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      女貞子有效成分提取工藝及含量研究進(jìn)展

      2022-11-18 22:46:51譚朝陽劉塔斯
      湖北農(nóng)業(yè)科學(xué) 2022年15期
      關(guān)鍵詞:齊墩女貞子女貞

      趙 杰,肖 雨,譚朝陽,劉塔斯

      (湖南中醫(yī)藥大學(xué)生物工程實(shí)驗(yàn)室,長(zhǎng)沙 410208)

      女貞(Ligustrum lucidumAit.)為木樨科(Oleanceae)女貞屬(Ligustrum)常綠喬木,其干燥成熟果實(shí)即女貞子。女貞子甘、苦、涼,歸肝、腎經(jīng),具有滋補(bǔ)肝腎、明目烏發(fā)之功效,可用于治療頭暈?zāi)垦6Q、腰膝酸軟、須發(fā)早白、目暗不明等病癥[1],歷代醫(yī)家沿用至今。女貞子的化學(xué)成分主要有三萜類、環(huán)烯醚萜類、苯乙醇苷類、黃酮類等。本研究通過查閱近年來的文獻(xiàn),就女貞子有效成分的提取工藝、質(zhì)量檢測(cè)方法及含量3個(gè)方面進(jìn)行歸納總結(jié),以期促進(jìn)女貞子的進(jìn)一步開發(fā)利用。

      1 女貞子提取工藝研究進(jìn)展

      1.1 齊墩果酸提取工藝研究進(jìn)展

      齊墩果酸屬五環(huán)三萜類化合物,具有弱酸性,脂溶性強(qiáng),是女貞子中含量較高的成分之一,《中華人民共和國(guó)藥典(2005年版)》[簡(jiǎn)稱《中國(guó)藥典(2005年版)》]曾規(guī)定女貞子中齊墩果酸的含量不得少于0.6%[2]。齊墩果酸藥效明確,毒性低,具有保肝、免疫調(diào)節(jié)、抗炎、抗病毒、抗艾滋、保護(hù)心血管系統(tǒng)、降血糖血脂等作用[3-7]。臨床上多用于急、慢性肝炎的輔助治療。齊墩果酸結(jié)構(gòu)復(fù)雜,不易合成,主要從天然植物女貞子中提取獲得。女貞子中齊墩果酸常用的提取方法有回流提取、索氏提取、超聲提取、微波提取、超臨界CO2萃取、加速溶劑提取和閃式萃取等。

      郗艷麗等[8]以甲醇為溶劑,采取索氏提取的方法,在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上進(jìn)行正交試驗(yàn),確定最佳提取工藝條件為溫度85℃、料液比1∶30(g/mL)、回流次數(shù)5次。在此條件下齊墩果酸的提取率為4.066%。

      蔣珍菊等[9]以乙醇為提取溶劑,采用單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)優(yōu)化超聲輔助提取工藝,料液體積比5∶40(V∶V),乙醇濃度95%,超聲頻率44 000 Hz,提取時(shí)間60 min,此時(shí)齊墩果酸含量可達(dá)(1.271±0.002)%。王瑩等[10]采用同樣的方法,料液比1∶8(g/mL)、提取時(shí)間30 min、提取溫度30℃、乙醇濃度85%時(shí),齊墩果酸含量最高,為1.0 mg/mL。

      樊維等[11]通過正交設(shè)計(jì)優(yōu)化微波提取工藝,得到的最優(yōu)方案為90%乙醇,微波溫度60℃,微波時(shí)間3 min,料液比1∶10(g/mL),微波功率300 W,提取率1.719 4%。朱沛沛等[12]使用單因素試驗(yàn)和響應(yīng)面法優(yōu)化微波提取工藝,得到最佳工藝為82%乙醇、料液比1∶11(g/mL)、微波時(shí)間3 min、微波功率300 W、微波溫度58℃,與樊維等[11]的試驗(yàn)結(jié)果接近,但提取率更高,為2.858 9%。

      CO2在超臨界狀態(tài)時(shí)有氣體的擴(kuò)散系數(shù)及黏度和接近液體的密度,對(duì)非極性物質(zhì)溶解性極強(qiáng),可根據(jù)不同成分在流體中的溶解度不同而將其分離開來。超臨界CO2萃取具有提取與分離一體、適合工業(yè)生產(chǎn)、安全無毒等優(yōu)點(diǎn)。郭姣等[13]提出了一種使用超臨界CO2萃取技術(shù)提取齊墩果酸的方法,最佳工藝條件為萃取溫度50℃,壓力15 MPa,分離釜Ⅰ溫度55℃,壓力10 MPa,分離釜Ⅱ溫度45℃,壓力6 MPa,萃取時(shí)間120 min,齊墩果酸得率為2.011 7%。

