的劑量依賴性。

CL溶解主要包括功能性退化和結(jié)構(gòu)性溶解兩個階段，前者主要表現(xiàn)為P4水平的下降，而后者則主要表現(xiàn)為CL組織的細(xì)胞凋亡，最終促使CL發(fā)生結(jié)構(gòu)性溶解[26-27]。首先，在CL功能性退化中，P4濃度的變化，是CL溶解過程中必不可少的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。大量研究顯示，CL退化過程中PGF2α水平的升高，通常會引起雌性動物體內(nèi)P4分泌水平的下降[24,26-28]。不過，JUNIOR等[29]在研究瘤牛的CL溶解時發(fā)現(xiàn)，高劑量PGF2α處理母體時，并不總是誘導(dǎo)P4含量發(fā)生顯著地變化，提示 PGF2α在CL的功能性退化過程中可能存在一定的劑量依賴性范圍。在本試驗中，通過ELISA法檢測上述昆明小鼠外周血液的P4含量發(fā)現(xiàn)，PGF2α在50 μg劑量時昆明小鼠體內(nèi)的P4含量呈現(xiàn)最低水平；與此類似，qRT-PCR結(jié)果顯示，P4關(guān)鍵合成酶基因StAR和3β-HSD mRNA在PGF2α50 μg劑量時在昆明小鼠的CL中也呈現(xiàn)最低表達(dá)；這一結(jié)果與上述ELISA檢測P4水平結(jié)果一致，說明在母體中CL的功能性退化效果確實與PGF2α劑量之間存在特定的臨界值，即僅在該臨界值范圍內(nèi)，CL的功能性退化程度才會呈現(xiàn)最佳劑量依賴性效果。不過，相較于功能性退化，CL結(jié)構(gòu)性溶解顯示出更為完全的CL組織的消失，主要表現(xiàn)為CL的細(xì)胞凋亡、引起CL組織結(jié)構(gòu)的消融[30-31]。眾所周知，BCL-2家族是介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的重要調(diào)控中心[32-33]；其中，抗凋亡BCL-2基因和促凋亡BAX基因是調(diào)節(jié)細(xì)胞存活和凋亡的兩種關(guān)鍵因子[34]，尤其是二者的比率變化更被認(rèn)為是啟動細(xì)胞凋亡發(fā)生的關(guān)鍵閘門[35]。有研究顯示，與中期CL和妊娠早期CL相比，抗凋亡BCL-2基因在退行期CL中呈現(xiàn)較低表達(dá)，而促凋亡BAX基因則呈現(xiàn)較高表達(dá)[36-37]，同時伴隨著BAX/BCL-2比率的顯著增加[38-39]，這一結(jié)果提示BAX和BCL-2基因表達(dá)在CL退化溶解過程中發(fā)揮著重要作用。在本試驗結(jié)果顯示，隨著PGF2α劑量的變化，BAX和BCL-2基因的表達(dá)也分別呈現(xiàn)不同程度的遞增或遞減；但卻在50 μg時出現(xiàn)了明顯的峰值與谷值，尤其是在此劑量時二者之間的比率呈現(xiàn)了唯一極顯著上調(diào)(P<0.05)，說明PGF2α在該臨界值時表現(xiàn)出了最佳的促CL結(jié)構(gòu)性溶解效果[12]。此外，作為細(xì)胞凋亡的最后執(zhí)行者，Caspase-3在各種因素啟動的凋亡程序中均起著最后樞紐的作用[39-41]。目前，已有大量研究證實，在不同的動物中，PGF2α均能夠誘導(dǎo)CL中Caspase-3基因表達(dá)上調(diào)，從而開啟CL細(xì)胞的凋亡過程[40-42]。類似地，在本試驗中，研究結(jié)果也顯示不同劑量的PGF2α處理組別中，Caspase-3基因的表達(dá)水平均呈現(xiàn)了不同程度的上調(diào)，且其表達(dá)變化趨勢與上述BAX/BCL-2比率變化趨勢結(jié)果一致，即在PGF2α50 μg時呈現(xiàn)最高水平，進(jìn)一步說明PGF2α在該臨界值時呈現(xiàn)出了最佳的促CL結(jié)構(gòu)性溶解效應(yīng)。因此，我們不難發(fā)現(xiàn)無論是在CL的功能性退化中還是在結(jié)構(gòu)性溶解中，PGF2α對CL的溶解效果確實存在特定的劑量臨界值范圍，即僅在該范圍內(nèi)二者之間才會呈現(xiàn)明顯的劑量依賴性關(guān)系。

總之，本試驗通過監(jiān)測昆明小鼠的發(fā)情周期，在明確了小鼠的CL活躍期的前提下，開展PGF2α劑量依賴性試驗，發(fā)現(xiàn)外源性PGF2α對母體的CL溶解效果(功能性退化和結(jié)構(gòu)性溶解)存在一定的劑量依賴性關(guān)系。但是，這種劑量依賴性關(guān)系存在一定的臨界值，即僅在該臨界值范圍內(nèi)，PGF2α才會與CL溶解呈現(xiàn)最佳的劑量依賴性效果，這為探析雌性動物的繁殖障礙性疾病機(jī)理(如持久CL或CL囊腫)、優(yōu)化PGF2α主導(dǎo)的高效繁殖技術(shù)方案提供了新的科學(xué)依據(jù)。