      褚姝含等[14]比較了浸漬提取法、回流提取法和超聲波提取對(duì)齊墩果酸含量的影響,最終得出超聲法相對(duì)傳統(tǒng)的浸漬法和回流法提取率更高的結(jié)論,超聲法得到的齊墩果酸含量為2.32%。蔣珍菊等[15]采用正交試驗(yàn)分別優(yōu)選了超聲提取、微波提取和超臨界CO2提取的最佳條件,并對(duì)其進(jìn)行比較,得到這3種方法相較于傳統(tǒng)方法提取率均較高的結(jié)論。

      閃式提取技術(shù)是指依靠高速機(jī)械剪切刀和超凍分子滲濾技術(shù),數(shù)秒內(nèi)把植物破碎為細(xì)微顆粒,并使有效成分迅速達(dá)到組織內(nèi)外平衡,通過過濾達(dá)到提取目的,此法能最大程度保留有效成分,縮短提取時(shí)間。武景路[16]以齊墩果酸和熊果酸的總含量和干膏收率為指標(biāo),采用單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)優(yōu)選閃式提取工藝,得到提取時(shí)間60 s、料液比1∶4(g/mL)、提取溫度65℃的結(jié)果,在此條件下閃式提取較其他方法提取率更高。

      連續(xù)超聲逆流提取是將超聲提取技術(shù)和連續(xù)逆流提取技術(shù)結(jié)合起來,更加高效、節(jié)能、安全、環(huán)保。張靜等[17]以齊墩果酸和熊果酸總量為指標(biāo)優(yōu)選工藝,得到的最佳條件是15倍量80%乙醇,超聲頻率30 kHz,此時(shí)齊墩果酸及熊果酸平均總質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5.66%。

      王文俊等[18]比較了加速溶劑萃取法、索氏提取和超聲提取,發(fā)現(xiàn)加速溶劑提取率與索氏提取相近,均高于超聲提取,但加速溶劑萃取相對(duì)索氏提取更加快速,溶劑和樣品用量更少,加速溶劑萃取不失為一種中藥材提取的好方法。

      1.2 特女貞苷提取工藝研究進(jìn)展

      特女貞苷是女貞子環(huán)烯醚萜類化合物中含量最高的成分,也是女貞子專屬性成分,具有抗氧化、抗衰老、保肝、保護(hù)血管等作用[19,20]?!吨腥A人民共和國(guó)藥典(2020年版)》[1]規(guī)定女貞子中特女貞苷的含量不得少于0.7%。

      目前,提取特女貞苷多采用煎煮法、回流提取法、超聲提取法和微波提取法等。特女貞苷屬水溶性成分,張艷等[21]以水作為溶劑,加熱回流提取,采用正交試驗(yàn)優(yōu)化條件,確定最佳條件為10倍量的水,3次提取,每次2 h,此時(shí)所得特女貞苷含量為(17.22±0.16)mg/g。此法簡(jiǎn)單易行,成本廉價(jià),得率較高,但是耗時(shí)較長(zhǎng)。

      程敏等[22]在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上進(jìn)行正交試驗(yàn),考察了超聲提取女貞子中特女貞苷的最優(yōu)條件,70倍量水,提取2次,每次超聲2.5 h,特女貞苷的得率最好,為0.976%。

      張冕等[23]應(yīng)用離子液體為提取溶劑,采用微波輔助法提取,并設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)優(yōu)化了工藝,最佳工藝為1.0 ml/L的溴化1-丁基-3-甲基咪唑提取劑,微波功率300 W,料液比3∶23(g/mL),提取時(shí)間6 min,此條件下特女貞苷的得率為15.13%。離子液體相對(duì)通常的提取溶劑甲醇、乙醇、乙酸乙酯等更安全環(huán)保,且提取率更高。

      黎軍等[24]通過單因素試驗(yàn)和響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化特女貞苷的水提醇沉工藝,得到最合適條件組合為液料比20 mL/g,進(jìn)行水浴,每次3 h,得到特女貞苷提取率為52.50%,響應(yīng)面回歸模型極顯著,預(yù)測(cè)值與實(shí)際值差異小,結(jié)果可靠。

      為更好地提取女貞子中的有效成分,研究者們常將特女貞苷和齊墩果酸作為綜合指標(biāo)進(jìn)行考察。郭宇潔等[25]采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì),分別優(yōu)選齊墩果酸和特女貞苷的乙醇提取工藝,二者的優(yōu)選結(jié)果均為75%乙醇,6倍量溶劑,提取3次,每次2 h。

      常星潔等[26]以特女貞苷和齊墩果酸為指標(biāo),采用單因素試驗(yàn)和Box-Behnken響應(yīng)面法優(yōu)化回流提取工藝,得到最優(yōu)條件為67.2%乙醇,12倍量溶劑,提取2次,每次1.5 h。此時(shí),特女貞苷與齊墩果酸的轉(zhuǎn)移率分別可達(dá)96.96%和97.30%。

      金婷等[27]不僅以齊墩果酸和特女貞苷為指標(biāo)考察了最佳的醇提工藝,還考察了粉碎度的影響,趁熱過濾與靜置24 h后過濾的差異,并比較了醇提與水提的提取率差異。最后發(fā)現(xiàn),單獨(dú)提取特女貞苷,水提效果更好,但若綜合考察2個(gè)指標(biāo),采用75%乙醇效果更好,最佳條件為取女貞子的壓碎品,采用10倍量溶劑,75%乙醇,提取3次,每次1 h,趁熱過濾,此時(shí)特女貞苷和齊墩果酸的提取率分別達(dá)74.5%和80.9%。該研究較為全面地考察了提取過程中的影響因素,可作為提取女貞子有效成分的參考。

      高爽等[28]以特女貞苷、齊墩果酸、熊果酸為指標(biāo)成分,采用單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)優(yōu)化女貞子回流提取工藝,發(fā)現(xiàn)使用8倍量60%乙醇,回流提取3 h,提取3次時(shí),指標(biāo)成分轉(zhuǎn)移率最高,此時(shí)特女貞苷轉(zhuǎn)移率為75.42%,齊墩果酸轉(zhuǎn)移率為93.86%,熊果酸轉(zhuǎn)移率為99.83%。所得結(jié)果良好,可用作回流提取女貞子的參考。

      1.3 紅景天苷提取工藝研究進(jìn)展

      紅景天苷屬于苯乙醇苷類成分,是水溶性成分,易溶于水和甲醇,可溶于乙醇,不溶于丙酮等脂溶性有機(jī)化合物。紅景天苷是中藥紅景天中的主要活性化合物,廣泛用于醫(yī)療保健和化妝品行業(yè),有著保肝、抗腫瘤、抗心肌損傷、抗衰老和調(diào)節(jié)免疫等作用[29-33]。然而,紅景天因過度采挖而資源匱乏,人工種植受到根腐病等生產(chǎn)條件的影響未能大規(guī)模推廣,因此從其他藥材如女貞子中提取紅景天苷成為可行的方法。

      郭加加等[34]以紅景天苷和酪醇為指標(biāo),使用正交試驗(yàn)優(yōu)選女貞子中紅景天苷的酸水解工藝,最佳條件為采用20倍量冰乙酸,在100℃下回流提取20 h。使用冰乙酸水解,可以使很多含有紅景天苷元的裂環(huán)烯醚萜成分水解轉(zhuǎn)化為紅景天苷,有效增加了紅景天苷的含量,經(jīng)研究,酸水解得到的紅景天苷是未經(jīng)水解的3倍,且所用冰乙酸無毒,更適合工業(yè)生產(chǎn)。

      黃君梅等[35]采用正交試驗(yàn)法優(yōu)化女貞子中紅景天苷回流提取工藝,并對(duì)濃縮后的提取液使用冰乙酸水解,得到最佳工藝為使用6倍量水為溶劑,回流1 h,提取3次。此法有效提高了女貞子中紅景天苷的含量,可減少對(duì)資源匱乏的紅景天的采挖。

      石任兵等[36]申請(qǐng)了一種基于堿轉(zhuǎn)化從女貞子中提取紅景天苷的專利,方案為采用40%~80%的乙醇回流2~4次,離心后上清液加堿水解后加酸中和,再進(jìn)行純化。此法得到的紅景天苷轉(zhuǎn)化率高達(dá)250%。

      辛云霞等[37]通過單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)優(yōu)化微波提取工藝,發(fā)現(xiàn)在45℃下,采用30%乙醇,20∶1(mL/g)的固液比,600 W的微波功率,提取2 min效果最好,紅景天苷的提取率為0.9113%,微波提取較傳統(tǒng)的回流提取明顯省時(shí)高效。

      許玲玲等[38]在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上進(jìn)行了正交試驗(yàn),優(yōu)化了酶解法提取工藝,最佳條件為纖維素酶用量0.10%,酶解溫度50℃,酶解時(shí)間4 h。此時(shí),紅景天苷的提取率為0.90%。還比較了超聲提取、回流提取、閃式提取與酶解法提取率的差異,發(fā)現(xiàn)酶解和超聲提取率較高,而閃式提取和回流提取的提取率較低。酶解法耗時(shí)相對(duì)長(zhǎng),但是操作簡(jiǎn)便,與超聲提取比較不會(huì)產(chǎn)生噪音,無儀器要求,更適合用于工業(yè)生產(chǎn)。

      從女貞子中提取紅景天苷的研究目前還相對(duì)較少,大多數(shù)都是從紅景天中提取紅景天苷,所用的方法有很多,如回流法、超聲法、微波法、超臨界CO2萃取、酶解法、閃式提取法、仿生提取法等。優(yōu)選工藝時(shí)采取的試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案也很多,如正交試驗(yàn)法、均勻設(shè)計(jì)法、響應(yīng)面法、正交設(shè)計(jì)-多元回歸法等。這些方法和設(shè)計(jì)方案也可用于從女貞子中提取紅景天苷。

      2 女貞子的質(zhì)量檢測(cè)方法

      定量分析是評(píng)價(jià)一種藥材質(zhì)量的關(guān)鍵步驟,只有使用可靠的測(cè)定方法來測(cè)定藥材中的有效成分含量,才能準(zhǔn)確地評(píng)估或鑒別藥材質(zhì)量。近年來,女貞子定量分析方法研究主要有薄層色譜法、高效液相色譜法、氣相色譜法、毛細(xì)管電泳法、紫外分光光度法以及近紅外光譜技術(shù)等。

      2.1 薄層色譜法

      《中國(guó)藥典(2005年版)》規(guī)定采用薄層色譜法測(cè)定女貞子中齊墩果酸含量,作為女貞子質(zhì)量控制的指標(biāo)。研究者們多采用薄層色譜法測(cè)定齊墩果酸的含量,但由于結(jié)果重現(xiàn)性較差,且難以將齊墩果酸與熊果酸分離,近10年,隨著高效液相色譜儀的普及,齊墩果酸的含量測(cè)定也多改用高效液相或超高液相色譜法來進(jìn)行。

      石力夫等[39]對(duì)不同極性溶劑的萃取液和女貞子弱脂溶性有效成分紅景天苷及其活性衍生物的薄層色譜行為進(jìn)行考察和分析,得到的最佳色譜條件為硅膠G板,氯仿和乙酸乙酯萃取液分別用環(huán)己烷-乙酸乙酯-乙酸(5∶2∶1)和乙酸乙酯-甲醇-甲酸(8∶1∶1)展開;紅景天苷及其衍生物用乙酸乙酯-甲醇-乙酸(8∶1∶1)展開,10%硫酸乙醇液顯色,能夠起到良好的分離鑒定作用。

      2.2 高效液相色譜法(HPLC)和超高液相色譜法(UPLC)

      HPLC和UPLC不僅具有穩(wěn)定、準(zhǔn)確、高效、靈敏、能夠同時(shí)測(cè)定多種化學(xué)成分等優(yōu)點(diǎn),而且對(duì)樣品的適用性廣,不受樣品揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的干擾,是近年來測(cè)定中藥材含量研究采用最多的方法。

      李元圓等[40]使用HPLC法同時(shí)測(cè)定了女貞子中紅景天苷和女貞子苷的含量,通過優(yōu)化色譜條件最終使得基線平穩(wěn),分離度耐用性好,結(jié)果準(zhǔn)確。色譜條件為以Dikma inspire C18色譜柱(4.6 mm×250.0 mm,5 μm)、甲醇-水為流動(dòng)相,梯度洗脫,流速1.0 mL/min,柱溫30℃,檢測(cè)波長(zhǎng)220 nm。

      廖曉燕等[41]使用HPLC-熒光法測(cè)定酒女貞子中酪醇、羥基酪醇和紅景天苷的含量。結(jié)果顯示,該法不僅對(duì)混合物分離效果好而且測(cè)定結(jié)果非常準(zhǔn)確,儀器靈敏度方面也很優(yōu)越。

      易駿等[42]使用RP-HPLC法同時(shí)測(cè)定女貞子中羥基酪醇、紅景天苷、特女貞苷、女貞苷、女貞苷G1、橄欖苦苷、類葉升麻苷(毛蕊花糖苷)和芹菜素8種化學(xué)成分,重現(xiàn)性和分離較好,結(jié)果準(zhǔn)確,并考察了環(huán)烯醚萜類、苯乙醇苷類和黃酮類多種活性成分的含量,更加全面地反映了女貞子的藥材質(zhì)量。

      燕霞等[43]建立高效液相-電霧式檢測(cè)方法測(cè)定了女貞子中齊墩果酸和熊果酸的含量,此法穩(wěn)定、重復(fù)性好且齊墩果酸和熊果酸能很好分離,使用的CAD檢測(cè)器檢測(cè)范圍更廣,靈敏度較之常用的紫外檢測(cè)器更高,可用作測(cè)定齊墩果酸和熊果酸的含量。

      任爽等[44]采用HPLC測(cè)定了女貞子和酒女貞子飲片中紅景天苷、酪醇、特女貞苷、木犀草苷、木犀草素、芹菜素、齊墩果酸和熊果酸8種成分的含量,并比較女貞子、酒女貞子飲片及水煎煮前后成分的含量,發(fā)現(xiàn)木犀草素、芹菜素可用于真?zhèn)舞b別,而紅景天苷、酪醇、特女貞苷和木犀草苷則為質(zhì)量控制的特征成分。

      韓疏影等[45]采用HPLC建立女貞子中紅景天苷、女貞苷、特女貞苷、橄欖苦苷和oleonuezhenide含量的測(cè)定方法,以特女貞苷為參照物,其他成分的相對(duì)校正因子為定量參數(shù),其他成分與特女貞苷的相對(duì)保留時(shí)間為定性參數(shù),建立了女貞子“一測(cè)多評(píng)”法,多項(xiàng)結(jié)果均表明其準(zhǔn)確可靠,為女貞子多指標(biāo)成分的質(zhì)量控制提供了參考,且促進(jìn)了“一測(cè)多評(píng)”法的運(yùn)用。

      指紋圖譜技術(shù)能夠全面地反映中藥所含化學(xué)成分的種類及數(shù)量,提供了豐富的藥材信息,HPLC指紋圖譜技術(shù)常用來規(guī)范質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。吳修紅等[46]以木犀草素峰為參照峰,以乙腈-水為流動(dòng)相,采用二極管陣列檢測(cè)器建立了酒女貞子飲片的HPLC指紋圖譜,并且測(cè)定了紅景天苷、齊墩果酸、木犀草素及特女貞苷的含量,方法學(xué)考察良好,分離效果好,能夠很好地反映女貞子的質(zhì)量。崔蘊(yùn)慧等[47]以紅景天苷為參照峰,以乙腈-水為流動(dòng)相,建立了女貞子HPLC指紋圖譜,并測(cè)定了紅景天苷和特女貞苷的含量,方法簡(jiǎn)單,結(jié)果準(zhǔn)確,該研究為考察女貞子的真?zhèn)魏唾|(zhì)量提供了參考。許浚等[48]采用乙腈-0.1%甲酸為流動(dòng)相,使用HPLC-Q/TOF-MSE對(duì)指紋圖譜共有峰進(jìn)行歸屬,建立了女貞子HPLC指紋圖譜和女貞子多指標(biāo)成分的測(cè)定方法,測(cè)定了女貞子中松果菊苷、紅景天苷以及特女貞苷的含量,結(jié)果準(zhǔn)確,能有效控制女貞子質(zhì)量。

      超高效液相法相較于高效液相法分析時(shí)間短、靈敏度更高,并且減少了溶劑的用量。紀(jì)鑫等[49]使用UPLC同時(shí)測(cè)定女貞子中紅景天苷和特女貞苷,并且探討了不同炮制時(shí)間酒女貞子成分含量的變化,發(fā)現(xiàn)酒女貞子隨炮制時(shí)間的增加,紅景天苷逐漸增多而特女貞苷逐漸減少,原因可能是炮制使得特女貞苷水解,分解出紅景天苷成分。

      2.3 氣相色譜法

      氣相色譜法具有效率高、靈敏度高、分析速度快、應(yīng)用廣泛等特點(diǎn),多用于低沸點(diǎn)揮發(fā)性成分的分析。周靜等[50]建立了一種使用氣相色譜測(cè)定女貞中齊墩果酸和熊果酸的方法,色譜條件為HP-1毛細(xì)管柱(25 m×0.32 mm,0.52 μm),柱溫280℃,以氮?dú)庾鳛檩d氣,采用氫火焰檢測(cè)器檢測(cè),方法學(xué)考察良好,齊墩果酸和熊果酸分離度良好,可作為女貞子質(zhì)量檢測(cè)的參考。

      郭勝男等[51]采用頂空固相微萃取/氣-質(zhì)聯(lián)用法分析女貞子酒制前后揮發(fā)性成分的變化,發(fā)現(xiàn)酒女貞子與女貞子的成分差異很大,苯乙醇等成分減少,烯類成分有所增加。此法可以測(cè)得整個(gè)藥材的揮發(fā)性成分,且不會(huì)對(duì)成分產(chǎn)生破壞,是考察女貞揮發(fā)性成分的好方法。

      2.4 毛細(xì)管電泳法

      毛細(xì)電泳法具有高效、快速、分離率高、儀器簡(jiǎn)單、樣品和溶劑使用量少等優(yōu)點(diǎn)。王文俊等[18]建立了一種加速溶劑萃取-毛細(xì)管區(qū)帶電泳測(cè)定女貞子中齊墩果酸和熊果酸的方法。考察了硼砂濃度、β-環(huán)糊精濃度、pH和甲醇濃度對(duì)分離度的影響,從而確定最優(yōu)電泳條件,最終確定為40 mmol/L硼砂,1 mmol/L β-環(huán)糊精,pH 9.5和6%甲醇,在此條件下分離良好。此法更加簡(jiǎn)單省時(shí),分析效率高,且具有創(chuàng)新性,有一定的應(yīng)用前景。

      巫利璇等[52]使用毛細(xì)管區(qū)帶電泳高頻電導(dǎo)檢測(cè)女貞子中齊墩果酸和熊果酸的含量。試驗(yàn)結(jié)果表明該法雖然操作簡(jiǎn)便但是不影響準(zhǔn)確度,重現(xiàn)性也十分優(yōu)越。

      黃寶美等[53]采用毛細(xì)管電泳-安培檢測(cè)法測(cè)定女貞子中齊墩果酸的含量。該法只對(duì)女貞子所含各種成分中具有電化學(xué)活性的化學(xué)成分有響應(yīng),所以其受干擾的程度比較小、分離效率也相應(yīng)更高,儀器以及試驗(yàn)操作上較為簡(jiǎn)便,不失為一種理想的方法。

      2.5 紫外分光光度法

      黎彧等[54]以蘆丁為對(duì)照品,用硝酸鋁顯色,采用紫外-可見光分光光度法測(cè)定女貞子總黃酮含量。試驗(yàn)結(jié)果顯示該法測(cè)量范圍廣、選擇性較好、靈敏度較高,是較為理想的測(cè)定方法。

      2.6 近紅外光譜法

      近紅外光譜法有時(shí)不需要進(jìn)行預(yù)先分離,也可以定量測(cè)定已知化學(xué)成分混合物中特定化學(xué)成分,雖然不如HPLC法精確,但能快速測(cè)量并得出結(jié)果。周穎等[55]使用近紅外光譜技術(shù)對(duì)女貞子中特女貞苷含量進(jìn)行測(cè)定。根據(jù)各項(xiàng)數(shù)據(jù)可知HPLC法實(shí)測(cè)值和近紅外光譜法預(yù)測(cè)值之間相差不大,能夠準(zhǔn)確測(cè)定。張迪文等[56,57]采用偏最小二乘法-近紅外光譜法建立了女貞苷和特女貞苷定量校正模型,模型預(yù)測(cè)值與實(shí)測(cè)值相關(guān)度高,模型結(jié)果可靠。

      3 女貞子藥材含量研究進(jìn)展

      《中華人民共和國(guó)藥典(2005年版)》將齊墩果酸作為女貞子含量測(cè)定指標(biāo),2010年及以后的歷版《中華人民共和國(guó)藥典》將含量測(cè)定指標(biāo)改為專屬性成分特女貞苷,同時(shí)《中華人民共和國(guó)藥典(2020年版)》還新增紅景天苷作為酒女貞子的含量測(cè)定指標(biāo),以反映女貞子炮制后的成分變化。近年來,對(duì)女貞子藥材含量的研究也多圍繞這些成分進(jìn)行。

      3.1 不同產(chǎn)地女貞子藥材含量研究

      劉歡等[58]考察了安徽、四川、湖南、云南、河南、山西6個(gè)省49個(gè)縣與女貞子中酪醇、紅景天苷、松果菊苷、蘆丁、毛蕊花糖苷、女貞苷、特女貞苷、槲皮素8種成分含量的關(guān)系,采用多種統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析,最終發(fā)現(xiàn)8種成分含量與地理位置無關(guān)。

      劉美等[59]用HPLC法測(cè)定了23批不同產(chǎn)地女貞子中特女貞苷的含量。結(jié)果表明安徽省產(chǎn)出的女貞子中特女貞苷含量最高,江蘇省產(chǎn)出的含量最低。不同產(chǎn)地之間含量差異較明顯。

      張炯怡等[60]使用HPLC法測(cè)定貴州省不同市級(jí)單位以及縣級(jí)單位女貞子中紅景天苷、特女貞苷以及女貞苷的含量。研究顯示即使是在同一個(gè)省份,位于不同市或縣含量都有差異,試驗(yàn)中采集的10個(gè)地區(qū)樣品之間最大含量差異可達(dá)1.6倍,紅景天苷∶貴州惠水含量最高,貴州貴陽市含量最低。特女貞苷∶貴州都勻含量最高,貴州銅仁含量最低。女貞苷∶貴州惠水含量最高,貴州銅仁含量最低。

      李彥靈等[61]用HPLC法測(cè)定了不同產(chǎn)地女貞子中紅景天苷、女貞苷、特女貞苷的含量。研究測(cè)得河南省平頂山市的女貞子紅景天苷含量最高,四川省含量最低;河南省女貞子中所含女貞苷和特女貞苷均為最高,而安徽省均為最低。

      易駿等[42]使用RP-HPLC法測(cè)定了12個(gè)省份12個(gè)地區(qū)女貞子中紅景天苷、特女貞苷、羥基酪醇和女貞苷的含量。結(jié)果顯示不同產(chǎn)地不同成分含量差異較大,特女貞苷∶江西樟樹含量最高,河北保定含量最低。紅景天苷∶江西贛州含量最高,安徽合肥含量最低。羥基酪醇∶江西樟樹含量最高,安徽合肥含量最低。

      崔蘊(yùn)慧等[47]采用HPLC法測(cè)定了湖北蘄春、廣東、江蘇、河南、廣西、云南、江西、安徽、甘肅、陜西、浙江杭州、湖南邵陽12個(gè)地區(qū)的女貞子中紅景天苷和特女貞苷的含量,研究發(fā)現(xiàn)陜西女貞子紅景天苷含量最低,而廣東含量最高;浙江杭州女貞子特女貞苷含量最低而廣西含量最高。不同地區(qū)紅景天苷及特女貞苷含量差異較大,這可能與產(chǎn)地自然環(huán)境差異以及采收時(shí)間不同有關(guān)。

      黎彧等[54]利用紫外-可見光分光光度法測(cè)定了廣西、湖南、廣東、浙江4個(gè)?。ㄗ灾螀^(qū))女貞子樣品中總黃酮含量。結(jié)果表明,浙江省生產(chǎn)的女貞子總黃酮含量最高,廣西最低,含量差異接近2倍,證明女貞子中黃酮含量與地理因素有關(guān)。

      3.2 不同采收期女貞子藥材含量研究

      劉歡等[58]采用HPLC測(cè)定了女貞子中酪醇、紅景天苷、松果菊苷、蘆丁、毛蕊花糖苷、女貞苷、特女貞苷、槲皮素的含量,并采用相關(guān)性分析、單因素方差分析、主成分分析等統(tǒng)計(jì)學(xué)方法考察了女貞子性狀、成分含量、采收時(shí)間、產(chǎn)地之間的關(guān)系,研究發(fā)現(xiàn)女貞子中紅景天苷在6月含量最高,8種成分總體在8—10月份含量較高。

      譚會(huì)穎等[62]通過HPLC測(cè)定了不同采收期女貞子中紅景天苷、特女貞苷、齊墩果酸和木犀草苷的含量,發(fā)現(xiàn)9月特女貞苷含量達(dá)最高,而紅景天苷在11月含量最高,齊墩果酸含量變化不大,木犀草苷含量較低,綜合考量,9—11月為女貞子的最佳采收期。

      劉芳等[63]使用HPLC考察了十堰市冬至前后特女貞苷、紅景天苷、酪醇3種成分累積量的變化,采用層次分析法對(duì)不同成分加權(quán)分析,發(fā)現(xiàn)最佳采收期為冬至前1個(gè)月。

      孔德平等[64]研究了南京女貞子不同采收期多指標(biāo)成分的動(dòng)態(tài)累計(jì),使用HPLC和紫外分光光度法進(jìn)行含量測(cè)定,主成分分析法進(jìn)行評(píng)價(jià),研究發(fā)現(xiàn)三萜類成分隨著果實(shí)成熟含量逐步下降,紅景天苷和特女貞苷含量先升后降,而糖類成分則隨月份含量逐漸上升,綜合考察認(rèn)為10月下旬為南京女貞子的最佳采收期。

      蔣梅 香等[65]使 用HPLC測(cè)定 了2016年9月 至2017年1月不同生長(zhǎng)時(shí)期株洲女貞子藥材中特女貞苷以及紅景天苷的含量。結(jié)果表明女貞子藥材中這兩種成分含量變化趨勢(shì)相反,綜合考慮12月為株洲女貞子的最適采收期。

      王甫成等[66]采用HPLC考察了8—12月5個(gè)采收期女貞子中紅景天苷、酪醇、木犀草苷、女貞苷和特女貞苷的含量動(dòng)態(tài)變化,發(fā)現(xiàn)除酪醇外其他成分均在9月含量最高,10月次之,9、10月為女貞子的最佳采收期。

      戴一等[67]采用紫外分光光度法考察了8—12月中旬7個(gè)不同采收時(shí)間女貞子總黃酮和多糖含量的動(dòng)態(tài)變化,試驗(yàn)結(jié)果表明女貞子中黃酮含量與采收期有直接關(guān)系且黃酮含量與多糖含量變化趨勢(shì)大致相反。

      仇小月等[68]采用紫外-可見光分光光度法測(cè)定安徽省2014年7—12月出產(chǎn)的女貞子藥材中總黃酮含量。結(jié)果顯示2014年7—10月女貞子中總黃酮含量較高,中間有小幅波動(dòng)含量比較穩(wěn)定,12月中旬含量最低。由此可知女貞子中黃酮含量與采收期有關(guān)。

      楊元豐等[69]采用HPLC對(duì)江西省南昌市2015年11月2日至2016年1月2日不同采收時(shí)期女貞子中熊果酸和齊墩果酸含量進(jìn)行了測(cè)定,發(fā)現(xiàn)在藥典規(guī)定采收期內(nèi),這兩種成分含量變化不大,推測(cè)女貞子齊墩果酸和熊果酸與“女貞子在冬至前后采收”無關(guān)。

      《中華人民共和國(guó)藥典(2020版)》中規(guī)定女貞子的采收時(shí)間為冬季果實(shí)成熟時(shí),但是諸多研究人員試驗(yàn)證實(shí)不同成分含量最高的時(shí)間存在差異,很多有效成分在冬季12月含量較低,需根據(jù)不同的需求確定采收時(shí)間,但是總體來說秋冬兩季女貞子有效成分含量較高。

      4 結(jié)語

      女貞子廣泛分布于華東、華南、西南及華中各地,且具有2 000多年的用藥歷史,藥理作用明確,毒性小,是極富開發(fā)利用價(jià)值的藥用資源。然而,當(dāng)前對(duì)女貞子的研究還存在一些問題,限制了其開發(fā)利用。①通過大量文獻(xiàn)查閱可知,目前對(duì)女貞子中脂溶性有效成分齊墩果酸研究較多,但是對(duì)其特女貞苷等水溶性有效成分研究略顯不足,應(yīng)當(dāng)進(jìn)一步研究。②女貞子成分豐富,僅考察1~2種成分不足以評(píng)價(jià)其質(zhì)量,建立多指標(biāo)成分定量評(píng)價(jià)體系成為亟需解決的問題。此外,各產(chǎn)地女貞子的質(zhì)量差異較大,品質(zhì)良莠不齊,有些地區(qū)女貞子的有效成分含量甚至不能達(dá)到藥典要求。雖然藥典規(guī)定了采收期,但是全國(guó)各地的最佳采收期并不完全一致,有的地方在8—9月女貞子中活性成分含量最高、質(zhì)量較好,也有的地方10—12月是最佳采收期。且女貞子中不同成分含量動(dòng)態(tài)變化也較大,這些均需進(jìn)一步研究。

      目前市場(chǎng)上已有多種以女貞子為主要原料開發(fā)的中成藥,對(duì)女貞子的應(yīng)用也不再局限于中藥配方。女貞子保健食品的開發(fā)研究也取得了一定成果,例如女貞子飲料、女貞子酒等[70]。未來應(yīng)當(dāng)不斷開發(fā)女貞子的潛在藥理作用,克服目前存在的技術(shù)瓶頸,并將已經(jīng)研究清楚的藥理成分開發(fā)出更多的使用形式,還可以將應(yīng)用領(lǐng)域延伸到化妝品行業(yè),比如抗氧化面霜、修護(hù)面膜等。

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